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扶肾降浊方对肾间质纤维化大鼠的治疗作用及TGF-β1,HGF,Col Ⅰ蛋白表达的影响
目的:观察扶肾降浊方对肾间质纤维化大鼠的生化指标,肾组织形态及纤维化因子转化生长因子-β1(TGF-β1),肝细胞生长因子(HGF),Ⅰ型胶原(Col Ⅰ)蛋白表达的影响.方法:在系膜增生性肾炎(MsPGN)的基础上,延长造模至12周,使其自然发展成肾间质纤维化模型,24只大鼠随机分为正常组、模型组、扶肾降浊方中药组、贝那普利西药组,分别检测大鼠血清尿素氮(BUN),血清肌酐(SCr),测定24 h蛋白尿,在光镜下观察肾组织切片病理改变,运用免疫组化法观察肾组织切片中TGF-β1,HGF,Col Ⅰ蛋白的表达情况.结果:通过对大鼠血清BUN,SCr,24 h蛋白尿定量的检测和肾组织形态的观察,模型组较正常组有明显的肾间质损伤(P＜0.01),中药组和贝纳普利组损伤程度均减轻(P＜0.01);第12周末,造模各组肾小管间质TGF-β1和Col Ⅰ蛋白表达均高于正常组(P＜0.01),扶肾降浊方组及贝纳普利组均显著低于模型组(P＜0.01);而模型组HGF蛋白表达低于正常组(P＜0.01),扶肾降浊方组及贝纳普利组均高于模型组(P＜0.01).结论:扶肾降浊方可抑制TGF-β1和Col Ⅰ蛋白表达,促进HGF蛋白的升高,对肾间质纤维化有明显的保护作用.
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胶原蛋白Ⅰ、胶原蛋白Ⅲ在糖尿病大鼠血管病变中的表达及中药的干预
[目的]对中药干预下的糖尿病大鼠动脉损伤模型的胶原蛋白的表达进行研究,为糖尿病大鼠动脉损伤纤维病变学说和中药干预糖尿病血管并发症的可行性提供实验学依据.[方法]雄性SD大鼠48只,按随机数字表法随机分为A-正常对照组,B-糖尿病对照组,C-中药治疗组,D-二甲双胍治疗组,其中B、C、D3组为糖尿病模型组,观察各组大鼠股动脉中胶原蛋白Ⅰ、Ⅲ的含量.[结果]糖尿病模型组与正常对照组比较,胶原蛋白Ⅰ、胶原蛋白Ⅲ均明显升高；各治疗组治疗后与糖尿病对照组比较,胶原蛋白Ⅰ、Ⅲ表达明显下降；中药治疗组与西药治疗组比较,胶原蛋白Ⅰ、Ⅲ表达下降(P＜0.05).[结论]胶原蛋白Ⅰ、Ⅲ在中、晚期糖尿病大鼠的大血管中显著增加,提示糖尿病大血管病变可能与胶原蛋白有关；中药组方加味桃核承气汤能有效降低致纤维化因子胶原蛋白在实验性糖尿病大血管病变中的表达,对糖尿病大血管病变有改善作用.
