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牛珀至宝微丸对骨髓间充质干细胞移植后转分化为神经元的影响
目的:观察牛珀至宝微丸对骨髓间充质干细胞(MSC)在脑缺血移植后的增殖与分化.方法:分离成年大鼠MSC并扩增,植入局灶性脑缺血大鼠纹状体内,并用牛珀至宝微丸干预治疗.于移植后1、2、3、4、6周取脑纹状体,用Brdu、NF免疫组化检测MSC移植后的增殖与分化.结果:移植后l周,移植区内可见Brdu、NF阳性表达,移植后2周达到高峰,移植后4周Brdu和NF表达减少,牛珀至宝微丸组(实验组)Brdu和NF表达不但增强,而且表达持续至移植后6周,与模型组比较差别有非常显著意义(P＜0.01).结论:牛珀至宝微丸不但能促进脑缺血移植MSC增殖,并且还能促进其分化为神经元.
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牛珀至宝微丸对内毒素休克肝损伤iNOS表达的影响
全世界每年约有30万人患感染中毒性休克,虽然抗生素已广泛应用并且有重症监护的支持,但其死亡率仍高达35%～60%,死亡的主要原因多脏器衰竭[1].一氧化氮(nitric oxide,NO)具有较强的细胞毒和血管扩张作用,NO在内毒素诱导下主要是由诱导型一氧化氮合酶(induciblenitricoxide synthase,iNOS)催化底物左旋精氨酸(L-Arg)而生成[2,3].近年研究表明,内毒素休克与一氧化氮(NO)生成密切相关[4],牛珀至宝微丸具有通瘀、化浊、开窍等功能[5],本课题研究牛珀至宝微丸抗内毒素休克作用与调节NO水平相关,并可减轻多脏器的病理损伤[6～8],其对肝脏的影响,本文探讨报道如下.
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牛珀至宝微丸对局灶性脑缺血再灌注后 Nestin表达的影响
目的:探讨牛珀至宝微丸对局灶性脑缺血再灌注后神经干细胞Nestin表达的影响.方法:采用大脑中动脉线栓法造成局灶性脑缺血再灌注模型,应用免疫组织化学技术检测神经上皮干细胞巢蛋白(Nestin)的表达,观察牛珀至宝微丸对脑缺血后神经上皮干细胞巢蛋白的影响.结果:脑缺血再灌注后,牛珀至宝微丸组缺血侧室管膜、室管膜下区、皮层和纹状体Nestin阳性细胞数显著多于缺血对照组(P＜0.05),且神经病学评分明显低于缺血对照组(P＜0.05).结论:牛珀至宝微丸能持续上调脑缺血再灌注后Nestin的表达,这可能是其治疗缺血性脑血管病的机理之一.
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牛珀至宝微丸对局灶性脑缺血后大鼠脑组织一氧化氮合酶的影响
目的:探讨牛珀至宝微丸对大鼠局灶性脑缺血后脑组织一氧化氮合酶(NOS)的作用.方法:采用大脑中动脉线栓法造成局灶性脑缺血模型,应用免疫组织化学技术检测脑组织NOS 3种亚型(eNOS、nNOS、iNOS)的表达,观察牛珀至宝微丸对脑缺血后NOS 3种亚型表达的影响,并进行神经病学评分.结果:牛珀至宝微丸组的缺血侧大脑皮层nNOS、iNOS表达显著低于缺血对照组(P＜0.05,P＜0.01),eNOS表达高于缺血对照组(P＜0.05),并可减轻神经损伤症状(P＜0.05).结论:牛珀至宝微丸能下调脑缺血所致nNOS、iNOS的异常表达,上调eNOS表达,这可能是其治疗缺血性脑血管病的机理之一.
