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JNK 通路对左归丸含药血清调控 MC3T3 成骨细胞 Runx2 mRNA 表达的影响
目的:探讨c-Jun氨端激酶(JNK)信号通路在左归丸含药血清调控成骨前体细胞(MC3T3-E1)增殖和成骨特异转录因子核心结合因子(Runx2) mRNA表达中的作用.方法:以MC3T3-E1为研究对象,制备左归丸含药血清,选用JNK特异抑制剂SP 600125,实验分为空白对照组、SP 600125组、左归丸组、左归丸加SP 600125组、倍美力组、倍美力加SP 600125组.孵育48 h后,采用噻唑蓝(MTT)法检测SP600125对左归丸含药血清干预MC3T3-E1成骨前体细胞增殖作用的影响,采用Western blot法分析JNK蛋白磷酸化水平,采用Real Time RT-PCR法检测成骨细胞特异转录因子Runx2 mRNA表达情况.结果:与空白对照组比较,左归丸含药血清组显著促进细胞增殖,明显上调p-JNK蛋白和Runx2 mRNA表达(P＜0.01)；SP600125显著抑制左归丸含药血清诱导的增殖和p-JNK蛋白表达(P＜0.01),对Runx2 mRNA表达的影响不显著.结论:JNK信号通路的激活可能参与了左归丸含药血清诱导的MC3T3-E1成骨前体细胞增殖,但左归丸含药血清诱导的Runx2mRNA高表达对JNK信号通路依赖不显著.
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间期荧光原位杂交技术对诊断核心结合因子急性髓系白血病的价值
本研究主要探讨间期荧光原位杂交技术在核心结合因子急性髓系白血病(CBF AML)诊断中的价值.采用间期荧光原位杂交技术(I-FISH),分别应用AMLl-ETO双色双融合探针和荧光素直接标记的双色断裂点分离基因探针CBF β-MYH1l检测82例AML-M2及43例AML-M4/M5患者白血病细胞的细胞遗传学异常,并与R显带常规细胞遗传学(CC)检测结果进行比较分析.结果表明:82例AML-M2患者中FISH检测AMLI -ETO融合基因阳性患者为25例(30.5％),CC检测存在t(8;21) (q22；q22)染色体异常为23例(28.0％),所有FISH检测AML1ETO阳性患者中典型的阳性信号模式1R1G2F为22例(88.0％)；不典型的信号模式包括1R2G1F和2RIG2F共3例(12.0％).在所有43例AML-M4/M5患者中,FISH检出inv(16) (p13；q22)/t(16；16) (p13；q22)信号模式(1R1G1F)为10例(23.3％),CC检测出存在inv(16)(p13；q22)/t( 16；16) (p13；q22)为2例(4.6％),FISH检测灵敏度显著高于CC(p ＜0.05).结论:FISH作为新型细胞遗传学分析技术可以弥补CC技术灵敏度较低、检测周期长等不足,两者结合可以成为CBF AML诊断乃至微小残留病监测的有力工具.