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MicroRNA-192在UUO幼年大鼠肾间质的表达及雷公藤多苷的干预研究
目的：研究幼年大鼠单侧输尿管结扎（UUO）致肾间质纤维化模型中，MicroRNA-192（miR-192）、Ⅰ型胶原的表达以及用免疫抑制剂雷公藤多苷（TWP）的干预效果。方法选用4~5周龄幼年SD雄性大鼠54只，按随机数字表法均分为3组，假手术组、UUO模型组及TWP治疗组，分别于治疗满3、7、14 d杀鼠取左肾，采用实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）方法对各组miR-192及Ⅰ型胶原mRNA进行定量检测。结果假手术组miR-192、Ⅰ型胶原mRNA仅微量表达，各时间点组内比较差异无统计学意义（P＞0．05）。与假手术组相比， UUO模型组miR-192、Ⅰ型胶原mRNA表达增加（P＜0．01），且随着梗阻时间的延长，两者的表达逐渐增强，各时间点组内比较差异有统计学意义（P＜0．01）；与UUO模型组相比，TWP治疗组可以减低miR-192、Ⅰ型胶原mR-NA的表达（P＜0．01），但仍高于假手术组（P＜0．01）。结论在幼年大鼠单侧输尿管梗阻致肾间质纤维化模型中， miR-192可能起促进作用；雷公藤多苷可有效抑制miR-192、collagenⅠ的表达，改善肾间质纤维化。
关键词： MicroRNA-192 肾间质纤维化 单侧输尿管结扎 胶原蛋白Ⅰ 雷公藤多苷 -
新基因JDP2通过不同通路抑制人胰腺癌上皮向间质转化作用的研究
目的 研究Jun二聚化蛋白2(JDP2)与人胰腺癌细胞系BxPC3上皮向间质转化(EMT)之间的关系.方法 应用pCEFL-HA-JDP2质粒瞬时转染BxPC3细胞系,并继续分别用转化生长因子β1(TGF-β1)和Ⅰ型胶原(Collagen Ⅰ)诱导,以仅加DMSO为空白对照组,倒置显微镜观察细胞形态学变化,Western blot及免疫荧光检测E-cadherin、vimentin的表达.Transwell小室侵袭实验验证侵袭能力的变化.结果 与空白对照组相比,转染JDP2组上皮标志物E-cadherin及间质标志物vimentin表达变化不明显,而转染空质粒组则E-cadherin表达降低而vimentin表达升高,提示JDP2能够抑制由Collagen Ⅰ及TGF-β1诱导的EMT;同时我们验证,转染JDP2质粒组细胞侵袭能力亦明显小于转染空质粒组细胞(P＜0.05).结论 JDP2,作为AP-1类因子的抑制因子,可以通过不同通路抑制EMT的产生,从而为胰腺癌的分子靶向治疗找到新的方向.
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雷米普利对实验性心衰大鼠左心室重构及非梗死区胶原影响的研究
目的 研究雷米普利对心肌梗死后心衰大鼠左心室重构及非梗死区胶原的影响.方法 将结扎大鼠左冠状动脉前降支并饲养6周的24只存活大鼠随机分为假手术组(Sham group,n＝8)、模型组(Model group,n＝8)及雷米普利组(Ramipril group,n＝8),连续灌胃给药4周后测定大鼠血流动力学参数,全心及左室肥厚指她(HW/BW,LVHW/BW),ELISA方法检测血清血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)的含量,RT-PCR 法测定非梗死区心肌组织胶原蛋白Ⅰ(col-Ⅰ)及胶原蛋白Ⅲ(col-Ⅲ)mRNA 表达水平.结果 雷米普利能明显升高左心室内压大上升和大下降速率(±dp/dtmax),降低左心室收缩压(LVSP)、左心室舒张末压(LVEDP)、心肌肥厚指数、血清血管紧张素Ⅱ的含量及下调col-Ⅰ、col-Ⅲ mRNA 表达水平(P＜0.05-0.01),但对心率(HR)、收缩压(SBP)、舒张压(DBP)无明显影响(P＞0.05).结论 雷米普利对心肌梗死后心衰大鼠心肌间质胶原重构有显著的抑制作用, 抗心室重构的作用机制与下调胶原蛋白mRNA表达有关.
