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基于PI3K/Akt通路观察五子衍宗方对老龄大鼠精原干细胞增殖的影响
目的:探讨五子衍宗方(Wuzi Yanzong Fang,WYF)基于磷酯酰肌醇3-激酶(PI3K)/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(Akt)信号通路对老龄大鼠精原干细胞增殖的作用及其机制研究.方法:以自然衰老大鼠为研究对象,将40只18月龄SPF级SD雄性大鼠随机分为老龄模型组,WYF低、中、高剂量组,每组10只,另以10只2月龄大鼠作为青年组.WYF低、中、高剂量组分别灌胃给药0.4,0.8,1.6 g·kg-1,青年组、老龄模型组分别灌胃给予生理盐水,每周停药2d,持续给药4个月.末次给药后麻醉处死大鼠,快速取出睾丸组织.免疫荧光法检测Sertoli细胞数量,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测胶质细胞源性神经营养因子(GDNF),前髓细胞锌指蛋白(PLZF),干细胞因子(SCF)和骨形态蛋白4(BMP4) mRNA表达水平,免疫荧光法检测精原干细胞数量及增殖细胞核抗原(PCNA)的表达,蛋白免疫印迹法(Western blot)和免疫荧光法检测磷酯酰肌醇3-激酶(PI3K)和磷酸化丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(p-Akt)的表达与定位.结果:与青年组比较,老龄模型组Sertoli细胞数量未见明显差异,而GDNF,PLZF,SCF和BMP4 mRNA表达水平显著降低,精原干细胞数量减少,PCNA表达下降,PI3K,p-Akt蛋白表达降低(P＜0.01);与老龄模型组比较,WYF各剂量组GDNF,PLZF,SCF和BMP4 mRNA表达水平显著升高,精原干细胞数量增多,PCNA表达上调,PI3K,p-Akt表达明显增多(P＜0.05,P＜0.01).结论:WYF能够明显促进老龄大鼠精原干细胞的增殖,其作用机制可能与调节睾丸内P13K/Akt信号通路有关.
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五子衍宗方的临床运用及现代研究
目的:综述近年来五子衍宗方的临床运用、药理、质控等研究概况.方法:对10余年来该方的临床运用和药理研究文献进行了回顾和总结.结果:该方现代临床用于治疗生殖泌尿、内科及抗衰老、轻度认知障碍等多种疾病;药理研究表明具有提高生殖器官重量、增加雄性激素分泌,降低血糖,提高机体免疫功能,抗衰老及增强学习记忆能力等作用,长期毒性研究证实安全无毒;初步建立五子衍宗丸质量控制标准.结论:五子衍宗方具有多种临床用途,其中促进学习记忆的作用机制仍需进一步研究.
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五子衍宗方对D-半乳糖致衰老小鼠学习记忆及抗氧化损伤的影响
目的:探讨五子衍宗方对D-gal致衰老小鼠学习记忆及抗氧化损伤的影响.方法:小鼠随机分为4组,模型组及给药组皮下注射D-gal,正常组皮下注射NaCl；同时各组给予相应的药物治疗,8周后检测小鼠的学习记忆能力、小鼠的脑、脾脏及胸腺指数、血清中SOD和MDA水平.结果:五子衍宗方能延长小鼠目标象限停留时间,增加穿过平台次数,降低跳台错误次数;降低脑及胸腺重量指数,增加SOD活性,降低MDA含量.结论:五子衍宗方能改善衰老小鼠的学习记忆能力,其机制可能与提高小鼠的抗氧化能力有关.
