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慢性肝病患者血清MMP-1及TIMP-1的检测及临床意义
目的 研究基质金属蛋白酶-1(MMP-1) 和基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1) 在慢性肝病患者肝纤维化过程中的表达和动态变化.方法 采用双抗体"夹芯"酶联免疫吸附( ELISA )法检测64例慢性乙型肝炎和22例乙型肝炎肝硬化患者血清MMP-1和TIMP-1水平,并与20例正常体检者进行对照.结果 血清MMP-1水平在慢性肝病患者肝纤维化过程中逐渐降低,而血清TIMP-1 水平则逐渐增高,与正常对照组比较有显著性差异(P＜0.01) ; 其中慢性肝炎轻度患者血清MMP-1水平与中度、重度和肝硬化之间, 中度与重度和肝硬化之间两两比较有显著性差异(P＜ 0.05 或P＜0.01), 而慢性肝炎重度与肝硬化之间比较无显著性相差(P＞0.05);慢性肝炎轻度患者血清TIMP1水平与中度、重度和肝硬化之间, 中度与重度和肝硬化之间,重度与肝硬化之间两两比较均有显著性差异(P＜0.05 或P＜0.01).结论 血清MMP-1和TIMP-1在慢性肝病患者肝纤维化过程中可能起重要作用,能够被用来做为判断肝纤维化程度的指标,尤其是血清TIMP-1意义更大.
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携TIMP-1基因RNAi慢病毒载体感染大鼠HSC-T6细胞抑制目的基因表达
目的：验证构建成功的携基质金属蛋白酶组织抑制因子-1（TIMP-1）基因特异性小干扰RNA的慢病毒载体对目的基因表达的抑制效应。方法以慢病毒质粒感染HSC-T6细胞，在感染6天和8天后，观察慢病毒感染效率；采用定量PCR法检测TIMP-1 mRNA水平变化；采用免疫印迹法检测TIMP-1蛋白表达变化。结果在慢病毒载体感染6天时，TIMP-1 mRNA水平较正常对照组下降约0.668倍[2-ΔΔCt为（0.668±0.046）]，下降程度明显高于阴性对照组[2-ΔΔCt为（1.001±0.041），（P<0.05）]；在慢病毒感染6天和8天时，RNAi组对TIMP-1蛋白表达具有明显的抑制作用，且以感染第6天为显著。结论构建成功的携TIMP-1基因特异性RNAi慢病毒载体能有效感染HSC-T6细胞，并抑制目的基因的表达。
关键词： HSC-T6细胞 基质金属蛋白酶组织抑制因子-1 RNA干扰 慢病毒 -
兔主动脉球囊损伤后TIMP～1的mRNA动态表达
目的探讨基质金属蛋白酶组织抑制因子-l(TIMP-1)mRNA在球囊损伤后的改变及可能作用.方法在兔腹主动脉球囊损伤的模型上,应用RT-PCR的方法,观察TIMP-1 mRNA在球囊损伤后不同时间的表达情况.结果TIMP-l mRNA球囊损伤后第1天表达开始逐渐升高,第4天达高峰.结论TIMP-l mRNA球囊损伤后表达逐渐升高,第4天达高峰可能与再狭窄中、后期新生内膜形成及血管重塑有关.
关键词： 基质金属蛋白酶组织抑制因子-1 球囊损伤 兔 -
肝癌中基质金属蛋白酶组织抑制因子-1表达的临床意义
目的 研究肝癌组织基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)的表达,探讨其与肝癌的关系及其临床意义,为临床上寻找肝癌表达的新的生物学标志物提供理论依据.方法 取山东省昌邑市人民医院2008年6月-2010年6月肝癌手术切除标本36例,按照Edmondson - Steiner组织学分级标准进行分级.选用3例外伤性肝破裂患者手术肝切除标本作正常对照.使用鼠抗人TIMP-1多克隆抗体,进行免疫组织化学PV- 9000通用型二步法染色.染色结果根据反应强度及面积判断,评分标准按Shimizu方法,根据两项打分之和判断.结果 对照组中TIMP-1的表达为阴性.TIMP-1在肝癌中的表达阳性率为74.8％.TIMP-1的阳性表达与患者年龄、性别、甲胎蛋白(AFP)是否阳性、乙型肝炎表面抗原(HBsAg)是否阳性均无关(均P＞0.05).有癌栓组、无癌栓组和包膜不完整组、包膜完整组的TIMP-1在各组间差异均无统计学意义(均P＞0.05).高侵袭转移组与低侵袭转移组间,TIMP-1阳性率分别为89.6％和48.3％,组间差异有统计学意义(P＜0.05).结论TIMP-1在肝癌组织中的过度表达是肝癌侵袭与转移程度的一个重要生物学标志物.