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氧化铍致大鼠肺纤维化及相关指标的动态变化
[目的]探讨氧化铍(BeO)致SD大鼠肺纤维化过程中肺组织的病理变化及纤维化相关指标的动态变化.[方法]无特定病原体(SPF)级SD雄性大鼠64只,随机分为阴性对照组、BeO染毒组.染毒方法采用一次性非暴露式气管内灌注法,BeO染毒组灌注0.5 mL浓度为10g/L的BeO悬浮液,阴性对照组灌注相同体积的质量分数为0.9％的生理盐水溶液.两组大鼠分别于染毒后的第20、40、60和80天4个时间点处死,每时间点每组各8只.取肺组织制作病理标本通过光学显微镜观察其肺组织病理变化并检测血清和肺组织匀浆中的胶原蛋白Ⅰ (COL-Ⅰ)、胶原蛋白Ⅲ(COL-Ⅲ)、平滑肌肌动蛋白α(α-SMA)、转化生长因子β1(TGF-β1)的表达. [结果]BeO染毒组肺组织病理观察染毒早期主要病理改变为支气管、肺间质炎性细胞浸润,并以单核/巨噬细胞为主,肺泡隔增厚,染毒后期肺泡间隔明显增厚,肺泡腔缩小,部分肺泡结构消失,肺泡结构紊乱,局部可见纤维化结节,结节中央可见BeO粉尘,肺组织局部发生实变.肺组织匀浆中:染毒组中COL-Ⅰ表达高于同时间点的阴性对照组(P＜0.05),染毒后60、80天COL-Ⅲ表达高于同时间点阴性对照组(P＜0.05),染毒后80天α-SMA表达高于同时间点阴性对照组(P＜0.05),染毒后60、80天TGF-β1表达高于同时间点阴性对照组(P＜0.05);与染毒后20天时比较,阴性对照组中各指标其他所有时间点与之差异均无统计学意义,染毒后40、60、80天COL-Ⅰ表达高于20天的(P＜0.05),染毒后80天α-SMA、COL-Ⅲ、TGF-β1表达高于20天的(P＜0.05).血清中:染毒后60、80天COL-Ⅲ和TGF-β1表达高于同时间点阴性对照组(P＜0.05),染毒后80天COL-Ⅰ表达高于同时间点的阴性对照组(P＜0.05),染毒组中α-SMA表达均高于同时间点阴性对照组(P＜0.05);与20天时比较,阴性对照组中各指标其他所有时间点与之差异均无统计学意义;染毒后60、80天COL-Ⅲ及染毒后80天COL-Ⅰ和TGF-β1的表达均高于20天的(P＜0.05). [结论] BeO染毒后肺组织发生纤维化,肺组织匀浆中和血清中COL-Ⅰ、COL-Ⅲ、α-SMA、TGF-β1的表达水平在不同时间点升高.
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盆底功能障碍性疾病患者宫颈组织Ⅰ型胶原蛋白及MMP1-mRNA的表达
目的 研究女性盆底功能障碍疾病(pelvic floor dysfunction,PFD)患者的宫颈组织中胶原蛋白Ⅰ型的含量变化及影响胶原蛋白Ⅰ型的细胞外基质(extracellular matrix,ECM)金属蛋白酶(MMP1)的表达.方法 应用ELISA和RT-PCR两种方法,分别从蛋白水平和核酸水平测定胶原蛋白Ⅰ型的含量变化及影响蛋白代谢的基质金属蛋白酶(MMP1)的mRNA表达.结果 PFD组宫颈组织胶原Ⅰ型含量下降,与正常对照组比较,有显著性差异(P<0.01);PFD组宫颈间质中MMP1-mRNA表达增强,与对照组比较具有显著性差异(P<0.001);分析宫颈胶原蛋白Ⅰ型与MMP1-mRNA表达的相关性,两者成负相关(r=-0.493,P<0.05).说明PFD患者其宫颈组织Ⅰ型胶原蛋白的降低与MMP1对其降解增加有关.结论 PFD患者宫颈组织Ⅰ型胶原蛋白的减少,MMP1的表达增加,表明PED患者宫颈组织Ⅰ型胶原蛋白含量的减少与MMP1增加有关,与本身合成量无关;宫颈组织胶原蛋白含量减少和代谢异常可以用于判断女性盆底组织的支持状况,预防PFD的发生.
