凯氏定氮法和考马斯亮蓝法测定方格星虫多糖中蛋白质的含量

目的:建立一种快速、简单、准确测定方格星虫多糖中蛋白质含量的方法.方法:分别采用凯氏定氮法和考马斯亮蓝法测定蛋白质含量,并进行稳定性、精密度、重复性和回收率测定.结果:凯氏定氮法和考马斯亮蓝法测定方格星虫多糖中蛋白的含量分别为2.40％,2.22％,其回收率分别为98.69％,100.97％,2种方法测得蛋白质含量基本相同,无显著性差异(P＞0.05).结论:综合考虑,凯氏定氮法简便、快速、准确,可用于方格星虫多糖中蛋白质的质量控制.

灯盏花注射液对大鼠低氧性肺动脉高压作用的实验研究

低氧性肺动脉高压对肺心病的发生发展起着十分重要的作用，因此降低肺动脉高压是该病防治的关键环节，我们将有关灯盏花注射液对低氧性肺动脉高压大鼠影响的实验结果报告如下。 材料与方法雄性SD大鼠30只（温州医学院动物实验中心提供），随机分为3组，每组10只：①对照组：常压常氧下常规饲养；②低氧组：将动物置于自制常压低氧箱内，控制箱内氧浓度为（10.0±0.5）%，二氧化碳浓度<1.5%，箱内以无水氯化钙吸收水蒸气，钠石灰吸收CO2，每天低氧10 h，每周6 d，共4周。每日于低氧前腹腔内注射1 ml生理盐水；③灯盏花组：每日低氧前腹腔内注射1次4 ml/kg灯盏花注射液（云南生物制药厂提供，批号980803，含总黄酮4.5mg/ml），低氧方法同低氧组。4周后，用导管法测定平均肺动脉压（mPAP）、平均颈总动脉压（mCAP），分离右心室（RV）、左心室加室间隔（LV+S），滤纸吸干水分后分别称重，并计算两者的比值［RV/（LV+S）］。各组右下肺取材，常规脱水，10%甲醛固定，石蜡包埋，弹力纤维染色。选取断面较完整的外径为100～200 μm的肺细小动脉，应用上海申腾信息技术有限公司、华东理工大学和上海医科大学联合研制的IMS细胞图像分析系统（产品标准号：Q/IAFP01—1997），采用华东理工大学自动化研究所研制的心胸血管分析软件进行测量，获得平均肺细小动脉中膜厚度（mMTPA）以及其占血管外径的比值（MT%），计算肺细小动脉管壁面积/管总面积（WA/TA）和管腔面积/管总面积（EA/TA）。将剩余肺组织制成10%的匀浆，采用南京建成生物工程研究所提供的试剂盒，测定匀浆一氧化氮合酶（NOS）、超氧化物歧化酶（SOD）活性，硫代巴比妥酸法测定丙二醛（MDA）含量。蛋白定量采用考马斯亮蓝法。采取颈总动脉血，用硝酸还原酶法测定血浆NO含量，试剂盒购自伊利康生物技术有限公司。数据用（±s）表示，组间比较采用非配对t检验。

多指标综合评分法优选地龙水提纯化工艺

目的:优选地龙的提取纯化工艺.方法:分别采用考马斯亮蓝法、纤维蛋白平板法测其蛋白质含量和蛋白酶活性,结合得膏率,用正交试验考察地龙的提取工艺;采用微波消解样品,氢化物原子吸收法测定砷含量.结果:蚓激酶在2 000～ 10000 U·mL-1与溶圈面积呈良好线性关系,地龙的提取工艺为地龙粗粉加入8倍量水浸泡30 min,超声提取3次,每次30 min,高速离心法纯化效果佳.结论:优选参数稳定可行,为地龙有效成分的充分利用提供新选择.