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核心结合因子和Ⅱ型胶原在高磷诱导的残肾大鼠血管钙化中的表达
目的 观察核心结合因子(Cbfα1)和Ⅱ型胶原在高磷诱导的残肾大鼠血管钙化中的表达,探讨慢性肾脏病5期血管钙化发生的可能机制.方法 40只SD雄性大鼠随即分为4组:残肾+高磷组(n=10),残肾+正常磷组(n=10),假手术+正常磷组(n=10),假手术+高磷组(n=10).分别行5/6肾切除或假手术,术后开始给予高磷饮食或正常磷饮食16周.收集尿量检测24 h尿蛋白,取血检测血清磷、肌酐、尿素氮,取胸主动组织,von kossa染色检测血管钙化,RT-PCR检测Cbfα1和Ⅱ型胶原mRNA表达,免疫组化或Western-Blot检测Cbfα1和Ⅱ型胶原蛋白表达.结果 与其他3组比较,残肾+高磷组大鼠尿蛋白、血磷、尿素氮和肌酐明显增高(P＜0.05).von kossa染色显示,残肾+高磷组大鼠主动脉呈现明显钙化,而残肾+正常磷组仅个别出现钙化,假手术+高磷组和假手术+正常磷组未见钙化.免疫组化显示,与其他3组比较,残肾+高磷组大鼠主动脉Cbfα1、Ⅱ型胶原的表达明显增多(P＜0.05).相关性分析表明,血磷水平与Cbfα1、Ⅱ型胶原阳性积分呈正相关(r=0.525,0.640,P＜0.05).RT-PCR和Western-Blot显示,与其他3组比较,残肾+高磷组主动脉Cbfα1 mRNA和蛋白的表达明显上调(P＜0.05).残肾+高磷组、残肾+正常磷组与另外2组相比,动脉Ⅱ型胶原mRNA表达明显上调(P＜0.05).结论 高血磷是残肾大鼠血管钙化的重要影响因素,血磷水平与Cbfα1和Ⅱ型胶原的表达呈正相关.Cbfα1、Ⅱ型胶原的表达增多可能是高磷诱导的残肾大鼠血管钙化的重要机制之一.
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成骨细胞与骨愈合
骨形成是一个生理调节过程,详细了解控制骨形成的分子通路并进行调控,不仅可促进骨折愈合并且可使骨愈合不良达到愈合.成骨细胞是骨形成的主要功能细胞,负责骨基质的合成、分泌和矿化.成骨细胞是特殊的间充质细胞,其基因如核心结合因子(Cbfal)和Osterix(Osx)扮演非常重要的角色.
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中药骨康含药血清培养脂肪干细胞移植促进骨质疏松性骨折愈合过程中cbfa1和OCN的表达变化
目的 探讨中药骨康含药血清培养脂肪干细胞移植促进骨折愈合过程中骨折端cbfa1和OCN的动态变化.方法 制备中药骨康含药血清并进行脂肪干细胞培养,移植脂肪干细胞到骨折部位,用免疫组化观察骨折部cbfa1和OCN的动态变化.结果第3 代脂肪干细胞流式鉴定CD90阳性,CD34、CD45低表达.免疫组化观察骨折部cbfa1和OCN的动态变化:第一周干预组Cbfal和OCN组均可见血肿、肉芽组织及纤维性骨痂组织中出现阳性细胞和基质阳性信号,阳性较强,对照组可见阳性细胞和基质阳性信号,阳性较弱,空白组基本上无阳性表达;第二周Cbfal和OCN组均出现软骨岛和新生骨小梁,胶原纤维排列整齐,大量阳性细胞和基质阳性信号,强阳性表达,对照组骨小梁和软骨岛均出现,但比干预组少,亦出现阳性细胞和基质阳性信号,信号比干预组弱,空白组少见软骨岛和骨小梁,胶原纤维排列混乱,阳性细胞和基质阳性信号亦可见,但比前两组要弱;第四周干预组Cbfal组阳性表达减弱,OCN组继续强阳性表达,对照组两指标均阳性表达,空白组阳性细胞和基质阳性信号存在,阳性程度比以往稍强.结论 通过免疫组化观察骨折部cbfa1和OCN的动态变化,表明脂肪干细胞移植可促进骨质疏松性骨折愈合,而中药骨康含药血清培养脂肪干细胞移植效果更理想.
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核心结合因子t(8;21)型和inv(16)型急性髓细胞白血病患者造血干细胞移植效果
急性髓细胞白血病(AML)核心结合因子包括t(8;21)(q22;q22)和 inv(16)(p13q22)/t(16;16)(p13;q22)两大类,其中inv(16)在临床上被认为是较好的细胞遗传学分型标准.许多小样本的研究报道,t(8;21)型AML患者行造血干细胞移植(HSCT)的效果较inv(16)型AML患者差.日本的研究者统计了日本HSCT移植登记中心1996～2004年的数据,发现255例t(8;21)型和83例inv(16)型AML成人患者接受了HSCT,inv(16)型受者的整体效果优于t(8;21)型受者.