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牛珀至宝微丸对内毒素休克大鼠肺损伤转化生长因子-β1及其受体表达的影响
目的观察牛珀至宝微丸对内毒素休克大鼠肺损伤转化生长因子-β1及其受体表达的影响.方法静脉注射脂多糖内毒素(1.5mg/kg)、腹腔注射D-氨基半乳糖(100mg/kg)造成内毒素休克模型,用牛珀至宝微丸干预处理,并用免疫组化方法检测转化生长因子-β1及其受体在肺组织内的表达.结果牛珀至宝微丸可以使内毒素休克大鼠肺转化生长因子-β1及其受体表达增强,肺损伤减轻.结论牛珀至宝微丸减轻内毒素休克肺损伤的机理可能与其增强肺组织转化生长因子-β1及其受体表达相关.
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牛珀至宝微丸对内毒素致急性肺损伤纤维化大鼠辅助性T细胞的影响
目的：观察牛珀至宝微丸对内毒素致急性肺损伤纤维化（RPF）大鼠辅助性T细胞（Th细胞）的影响。方法将224只健康Wistar大鼠按随机数字表法分为对照组、模型组、地塞米松组（地米组）和牛珀至宝微丸组（牛丸组），每组56只。采用内毒素“三次打击”造成RPF模型。于制模前3 d和制模后7 d牛丸组给予牛珀至宝微丸500 mg/kg灌胃，每日2次，共用10 d；地米组腹腔注射地塞米松3.0 mg/kg，每日1次，连用7 d；对照组给予等体积蒸馏水灌胃。于给药后1、3、7、9、14、21、28 d 7个时间点取血和支气管肺泡灌洗液（BALF），用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定血清及BALF中γ-干扰素（IFN-γ）、白细胞介素-4（IL-4）含量；然后取肺组织用苏木素-伊红（HE）染色及Van Gieson法染色，光镜下观察肺组织形态学变化。结果 HE染色显示，模型组肺间质增厚，肺泡腔内大量炎性渗出，腔内微血栓形成；地米组肺间质增厚，炎性渗出减少明显；牛丸组渗出较地米组稍增多，肺间质基本正常。Van Gieson法染色显示：模型组胶原纤维表达明显；地米组胶原纤维表达减少不明显；牛丸组胶原纤维表达显著减少。ELISA试验显示：模型组BALF和血清中IFN-γ显著升高，地米组7 d时低，14 d上升至治疗前水平，21 d逐渐下降；牛丸组IFN-γ持续处于高水平后缓慢回落，给药后7 d起各时间点BALF和血清中IFN-γ水平即明显高于模型组和地米组〔BALF（ng/L）：140.47±4.22比149.23±8.35、90.67±6.65；血清（ng/L）：140.47±4.15比100.43±11.05、99.35±7.85，P＜0.05或P＜0.01〕。各组BALF和血清中IL-4显著升高，7 d时高，以后逐渐降低，给药后28 d牛丸组显著低于模型组和地米组〔BALF（ng/L）：6.60±1.05比7.20±1.25、8.55±1.05，血清（ng/L）：6.75±1.05比7.21±1.25、8.25±1.15，P＜0.05或P＜0.01〕。结论牛珀至宝微丸通过促进IFN-γ分泌、抑制IL-4分泌，调整Th细胞失衡，以达到抗炎、减轻肺损伤、抑制肺纤维化的作用。
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牛珀至宝微丸对急性脑梗死一氧化氮影响的临床与实验研究
目的:探讨牛珀至宝微丸对急性脑梗死后一氧化氮(NO)的影响.方法:临床采用随机对照研究方法,以硝酸还原酶法测定脑梗死患者急性期血浆NO的水平,观察牛珀至宝微丸对NO的影响.动物实验采用大脑中动脉线栓法造成大鼠局灶性脑缺血模型,应用免疫组织化学技术检测脑组织诱生型一氧化氮合酶(iNOS)的表达,观察牛珀至宝微丸对脑缺血后iNOS表达的影响,并进行神经病学评分.结果:牛珀至宝微丸能减轻脑梗死患者急性期的NO水平及改善临床症状;牛珀至宝微丸治疗组动物的缺血侧大脑皮质iNOS表达显著低于缺血对照组(P<0.01),并可减轻神经损伤症状.结论:牛珀至宝微丸能部分下调脑缺血所致NOS的异常表达,这可能是其治疗缺血性脑血管病的机制之一.