关键词： 肝癌 基质金属蛋白酶组织抑制因子-1 免疫组织化学 -
冬虫夏草干预肾小球硬化进展的实验研究
目的:用冬虫夏草对进行性肾小球硬化大鼠模型干预治疗,观察其对细胞外基质的影响并探讨其作用机制.方法:实验大鼠随机分为三组.模型组、冬虫夏草组分别行5/6肾切除制备进行性肾小球硬化模型,每天灌胃给予冬虫夏草(2.5 g/kg)水提取液,进行干预治疗;模型组和正常对照组给予等量的自来水.末次术后4周、9周分别测定大鼠24 h尿蛋白定量;观察肾脏病理变化,用免疫组织化学检测肾组织胶原Ⅳ、纤维连接蛋白(FN)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)和基质金属蛋白酶组织抑制因子-2(TIMP-2).结果:冬虫夏草能降低肾小球硬化指数,减少胶原Ⅳ、FN表达;减少尿蛋白排泄;增加肾组织MMP-2表达,减少TIMP-1和TIMP-2的表达.结论:冬虫夏草能够减少5/6肾切除大鼠尿蛋白排泄量;调节MMP/TIMP之间的平衡;减轻肾小球硬化大鼠细胞外基质的积聚,延缓肾小球硬化的进展.
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大蒜素对兔膝骨关节炎作用的实验研究
[目的]探讨大蒜素对兔膝骨关节炎的作用.[方法]将30只家兔随机分为空白对照组、模型对照组和大蒜素组,每组10只;除空白对照组外其余2组按改良Hulth法建立模型,术后开始灌服药物,大蒜素组(大蒜素,128 mg/kg/d)、空白对照组和模型对照组(等量生理盐水20 ml),连用8周.术后8周处死所有家兔取右膝股骨髁大体观察;苏木精-伊红(HE)和番红O (SA-O)染色对股骨髁关节软骨行Mankin评分;采用qRT-PCR法检测股骨内侧髁负重区软骨组织interleukin-1β(白细胞介素-1β,IL-1β)、matrix metalloproteinase-3(基质金属蛋白酶-3,MMP-3)和tissue inhibitor of metalloproteases-1(基质金属蛋白酶组织抑制因子-1,TIMP-1)的mRNA相对表达量.[结果]三组之间比较,空白对照组的Mankin评分低,IL-1β、MMP-3和TIMP-1 mRNA表达量低,模型对照组和大蒜素组,分别与空白对照组比较,上述指标差异均有统计学意义(P＜0.05);与模型对照组比较,大蒜素组Mankin评分降低,IL-1β、MMP-3、TIMP-1 mRNA表达量降低,差异有统计学意义(P＜0.05).[结论]大蒜素能够改善兔膝骨关节炎Mankin评分并能够下调股骨髁关节软骨中IL-1β mRNA、MMP-3mRNA表达,上调TIMP-1 mRNA表达量.