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核心结合因子急性髓系白血病发病机制和诊治现状
核心结合因子急性髓系白血病(CBF-AML)是由特定非随机性染色体易位和倒位所致,为急性髓系白血病(AML)的独立细胞遗传学亚型,一般被分为t(8;21)AML和inv (16) AML.对CBF-AML患者采取常规化疗的总体预后良好,但是成年人患者复发率可高达40％,CBF-AML复发为临床亟待解决的问题.近年研究结果表明,CBF-AML在临床表型、细胞分子遗传学和表观遗传学方面均存在较大异质性.因此,综合分析2种CBF-AML并存细胞分子遗传学异常种类和频率,对于优化CBF-AML分层诊断、预后预测,以及整合新型靶向治疗,进一步提高预后、降低复发具有重要临床意义.笔者拟就近年本领域相关研究进展阐述如下.
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流体剪切应力对人骨肉瘤成骨样MG-63细胞Cbfα1基因表达的影响
目的观察流体剪切应力(FSS)对人骨肉瘤成骨样细胞(MG-63)Cbfα1基因表达的影响.方法对MG-63骨肉瘤细胞进行培养,传代60 h后,将细胞置于流室系统中进行应力刺激实验.FSS分为0.5 Pa和1.5 Pa两个水平,每个水平下作用时间分别为15 min、30 min和60 min.提取细胞总RNA,进行反转录PCR,检测细胞内Cbfα1 mRNA的表达,并计算与内参照GAPDH mRNA的比值.结果与对照组相比,FSS 作用组的Cbfα1 mRNA的表达在30 min和60 min均显著增强,且在一定的时间范围内(15～60 min),Cbfα1 mRNA的表达水平随着作用时间的延长、应力水平的增加而增强,在30 min和60 min的变化具有显著性意义(P<0.01).结论 FSS可以促进成骨细胞内Cbfα1的表达.
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核心结合因子(Cbfa1/Runx2)重组腺病毒载体的构建、鉴定及在脂肪来源干细胞中的表达
目的:验证核心结合因子(Cbfa1/Runx2)的重组腺病毒载体可高效感染脂肪组织来源干细胞并表达蛋白.方法:分离、扩增脂肪组织来源干细胞并诱导其向骨细胞、脂肪细胞分化.将Cbfa1/Runx2 cDNA的全长序列亚克隆到穿梭质粒pAdTrack上,在BJ5183细菌内和pAdEasy1同源重组,筛选阳性克隆,命名为Ad-Cb-fa1/Runx2.经酶切、PCR鉴定,线性化后以脂质体法转染293T细胞进行包装、扩增,利用报告基因GFP对病毒滴度和感染效率进行监测.通过RT-PCR、间接免疫荧光检测Ad-Cbfa1/Runx2感染脂肪组织来源干细胞后Cbfa1/Runx2基因的表达.结果:脂肪组织来源干细胞细胞数目两天增长一倍.在特定诱导条件下,可向成脂细胞、成骨细胞分化.酶切及PCR鉴定证实Cbfa1/Runx2基因重组腺病毒载体构建成功.Ad-Cbfa1/Runx2对脂肪组织来源干细胞的转染效率为81.39%.转染3天后,PCR、间接免疫荧光检测到脂肪组织来源干细胞中Cbfa1/Runx2蛋白的表达.结论:成功分离、培养了脂肪组织来源干细胞,构建了含有小鼠Cbfa1/Runx2基因的重组腺病毒载体,证明了Ad-Cbfa1/Runx可高效感染脂肪组织来源干细胞并表达Cbfa1/Runx2蛋白.