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五子衍宗方对实验性隐睾小鼠复位固定术后生精功能恢复的影响
目的:研究五子衍宗方对实验性隐睾小鼠复位固定术后睾丸生精功能恢复的促进作用.方法:取Balb/c小鼠随机分为假手术组、模型组、五子衍宗方100、200 mg· kg-组,除假手术组外,其余4组分别行睾丸腹腔固定术制隐睾模型,假手术组将睾丸提至腹腔后即回复阴囊而不行固定术；术后常规饲养14d后,对模型组及五子衍宗方组再行隐睾复位固定术,术后假手术组和模型组每天灌服纯净水0.01mL·g-1,五子衍宗方100、200 mg·kg-剂量组分别灌服相应剂量五子衍宗方,各组小鼠连续给药14 d,于末次给药24 h后检测各组小鼠的睾丸重量、精子密度、活率,流式细胞术分析睾丸各级生精细胞周期,光、电镜观察睾丸组织学变化.结果:五子衍宗方能够提高模型小鼠睾丸重量,增加精子密度、精子活率,恢复睾丸内各级生精细胞百分比,从而改善隐睾小鼠复位固定术后睾丸组织的病理性变化.结论:五子衍宗方能够促进隐睾小鼠睾丸复位固定术后的睾丸生精功能恢复.
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五子衍宗方对环磷酰胺致小鼠DNA损伤的影响
目的：观察五子衍宗方对环磷酰胺(CTX)致小鼠 DNA 损伤的影响,并探讨其作用机制。方法将BalB/c 小鼠随机分为正常组、模型组、五子衍宗方低剂量组、五子衍宗方高剂量组。五子衍宗方低、高剂量组预给药1周后,除正常组外,其余各组腹腔注射CTX 100 mg/kg造模,隔日1次,共3次,同时五子衍宗方低、高剂量组继续给药,末次给予CTX后12 h处死小鼠,分离血清,ELISA检测血清中8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)的含量,应用单细胞凝胶电泳技术检测骨髓细胞DNA损伤。结果五子衍宗方低、高剂量组能够降低血清中8-OHdG的含量,使小鼠骨髓细胞彗星图像的Olive尾矩、尾距、尾长和尾部DNA含量降低。结论五子衍宗方对CTX致小鼠DNA损伤具有较好的保护作用。
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加味五子衍宗方总黄酮对大鼠海马锥体细胞VGCC通道的影响
目的:探讨加味五子衍宗方总黄酮成分对Aβ_(25-35)作用后的大鼠海马CA1区锥体神经元电压门控钙通道电流的作用.方法:应用全细胞膜片钳技术记录海马神经元I_(Ca)电流,采用内向电流的幅度作为观察指标,观察模型药物及干预药物对其的作用.采用出生7 d的乳鼠取海马后制成脑片,选取立体感强、状态好的锥体细胞形成全细胞膜片钳记录,从-50 mV到+50 mV范围(步进为5 mV)一系列去极化电压脉冲刺激(脉冲宽度500 ms),以激发出电压依赖性的内向钙离子电流.记录电流后加入Aβ_(25-35)后,再加入总黄酮进行干预.结果:Aβ_(25-35)淀粉蛋白可以通过增强I_(Ca)可引起胞内钙超载,正常幅度平均为-(157.1±19.9)pA,Aβ_(25-35)作用后增大为-(323.2±23.4)pA,125,250,500 mg·L~(-1)的总黄酮作用之后,分别下降为-(257.9±31.6),-(196.4±29.8),-(169.3±34.0)pA.结论:引起胞内钙离子超载可能是Aβ_(25-35)产生神经毒性作用的机制之一,加味五子衍宗方总黄酮成分可通过抑制钙离子内流对神经元起一定保护作用.
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基于内质网应激研究五子衍宗方对自然衰老大鼠睾丸生殖细胞凋亡的保护作用
基于内质网应激(ERS)研究五子衍宗方对自然衰老大鼠睾丸生殖细胞凋亡的保护作用.将16月龄SPF级SD雄性大鼠随机分为3组,自然衰老组(Ageing),五子衍宗方低剂量组(WZ,1 g·kg-1)和五子衍宗方高剂量组(WZ,4 g·kg-1),另购买2月龄SD雄性大鼠作为青年对照组(Adult),每组10只.给予普通饲料或含药饲料喂养4个月后,处死大鼠,取出睾丸组织备用.苏木素-伊红(HE)染色观察睾丸组织形态;Western blot法检测睾丸组织中内质网应激相关蛋白GRP78,p-PERK,p-eif2α,ATF4,p-IRE1,XBP1,ATF6及其介导的凋亡相关蛋白CHOP,caspase 12,p-JNK的表达水平.HE结果显示,五子衍宗方能明显改善自然衰老所致的睾丸组织形态变化.Western blot结果显示,与自然衰老组相比,五子衍宗方能显著升高自然衰老大鼠睾丸组织内质网应激相关蛋白GRP78,p-PERK,p-eif2α,ATF4,p-IRE1,XBP1,ATF6的表达水平;显著降低内质网应激介导的凋亡相关蛋白CHOP,caspase 12,p-JNK的表达水平.综上所述,五子衍宗方可通过调节内质网应激减轻自然衰老大鼠睾丸生殖细胞凋亡.