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鬼箭羽醇提物对四氯化碳诱导小鼠肝纤维化模型的作用
目的 探讨鬼箭羽醇提物对四氯化碳(CCl4)致小鼠肝纤维化的作用与机制.方法 80只C57BL/6♂小鼠随机分成8组:正常组、CCl4组、鬼箭羽醇提物早期治疗组(EAE)和后期治疗组(EAL),治疗组再分别分为低、中、高剂量组(EAE-L/M/H,EAL-L/M/H),每组10只.腹腔注射CCl4制备肝纤维化模型,共30 d,EAE和EAL分别于前15 d和后15 d灌胃不同剂量EA.处死后,HE和Masson染色观察肝组织与胶原纤维变化,ELISA检测血清(ALT)、(AST)、(TNF-α)变化,免疫组化和 Western blot检测 α-SMA、Colla-genⅠ的表达.结果 与正常组相比,EA 各组的肝指数、ALT、AST、TNF-α及α-SMA、CollagenⅠ的表达呈剂量依赖性的低于模型组(P<0.05或P<0.01);EAE和EAL各组肝组织形态与胶原纤维变化也明显呈剂量依赖性优于模型组;且EAE组在HE染色、Masson染色及α-SMA、CollagenⅠ的表达方面,效果明显优于EAL组(P<0.05).结论 EA呈剂量依赖性阻止CCl4所诱导的小鼠肝纤维化,且早期治疗效果明显,其机制可能与抑制TNF-α的生成,进而影响α-SMA、CollagenⅠ的表达有关.
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抗TGF-β2抗体对滤过泡瘢痕成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达的影响
目的 观察抗转化生长因子-β2(TGF-β2)抗体对体外培养的滤过泡成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达的影响.方法 利用手术修复人眼小梁切除术后失败滤过泡修复时切除下来的瘢痕组织进行组织块培养,获得成纤维细胞(FB).将0、0.01、0.1、1μg/mL抗TGF-β2抗体作用于FB 24h以及0.14μg/mL(半数抑制率质量浓度,IC50)抗体作用0、24、48、72h,通过生物化学显色法、RT-PCR法检测抗TGF-β2抗体对成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的表达量. 结果在FB中加入0、0.01、0.1、1μg/mL抗TGF-β2抗体作用24h及IC50质量浓度处理0、24、48、72h,结果显示随着抗TGF-β2抗体质量浓度增加及作用时间延长,Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达依次减少,羟脯氨酸(HPr)及胶原含量逐渐降低(P＜0.05).结论 抗TGF-β2抗体能减少Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的表达及合成.
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酚妥拉明对心肌重构大鼠心肌细胞外基质的影响
目的 探讨酚妥拉明对去甲肾上腺素诱导大鼠心肌肥厚心肌细胞外基质(ECM)重塑的影响及可能机制.方法 24只雄性SD大鼠随机分为对照组、去甲肾上腺素造模组(模型组)和去甲肾上腺素+酚妥拉明组(治疗组).采用超声心动图观察心脏结构及功能变化,测定胶原容积积分(CVF)、羟脯氨酸、心肌胶原含量,用免疫组织化学法检测心肌组织基质金属蛋白酶2和胶原蛋白Ⅰ的蛋白表达.结果 模型组大鼠发生左心室肥厚,其羟脯氨酸含量、CVF值显著高于对照组(P＜0.01),基质金属蛋白酶2和胶原蛋白Ⅰ蛋白表达上调(P＜0.01).治疗组心肌肥大明显改善,羟脯氨酸、CVF降低,基质金属蛋白酶2和胶原蛋白Ⅰ蛋白表达下降(P＜0.05).结论 酚妥拉明可有效减轻SD大鼠心肌肥厚的发生及ECM重塑;酚妥拉明缓解ECM重塑可能与其降低心肌组织中基质金属蛋白酶2和胶原蛋白Ⅰ的表达有关.