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核心结合因子过表达定向诱导脂肪组织来源干细胞体内、外成骨
目的:探讨脂肪组织来源干细胞(adipose-derived stem ceils,ADSCs)和核心结合因子(Core Binding Factor Alpha 1,Cbfa1)的成骨潜能及其应用于基因增强的骨组织工程临床治疗的可能性.方法:利用重组了Cbfa1的腺病毒载体在ADSCs中过表达Cbfa1.采用Realtime RT-PCR定量检测成骨特异性基因和成脂特异性基因的表达变化.同时采用Von Kossa染色观察Cbfa1过表达后21天ADSCs内钙盐的沉积情况.在体内实验中,裸鼠右下肢肌肉内注射Cbfa1基因修饰的脂肪来源干细胞,8周后,采用石蜡切片(HE和甲苯胺蓝染色)检测软骨和骨的生成情况.结果:Cbfa1转染后3天,ADSCs中检测到Cbfa1 RNA表达,及骨钙素、骨桥素、Ⅰ型胶原表达,同时脂蛋白脂酶表达下降.Vocassa染色证明,转染Cbfa1后,ADSCs细胞基质中的钙盐沉积显著增加.体内实验8周后,注射Cbfa1基因修饰的脂肪来源干细胞的肌肉内有明显的软骨和骨组织形成.结论:Cbfa1过表达可定向诱导ADSCs体外钙盐沉积和体内成骨,可作为基因增强的骨组织工程中有潜力的治疗基因和载体细胞.
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瘦素对成骨细胞增殖、BMP-2及Cbfa1基因表达的影响
目的：通过瘦素(leptin)对体外成骨细胞增殖、骨形态蛋白-2（BMP-2）及核心结核因子（cbfa1）基因表达的影响研究，探讨leptin对骨代谢影响的可能机制。方法体外培养大鼠成骨细胞并对其进行鉴定。结果体外培养的细胞经鉴定为成骨细胞；对照组与实验组，实验组组间比较，均有统计学差异（P<0.05）；随着leptin浓度增高，使成骨细胞表面BMP-2和cbfa1基因表达升高，光密度比值明显增加，且都呈剂量依赖性变化。对照组与实验组，实验组组间比较，均有显著性统计学差异（P<0.01）。结论 leptin促进成骨细胞增殖；leptin可增加BMP-2和cbfa1基因的表达；leptin可能通过增加BMP-2和cbfa1基因的表达，促进成骨细胞的增殖、分化及成熟。
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仙灵骨葆胶囊对去势大鼠股骨组织形态计量学和OCN、Cbfα1 mRNA的影响
目的 探讨仙灵骨葆胶囊对去势大鼠股骨形态计量学和成骨相关基因骨钙素(OCN)、核心结合因子(Cbfα1)mRNA的影响.方法 50只6月龄雌性SD大鼠,随机分为A组(作为空白对照)、B组(作为模型)、C组(给予高剂量仙灵骨葆胶囊)、D组(给予低剂量仙灵骨葆胶囊)、E组[给予阿仑膦酸钠维D3片(福美加)],每组10只.药物干预3个月后,采用X线显微断层显像仪检测左侧离体股骨骨密度(BMD)和骨小梁数量(TbN),逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测右侧股骨组织OCN、Cbfα1 mRNA表达,比较各组检测结果.结果 干预3个月后,B组左侧股骨BMD、TbN明显低于A组,差异具有统计学意义(P<0.05);与B组比较,C、E组左侧股骨BMD明显增高,E组左侧股骨TbN明显增高,差异具有统计学意义(P<0.05);与E组比较,C、D组左侧股骨BMD、TbN明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05);五组左侧股骨BMD、TbN比较差异具有统计学意义(F=86.400、28.027,P<0.05).干预3个月后,与A组比较,B组右侧股骨Cbfα1、OCN mRNA表达量明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05);与B组比较,C、D、E组右侧股骨Cbfα1 mRNA表达量明显增高(P<0.05),C、E组右侧股骨OCN mRNA表达量明显增高,差异具有统计学意义(P<0.05);与E组比较,C组右侧股骨Cbfα1和OCN mRNA表达量明显增高(P<0.05),D组右侧股骨Cbfα1 mRNA表达量明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05);五组大鼠右侧股骨Cbfα1、OCN mRNA比较差异具有统计学意义(F=13.233、48.338,P<0.05).结论 仙灵骨葆胶囊提高去势大鼠股骨BMD可能是通过提高OCN、Cbfα1 mRNA表达量发挥作用,TbN和BMD及成骨基因OCN、Cbfα1之间的关系尚需要进一步研究.