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MMP-12及其抑制因子TIMP-1在基底细胞癌和鳞状细胞癌患者皮损中的表达
目的:明确基质金属蛋白酶-12(MMP-12)及其抑制因子-1(TIMP-1)与基底细胞癌(BCC)和鳞状细胞癌(SCC)的相关性.方法:通过免疫组化法检测MMP-12及TIMP-1在20例正常皮肤组织(NC)和31例基底细胞癌(BCC)、25例皮肤鳞状细胞癌患者(SCC)皮损中的表达.结果:MMP-12、TIMP-1在BCC和SCC中均呈弥漫性阳性表达.MMP-12在BCC和SCC患者中表达阳性率分别为45.2％和80％,高于正常组的5％(P<0.05),TIMP-1在BCC和SCC患者中表达阳性率分别为67.7％和60％,低于正常组的90％(P<0.05).结论:MMP-12、TIMP-1蛋白可能在BCC和SCC发病中发挥重要作用.
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MMP-9、TIMP-1与肾小球硬化关系的中西医结合研究进展
肾小球硬化(glomerular sclerosis,GS)是大多数肾脏疾病的共同病理特征,是多种慢性肾脏疾病进行性发展的后转归,是不同肾脏疾病终末期共同的形态学表现,能引起肾单位结构和功能破坏,终发展为慢性肾功能衰竭.其主要特点是细胞外基质(extracellular matrix,ECM)的过度积聚[1].ECM在肾小球内的沉积过程及发生机制十分复杂,长期以来,人们对ECM积聚的研究主要集中于合成增加,近年来发现ECM降解酶系异常发挥着同样重要的作用.其中基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)及其组织抑制因子(tissue inhibitors of metalloproteinases-1,TIMP-1)的功能紊乱在其发生发展过程中起着尤为重要的作用.
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血液炎性因子与短暂性脑缺血发作的相关性
目的 探讨外周血中部分炎性因子与短暂性脑缺血发作(TIA)的相关性.方法 对43例TIA患者和39例健康体检者(对照组)外周血中C-反应蛋白(CRP)、D-二聚体(D-D)、血清基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)水平进行检测,并进行多因素Logistic回归分析.结果 与TIA相关的单因素分析显示TIA患者血CRP、D-D、MMP-9和TIMP-1水平高于对照组,两组比较差异有统计学意义;多因素Logistic回归分析提示:TIMP-1与是否患病关系密切.结论 血中部分炎性因子在TIA后都有不同程度升高,它们参与了TIA的病理生理过程,与TIA密切相关.
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丙型肝炎病毒核心蛋白上调基质金属蛋白酶组织抑制因子-1的表达
目的 研究丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白对基质金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP)-1基因表达的影响,以探讨HCV的致肝纤维化机制.方法 聚合酶链反应(PCR)扩增TIMP-1的启动子DNA片段,克隆至真核报告载体pCAT3-basic中,构建pCAT3-TIMP-1p报告载体;将该质粒转染人肝癌细胞系HepG2细胞,以酶链免疫吸附试验(ELISA)检测氯霉素乙酰转移酶(CAT)的表达活性;将构建的pCAT3-TIMP-1p与HCV核心蛋白真核表达载体PcDNA3.1(-)-HCVcore共转染人人肝星状细胞系LX-2细胞,同时平行设立pCAT3-basic阴性对照组、pCAT3-control阳性对照组、pCAT3-TIMP-1p单独转染组,用ELISA法检测各组CAT的表达活性.结果 成功获得TIMP-1基因启动子DNA片段,构建的pCAT3-TIMP-1p具有转录活性,与PcDNA3.1(-)-HCVcore共转染LX-2细胞后,ELISA法检测结果显示pCAT3-TIMP-1p吸光度值为0.833±0.040,同期单独转染LX-2细胞的pCAT3-TIMP-1p吸光度值为0.677±0.049,方差分析各组差异有统计学意义(F=132.401,P＜0.05).结论 HCV核心蛋白通过上调TIMP-1启动子的活性,促进TIMP-1基因的表达.