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牛珀至宝微丸对内毒素休克时蛋白激酶C调控一氧化氮生成的影响
目的:研究牛珀至宝微丸对蛋白激酶C调控内毒素休克时一氧化氮(NO)生成的影响.方法:以内毒素制成休克大鼠模型,用硝酸还原酶法检测血浆中NO;用免疫组织化学、Western blot法检测诱生型一氧化氮合酶(iNOS)的表达,用同位素标记法检测其活性;观察牛珀至宝微丸对蛋白激酶C抑制剂H7及激动剂佛波脂(PMA)的影响.结果:牛珀至宝微丸可增强H7对iNOS表达的调控而使血压回升和NO浓度下降,其作用可部分被PMA逆转.结论:牛珀至宝微丸可经蛋白激酶C通路抑制内毒素诱导的NO合成而调节血压.
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牛珀至宝微丸对内毒素休克大鼠心脏诱导型一氧化氮合酶表达的影响
目的:探讨牛珀至宝微丸对内毒素休克大鼠心脏诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的影响.方法:静脉注射内毒素(LPS)1.5 mg/kg、腹腔注射D-氨基半乳糖(D-GalN)100 mg/kg造成内毒素休克模型,采用免疫组织化学方法检测心脏iNOS的表达.结果:内毒素组iNOS阳性细胞分布于心脏外膜与心肌.牛珀至宝微丸能明显降低内毒素所致iNOS的表达.结论:牛珀至宝微丸治疗内毒素休克的心脏损伤与其下调iNOS的表达相关.
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牛珀至宝微丸对内毒素休克大鼠脑诱导型一氧化氮合酶表达的影响
目的:探讨牛珀至宝微丸对内毒素休克大鼠脑诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的影响.方法:静脉注射内毒素(LPS)1.5 mg/kg、腹腔注射D-氨基半乳糖(D-GalN)100 mg/kg造成内毒素休克模型;采用免疫组织化学方法检测iNOS在脑区的表达.结果:内毒素组iNOS阳性细胞主要分布于大脑皮质、纹状体、脑干、小脑等;牛珀至宝微丸能明显降低内毒素所致iNOS在脑组织中的表达,两组比较差异有统计学意义(P<0.01).结论:牛珀至宝微丸治疗内毒素休克脑损伤与下调iNOS的表达相关.
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牛珀至宝微丸对蛋白激酶C调控内毒素诱导iNOS基因表达的影响
目的:探讨牛珀至宝微丸对蛋白激酶C(PKC)调控(LPS)诱导单核-巨噬细胞诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因表达的影响.方法:用PKC活性测定法观察LPS对PKC的激活作用,用Griess还原法测定一氧化氮(NO)的生成,用基因重组技术构建iNOS荧光素酶报告基因载体,用基因转染及报告基因检测等方法研究牛珀至宝微丸调控LPS刺激RAW264.7细胞对iNOS启动子活性的诱导作用及其与PKC的关系.结果:牛珀至宝微丸可负调节LPS刺激RAW264.7细胞引起的PKC磷酸化激活和膜移位,并可延长PKC抑制剂H-7下调NO作用时间.荧光素酶报告基因实验结果显示,牛珀至宝微丸可抑制LPS刺激诱导的iNOS启动子的转录活性,并可增强H-7和钙离子通道阻滞剂维拉帕米的作用.结论:牛珀至宝微丸抑制LPS刺激RAW264.7细胞所致的NO生成增加,其机制之一是量效与时间两方面抑制PKC激活和细胞内钙增加,从而影响iNOS启动子的转录活性.
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牛珀至宝微丸对内毒素休克大鼠脑诱导型一氧化氮合酶表达的影响
目的:探讨牛珀至宝微丸对内毒素休克大鼠脑诱导型一氧化氮合酶(Inducible Nitric Oxide Synthase,iNOS)表达的影响.方法:静脉注射内毒素1.5 mg/kg、腹腔注射D-氨基半乳糖(D-GaLN)100 mg/kg造成内毒素休克模型,免疫组化方法检测iNOS在脑区的表达.结果:内毒素组iNOS阳性细胞分布于大脑皮质、纹状体、脑干、小脑等.而牛珀至宝微丸能明显降低内毒素所致iNOS表达,二者间比较,差异有显著性.结论:牛珀至宝微丸治疗内毒素休克脑损伤与下调iNOS表达相关.
