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金雀异黄素对高糖培养肾小球系膜细胞SMemb表达及细胞外基质的影响
目的 探讨金雀异黄素(Gen)对高糖培养下大鼠系膜细胞(MC)表型和细胞外基质(ECM)的影响.方法 对照组:低糖DMEM培养液;实验组:高糖DMEM培养液(含0、5、10、50、100、200 μmol/L Gen),培养12、24、48 h,分别检测SMemb mRNA、MMP-2 mRNA、TIMP-1 mRNA水平及上清液Fn的含量.结果 Gen可抑制高糖刺激下SMemb的表达,减少Fn的分泌(P＜0.01或0.05);并可增加MMP-2/TIMP-1mRNA半定量比值,呈浓度、时间依赖性.结论 在体外高糖条件下,Gen干预可降低MC SMemb表达,减轻ECM积聚.
关键词： 金雀异黄素 高糖 非肌肉型肌球蛋白重链 纤连蛋白 基质金属蛋白酶 -
肌成纤维细胞与血管内再狭窄
肌成纤维细胞(myofibroblast)是一种具有平滑肌细胞样特点的成纤维细胞,广泛存在于机体各组织中.具有强收缩和迁移能力,同时仍保留成纤维细胞的功能和特性,例如,表达间充质细胞表型蛋白--波形蛋白(vimentin),合成分泌细胞外基质,如Ⅰ胶原、Ⅲ胶原、纤连蛋白(fibronectin,FIN)等.
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上调肾组织 intermedin 表达抑制单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化
目的：观察上调肾组织intermedin（IMD）表达对单侧输尿管梗阻（UUO）大鼠肾间质纤维化的影响。方法健康雄性Wistar大鼠随机分为假手术组、UUO组、IMD＋UUO组、空质粒＋UUO组。IMD＋UUO组和空质粒＋UUO组在输尿管结扎前分别将IMD-pcDNA3．1真核表达质粒和空质粒转入肾组织，real-timeRT-PCR及免疫组化法检测转染效率。各组分别于术后7d、14d留取梗阻侧肾组织。HE、Masson染色观察肾组织病理变化；real-timeRT-PCR检测肾组织中转化生长因子-β1（TGF-β1）、纤连蛋白（Fn1）的mRNA表达；Western印迹法检测Fn1的蛋白表达；免疫组化法检测TGF-β1的蛋白表达。结果与假手术组相比，UUO组肾脏出现明显的病理改变，肾间质纤维化程度随梗阻时间延长加重（与假手术组比较，7d，t＝11．927，P＝0．0003；14d，t＝8．891，P＝0．0009）；IMD＋UUO组肾脏病理改变及肾间质纤维化程度较同时间点UUO组明显减轻（7d，t＝3．892，P＝0．018；14d，t＝4．047，P＝0．016），而空质粒＋UUO组与UUO组无显著差别（7d，t＝0．562，P＝0．604；14d，t＝0．035，P＝0．974）。与同时间点假手术组相比，UUO组TGF-β1、Fn1的表达明显升高（TGF-β1mRNA水平7d，t＝4．432，P＝0．011；14d，t＝4．873，P＝0．006；蛋白质水平7d，t＝5．312，P＝0．006；14d，t＝4．482，P＝0．011；Fn1mRNA水平7d，t＝6．053，P＝0．004；14d，t＝7．345，P＝0．002；蛋白质水平7d，t＝8．791，P＝0．009；14dt＝8．027，P＝0．001）；转染IMD质粒后Fn1的表达较同时间点UUO组明显下降（mRNA水平7d，t＝3．103，P＝0．036；14d，t＝2．913，P＝0．044；蛋白质水平7d，t＝2．955，P＝0．042；14d，t＝2．991，P＝0．040）；而转染空质粒后Fn1的表达无明显变化（mRNA水平7d，t＝0．095，P＝0．929；14d，t＝0．158，P＝0．882；蛋白质水平7d，t＝0．159，P＝0．881；14d，t＝0．170，P＝0．874）。转染IMD和空质粒对TGF-β1的表达均无明显影响（转染IMD质粒mRNA水平7d，t＝0．176，P＝0．869；14d，t＝0．126，P＝0．906；蛋白质水平7d，t＝0．198，P＝0．853；14d，t＝0．196，P＝0．854；转染空质粒mRNA水平7d，t＝0．100，P＝0．925；14d，t＝0．097，P＝0．928；蛋白质水平7d，t＝0．042，P＝0．968；14d，t＝0．060，P＝0．955）。结论上调肾组织IMD的表达能明显减轻肾间质纤维化，但其作用不是通过直接抑制TGF-β1的表达实现的。