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五子衍宗方对自然衰老大鼠睾丸生殖细胞DNA氧化损伤的保护作用研究
基于Nrf2/HO-1通路和碱基切除修复(BER)研究五子衍宗方对自然衰老大鼠睾丸生殖细胞DNA氧化损伤的保护作用.将16月龄SPF级SD雄性大鼠随机分为3组,自然衰老组(Ageing),五子衍宗方低剂量组(WZ,1g·kg-1)和五子衍宗方高剂量组(WZ,4 g·kg-1),2月龄SD大鼠作为青年对照组(Adult),每组10只.给予普通饲料或含药饲料饲养4个月后,处死大鼠,取出睾丸组织备用.采用黄嘌呤氧化酶法和硫代巴比妥酸(TBA)法检测睾丸组织中超氧化物歧化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)含量;免疫荧光检测睾丸组织中8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)和核因子E2相关因子2(Nrf2)的表达和定位;Westernblot法检测睾丸组织中Nrf2及其下游相关蛋白血红素氧合酶-1(HO-1)和醌氧化还原酶(NQO1)的表达水平,BER相关蛋白脱嘌呤脱嘧啶核酸内切酶(APE1)、8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶1(OGG1)和X线修复交错互补基因1(XRCC1)表达的变化情况.结果显示,五子衍宗方能显著提高睾丸SOD活力,降低MDA含量;免疫荧光结果显示,五子衍宗方能明显上调Nrf2的表达,下调8-OHdG的表达;Western blot结果显示,五子衍宗方能显著上调Nrf2,HO-1,NQO1的蛋白表达,显著下调APE1,OGG1,XRCC1的蛋白表达水平.综上所述,五子衍宗方可通过调节Nrf2/HO-1和碱基切除修复通路减轻自然衰老大鼠睾丸DNA氧化损伤.
关键词： 五子衍宗方 Nrf2/HO-1通路 碱基切除修复(BER) 衰老 睾丸 DNA损伤 -
加味五子衍宗方对记忆障碍小鼠空间学习记忆成绩的影响
[目的]初步探讨加味五子衍宗方改善学习记忆障碍的物质基础及其作用机制.[方法]以东莨菪碱建立小鼠记忆获得障碍模型,以Morris水迷宫系统检测模型小鼠空间辨别性学习记忆成绩.[结果]模型组小鼠定位航行实验搜索策略、空间探索实验穿越目标区域次数成绩较空白对照组明显减退(P＜0.05),而加味五子衍宗方及其总黄酮、总多糖组分处理的动物上述成绩显著优于模型组(P＜0.05),其中总多糖组分的作用有优于原复方的趋势.[结论]提示加味五子衍宗方及其总黄酮、总多糖组分对中枢胆碱能系统损伤的学习记忆障碍有保护作用.该复方总黄酮、总多糖组分是其促智的有效组分,其中总多糖组分的作用更为突出.