蛋白质含量测定方法的规范化研究

组成蛋白质的基本单位是氨基酸,氨基酸通过脱水缩合形成肽链.蛋白质是由一条或多条多肽链组成的生物大分子,其含量测定是生化药品研究中常用、基本的分析方法之一.目前其常用的测定方法有凯氏定氮法、福林酚法、双缩脲法、BCA法、考马斯亮蓝法、紫外分光光度法及荧光法.

中药材中蛋白质含量测定方法的研究

近年来,随着基因工程学、分子生物学和现代分离技术的快速发展,蛋白质也成了一项质量和资源评价的指标,故探索测定蛋白质含量的方法有着重要的意义[1].目前测定蛋白质含量的常用方法有凯氏定氮法、考马斯亮蓝法、紫外分光光度法、双缩脲法、Folin-酚试剂法和双辛可宁酸法[2]等.这些方法也分别应用于测定不同中药材中蛋白质含量.

4种常用蛋白质测定方法用于中药注射剂中大分子蛋白检测的适用性研究

目的 探究4种常用蛋白质测定方法用于中药注射剂中大分子蛋白检测的适用性.方法 比较磺基水杨酸法、考马斯亮蓝法、福林酚(Lowry)法、体积排阻色谱(SEC)法的灵敏度、专属性,并将4种方法分别用于测定5种市售中药注射剂中的大分子蛋白,比较测定结果.结果 磺基水杨酸法灵敏度不高,考马斯亮蓝法和Lowry法的专属性较差,SEC法灵敏度高且专属性好.以SEC法测定5种市售中药注射剂样品,均未检出大分子蛋白.结论 SEC法可用于中药注射剂中大分子蛋白测定.

考马斯亮蓝法蛋白定量标准曲线稳定性观察

蛋白定量结果是生物医学研究中的基础数据,其准确与否关系到研究结果的可靠程度.样品总蛋白定量技术方法[1,2]由于限制条件较多,操作复杂,适用面较窄,其中凯氏定氮法是目前常用的标准参照蛋白自身定量技术 .本文选择冻干的牛血清白蛋白,将其溶解后,在4 ℃条件下50 d内作为定量用标准参照蛋白,观察不同存放时间内标准参照蛋白含量变化和标准曲线的兼容性和稳定性[3].结果报告如下.

N-V蛋白酶含量检测方法的准确度评价

目的:采用多种方法测定N-V蛋白酶含量,并比较实验结果,选择出适合N-V蛋白酶含量测定的方法.方法:从沙蚕体内提取的N-V蛋白酶,以凯氏定氮法为基准方法,采用考马斯亮蓝法、Lowry法和紫外吸收法测定N-V蛋白酶的含量.结果:考马斯亮蓝法得到N-V蛋白酶含量为(5.150±0.028)g·L-1,紫外吸收法(A280-A260)测得蛋白酶含量为(5.202 ±0.001)g·L-1,这两种方法均与凯氏定氮法测得的结果(5.164±0.013)g·L-1存在较小差异;Lowry法测得的结果为(1.12±0.014)g·L-1,明显偏低,存在较大差异.结论:凯氏定氮法、考马斯亮蓝法和紫外吸收法(A280-A260)均可测定出N-V蛋白酶含量.但N-V蛋白酶不适合采用Lowry法进行测定.

哈蟆油发酵乳中蛋白质及氨基酸含量分析

目的：建立哈蟆油发酵乳中蛋白质及氨基酸含量分析方法。方法运用考马斯亮蓝法测定哈蟆油发酵乳中蛋白质含量，运用氨基酸自动分析仪测定哈蟆油发酵乳中氨基酸的含量。结果3批哈蟆油发酵乳蛋白含量分别为8.0501、8.0930、7.7582 mg/mL。平均总氨基酸的含量为15.3205 mg/mL。结论哈蟆油发酵乳中含有合成人体所需蛋白质及丰富的氨基酸。