关键词： 肾脏 间质纤维化 Intermedin 转化生长因子-β1 纤连蛋白 -
表皮生长因子信号通路对前列腺癌细胞DU145表面整合素α5、β1的调控
目的探讨表皮生长因子(EGF)信号通路对雄激素非依赖型前列腺癌细胞系DU145表面整合素α5、β1的调控.方法应用流式细胞术、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western蛋白印迹(Western blot)法测定EGF、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路抑制剂PD98059对DU145细胞整合素α5和β1表达的影响;采用细胞粘附能力测定和Transwell小室法检测EGF及PD98059对DU145细胞粘附能力和迁移能力的影响.结果EGF上调DU145细胞表面整合素β1亚基的蛋白和mRNA的表达,分别为对照组的231%和248%(方差值为9.0和24.6,P均＜0.01),并可促进DU145细胞对纤维连接蛋白(Fn)的粘附和迁移能力.而PD98059则具有相反的作用,下调DU145细胞表面整合素β1亚基的蛋白和mRNA的表达,分别为对照组的60%和63%(方差值为6.3和15.3,P均＜0.01),并可抑制DU145细胞对Fn的粘附和迁移能力.EGF和PD98059对整合素α1的表达无明显影响.结论EGF可能通过MAPK信号通路上调前列腺癌DU145细胞表面整合素β1亚基的表达,从而促进DU145细胞对Fn的粘附能力和迁移能力;此调节作用主要发生在mRNA转录水平.
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肝炎患者肝组织内纤连蛋白表达变化的研究
目的 研究纤连蛋白(FN)在不同类型的肝炎和肝硬化患者肝组织中的表达和分布及其与血清透明质酸(HA)水平的关系.方法 用免疫组化方法和常规病理技术确定纤连蛋白在正常和病变肝组织内的定位和表达量的变化规律,并以放射免疫学方法检测肝病患者血清内透明质酸的含量.结果 慢性活动性肝组织中肝细胞和内皮细胞内FN的阳性细胞率明显高于急性肝炎(AH)组和慢性迁延性肝炎(CPH)组(P＜0.05);FN在肝硬化患者肝细胞内不表达,在内皮细胞内呈弱阳性表达,但在各型肝炎的炎症细胞浸润区内FN呈阳性表达;肝组织中FN阳性表达的患者血清内HA含量为(203.7±121.6)ng/ml,明显高于阴性和弱阳性表达患者(139.2±158.0)ng/ml和(130.4±65.1)ng/ml(P＜0.01).结论 FN是肝纤维化的前驱物质,参与新生纤维组织的形成,与肝组织的损伤及其修复和血清内HA含量增大有关.
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手术切口感染患者血清C反应蛋白与降钙素原及纤连蛋白检测价值
目的 研究分析手术切口感染患者的血清C反应蛋白(CRP)、降钙素原(PCT)及纤连蛋白(FN)水平的检测价值.方法 选取2007年12月-2009年12月于医院进行手术治疗并发生切口感染的57例患者为观察组,同期采用手术治疗但未并发切口感染的57例患者为对照组,将两组患者的血清CRP、PCT及FN的阳性率、含量进行检测与比较.结果 观察组的血清CRP、PCT阳性率为91.23％和89.47％,含量分别为(12.27±0.62)mg/L和(10.46±2.14) μg/L,均高于对照组,血清FN的阳性率为82.46％,高于对照组,含量为(137.84±18.96)μg/ml,低于对照组,且重度感染患者CRP、PCT升高的幅度和FN降低的幅度均大于轻度和中度患者,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 手术切口感染患者的血清CRP、PCT及FN水平均呈现异常波动,且对感染的严重程度有一定的临床价值.