关键词： 肝炎病毒 启动子 病毒核心蛋白质类 基质金属蛋白酶组织抑制因子-1 转录 -
护肝解纤汤对肝纤维化大鼠基质金属蛋白酶-1及其抑制因子表达的影响
目的 观察自拟护肝解纤汤对肝纤维化大鼠基质金属蛋白酶-1(MMP-1)和基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)表达的影响,探讨其抗肝纤维化的机制.方法 100只雄性SD大鼠随机分7组后,其中6组以四氯化碳(CCl4)腹腔注射方法制作大鼠肝纤维化模型,造模后除模型组外分别施以低、中、高剂量姜黄组成的护肝解纤汤灌胃,小柴胡汤及复方鳖甲软肝片为阳性对照,12周后同时处死大鼠,检测血清MMP-1及TIMP-1含量及肝组织MMP-1及TIMP-1表达的变化.结果 与模型组比较,护肝解纤汤可使肝纤维化大鼠血清MMP-1含量增加,血清TIMP-1水平下降,其中均以低剂量姜黄组效果明显,差异有显著性;与模型组比较,各组肝组织中MMP-1阳性表达明显增加,TIMP-1阳性表达明显减少,差异均有显著性(P<0.01).结论 护肝解纤汤具有促进MMP-1表达、抑制TIMP-1表达的作用,其抗肝纤维化作用可能与促进MMP-1表达、抑制TIMP-1表达等机制有关.
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Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ在PDGF诱导肝星状细胞胶原合成中的作用
目的 观察Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)对PDGF诱导下人肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC) collagen α1(Ⅰ)合成的影响.方法 CaMKⅡα siRNA转染对HSC内CaMKⅡα进行干扰,real-time PCR法检测HSC collagen α1(Ⅰ)及TIMP-1 mRNA的表达,Western blot法检测collagen α1(Ⅰ)及MMP-2、TIMP-1表达的变化,ELISA法检测HSC collagen α1(Ⅰ)分泌的变化.结果 CaMKⅡα siRNA可显著抑制PDGF诱导下HSC collagen α1(Ⅰ) 及MMP-2、TIMP-1的转录、蛋白表达以及collagen α1(Ⅰ)的分泌,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 CaMKⅡα信号参与了PDGF诱导下HSC collagen α1(Ⅰ)的产生与分泌,同时通过抑制MMP-2、促进TIMP-1的表达而阻止胶原的降解,是肝纤维化发展过程中PDGF信号的重要调控分子和肝纤维化的潜在治疗靶点.
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脑膜瘤组织中MMP-9、TIMP-1的表达
目的:探讨脑膜瘤组织中基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及其组织抑制因子(TIMP)-1的表达.方法:采用免疫组化S-P法检测10例正常蛛网膜组织、28例良性脑膜瘤组织和16例恶性脑膜瘤组织中MMP-9及TIMP-1的表达水平.结果:正常蛛网膜组织、良性脑膜瘤组织和恶性脑膜瘤组织中MMP-9的阳性表达率分别为0%、25.0%和62.5%,恶性脑膜瘤组织中MMP-9阳性率高于良性脑膜瘤组织,差异有统计学意义(P＜0.01);正常蛛网膜组织中TIMP-1的表达率高(100.0%),良性脑膜瘤组织次之(89.3%),恶性脑膜瘤组织低18.8%,各组间比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论:MMP-9的高表达和TIMP-1的低表达与脑膜瘤的发病过程有关.
关键词： 脑膜瘤 基质金属蛋白酶-9 基质金属蛋白酶组织抑制因子-1 -
阿托伐他汀对不稳定型心绞痛PCI术后患者MMP-9和TIMP-1的影响
目的 探讨不同剂量阿托伐他汀对冠脉介入治疗(PCI)术后基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)的影响.方法 接受PCI的167例不稳定型心绞痛患者,随机分为低剂量组56例、中等剂量组57、高剂量组54例;分别给予阿托伐他汀钙片10 mg、40 mg和60 mg,每晚饭后口服.于术前和术后4周以酶联免疫吸附法测定患者血清MMP-9和TIMP-1水平.结果 低剂量组患者血清MMP-9和TIMP-1水平在治疗前后差异无显著性,中、高剂量组MMP-9手术后4周较术前明显降低(P均＜0.01),但中高剂量组间差异无显著性.中、高剂量组TIMP-1水平术后4周较术前明显升高(P均＜0.01),中高剂量组间差异无显著性.结论 阿托伐他汀减轻不稳定型心绞痛患者PCI术后炎症反应呈剂量依赖性,以中等剂量(40 mg/d)效应佳.