不同产地云芝中多糖体外抗氧化活性的研究

目的:测定不同产地云芝中多糖和多糖中蛋白的含量,并对提取多糖进行抗氧化活性的研究.方法:采用苯酚-硫酸法测定多糖含量,以葡萄糖为标准品,紫外分光光度法对不同产地云芝中多糖的含量进行检测;采用考马斯亮蓝法测定多糖中蛋白的含量,以牛血清白蛋白为标准品,紫外分光光度法对不同产地云芝多糖中蛋白含量进行了检测;以清除DPPH自由基为指标测定不同产地云芝中多糖的抗氧化活性.结果:在所选四种不同产地云芝中,云南产云芝多糖的总糖含量高,为77.3％;黑龙江产云芝多糖蛋白含量高,为15.9％;黑龙江产云芝多糖对DPPH的清除效果好,IC50值为0.832g/ml.结论:四个产地云芝中多糖含量除云南产含量相对较高外,其他三个产地多糖含量差异不明显;多糖中蛋白含量依次为黑龙江＞山东＞吉林＞云南;清除DPPH自由基能力依次为:黑龙江＞山东＞吉林＞云南.

地龙提取液中蛋白质的稳定性研究

目的:对影响地龙提取液中蛋白质稳定性的因素进行研究.方法:通过考马斯亮蓝法建立了地龙提取液中蛋白质的含量测定方法,并考察了温度、pH值、无机盐及有机溶剂等因素对提取液中蛋白质稳定性的影响.结果:在30℃、pH值为7的条件下,提取液中蛋白质的含量高,而加入无机盐或有机溶剂后蛋白质含量均有所降低.结论:提取液的佳保存条件为30℃、pH值7,且提取过程中应尽量减少无机盐和有机溶剂的使用.

壳聚糖中蛋白质含量测定方法的研究

目的：解决壳聚糖中蛋白质含量测定时出现的沉淀问题。方法对考马斯亮蓝法测定壳聚糖中蛋白质含量进行方法改进。结果用盐酸浓度为5%的考马斯亮蓝溶液作为染色剂，染色15 min，在大吸收波长598 nm处进行测定；吸光度-蛋白质浓度标准曲线为：y=0.003x+0.0179，r2=0.991，蛋白质浓度范围为5μg/mL~40μg/mL时线性相关性良好；低检出限1μg/mL，加标回收率97.8%~103.7%。结论该文确定的壳聚糖中蛋白质含量的检测方法准确性高、试验结果稳定、可靠，重现性强，可广泛用于产品检验。

组蛋白诱导抗核抗体产生及其对肾脏损害

目的寻找系统性红斑狼疮中诱导抗核抗体(ANA)生成的真正的自身核成分免疫原.方法从ConA活化的脾淋巴细胞中提取组蛋白免疫同系BALB/c小鼠,ELISA方法测定IgG类抗组蛋白、抗dsDNA抗体,免疫荧光法检测抗核抗体核型和免疫复合物在肾小球内的沉积,免疫印迹法测定抗可溶性核抗原抗体,考马斯亮蓝法检测尿蛋白含量,光镜下观察肾脏形态变化,电镜下观察肾小球电子致密物.结果活性组蛋白诱导IgG类抗组蛋白、抗dsDNA等多种抗核抗体生成,且诱发同系小鼠产生SLE样肾脏病理变化.结论活性组蛋白是诱发抗核抗体生成、造成肾损害的免疫原之一.[全文刊登于中华微生物学和免疫学杂志2001,21(1):62]

牛血清白蛋白键合的液相手性整体柱制备及其蛋白柱载量的研究

蛋白质柱载量的测定对优化蛋白质类手性整体柱的制备条件具有重要意义.采用热引发原位聚合方法制备了聚甲基丙烯酸缩水甘油酯(GMA)-乙二醇二甲基丙烯酸酯(EDMA)液相整体柱,而后采用环氧法直接键合手性选择剂牛血清白蛋白(BSA),制得高效液相手性整体柱,并且建立考马斯亮蓝(CBB)法测定手性整体柱上的蛋白柱载量.结果显示,BSA大的柱载量为11.90 mg/g,此时致孔剂组成为环己醇-十二烷醇(65∶ 35).将制备的高效液相手性整体柱用于色氨酸和华法林的拆分,色氨酸的两个对映异构体达到基线分离.高效液相手性整体柱的蛋白柱载量与手性拆分的效果呈现正相关.