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基于P53/P21和碱基切除修复通路的五子衍宗方对自然衰老大鼠睾丸DNA损伤的保护作用研究
目的 基于P53/P21和碱基切除修复(BER)通路研究五子衍宗方对自然衰老大鼠睾丸DNA损伤的保护作用.方法 将16月龄SPF级SD雄性大鼠随机分为3组,衰老模型组、五子衍宗方低剂量组(1 g/kg)和高剂量组(4 g/kg),另取2月龄SD雄性大鼠作为青年对照组,每组8只.给予普通饲料或含药饲料饲养4个月后,处死大鼠,取出睾丸组织.免疫荧光检测大鼠睾丸组织中DNA损伤相关蛋白γ-H2AX及BER相关蛋白脱嘌呤脱嘧啶核酸内切酶(APE1)、8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶1(OGG1)和X线修复交错互补基因1(XRCC1)的表达和定位;ELISA法检测大鼠睾丸组织中8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)的量;Western blotting法检测大鼠睾丸组织中p-P53和P21蛋白的表达水平.结果 与衰老模型组相比,五子衍宗方能明显降低睾丸DNA损伤相关蛋白γ-H2AX和BER相关蛋白OGG1、APE1和XRCC1的表达水平;ELISA检测结果显示,与衰老模型组相比,五子衍宗方能显著下调8-OHdG的量;Western blotting结果显示,五子衍宗方能显著降低自然衰老大鼠睾丸-P53、P21的蛋白表达水平.结论 五子衍宗方可通过调节P53/P21和BER通路减轻自然衰老大鼠睾丸DNA损伤.
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五子衍宗方制剂-药材谱峰匹配指纹图谱研究
目的 建立五子衍宗方(WYP)制剂的HPLC指纹图谱,对其中的特征峰进行指认,并对WYP制剂-药材进行谱峰匹配研究.方法 采用HPLC-DAD检测法,色谱柱为Waters Symmetry@C18 (250 mm×4.6 mrm,5 μm),流动相为0.4％磷酸水溶液-乙腈,体积流量1 mL/min,线性梯度洗脱,柱温35℃,检测波长为254 nm,对12个批次的WYP样品进行HPLC指纹图谱相似性评价,并将WYP对照图谱与单味药材进行谱峰匹配.结果 在12批WYP样品色谱图中共有24个共有峰,指认的特征峰有8个,分别为没食子酸(1号峰)、京尼平苷酸(4号峰)、绿原酸(8号峰)、金丝桃苷(19号峰)、异槲皮苷(20号峰)、毛蕊花糖苷(21号峰)、山柰酚-3-O-芸香糖苷(22号峰)和异毛蕊花糖苷(23号峰),单味药材色谱峰与WYP谱峰共有蜂匹配数分别为枸杞子8个(2、3、6、7、8、11、12、18号峰)、菟丝子10个(6、7、8、9、10、15、16、19、20、24号峰)、覆盆子7个(1、3、7、13、14、17、22号峰)、车前子3个(4、21、23号峰)、五味子1个(3号峰).各批WYP样品之间的相似度均大于0.959,各批WYP样品与对照指纹图谱之间的相似度均大于0.979.结论 建立的WYP指纹图谱相似度较高,同时结合制剂用药材与WYP制剂指纹图谱谱峰匹配相结合的方法为wYP的定性、定量鉴别提供了科学、简便可行的评定方法.
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补肺壮精方对精子形态、精浆生化及精液参数的影响
目的:研究补肺壮精方对精子形态、精浆生化及精液参数的影响.方法:将120例男性不育患者随机分为2组,每组60例.方法:治疗组服用补肺壮精方(黄芪、桑白皮、天冬、麦冬、知母、桑叶、桑螵蛸、枳壳、菟丝子、制何首乌、沙苑子、茯苓)治疗,对照组服用五子衍宗方(菟丝子、覆盆子、枸杞子、车前子、五味子)治疗.2个月为1疗程.主要观察治疗前后精子活力、α-中性糖苷酶、精浆果糖及精子形态的变化.结果:治疗组总有效率为86.67%、显效15例、无效8例,对照组总有效率为68.33%、显效9例、无效19例,2组总有效率比较,差异有显著性(P <0.05);治疗后2组患者精浆果糖、糖苷酶及精子形态正常率较治疗前均有显著性升高(P <0.05),但各指标改善情况治疗组均优于对照组,差异有显著性(P <0.05);治疗后2组患者精液参数均高于治疗前(P <0.05),但各指标改善情况治疗组均优于对照组,差异有显著性(P <0.05).结论:补肺壮精方可以明显提高精子活力并改善精子形态.