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核心结合因子α1对成骨及促进骨折愈合作用研究进展
核心结合因子α1(Cbfa1)是成骨细胞发生和分化的特异性转录因子,能够诱导多潜能间充质细胞向成骨细胞表型分化,并激活骨钙蛋白、Ⅱ型胶原蛋白、骨桥蛋白、骨涎蛋白等成骨基因转录.成纤维细胞生长因子、骨形态发生蛋白、肿瘤坏死因子α、糖皮质激素地塞米松、雌激素受体调节剂等多种因子和激素可上调或抑制Cbfa1的表达.随着深入的研究,利用Cbfa1治疗骨质疏松及某些骨缺损和骨折不愈合等骨科疾病也终将使用于临床.
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核心结合因子:血细胞发生及白血病的中心调控者
核心结合因子(CBF)是20世纪90年代初发现的一个转录因子.近年来,随着转录因子在白血病发病分子机制中重要作用的揭示,CBF越来越受到人们的重视.目前,虽然人们对CBF的功能仍未有系统的了解,但已证实了CBF是造血干细胞(HSC)出现及终发育的必备因子.并已初步阐明了CBF与其他因子的相互作用及其各种融合蛋白与不同类型白血病的联系.本文就该领域的研究现状作了一简要概述.
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大剂量阿糖胞苷巩固治疗核心结合因子相关急性髓系白血病的疗效及安全性分析
目的:探讨大剂量阿糖胞苷(HDAraC)巩固治疗核心结合因子相关急性髓系白血病(CBF-AML)的疗效和安全性.方法:回顾分析本院血液科骨髓移植病区2007年至2012年收治的CBF-AML患者应用HDAraC巩固化学治疗(化疗)的临床资料.评估患者总生存(OS)率、无病生存(DFS)率及复发率,并评价其治疗安全性,包括血液学不良反应及胃肠道、中枢神经系统等非血液学不良反应.结果:入选14例患者(男9例、女5例),中位年龄36.5(15～58)岁;AML-M2b 7例,AML-M4E0 7例.共进行38个疗程HDAraC治疗.中位随访32.3个月,预期5年OS率为67.4％±14.0％,5年DFS率为44.6％±14.4％,5年复发率56.3％±14.4％.截止末次随访,10例患者存活,1例死于血小板减少所致颅内出血,3例死于疾病复发.7例患者复发,其中1例为复杂染色体异常,2例AML-M2b伴c-kit基因突变.29个疗程可评价不良反应:所有患者均出现Ⅳ度粒细胞减少和Ⅳ度血小板降低以及粒细胞缺乏性发热,经治疗无严重感染致死病例,1例因血小板减少致颅内出血死亡.患者均有Ⅰ～Ⅱ度胃肠道不良反应.未见中枢神经系统、皮肤等不良反应.结论:HDAraC应用于CBF-AML缓解后巩固化疗的效果和安全性令人满意,值得临床推广应用.
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转录因子Runx2、Osterix与骨髓间质干细胞的成骨分化
在骨髓间质干细胞向成骨细胞的分化过程中,Runx2与Osterix是两个极为重要的转录因子.Runx2又称核心结合因子,属于runt域基因家族,体内外实验均表明Runx2为骨髓间质干细胞成骨分化和骨发育所必需,Runx2基因是骨形成的关键基因.而Osterix则是一种新近发现的含锌指结构的转录因子,它虽不是Runx2表达所需的转录因子,但其位于成骨细胞分化路径中Runx2的下游调控成骨细胞的生成.