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抗纤灵Ⅰ方对小鼠血吸虫病肝纤维化的干预及机制探讨
目的：观察抗纤灵Ⅰ方对小鼠血吸虫病肝纤维化的干预效果，探讨抗纤灵Ⅰ方干预血吸虫肝纤维化的可能分子机制，为抗纤灵Ⅰ方的临床应用提供实验依据。方法采用日本血吸虫尾蚴经皮肤贴片感染昆明小鼠，建立血吸虫病早期肝纤维化动物模型，将建模成功的小鼠用吡喹酮药物连续杀虫治疗后分为抗纤灵Ⅰ方低、中、高剂量组，抗纤灵Ⅰ方的丹参加味方低、中、高剂量组，秋水仙素治疗对照组，蒸馏水灌胃对照组和未做任何处理的模型对照9组。以未感染血吸虫的正常小鼠为肝纤维化阴性对照组。各实验组连续灌胃治疗8周，收集各组小鼠肝脏，HE染色观察肝纤维化病理改变，测量肝组织虫卵肉芽肿平均面积；免疫组化染色方法检测肝组织内胶原蛋白Ⅰ、Ⅲ、MMP-1蛋白酶以及TIMP-1蛋白的表达，比较各组间的蛋白表达差异。结果 HE染色显示，与模型组和正常对照组相比抗纤灵Ⅰ方及其丹参加味方高剂量组可显著减少肝组织虫卵肉芽肿面积（P<0.05）；免疫组化染色结果显示，与模型组比较，抗纤灵Ⅰ方及其丹参加味方中、高剂量组干预后小鼠肝组织内的胶原Ⅰ、Ⅲ蛋白以及TIMP-1蛋白表达显著减少（P<0.05）、MMP-1蛋白酶表达显著增加（P<0.05），但抗纤灵Ⅰ方与丹参加味方之间差异无统计学意义（P＞0.05）。结论抗纤灵Ⅰ方及其丹参加味方对小鼠血吸虫病肝纤维化具有较好的干预效果，但两者在疗效上差异无统计学意义，丹参未能增强抗纤灵Ⅰ方的干预肝纤维化效果；抗纤灵Ⅰ方的干预机制可能是通过抑制肝组织内胶原蛋白Ⅰ、Ⅲ和TIMP-1蛋白的表达，增加MMP-1蛋白酶的表达来发挥作用。
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1-磷酸鞘氨醇对肺成纤维细胞纤维化发生的影响和机制
目的:研究S1P对HLF细胞纤维化的影响及机制.方法:(1)分别用S1P(1μmol/L)、FTY720-P(5μmol/L)、ponesimod(5μmol/L)、SEW2871(5μmol/L)处理HLF细胞24 h,使用Western Blot法测ECM相关蛋白表达并与只加培养基空白组对比;(2)分别用S1P1R拮抗剂W146(1μmol/L)、S1P2R拮抗剂JTE-013(0.2μmol/L)和S1P3R拮抗剂TY-52156(1.25μmol/L)预处理HLF细胞1 h,再加入S1P及S1PR激动剂分组孵育24 h后测ECM相关蛋白表达并与无拮抗剂对照组对比;(3)使用S1P2R拮抗剂JTE-013和S1P3R拮抗剂TY-52156共同预处理HLF细胞1 h,加入S1P及S1PR激动剂分组孵育24 h后测ECM相关蛋白表达并与无拮抗剂对照组及单一拮抗剂组对比.结果:(1)S1P及选择性S1P受体激动剂组均上调ECM表达,但程度不同;(2)S1P1R拮抗剂W146不影响S1P及S1PR激动剂诱导ECM合成,S1P2R拮抗剂JTE-013及S1P3R拮抗剂TY-52156均下调S1P及S1PR激动剂诱导ECM合成;(3)两种拮抗剂同时使用能使S1P及非选择性S1PR激动剂诱导ECM合成进一步降低,但不能使ponesimod组进一步降低.结论:HLF细胞中,S1P通过与S1P2R和S1P3R结合增加ECM相关促纤维化蛋白表达.