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紫杉醇调节TIMP-1启动子活性及TIMP-1降低紫杉醇对乳腺癌细胞增殖抑制作用的研究
目的 探讨TIMP-1在降低MCF-7对紫杉醇敏感性中的作用.方法 采用DNA重组技术构建含timp-1基因启动子的荧光素酶报告质粒并瞬时转染MCF-7细胞,在撤血清条件下测定荧光素酶的相对活性,以验证重组质粒的有效性;重组质粒瞬时转染入MCF-7细胞中,经紫杉醇处理后,测定荧光素酶的相对表达活性;检测在紫杉醇作用下,TIMP-1过表达克隆与对照克隆细胞增殖的情况.结果 酶切、PCR及测序鉴定结果证实成功构建带有TIMP-1启动子的报告基因表达质粒;且撤血清条件下TIMP-1启动子转录活性显著增强,1 000 nmol/L紫杉醇处理的MCF-7细胞中TIMP-1启动子调控的荧光素酶活性显著降低;紫杉醇对TIMP-1过表达克隆的细胞增殖抑制作用显著低于对照克隆.结论 成功地构建了含timp-1基因启动子的荧光素酶报告质粒,准确地评价TIMP-1启动子在紫杉醇作用过程中的活性变化,并进一步阐明TIMP-1在降低乳腺癌细胞对紫杉醇敏感性中的作用.
关键词： 基质金属蛋白酶组织抑制因子-1 启动子 表达质粒 紫杉醇 -
阿托伐他汀对急性冠状动脉综合征患者血清MMP-9及TIMP-1水平的影响
目的:测定急性冠状动脉综合征(ACS)患者经阿托伐他汀治疗前后血清明胶酶B(MMP-9)、基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)水平,探讨两者水平与粥样斑块破裂的关系及他汀类调脂药物稳定斑块的可能机制.方法:选择稳定型心绞痛(SAP)患者30例,ACS患者54例,并选择30例健康人作为对照.随机将ACS患者分成阿托伐他汀治疗组(30例)及常规治疗组(24例),比较各组患者血清MMP-9,TIMP-1水平变化.结果:SAP、ACS、健康对照组三组之间MMP、TIMP-1水平比较差异有统计学意义,阿托伐他汀治疗组与常规治疗组治疗后血清MMP-9、TIMP 1水平相比差异有统计学意义.结论:血清MMP-9升高及TIMP-1降低与粥样斑块破裂明显相关.阿托伐他汀可降低ACS患者血清MMP-9水平,升高TIMP-1水平,从而起到稳定斑块的作用.
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阿司匹林对川崎病小鼠的治疗作用及其机制研究
目的:采用干酪乳杆菌细胞壁提取物(LCWE)诱导川崎病(KD)小鼠模型,探讨阿司匹林对KD小鼠的治疗作用及其可能的新的作用机制.方法:采用LCWE诱导KD小鼠模型,给予6.25～25.00 mg/ml阿司匹林治疗10 d,观察小鼠实验期间的一般情况和冠状动脉(冠脉)病变情况,以及测定小鼠血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、前列腺素E2(PGE2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)含量,并计算MMP 9/TIMP 1比值.结果:小鼠单次腹腔注射LCWE后,在前3d内,KD小鼠进食、饮水、活动量明显减少;给阿司匹林治疗10d后,与正常对照组比较,KD小鼠冠脉周围有大量炎细胞浸润,血清中TNF-α和PGE2含量显著升高(P＜0.01),同时伴有MMP-9、TIMP-1以及MMP-9/TIMP-1比值的明显升高(P＜0.05),而阿司匹林组小鼠则冠脉周围炎性细胞明显减少,还能不同程度降低血清中TNF-α、PGE2、MMP-9的含量,以及降低MMP-9/TIMP-1比值(P＜0.05或P＜0.01).结论:阿司匹林对KD引起的冠脉损伤有一定的疗效,可能与降低KD小鼠血清中的炎性因子TNF-α和PGE2的含量,以及降低与细胞外基质降解密切相关的MMP-9含量和MMP-9/TIMP-1比值有关.
