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白屈菜红碱诱导人肝癌细胞HepG2凋亡及机制探讨
目的:研究白屈菜红碱(CHE)体外诱导人肝癌细胞HepG2凋亡的作用与机制.方法:以肝癌HepG2细胞为研究对象,通过噻唑蓝(MTT)法测定CHE对细胞的增殖作用,荧光染料Hoechst 33285染色观察CHE对人肝癌细胞HepG2凋亡形态的变化,免疫印迹法(Western blot)及实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),Bcl-2家族的抑凋亡蛋白Bcl-xl,促凋亡相关半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白和基因表达.结果:与溶剂组比较,CHE能显著抑制HepG2细胞的增殖,其6,12,24 h的半数抑制浓度(IC50)分别为12.98,10.53,11.21 μmol·L-1,在Hoechst 33258染色结果中,CHE组出现细胞凋亡的典型特征;与溶剂组比较,高浓度CHE能明显上调Bax,Caspase-3的蛋白及mRNA表达,明显降低Bcl-xl蛋白及mRNA表达(P＜0.05).结论:白屈菜红碱能抑制肝癌细胞HepG2的增殖,并能上调促凋亡蛋白和mRNA,下调抗凋亡蛋白和mRNA表达,进而诱导凋亡.
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高效毛细管电泳测定小果博落回中血根碱和白屈菜红碱
目的:建立测定小果博落回中血根碱和白屈菜红碱的含量的新方法.方法:采用高效毛细管电泳法,盐酸小檗碱为内标,运行缓冲液为25 mmol·L-1磷酸氢二钠与25 mmol·L-1磷酸二氢钠的混合体系(磷酸调pH为7.0)-甲醇(2.5:1);运行电压18 kV;柱温25℃;检测波长200nm.结果:血根碱和白屈菜红碱的线性范围分别为0.0124～0.0828mg·mL-1(r=0.999 8);白屈菜红碱的线性范围0.018 8～0.125 6 mg·mL-1(r=0.999 6),平均加样回收率(n=6)分别为98.7%(RSD1.01%)、98.4%(RSD 1.27%).结论:高效毛细管电泳操作简便,分析快速,结果准确、重现性好,适用于小果博落回中血根碱和白屈菜红碱的含量的测定.
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白屈菜红碱、血根碱单体的分离和鉴定
目的:分离及鉴定白屈菜红碱和血根碱单体.方法:采用柱色谱分离技术对白屈菜红碱和血根碱进行分离纯化,通过HPLC进行鉴定.结果:采用柱色谱法可获得单一成分,经HPLC鉴定为白屈菜红碱和血根碱单体,纯度分别为98.6％,95.7％.结论:采用柱色谱技术可从博落回中提取、分离到高纯度的白屈菜红碱和血根碱单体.
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超声-酶法提取两面针中白屈菜红碱及其6-烷氧基衍生物的工艺优选
目的:优化超声-酶法提取两面针中白屈菜红碱及其6-烷氧基衍生物的工艺条件.方法:采用HPLC测定白屈菜红碱及其6-烷氧基衍生物提取率,流动相乙腈-水-磷酸-三乙胺(25:75:0.2:0.25),检测波长284 nm.通过单因素试验考察溶剂加酸和酶解预处理对有效成分提取率的影响,利用正交试验优化提取次数、超声功率和溶剂用量,通过动态过程优化超声时间.结果:佳工艺条件为复合酶预处理后,加40％乙醇(含盐酸0.5％)于250 W超声提取3次,每次的溶剂用量分别为6,3,3倍,提取时间依次为18,15,12 min.白屈菜红碱及其6-烷氧基衍生物提取率90.5％.结论:该工艺经济、高效、节能、省时,可为开发利用两面针中白屈菜红碱等成分提供实验基础.