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牛珀至宝微丸对热应激反应内毒素休克大鼠TNF-α的影响
目的：研究牛珀至宝微丸对热应激反应内毒素休克大鼠影响。方法：将雄性Wistar大鼠45只随机分成3组：a：热应激+牛珀至宝微丸+内毒素组；b：热应激+NS+内毒素组；C：NS+内毒素对照组。分别予以热应急处理或热应激处理后灌注牛珀至宝微丸或单独灌注生理盐水后，静脉注射内毒素(LPS)，然后取注射LPS前和后2 h的动脉血分离血浆测定TNF-α，同时用二导生理仪记录血压等。结果：动物注射LPS后血压明显降低，TNF-α浓度明显升高，热应激反应能降低其浓度(P＜0.05)，而牛珀至宝微丸能加强其作用(P＜0.05)。结论：牛珀至宝微丸能加强大鼠对热应激反应。
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牛珀至宝微丸对内毒素休克肺组织热休克蛋白70表达的调控
目的:观察:牛珀至宝微丸对内毒素休克肺损伤时热休克蛋白70(heat,shock,protein,HSP70)表达的影响及其与一氧化氮(nitric,oxide,NO)的关系.方法:静脉注射内毒素(LPS)1.5mg/kg,腹腔注射D-氮基半乳糖(D-GalN)100mg/kg造成内毒素休克模型,用牛珀至宝微丸和AG作对照干预处理,检测血浆一氧化氮(NO)浓度,免疫组化方法检测HSP70在肺组织内的表达.结果:牛珀至宝微丸增强内毒素休克时肺组织HSP70表达,降低血浆NO浓度,肺损伤减轻.结论:证实牛珀至宝微丸能增强内毒素休克时肺组织HSP70表达,提示牛珀至宝微丸对内毒素休克造成的肺损伤的保护作用可能是通过刺激肺组织HSP70表达增强来调节血浆NO浓度而产生的.
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牛珀至宝微丸对脓毒血症大鼠自由基和肝组织形态学的影响
为探讨牛珀至宝微丸(主药:水牛角、羚羊角、琥珀等)对脓毒血症的防治作用.采用盲肠结扎术造成SD大鼠重度脓毒血症模型,在造模前连续5d予牛珀至宝微丸治疗,并与鸡卵黄免疫球蛋白(IgY)治疗组比较.检测血清SOD、MDA;电镜下观察肝脏组织形态学变化.结果:牛珀至宝微丸、IgY均能提高SOD活性、降低MDA含量;并能保护肝细胞线粒体及内织网.提示,牛珀至宝微丸和IgY对实验性动物脓毒血症有一定的防治作用,其机理可能与其有较强的清除超氧阴离子,抑制脂质过氧化有关.
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牛珀至宝微丸对内毒素休克大鼠肺组织高迁移率族蛋白B1表达的影响
目的:观察牛珀至宝微丸对内毒素休克大鼠肺组织高迁移率族蛋白B1(high-mobility group box-1 protein,HMGB1)表达的影响.方法:30只SPF级Sprague-Dawley大鼠随机分为正常组、内毒素组和牛珀至宝微丸组.牛珀至宝微丸组大鼠每天以含生药量3 mg的牛珀至宝微丸生理盐水悬液3 mL灌胃,连续7 d,正常组予生理盐水.模型组和牛珀至宝微丸组大鼠用静脉注射内毒素(1.5 mg/kg)联合腹腔注射D-氨基半乳糖(100 mg/kg)方法建立内毒素休克模型.采用二氨基联苯胺(diaminobenzidine,DAB)显色和异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)荧光标记的免疫组织化学染色以及蛋白印迹等方法检测大鼠肺组织内HMGB1的表达.结果:正常组HMGB1表达较弱,仅有少量细胞呈阳性,阳性部位多在细胞核;内毒素组HMGB1表达增加,阳性部位主要在细胞质;牛珀至宝微丸组HMGB1表达更高,阳性部位主要在细胞核.结论:牛珀至宝微丸能使HMGB1定位于细胞核内,从而可能避免被分泌出胞,产生毒性,这可能是其治疗感染性休克的作用机制之一.