关键词： 川崎病 阿司匹林 炎性因子 基质金属蛋白酶-9 基质金属蛋白酶组织抑制因子-1 -
急性冠状动脉综合征患者外周血中脂联素水平与IL-10及TIMP-1的相关性
目的:探讨急性冠状动脉综合征(ACS)患者外周血中脂联素水平与白细胞介素(IL)-10和基质金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP)-1的相关性.方法:设立ACS组,50例;稳定型心绞痛组(SA组),13例;正常对照组, 22例.用双抗体夹心酶联免疫吸附法检测各组外周血中脂联素、IL-10和TIMP-1的浓度.结果:ACS组与正常对照组相比,外周血清中脂联素、IL-10和TIMP-1的浓度均显著降低 (均P＜0.01);SA组与正常对照组相比,脂联素、IL-10及TIMP-1的浓度均差异无统计学意义(均P＞0.05).ACS组与SA组相比,脂联素和IL-10的浓度显著降低(P＜0.01和P＜0.05),TIMP-1的浓度差异无统计学意义(P＞0.05).在各指标之间的相关性分析中:脂联素与IL-10和TIMP-1之间的相关性均有统计学意义(r＝0.691,P＜0.01和r＝0.660,P＜0.01).结论:ACS患者血清中脂联素和IL-10的分泌减少,导致TIMP-1的分泌也减少,可能是ACS发生的重要因素.
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复方黄芪颗粒抗肝纤维化机制的实验研究
目的:探讨复方黄芪颗粒(FFHQKL)有无抗肝纤维化作用及作用机制.方法:应用Chevallier半定量计分系统,病理组织学观察,结合细胞外基质(ECM)特殊染色动态观察高、低剂量FFHQKL治疗猪血清诱导肝纤维化模型后各时间段肝组织学及ECM量的变化,评估复方黄芪颗粒的抗肝纤维化疗效;应用免疫组织化学染色方法观察造模结束时以及药物治疗各时间段肝组织内基质金属蛋白酶-13(MMP-13)及其抑制剂(TIMP-1)表达量的变化.结果:与模型组比较,高、低剂量FFHQKL治疗2个月、3个月结束时,肝组织Chevallier纤维化评分均明显减少(P＜0.01).FFHQKL高、低剂量治疗组在治疗第2个月结束时,TIMP-1蛋白表达明显减弱,MMP-13蛋白表达明显增强,治疗第3个月结束时,上述改变更加显著,与模型组比较差异有显著性意义(P＜0.05或P＜0.01).结论:FFHQKL可在蛋白水平增强MMP-13酶蛋白的表达,同时抑制TIMP-1酶蛋白的表达,促进ECM的降解,从而达到逆转肝纤维化之疗效.
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丹参对肝星状细胞基质分解素-1及其抑制因子基因表达的影响
目的 观察丹参对HSC-T6细胞基质分解素-1(MMP3)及其抑制因子基因表达的影响.方法 以不同浓度的丹参(0.8、0.4 g/L)作用于培养的肝星状细胞株HSC-T6细胞48 h,收集细胞,提取总RNA;用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法测定MMP3及基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)的基因表达水平.结果 MMP3基因表达水平在丹参0.8、0.4 g/L两组分别为2.03±0.32、2.19±0.26,而空白对照组为2.13±0.30.TIMP-1基因表达水平在丹参0.8 g/L、0.4g/L两组分别为2.11±0.32、3.12±0.46,而空白对照组为4.03±0.56.结论 丹参可明显抑制HSC-T6细胞TIMP-1的基因表达,且与剂量有关；但对MMP3的基因表达无明显影响.
关键词： 肝星状细胞 丹参 基质金属蛋白酶组织抑制因子-1 基因表达