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五子衍宗方对环磷酰胺致肝损伤的保护作用及其机制研究
目的 研究五子衍宗方(WP)对环磷酰胺(CTX)致肝损伤的保护作用及其机制,以期为临床治疗提供借鉴.方法 2015年9月-2016年6月,将8周龄SPF级BALB/c雄性小鼠40只随机分为正常对照组、模型对照组、WP低剂量组、WP高剂量组,每组10只.应用WP提取黄酮类化合物并将其溶于1%羧甲基纤维素钠(CMC-Na),WP低剂量组和WP高剂量组提前3 d分别给予黄酮类化合物140、280 mg/kg,灌胃给药30 d,1次/d;从第3天开始,除正常对照组腹腔注射等量0.9%氯化钠溶液外,其余各组均腹腔注射CTX 50 mg/kg造模,每隔2 d注射1次,共10次.模型对照组血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平与正常对照组比较有统计学差异提示造模成功.后一次注射CTX 12 h后眼球取血、脱臼处死小鼠.检测血清ALT、AST水平;取肝脏,计算肝脏系数,HE染色法观察肝组织形态学表现,检测肝组织中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平.结果 模型对照组小鼠血清ALT、 AST水平高于正常对照组(P<0.01);WP低剂量组、WP高剂量组小鼠血清ALT、 AST水平低于模型对照组(P<0.05).模型对照组肝脏系数高于正常对照组、WP低剂量组、WP高剂量组(P<0.01).模型对照组小鼠肝小叶和肝索排列混乱,肝细胞肿胀明显并伴有坏死,胞质疏松.WP低剂量组、WP高剂量组肝小叶排列较整齐,肝细胞肿胀和胞质疏松程度较模型对照组明显减轻,肝细胞形态均匀,排列规整.模型对照组肝组织SOD水平低于正常对照组、WP低剂量组、WP高剂量组,MDA水平高于正常对照组、WP低剂量组、WP高剂量组(P<0.05).结论 WP对CTX所致肝损伤具有良好的保护作用,其机制可能与提高机体的抗氧化能力,清除体内自由基有关.
关键词： 药物性肝损伤 环磷酰胺 药理作用分子作用机制 五子衍宗方 -
五子衍宗方对生精障碍模型大鼠睾丸TGF-β1/Smads信号转导通路的影响
目的:观察五子衍宗方对生精障碍模型大鼠睾丸TGF -β1/Smads信号转导通路的影响,探讨其治疗男性不育症的作用机制.方法:采用随机数字表法将50只雄性SD大鼠分为正常对照组、模型组、甲基睾酮组和五子衍宗方低、高剂量组,每组10只.除正常对照组外,其余各组大鼠按醋酸棉酚50mg/kg体质量灌胃给药,制备生精障碍模型.正常组和模型组大鼠灌服蒸馏水,甲基睾酮组大鼠灌服甲基睾酮混悬液,五子衍宗方低、高剂量组大鼠分别给予低、高浓度(含1.75g、3.5g生药/mL)五子衍宗方混悬液灌胃,每天1次,连续30天.光镜下观察大鼠睾丸组织结构变化,免疫组化法检测大鼠睾丸组织TGF -β1、Smad2、Smad4蛋白表达量.结果:棉酚可造成大鼠睾九曲细精管萎缩、退化,管壁变薄,生精细胞减少,排列紊乱,精子发生障碍；睾丸组织TGF -β1表达上调(P＜0.01),Smad2、Smad4表达下调(P＜0.01).五子衍宗方能显著下调大鼠睾丸TGF -β1表达(P＜0.01),上调Smad2、Smad4表达(P＜0.01),拮抗棉酚造成的大鼠睾丸组织结构损伤.结论:通过调控TGF -β1/Smads信号转导通路,改善大鼠睾丸的生精功能,可能五子衍宗方治疗不育症的作用机制之一.