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牛珀至宝微丸对内毒素休克大鼠脑神经型一氧化氮合酶表达的影响
目的:探讨牛珀至宝微丸对内毒素休克大鼠脑神经型一氧化氮合酶(neuronal nitric oxide synthase, nNOS)表达的影响.方法:将SD大鼠随机分成正常对照组、模型组、牛珀至宝微丸组.模型组静脉注射内毒素脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)1.5 mg/kg、腹腔注射D-氨基半乳糖(D-galactosamine, D-GalN)100 mg/kg造成内毒素休克模型,牛珀至宝微丸组用药7 d后再作以上处理.用免疫组织化学方法检测各组nNOS在不同脑区的表达.结果:nNOS阳性细胞广泛分布于大脑皮质Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ层,海马分子层,齿状回多形层,脑干网状结构,小脑分子层、颗粒层和普尔基涅细胞层.在大脑皮质、海马、脑干及小脑各部位,牛珀至宝微丸组的nNOS阳性细胞数略高于正常对照组,但明显低于模型组(P<0.05).结论:牛珀至宝微丸有部分下调内毒素休克所致广泛脑区nNOS过度表达的作用.
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牛珀至宝微丸对肺损伤早期纤维化大鼠TGF-β1表达的影响
目的 观察牛珀至宝微丸对肺损伤早期纤维化大鼠转化生长因子β1(TGF-β1)的影响.方法 48只SD大鼠随机均分为4组:对照组(C组)、内毒素组(LPS组)、低剂量牛珀至宝微丸预处理组(LD组)、高剂量牛珀至宝微丸预处理组(HD组).采用气管内联合腹腔注射内毒素法复制肺损伤早期纤维化模型.实验结束前留取标本测定肺血管通透性(EB值)及肺组织湿/干重量比(W/D)；HE染色光镜下观察肺损伤程度(DAD评分)；用免疫组化法和蛋白质免疫印迹法测定肺组织TGF-β1蛋白表达；Van Gieson染色法检测肺组织胶原纤维表达.结果 与LPS组比较,LD组以及HD组,尤其是HD组的EB、W/D值和DAD评分明显降低(P＜0.01),光镜下肺肺损伤及纤维化的程度均减轻,肺组织中TGF-β1表达明显减少(P＜0.01).结论 牛珀至宝微丸通过抑制肺组织TGF-β1蛋白的激活,有助于减轻内毒素所致肺损伤早期纤维化.
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牛珀至宝微丸对内毒素肺损伤纤维化大鼠信号转导蛋白smads表达的影响
目的:观察牛珀至宝微丸对内毒素肺损伤纤维化大鼠中转化生长因子-β下游胞内信号转导蛋白Smads表达的影响.方法:气管内两次滴注脂多糖内毒素(1.5mg/kg,3.0mg/kg)、腹腔注射脂多糖内毒素(3.0mg/kg)造成内毒素大鼠急性肺损伤纤维化模型,设正常组对照,用牛珀至宝微丸作干预处理,以HE染色法观察肺组织损伤的形态学改变,Van Gieson法染色检测胶原纤维在肺组织内的表达,并用Western Blot、免疫组化方法检测在肺组织内TGF-β下游胞内信号转导蛋白Smads的表达.结果:内毒素造成严重的急性肺损伤,牛珀至宝微丸可以使内毒素肺损伤纤维化大鼠的smad2/3表达得到抑制,smad4和smad7表达得到不同程度的增强.结论:牛珀至宝微丸减轻内毒素肺纤维化的机理可能与其对TGF-β下游smads通路的调节表达相关.
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牛珀至宝微丸诱导成年大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元的研究
牛珀至宝微丸系由中医急症三宝之一的至宝丹化裁而来,前期临床研究表明对脑梗死急性期有较好疗效,实验研究可减轻脑缺血后神经损伤和病理改变,并增强神经干细胞增殖[1～3].