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WWOX基因对卵巢上皮性癌细胞黏附能力的影响
目的 探讨WWOX基因对卵巢上皮性癌(卵巢癌)细胞黏附能力的影响.方法 采用RT-PCR技术、蛋白印迹法检测WWOX基因转染的卵巢癌PEO1细胞WWOX mRNA和蛋白的表达;采用黏附实验检测WWOX基因转染的PEO1细胞对纤连蛋白(FN)介导的黏附性.将WWOX基因的小分子RNA(siRNA)转染人具有内源性WWOX基因表达的卵巢癌A2780细胞,黏附实验检测细胞黏附性的变化.结果 WWOX基因转染的PEO1细胞(H6、H7、H8细胞)均有WWOX mRNA的表达,也均有WWOX蛋白的表达.H6、H7、H8细胞在FN包被的培养孔中培养2 h,其黏附性分别为0.098±0.003、0.091±0.004、0.099±0.003,较未转染的PEO1细胞(0.211±0.007)明显减小,分别比较,差异有统计学意义(P＜0.01).转染WWOX siRNA后,转染组A2780细胞在FN包被的培养孔中培养0.5 h,其黏附性为0.059±0.005,明显高于空白对照组(0.029±0.003),两组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 WWOX基因能抑制卵巢癌细胞的黏附能力,WWOX基因缺失可增强卵巢癌细胞对盆腹腔黏膜的黏附,进而发生盆腹腔的种植及扩散.
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腺样囊性癌在纤维连接蛋白中趋化功能变化及其浸润机制
目的通过腺样囊性癌（adenoid cystic carcinoma，ACC）在纤维连接蛋白（fibronectin,FN）中的固相趋化功能变化探讨其浸润机制。方法用Boyden小室法和流式细胞术等测定了3种ACC细胞对FN的趋化反应和细胞表面的受体变化。结果 3种ACC均比鳞状细胞癌（squamous cell carcinoma,SCC）趋化功能强；ACC和SCC细胞表面α2、α3、α6和β1受体亚单位水平高，且ACC3α5也高；受体阻断可见：FN中阻断ACC的α5、β1受体亚单位趋化功能呈高度抑制，阻断α4呈中度抑制，SCC则阻断α1、α4和β1呈强抑制。结论 FN中ACC比SCC侵袭力强；各种细胞不同受体在FN中趋化反应的作用有一定规律。
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三种生物制剂复合应用对芥子气兔眼角膜损伤的治疗作用
目的:观察角膜胶原膜(CCS)及伍用纤连蛋白(FN)、表皮生长因子(EGF)对兔眼角膜芥子气损伤后的治疗作用,寻找芥子气眼损伤后眼睑水肿前救治的新方法、新技术和新药物.方法:将24只兔左眼角膜芥子气染毒后,随机均分为A,B,C组,分别用PBS液、CCS及CCS+FN+EGF处理,于染毒后2,8,16,24,36,48和72 h对角膜荧光素着色区拍照,计算其上皮愈合速率和上皮破损率.结果:A,B,C三组的角膜上皮愈合速率分别为(0.879±0.139)mm2/h、(1.223±0.166)mm2/h和(1.543±0.224)mm2/h,统计学处理发现角膜上皮愈合速率各组间差异均非常显著(P<0.01),三组的角膜上皮破损率分别为71.6%、57.3%和44.8%,统计学差异也非常显著(P<0.01).结论:CCS能促进芥子气染毒引起的兔眼角膜损伤的上皮愈合,而伍用FN和EGF的效果更佳.