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RP-HPLC测定白屈菜中白屈菜红碱的含量
目的:建立白屈菜药材的质量标准.方法:采用甲醇提取,高效液相色谱法测定,以乙腈-1%三乙胺溶液(25:75)(三乙胺溶液用磷酸调节PH至3.0)为流动相;检测波长268 nm.结果:白屈菜红碱进样量在0.051 6～0.516 0μg线性关系良好,r=1.000,平均加样回收率(n=6)103.0%,RSD 1.2%.供试品溶液在8 h内稳定,用不同色谱柱分析耐用性好.结论:所建立的分析方法简单、专属性强,结果可靠、准确.
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HPLC测定刺壳花椒中木兰花碱含量的研究
芸香科花椒属刺壳花椒Zanthoxylum echinocarpum Hemsl是我国南方地区民间常用药,主要产于西南及湖南、湖北、广东、广西等地,其药用部位有根、根皮、茎和叶,有行气止痛的功效.刺壳花椒中已知的化学成分有木兰花碱、α-别隐品碱、11-甲氧基白屈菜红碱、白藓碱、γ-花椒碱、茵芋碱等.本实验选用有抗炎作用的木兰花碱为指标,建立了高效液相色谱法测定刺壳花椒中木兰花碱含量的方法,并对10批刺壳花椒药材中木兰花碱的含量进行了测定,为刺壳花椒药材的质量控制提供实验依据.
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白屈菜红碱药理活性研究进展
白屈菜红碱是一种苯并菲啶型生物碱,普遍存在于紫堇科、罂粟科、毛莨科和芸香科等植物中,具有抗肿瘤、抗菌和抗炎等药理活性.该文对近10年来国内外关于白屈菜红碱的药理活性的研究进展进行了综述,期望为白屈菜红碱深入研究及开发利用提供一定的科学依据.
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蛋白激酶C抑制剂联合顺铂治疗非小细胞肺癌的实验研究
目的 初步探讨蛋白激酶C(PKC)抑制剂白屈菜红碱(CH)与化疗药物顺铂联合应用在非小细胞肺癌(NSCLC)治疗中的作用及其可能的机制.方法 应用四甲基偶氮唑蓝试验及流式细胞术分别检测CH、顺铂以及CH与顺铂联用对人NSCLC细胞株A549增殖和凋亡的影响.用裸鼠移植瘤实验检测CH、顺铂以及CH与顺铂联用对A549细胞成瘤性的影响.应用人肺腺癌细胞株A549细胞构建裸鼠皮下移植瘤模型,用随机数字表法将24只倚瘤裸鼠分为CH组、顺铂组、CH+顺铂组及生理盐水对照组,每组5只,裸鼠分别腹腔注射CH、顺铂、CH+顺铂和生理盐水(共3周,顺铂及生理盐水每周注射1次,CH每周注射2次),观察移植瘤的生长情况.结果 CH可抑制NSCLC细胞株A549增殖,浓度增加其细胞毒作用亦增强,CH与顺铂联用呈协同或相加作用;CH组、顺铂组及CH+顺铂组A549细胞的凋亡率分别为(5.36±0.70)%、(5.23±0.55)%及(17.28±2.17)%,均高于对照组的(2.75±0.35)%(t=7.88,P＜0.05),CH+顺铂组A549细胞的凋亡率分别高于CH组及顺铂组(t=5.62,P＜0.05);裸鼠移植瘤体内实验结果表明,CH及顺铂均町抑制移植瘤的生长,CH+顺铂组的抑瘤率(80.5%)高于CH组(72.4%)及顺铂(64.3%)组(t=11.34,P＜0.01).结论 CH与顺铂联用对A549细胞及裸鼠移植瘤有显著的协同抗肿瘤作用,其作用机制可能是通过增强对A549细胞增殖的抑制以及诱导其凋亡而实现.