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五子衍宗方对生精障碍模型大鼠附睾精子参数及血清抑制素B的影响
目的:观察五子衍宗方对生精障碍模型大鼠附睾精子参数及血清抑制素B水平的影响.方法:采用随机数字表法将50只雄性SD大鼠分为正常对照组、模型组、甲基睾酮组和五子衍宗方低、高剂量组,每组10只.除正常对照组外,其余各组大鼠按醋酸棉酚50mg/kg体质量灌胃给药,制备生精障碍模型.正常组和模型组大鼠灌服蒸馏水,甲基睾酮组大鼠灌服甲基睾酮混悬液,五子衍宗方低、高剂量组大鼠分别给予低、高浓度(含1.75g、3.5g生药/mL)五子衍宗方混悬液灌胃,每天1次,连续1个月.观察各组大鼠睾丸湿重、睾丸指数及间质细胞数,按WHO标准,采用WLJY - 9000荧光染色精子动(静)态图像分析系统检测附睾精子参数,ELISA法检测大鼠血清抑制素B水平.结果:棉酚可造成大鼠睾丸减轻、睾丸指数减小、间质细胞数减少(P＜o.01)；附睾精子密度降低,活动率和前向运动率(a+b％)下降(P ＜0.05,P＜0.01),血清抑制素B水平降低(P＜0.01)；五子衍宗方能显著改善大鼠睾丸重量及睾丸指数,增加间质细胞数,改善附睾精子参数(P＜0.05,P＜0.01),上调血清抑制素B水平(P＜0.01),拮抗棉酚造成的大鼠睾丸生精功能损伤.结论:通过上调抑制素B水平,改善睾丸生精功能,可能五子衍宗方治疗不育症的作用机制之一.
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五子衍宗方对环磷酰胺致小鼠肝脏细胞DNA损伤的保护作用
目的 研究五子衍宗方对环磷酰胺(CTX)诱导的小鼠肝脏细胞DNA损伤的保护作用.方法 将BALB/c小鼠随机分为正常对照组,模型组,五子衍宗方低、高剂量组,每组10只.五子衍宗方组预给药一周之后,除正常对照组之外,其余各组注射CTX(100 mg/kg)隔天给药共3次,末次注射CTX 12 h后处死小鼠.检测小鼠的肝脏指数,血清中丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)活力.硫代巴比妥酸法检测肝脏中丙二醛(MDA)的量,ELISA检测肝脏中8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)的量,单细胞凝胶电泳技术检测肝脏细胞的DNA损伤.结果 五子衍宗方能够升高小鼠的肝脏指数,降低ALT、AST的活力,降低肝脏中的8-OHdG、MDA的量,五子衍宗方组均可以使小鼠Olive尾矩、尾长、尾距和尾部DNA％降低.结论 五子衍宗方能拮抗CTX造成的小鼠肝脏细胞的DNA损伤,提高肝脏的抗氧化能力.
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五子衍宗方对H22荷瘤小鼠环磷酰胺化疗的减毒作用
目的 研究五子衍宗方对H22荷瘤小鼠环磷酰胺(环磷酰胺)化疗的减毒作用.方法 建立H22荷瘤小鼠模型,实验小鼠接种H22后,随机分为4组,即荷瘤对照组、环磷酰胺组、环磷酰胺加五子衍宗方高剂量组(840mg/kg)、环磷酰胺加五子衍宗方低剂量组(420mg/kg).检测各组小鼠外周血红细胞、白细胞、血小板数量和骨髓有核细胞数量变化,观察各组荷瘤小鼠瘤质量的变化以及抑瘤率,流式细胞术分析小鼠脾脏中CD4+、CD8+、CD19+、CD69+ CD4+绝对数量和CD4+/CD8+比例变化.结果 环磷酰胺化疗小鼠出现红细胞、白细胞、血小板数量下降,脾脏淋巴细胞CD4+、CD8+、CD19+亚群绝对数量显著减少,并且CD69+CD4+绝对数量和CD4+/CD8+比例下降.与环磷酰胺单用组相比,五子衍宗方联合环磷酰胺组红细胞、白细胞、血小板数量明显恢复；小鼠瘤质量降低,抑瘤率升高；小鼠脾脏淋巴细胞CD4+、CD8+、CD19+亚群绝对数量显著增加,并且CD69+CD4+绝对数量和CD4+/CD8+比例明显上升.结论 五子衍宗方可减轻环磷酰胺对H22荷瘤小鼠化疗的毒副作用,其机制可能与改善机体免疫功能有关.