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原儿茶醛对脂多糖损伤的血管内皮细胞的作用机制研究
目的:研究复方丹参方中水溶性单体原儿茶醛对血管内皮细胞炎症反应的药理作用及机制.方法:使用脂多糖(LPS,0.5 μg/ml)刺激人脐静脉内皮细胞,造成炎症模型,用原儿茶醛(0.25 mmol/L,0.5 mmol/L,1.0 mmol/L)加以干预;用RT-PCR和ELISA方法检测细胞间黏附分子-1和纤连蛋白的表达水平以及单核细胞趋化蛋白-1的分泌量;用Western印迹方法观察了丝裂原激活的信号转导通路中ERK1/2、JNK和p38的活化情况.结果:原儿茶醛呈剂量依赖性地降低LPS导致的细胞间黏附分子-1及纤连蛋白的高表达,减少了单核细胞趋化蛋白-1的过度分泌,并能抑制ERK1/2、JNK和p38分子的活化.结论:原儿茶醛能通过抑制NF-κB-MAPK信号通路抑制脂多糖诱导的血管内皮细胞炎症反应.
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纤连蛋白的分段表达及与乙肝表面抗原相互作用研究
目的:克隆纤连蛋白(fibronectin)各功能区域基因,在大肠杆菌中表达以筛选与HBsAg相互作用的区域.方法:将纤连蛋白分成7个片段,设计引物,利用RT-PCR从HepG2.2.15中扩增出相应的PCR产物,连接到表达载体pGEX4T-1中,用IPTG诱导目的蛋白在E.coli中表达,通过Western印迹分析对表达产物进行鉴定.融合蛋白纯化后制备蛋白芯片,与HBsAg杂交,筛选纤连蛋白中与HBsAg相互作用的区域.结果:经RT-PCR从HepG2.2.15中扩增到各结构域片段的cDNA,序列分析均正确;SDS-PAGE分析表明,各结构域片段的可溶性表达产物均占细菌可溶性蛋白的10%以上;Western印迹分析提示,诱导表达产物可与GST单抗发生特异性反应.经制备蛋白芯片并杂交,发现片段FN1、FN2信号强.结论:成功地表达了纤连蛋白各片段,蛋白芯片杂交结果显示纤连蛋白可能是通过Ⅱ型肝素结合区及其羰基端(c端)与HBsAg相互作用.
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提高悬浮细胞脂质体转染效率的方法
目的:提高悬浮细胞脂质体转染效率.方法:将细胞分成6组,脂质体组、纤连蛋白(fibronectin)+脂质体组、电击+脂质体组、纤连蛋白+电击+脂质体组、辐射+脂质体组、纤连蛋白+辐射+脂质体组.各实验组均转染EGFP-N1质粒.计算转染效率.结果和结论:脂质体与其他条件组合使用,可以较好地提高悬浮细胞转染效率.
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纤维连接蛋白B结构域的生物学特征及其靶向药物开发
纤维连接蛋白(fibronectin,FN)的B结构域(extra-domain B,ED-B)作为新的实体肿瘤组织标志物已成为新药开发的优良靶点之一,已有多个抗体药物进入临床研究阶段.其中两项Ⅱ期临床试验数据显示B结构域的抗体融合蛋白(L19-IL2和L19-TNFα)对黑素瘤的疗效显著优于PD-1药物,相关Ⅲ期临床试验也已顺利开展.本文介绍B结构域的生物学特征、新药开发案例和潜在的开发方向,包括蛋白质药物结构改造与修饰、多种药物融合蛋白、适应证拓展、伴随诊断与个体化治疗等,也探讨加强源头创新以扩大新药研发差异化的方法,期望找到新的靶向药物开发热点.
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钙蛋白酶抑制剂对纤连蛋白诱导的MCF-10A乳腺上皮细胞-间质转化的影响
本研究观察钙蛋白酶抑制剂(ALLN和calpain inhibitor Ⅳ)对纤连蛋白(FN)诱导的MCF-10A乳腺上皮细胞-间质转化(EMT)的影响.FN作用MCF-10A细胞48 h后,采用划痕修复实验检测MCF-10A细胞的迁移能力;基质胶包被的transwell小室实验检测细胞的侵袭能力;Western blot法检测波形蛋白(vimentin)、E-钙粘着蛋白(E-cadherin)、锌指蛋白(snail)和钙蛋白酶-2(calpain-2)的表达.研究结果显示,FN诱导MCF-10A细胞形态发生改变;显著增加MCF-10A细胞的迁移和侵袭能力;上调calpain-2、vimentin和snail蛋白表达,下调E-cadherin蛋白水平.ALLN和calpain inhibitorⅣ能显著抑制FN诱导的MCF-10A细胞形态变化、迁移和侵袭能力增强、vimentin、snail和calpain-2蛋白表达上调及E-cadherin蛋白表达下调.以上研究结果表明,FN诱导MCF-10A乳腺上皮细胞发生EMT可能与上调calpain-2的表达有关,ALLN和calpain inhibitorⅣ能够抑制FN诱导的上皮间质转化.