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蛋白激酶C抑制剂白屈菜红碱在缺氧缺糖所致SHSY5Y细胞损伤中的作用
目的 观察蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)抑制剂白屈菜红碱对体外缺氧缺糖(OGD)SHSYSY细胞的保护作用,探讨PKC与脑缺血的关系及白屈菜红碱神经保护作用的机制.方法 体外培养SHSY5Y神经母细胞瘤株,分为假OGD,OGD及白屈菜红碱(0.01mmol/L)伴或不伴二乙基二硫代氨基甲酸钠(djethyldithiocarbamate,DDC)(100nmmol/L)处理组,以四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)检测sHsY5Y细胞活性.应用HEt和fluo-3/AM的荧光强度测定OGD后SHSY5Y细胞超氧化物阴离子和钙离子的浓度.结果 与假OGD组相比,OGD组细胞活性显著下降(P<0.01),白屈菜红碱能提高OGD后SHSY5Y细胞的活性(P<0.01),这种神经保护作用可被DDC阻断.白屈菜红碱降低OGDA后HFt和fluo-3/AM荧光强度(P<0.05～0.01).结论 白屈菜红碱通过激活SHSY5Y细胞超氧化物歧化酶,降低细胞内超氧阴离子的浓度,进而抑制细胞内钙超载,阻断PKC,从而达到保护SHSY5Y细胞对抗oGD的细胞损害的作用.
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白屈菜红碱逆转不同浓度葡萄糖培养的乳鼠心肌细胞肥大及其相关机制的探讨
研究白屈菜红碱对不同浓度葡萄糖培养的乳鼠心肌细胞肥大的作用,并进一步探讨其相关的作用机制.通过建立乳鼠心肌细胞培养模型,随机分成对照组(5 mmol·L-1)、高糖组(10、15、20及25.5 mmol·L-1)、高糖(25.5 mmol·L-1)+不同浓度白届菜红碱(1及8umol·L-1)组、对照(5 mmol·L-1)+不同浓度白屈菜红碱(1及8 μmol·L-1)组,分别测定各组心肌细胞直径和蛋白质含量,并应用 Western blotting检测心肌细胞蛋白激酶C(protein kinaseC,PKC)-α、PKC-β2的表达及其磷酸化水平.结果表明,高糖培养组心肌细胞直径、蛋白质含量以及PKC-α、PKC-β2的表达和磷酸化水平均高于对照组,并旱现浓度依赖性;而分别在对照组和高糖组(25.5mmol·L-1)加入不同浓度的白届菜红碱后,心肌细胞直径、蛋白质含量、PKC-α、PKC-β2的磷酸化水平以及PKC-α的总表达水平均降低,并且这种效应随着白屈菜红碱浓度的增高而增强;但在对照+白屈菜红碱(1 μmol·L-1)组,PKC-β2的总表达水平并没有出现显著性降低.本研究表明白屈菜红碱可逆转葡萄糖诱导的乳鼠心肌细胞肥大,对高糖环境中的心肌细胞具有保护作用,其机制可能与PKC途径有关.
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新型环化小檗碱衍生物的设计合成及抗MRSA活性研究
本研究组前期工作中首次发现全新结构骨架9-乙酰氧基环化小檗碱(1)具有独特的抗对甲氧西林敏感的金黄色葡萄球菌 (MSSA)/耐甲氧西林金黄色葡萄球菌活性(MRSA),MIC为1～16 μg·mL-1.本研究以1为先导物,以抗菌活性为导向,针对分子中多个结构片段设计合成了14个不同类型的环化小檗碱(CBBR)衍生物,包括小檗碱与白屈菜红碱衍生物.构效关系分析表明: ① E环为活性必需片段;②移除B环后,抗MRSA活性有所降低,但对VRE活性提高;③ 9-位引入适当的刚性基团有利于活性提高.其中,化合物9a对标准与临床分离的MSSA/MRSA菌株的活性明显优于先导物1,MIC值介于0.5～1 μg·mL-1之间,提示其作用机制可能与临床抗菌药不同.另外,9a的体外药代稳定性优于先导物1,值得进一步研究.研究结果为此类化合物发展成一类新型抗MRSA候选物提供了关键的科学数据.