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黄芪注射液对压力过载性左心室肥厚大鼠心肌胶原蛋白Ⅰ、Ⅲ表达的影响
目的:观察黄芪注射液对大鼠压力过载性心肌肥厚的逆转作用,并探讨胶原蛋白Ⅰ、Ⅲ在肥厚心肌中的表达变化及黄芪注射液对其的影响.方法:采用缩窄大鼠腹主动脉建立心肌肥厚模型,术后12周开始给药,连续12周.测定大鼠左心室质量指数(LVWI),观察黄芪注射液对大鼠心肌组织病理变化的影响;检测大鼠左心室组织胶原蛋白Ⅰ、Ⅲ的表达.结果:黄芪注射液呈剂量依赖性抑制模型大鼠左心室LVWI的增加,其中高剂量黄芪注射液与卡托普利作用相似.黄芪注射液和卡托普利均能减轻模型大鼠心肌胞外基质过多沉积,改善心肌细胞受压萎缩或空泡变性的程度;均能抑制心衰大鼠左心室组织中胶原蛋白Ⅰ的表达,而胶原蛋白Ⅲ的表达无显著变化.结论:黄芪注射液对压力过载所致大鼠左心室肥厚有抑制作用,其机制可能与下调心肌组织胶原蛋白Ⅰ的表达有关.
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肝癌细胞侵袭行为与其流变特性相关
以原代肝细胞、肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma, HCC)细胞及对人工基底膜Matrigel具有侵袭能力的HCC细胞(HCC-Inv细胞)为研究对象,研究了三种细胞的粘弹特性、与胶原蛋白Ⅰ的粘附力学特性及与肝血窦内皮细胞(Liver sinosoidal endothelial cell, LEC)的粘附力学特性.结果发现,HCC细胞的上述流变特性较之于肝细胞发生明显的变化;与肝细胞及HCC细胞相比较,HCC-Inv细胞表现出高的粘弹特性,高的与胶原蛋白Ⅰ的粘附力,高的与LEC的粘附力;免疫细胞化学的结果证实了HCC细胞与HCC-Inv细胞形态与细胞骨架结构的差异.作者对肝癌细胞流变特性改变及病理学意义作了简要讨论.
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IgA肾病肾间质纤维化患者血清胶原蛋白I、血小板衍生生长因子、转化生长因子-β1水平变化及意义
目的：探讨 IgA 肾病肾间质纤维化患者血清胶原蛋白-Ⅰ( Col-Ⅰ)、血小板衍生生长因子(PDGF)、转化生长因子-β1(TGF-β1)水平变化及意义。方法选取90例IgA肾病肾间质纤维化患者为观察组,根据牛津分型又分为轻度组、中度组和重度组,每组30例；另选取60例肾小球微小病变患者为对照组,60例健康体检者为健康组。检测各组患者血清β2微球蛋白(β2-MG)、血肌酐( Scr)、血尿酸( UA)、胱抑素C( CysC)水平及血清 Col-Ⅰ、PDGF、TGF-β1水平,采用 Pearson 相关性分析观察各指标间相关性。结果观察组患者血清β2-MG、Scr、UA、CysC水平显著高于对照组和健康组,且随着肾间质纤维化程度的加重,观察组患者血清β2-MG、Scr、UA、CysC水平也显著增高(P均<0.05)。观察组患者血清Col-Ⅰ、PDGF、TGF-β1水平均显著高于对照组和健康组,且随着肾间质纤维化程度的加重,观察组患者血清Col-Ⅰ、PDGF、TGF-β1水平也显著升高(P均<0.05)。观察组患者血清Col-Ⅰ、PDGF、TGF-β1水平与肾功能指标β2-MG、Scr、UA、CysC水平均呈显著正相关(P<0.05)。结论 IgA肾病肾间质纤维化患者血清Col-Ⅰ、PDGF、TGF-β1的表达显著增加,其水平与患者肾功能损伤和肾间质纤维化程度有关。