关键词： 钙蛋白酶抑制剂 MCF-10A乳腺上皮细胞 纤连蛋白 上皮间质转化 钙蛋白酶 -
复方鱼腥草改善db/db小鼠肾损伤及其机制研究
目的:研究复方鱼腥草不同提取部位对db/db小鼠肾损伤及其机制.方法:db/m小鼠为正常组;db/db小鼠分为模型组、JAK酶抑制剂AG490组(AG490组)、石油醚提取部位组(SYM组)、乙酸乙酯提取部位组(YSYZ组)、正丁醇提取部位组(ZDC组)、水提组(ST组).每组6只,给药8周.检测小鼠尿白蛋白(AL)、24 h尿蛋白定量、血糖、尿酸(UA)、谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、纤连蛋白(FN)、糖化血红蛋白(HbA1c)、肾组织中的JAK2,STA T3,SOCS-1的基因变化及其相应的蛋白P-JAK2,P-STAT3蛋白表达变化.结果:模型组JAK2,P-JAK2,STAT3,P-STAT3蛋白及JAK2mRNA,STAT3mRNA表达均明显增高(P＜0.05);与模型组相比,复方鱼腥草各给药组的P-JAK2,P-STAT3均有降低,ST组及ZDC组的SOCS-1基因与蛋白变化升高;但各给药组的JAK2,STAT3基因及蛋白表达无显著差异.结论:复方鱼腥草能降低尿AL、24 h尿蛋白、UA、FN的分泌,改善糖尿病肾损伤,其机制可能与调节JAK/STAT-SOCS-1通路有关.
关键词： 复方鱼腥草 JAK/STAT通路 糖尿病肾病 纤连蛋白 尿酸 -
曲格列酮对转化生长因子-β1诱导的HK-2细胞纤连蛋白和胶原I型基因表达的影响
目的 观察曲格列酮对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的人肾近曲小管上皮细胞(HK-2)细胞外基质纤连蛋白和胶原I型的影响,探讨曲格列酮抗肾间质纤维化的潜在作用.方法 将曲格列酮0,0.25,0.5,1,2.5,5和10μmol·L-1预处理HK-2细胞2 h,随后加入TGF-β1 5 mg·L-1作用24 h,利用乳酸脱氢酶(LDH)释放实验检测曲格列酮对HK-2细胞的毒性作用;曲格列酮0,1,2.5,5和10 μmo·L-1预处理HK-2细胞2 h,再加入TGF-β1 5 mg·L-1作用24 h,通过实时荧光定量RT-PCR检测HK-2细胞外基质主要成分胶原I型mRNA和纤连蛋白mRNA表达.结果 曲格列酮0.25～5 μmol·L-1对HK-2细胞膜完整性无影响,LDH的释放与正常对照组无明显差异,曲格列酮10 μmol·L-1组LDH释放率为(10.7±5.3)%,明显高于正常对照组(P<0.01).与正常对照组相比,曲格列酮1,2.5,5和10μmo·L-1单独作用并没有增加HK-2细胞外基质中胶原I型纤维和纤连蛋白的表达,而TGF-β1刺激下胶原I型纤维和纤连蛋白表达明显上调,曲格列酮提前干预下纤连蛋白mRNA及胶原I型mRNA表达下降,曲格列酮2.5,5和10 μmo·L-1可显著下调纤连蛋白mRNA表达(P<0.05,P<0.01);曲格列酮5和10 μmol·L-1可显著下调胶原I型mRNA表达(P<0.05).结论 曲格列酮可能具有拮抗肾间质纤维化的潜在作用,其作用机制可能与抑制HK-2细胞纤连蛋白和胶原I型纤维的增加有关.