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高效液相色谱法同时测定飞龙掌血中橙皮苷等4种化学成分的含量
目的 建立反相高效液相色谱法(RP-HPLC)同时测定飞龙掌血药材中橙皮苷、氯化两面针碱,白屈菜红碱,毛两面针素的含量.方法 采用优化色谱条件;色谱柱:Diamonsil-C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相:乙腈(A)-0.75％冰醋酸(B);梯度洗脱;检测波长:290 nm;流速:1.0 mL· min-1;紫外检测器检测;分别测出其峰面积,采用外标法定量;柱温:30℃.结果 飞龙掌血中橙皮苷、氯化两面针碱、白屈菜红碱、毛两面针素的线性范围分别为0.487 4～2.437 2μg(r=0.999 7),0.030 30 ～0.151 5μg(r =0.999 2),0.062 34 ～0.311 7μg(r=0.999 3),0.024 92 ～0.124 6μg(r =0.999 9);平均加样回收率(n=6)分别为100.76％(RSD 2.75％)、97.98％(RSD 1.25％)、100.07％(RSD 3.24％)、100.10％(RSD 3.83％).结论 该方法简便、快速、准确,重现性好,回收率高,可用于飞龙掌血药材中4种主要化学成分含量的测定,其结果可为其质量控制、合理用药及进一步研究开发提供参考.
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胃痛平胶囊中白屈菜红碱含量的测定方法
目的 建立胃痛平胶囊中白屈菜红碱的含量测定方法.方法 采用高效液相色谱法测定胃痛平胶囊中白屈菜红碱的含量,色谱柱为Agilent XDB-C18(4.6 mm×150 mm,2.5 μm),流动相为乙腈-1％三乙胺溶液(磷酸调节pH值至3.0)(26:74),检测波长为269 nm,柱温为25℃,流速为1.0 ml/min,进样体积为10μl.结果 白屈菜红碱的线性范围:2.62～43.67 μg/ml (r=0.9999),平均加样回收率为98.88％,RSD为1.91％(n=9).结论 所建立的方法准确、灵敏、简便,稳定性和重现性良好,专属性强,可较好地控制胃痛平胶囊的质量.
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博落回药材的提取工艺研究
目的:研究博落回药材的提取工艺.方法:采用正交试验法,以白屈菜红碱得率及固形物为指标,考察乙醇浓度(A)、提取温度(B)、pH值(C)三个因素对博落回提取工艺的影响.结果:优化的博落回提取工艺为A2B1C2,即取博落回药材以80%乙醇、调节pH=5.0、60℃温浸提取.结论:本研究确定的佳工艺可行.
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白屈菜红碱对人胃癌BGC823细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用
目的观察白屈菜红碱(chelerythrine)对人胃癌BGC823细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用.方法通过MTT实验检测白屈菜红碱对细胞生长的抑制率,AO/EB的荧光核染色观察细胞形态,DNA琼脂糖凝胶电泳及流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡.结果MTT实验显示白屈菜红碱抑制BGC823细胞的生长呈时间、浓度依赖的方式,显微镜下观察到AO/EB的荧光核染后凋亡的细胞,琼脂糖凝胶电泳出现DNA的片段化,在白屈菜红碱质量浓度为1.5、2.0、2.5μg/mL且培养24 h时,流式细胞仪可以检测到凋亡峰,且细胞被阻滞在S和G2/M期.结论白屈菜红碱能有效地诱导BGC823细胞凋亡,而且其诱导的凋亡具有周期依赖性.
关键词： 白屈菜红碱 增殖抑制 凋亡诱导 人胃癌BGC823细胞 -
博落回抗肿瘤作用及诱导人体端粒DNA形成G-四链体分子机制研究
目的 从博落回的2个主要活性成分血根碱(San)和白屈菜红碱(Che)入手研究博落回的抗肿瘤作用分子机制.方法 采用MTT法测定San与Che对3种肿瘤细胞(肺癌细胞A-549、结肠癌细胞HCT-8、肝癌细胞Bel-7402)的IC50值,从而确定这两种成分是否为博落回的抗肿瘤活性成分:采用UV-vis、FL、CD法研究San和Che与人体端粒DNA(HT4)的相互作用.结果 San与Che对肿瘤细胞有不同能力的杀伤作用,说明该2种成分是博落同的抗肿瘤活性成分;San和Che能够与HT4相互作用,可以得出San与HT4的结合常数为5×108,并能诱导单链HT4完全形成反平行结构,而Che与HT4的结合常数为930,并能诱导单链HT4部分形成反平行结构.结论 博落同含有的2种活性成分San和Che具有诱导人体端粒DNA形成G-四链体结构的能力,从而抑制端粒酶活性,达到抑制肿瘤细胞增殖的目的,这可能是博落回抗肿瘤的分子机制之一.