考马斯亮蓝法测定微量蛋白的条件探讨

目的探讨测定微量蛋白的佳方法.方法用考马斯亮蓝试验,不同浓度的定值样本吸取不同的量,以不同波长测定吸光度值,且选择不同浓度作标准液计算测定值进行分析.结果590nm波长时,样本吸光度变化大;10μl样本量,以1.0g/L作标准液时,测定值与定值相近,直线回归方程:Y=0.9549X+0.0386,r=0.9989,t=0.134,P＞0.1.测定值与定值无差别.结论考马斯亮蓝试验测定微量蛋白,用试剂2.0ml,样本量10μl,以1.0g/L作标准及选590nm波长测定,是一种可行的理想方法.

全蝎酶解液佳灭活工艺的研究

目的：研究全蝎酶解液的佳灭活工艺。方法：以灭活温度、时间和pH值为考察因素，设计正交试验，用考马斯亮蓝法和改良Lowry法相结合测定相对寡肽含量，以灭活后相对寡肽含量和灭活前相对寡肽含量差的绝对值为指标，选择佳灭活工艺。结果：以实验方案A1B2C2所得相对寡肽含量差低。结论：在pH值为1.5的环境下，以温度为65℃，灭活25 min的灭活工艺佳。

中药药性与蛋白质含量相关性研究

目的:初步探讨中药寒热药性与蛋白质含量的相关性.方法:采用考马斯亮蓝法测定20味中药的蛋白质含量,以蛋白质含量为指标,确定中药药性与蛋白质含量的相关关系.结果:中药的寒热药性与蛋白质含量没有统计学意义,但10种热性药蛋白质平均含量为12.6670 mg/g,10种寒性药蛋白质平均含量为6.5036 mg/g,热性药蛋白质含量是寒性药的1.9倍.结论:蛋白质含量与中药寒热药性有一定的相关性.

福林酚法与考马斯亮蓝法测定甘露聚糖肽口服溶液中蛋白质含量的比较

目的:分别建立福林酚法与考马斯亮蓝法测定甘露聚糖肽口服溶液中蛋白质含量并做比较.方法:分别对两种方法的检出限、线性范围进行考察,并进行精密度、重复性、回收率和样品含量的测定.结果:福林酚法检出限为0.2μg,蛋白质浓度线性范围为0~112.0μg(r=0.9990),平均回收率为105.2%(RSD=1.9%),精密度RSD均<1%,样品测定结果分别为47.45,58.34,40.99μg·ml-1.考马斯亮蓝法检出限为0.8μg,蛋白质浓度线性范围0~99.6μg(r=0.9980),平均回收率为102.0%(RSD=2.7%),精密度RSD均<1%,样品测定结果均为未检出.结论:福林酚法测定甘露聚糖肽口服溶液中蛋白质含量可靠而有效.

考马斯亮蓝法测定天花粉饮片水煎剂中蛋白质含量

目的:测定治疗脑卒中及其后遗症的经典方栝楼桂枝汤中的君药天花粉饮片水煎剂中蛋白质的含量.方法:采用考马斯亮蓝法,利用考马斯亮蓝染料与蛋白质中的碱性基团相结合的原理,通过分光光度计测量待测溶液吸光度,得出其蛋白浓度.结果:浓度分别为0.5g/mL和1.0g/mL的天花粉饮片水煎剂,其蛋白质含量分别为106.6μg/mL和132.6μg/mL.结论:该测定方法快捷、方便、灵敏度高,为后续研究奠定了基础.

054尿中总蛋白测定:排除考马斯亮蓝法和邻苯三酚红法间结果的差异