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五子衍宗方对环磷酰胺致小鼠睾丸细胞DNA损伤的影响
目的 探讨五子衍宗方(枸杞子、菟丝子、覆盆子、车前子、五味子)对环磷酰胺致成年雄性小鼠睾丸细胞DNA损伤的影响.方法 将50只成年雄性Balb/C小鼠中40只腹腔注射环磷酰胺后随机均分为模型对照组(生理盐水)以及五子衍宗方低、中、高剂量组(100、200、400 mg/kg),10只另设正常对照组(生理盐水),乙醚麻醉小鼠后颈椎脱臼处死.检测小鼠精子数量、精子活率及精子畸形率,酶联免疫吸附测定法(ELISA)法检测血清中8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)的含有量,单细胞凝胶电泳技术检测睾丸细胞DNA损伤程度,Western blot检测睾丸组织中磷酸化的肿瘤抑制蛋白53 (p-P53)、γ位磷酸化的组蛋白(y-H2AX)蛋白表达.结果 相较于模型对照组,五子衍宗方各组可显著升高小鼠精子数量、精子活率,显著降低精子畸形率、血清8-OHdG水平,显著降低睾丸组织中p-P53与γ-H2AX蛋白表达.结论 五子衍宗方能通过下调p-P53、γ-H2AX蛋白表达来显著减轻环磷酰胺致小鼠睾丸细胞DNA损伤.
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五子衍宗方对环磷酰胺致小鼠睾丸氧化损伤的保护作用
目的 研究五子衍宗方(枸杞子、覆盆子、菟丝子、车前子、五味子)对环磷酰胺致小鼠睾丸氧化损伤的保护作用及其机制.方法 将8周龄的Balb/C小鼠随机分组.空白对照组腹腔注射生理盐水,实验组连续7d腹腔注射环磷酰胺50 mg/kg,然后空白对照组和模型组灌胃生理盐水,五子衍宗方组灌胃五子衍宗方提取物28 d.检测各组小鼠睾丸质量、附睾质量、精子密度、精子活率、睾丸组织中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)活性及丙二醛(MDA)水平;原位末端标记法检测生精细胞凋亡程度,Real-time PCR检测睾丸组织中SOD、GPX、Bcl-2、Bax mRNA表达水平,免疫组织化学法检测睾丸组织中凋亡相关基因Bcl-2、Bax的表达情况.结果 与模型组比较,五子衍宗方能显著增加模型小鼠睾丸质量、附睾质量、精子密度和活率,提高模型小鼠睾丸组织中SOD、GPX的活性、降低MDA水平,上调SOD3、GPX1、Bcl-2基因的表达,下调Bax基因的表达,上升Bcl-2/Bax蛋白表达的比例.结论 五子衍宗方能够显著恢复环磷酰胺致小鼠的睾丸生殖功能损伤,其机制可能与提高睾丸内抗氧化损伤,减少生精细胞凋亡有关.
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五子衍宗方与左卡尼汀治疗男性不育症的Meta分析
目的 评价五子衍宗方与左卡尼汀治疗男性不育症的临床疗效.方法 检索五子衍宗方治疗男性不育症的临床随机对照研究(RCTs),根据Cochrane 5.1手册要求,分别选择研究、提取数据并评价纳入RCTs的质量,使用Rev-Man 5.3软件进行Meta分析.结果 纳入4项研究,共324例患者.Meta分析显示,五子衍宗方有效率(RR=1.25,95％CI:0.99～1.58,P=0.06)、受孕率(RR=1.76,95％CI:0.81～3.82,P=0.15)、精液量增加值(MD=-0.04,95％CI:-0.41～0.34,P=0.85)、精子密度增加值(SMD=0.65,95％CI:-0.12～1.43,P=0.10)、A级精子百分率提高值(MD=1.89,95％CI:-10.41～14.20,P=0.76)、A+B级精子百分率提高值(MD=3.42,95％CI:-5.00～11.84,P=0.43)均与左卡尼汀相当,但精子活率提高值不及左卡尼汀(MD=-12.42,95％CI:-22.06～-2.78,P=0.01).结论 本次系统评价结果显示,五子衍宗方治疗男性不育症疗效有一定的价值,但鉴于纳入研究有一定的局限性,需按中医辩证论治来设计良好的大规模临床随机对照研究来验证.