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HPLC 法测定飞龙掌血中白屈菜红碱的含量
目的:建立飞龙掌血中白屈菜红碱的含量测定方法.方法:采用高效液相色谱法,色谱柱为Phenomenex Gemini C18柱(250mm×4.6mm,5μm ),流动相为乙腈-1%三乙胺(磷酸调pH值3)(28∶72),检测波长为269nm,流速为1.0ml·ml-1.结果:白屈菜红碱的线性范围为0.07～7.40μg(r=0.9998);浓度范围内进样量与峰面积线性关系良好.平均回收率为100.07%,RSD=1.24% (n=9).结论:所建方法简单、快速、准确,可用于飞龙掌血的质量控制.
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白屈菜红碱对变形链球菌黏附抑制作用的扫描电镜观察
目的 通过扫描电镜观察白屈菜红碱(CHE)对变形链球茵(S.mutans)作用后的形态学影响,进一步揭示其抑制细菌黏附的作用机制.方法 选择变形链球菌ATCC25175作为实验菌株.将1.0 cm×1.0 cm ×0.02 cm的盖玻片放入15 mL试管中灭菌备用.将CHE溶液处理组、空白对照组及基础对照组3组溶液及菌液分别加入灭菌后的试管中,在37℃厌氧环境(80%N2,20%CO2)下培养24 h,细菌在盖玻片上形成一层生物膜,取出盖玻片,扫描电镜观察.结果 97.5μ/mL的CHE溶液可明显抑制S.mutans对玻璃表面的黏附作用及细菌之间的相互黏附作用,表现为细菌胞体间黏附明显稀疏,黏附层薄,部分区域无黏附.高倍镜下细菌胞体多呈胶囊状,细菌分裂横壁不明显,两端不对称且形态不规则,分裂后的细菌链局部出现断裂现象.结论 CHE溶液对S.mutans的黏附有显著的抑制作用,在龋病防治领域具有一定的应用前景.
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白屈菜红碱抗肺癌活性及其相关机制
肺癌在很多国家已经列居癌肿死因的第一位,虽然治疗技术的改进,但肺癌的5年生存率仍不超过15％[1].肺癌也是老年人常见的恶性肿瘤,据统计,50％以上的晚期非小细胞肺癌患者诊断时年龄超过65岁,老年患者因为体质等因素的影响多已错过佳手术时机[2],因此化疗在老年肺癌的治疗中占有重要的地位,但肿瘤耐药一直是化疗成功的主要障碍,开发新的抗肿瘤药物是克服肿瘤化疗耐药的一个有效途径.白屈菜红碱是从天然植物中提取出的苯并菲啶类碱,体外试验证实对多种肿瘤细胞具有细胞毒性[3].本研究探讨了白屈菜红碱对肺癌的抗肿瘤活性以及相关作用机制.
关键词： 白屈菜红碱 肺癌A549细胞 细胞凋亡 Annexin V/PI双染 -
博落回总碱胃内漂浮片中白屈菜红碱的含量测定
目的：采用HPLC法测定博落回总碱胃内漂浮片中白屈菜红碱的含量。方法：采用HPLC法，色谱柱为迪马公司Diamonsil C18（5μm，250mm ×4．6mm）；流动相为乙腈-水-磷酸（25∶75∶0．1）；流速为1.0 mL/min；检测波长270 nm；进样量10μL；柱温为35℃。结果：白屈菜红碱在10．00～90．00μg/mL之间具有良好的线性关系（r＝0．9999，n＝5）；平均回收率为99．10％，RSD为1．91％。结论：结果准确度高、精密度好，可作为博落回总碱胃内漂浮片的质量控制方法。