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普伐他汀对激素性兔股骨头坏死BMP2 mRNA及Cbfα1 mRNA水平的影响
目的:观察普伐他汀对激素性兔股骨头坏死骨形态发生蛋白2(BMP2)mRNA及核心结合因子(Cbfα1)mRNA水平的影响.方法:将45只实验白兔根据数字表法随机分为对照组(n=15)、模型组(n=15)和普伐他汀组(n=15).模型组和普伐他汀组均构建激素性兔股骨头坏死模型;普伐他汀组予以普伐他汀灌胃,对照组和模型组仅予以生理盐水灌胃.比较各组兔股骨头组织切片骨小梁、骨陷窝及血管数等指标,采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测造模后第8、12、16周时BMP2 mRNA及Cbfα1mRNA表达水平.结果:普伐他汀组血管数量及其直径均明显大于对照组和模型组(P＜0.05),而骨陷窝空缺百分率低于其他两组(P＜0.05);普伐他汀组造模后第8、12、16周时BMP2mRNA及Cbfα1 mRNA表达水平均明显高于对照组和模型组(P＜0.05),且随治疗时间延长,BMP2mRNA及Cbfα1 mRNA表达水平明显升高(P＜0.05);BMP2 mRNA表达水平与Cbfα1 mRNA表达水平之间呈正相关(P＜0.05).结论:普伐他汀可明显改善激素性兔股骨头坏死组织病理学表现,可能通过调节BMP2 mRNA、Cbfα1 mRNA而发挥其作用.
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核心结合因子α1与骨发育
核心结合因子α1（core-binding factor α1, CBFα1）又称为多瘤病毒增强子结合蛋白2αA（polymavirus enhancer binding protein 2αA，PEBP2αA）或急性骨髓性白血病因子3（acute myeloid leukaemia 3, AML3）,属于runt结构域基因家族的转录因子。迄今已发现该家族有3个成员，即CBFα1/PEBP2αA/AML3、CBFα2/PEBP2αB/AML1和 CBFα3/PEBP2αC/AML2，它们的共同特点是在其分子结构中均含有一个氨基酸组成DNA结合区，该结合区由128个氨基酸组成并与果蝇属的分节基因runt同源，由此而被称为 runt结构域〔1〕。它介导runt家族的转录因子与Cbfb/PEBP2β结合形成异二聚体，并因此获得更强的与DNA结合的能力，同时runt 结构域选择性地识别结合靶基因上PyGPyGGTPy序列(Py代表嘧啶)〔2〕，从而产生不同的生物效应。研究表明该序列存在于造血干细胞多种基因的转录增强子上和逆转录病毒LTR的增强子上〔3〕。
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健骨颗粒对大鼠成骨细胞OCN、Cbfal的影响
骨质疏松症主要是由于骨形成、骨吸收偶联的破坏,使骨形成减少,骨量降低所导致.成骨细胞是骨形成的关键细胞,而成骨细胞的分化成熟、功能活性与骨形成密切相关.前期在体、体外实验表明.补肾健脾中药健骨颗粒能明显增强成骨细胞的功能活动.
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达沙替尼联合化疗治疗7例儿童核心结合因子阳性急性髓系白血病患儿疗效评估
目的:对达沙替尼作为第二代酪氨酸激酶抑制剂靶向抑制存在C-KIT突变及KIT蛋白高表达的核心结合因子阳性的急性髓系白血病(AML)患儿的临床有效性和安全性进行评估.方法:选取我中心7例核心结合因子阳性的AML患儿,完善其发病时白细胞总数、骨髓形态、流式免疫分型、染色体核型分析、融合基因定量及突变基因筛查,给予达沙替尼单药治疗或者联合化疗治疗,根据血药物浓度,调整达沙替尼用量,以15天为1个周期评估患儿骨髓形态、流式免疫分型、融合基因定量拷贝数的变化情况.结果:4例患儿经达沙替尼治疗后融合基因降低至低拷贝数,其中2例C-KIT突变的患儿接受治疗后融合基因均降至低拷贝数.1例巩固治疗5个疗程后融合基因高拷贝数的患儿单用达沙替尼,15天融合基因降至低拷贝数.结论:达沙替尼可以增加化疗对核心结合因子阳性的AML的疗效,尤其是存在C-KIT突变及KIT蛋白过表达的患儿.