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宫颈Bishop评分与fFN的测定对预测延/过期妊娠孕妇引产效果的价值
目的：探讨宫颈Bishop评分与fFN的测定对预测延/过期妊娠患者引产效果的价值。方法对300例延/过期妊娠患者进行宫颈评分及fFN测定，宫颈评分＞6分者直接进行催产素引产，≤6分者则给予硫酸普拉睾酮钠促宫颈成熟3d后再次评分及fFN测定并催产素引产，追踪分析宫颈评分及fFN检测结果能否预测孕妇的引产效果。结果随宫颈评分的增加，fFN的阳性率上升，两者之间存在正相关性；当Bishop＞6且fFN阳性时，引产成功率高达98.8%，Bishop≤6且fFN阴性时，引产成功率为8.8%。结论fFN对于预测引产成功率的敏感性、特异性、准确率等均要高于宫颈评分，而如果将两者联合进行测量将更明显增加预测的可信度。
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氧化苦参碱对TGF-β1诱导的PANC-1细胞Smad3/Gli1通路相关因子表达的影响
目的 研究氧化苦参碱(OM)对接受转化生长因子-β1 (TGF-β1)刺激的人胰腺导管癌PANC-1细胞中Smad3/Gli1通路相关因子表达的影响.方法 以TGF-β1刺激PANC-1细胞模拟胰腺纤维化模型,并观察给予OM干预对Smad3/Gli1通路相关因子表达的影响.通过细胞转染技术将Gli1及Smad3的RNA干扰质粒转染入PANC-1细胞;通过Western blotting技术检测Smad3、Gli1和α-SMA的蛋白表达,ELISA技术检测纤连蛋白(FN)和Ⅰ型胶原(CoL-Ⅰ)在细胞培养上清中的表达.结果 与对照组相比,PANC-1细胞接受TGF-β1刺激后Smad3、Gli1和α-SMA的蛋白表达显著升高;与TGF-β1组相比,OM和TGF-β1共同处理组Smad3、Gli1和α-SMA的蛋白表达显著降低.转染Smad3干扰质粒后,Gli1、α-SMA、FN和CoL-Ⅰ表达显著下降.与TGF-β1组比较,转染Gli1干扰质粒后加TGF-β1组α-SMA、FN和CoL-Ⅰ表达显著降低.结论 OM可能通过调节PANC-1细胞TGF-β1/Smad3/Gli1通路发挥抗胰腺纤维化作用.
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纤连蛋白通过激活 FAK 促进口腔鳞癌细胞迁移的实验研究
目的：探讨粘着斑激酶（FAK ）信号通路在纤连蛋白（ FN）调节口腔鳞癌细胞迁移中的作用。方法采用Tran-swell方法检测不同浓度FN（0，0．1，1，10和50μg ／ml）对口腔鳞癌细胞迁移能力的影响，并检测FAK磷酸化抑制剂（ PF-04554878）对FN促进口腔鳞癌细胞迁移能力的影响。采用Western blot法检测FN佳浓度下的FAK活性变化。结果 FN能够促进口腔鳞癌细胞的迁移，且在浓度10μg ／ml时作用大；FN促进口腔鳞癌细胞迁移过程中 FAK被激活，PF-04554878可阻断FN对口腔鳞癌细胞迁移的促进作用。结论 FN通过激活FAK促进口腔鳞癌细胞迁移。
关键词： 纤连蛋白 FAK PF-04554878 口腔鳞癌 -
血浆纤连蛋白预测妊娠期高血压疾病
目的 通过检测孕中期孕妇血浆纤连蛋白(fetal fibronectin,FFN)值,预测妊娠期高血压疾病(HDCP),为临床上确立FFN预测值及早期防治该病发生提供理论依据.方法 选择我院产科门诊进行常规检查的孕24～28周孕妇作为研究对象.选择符合标准的孕妇,抽取肘静脉血5 ml,加抗凝剂,采用酶联免疫吸附法测血浆中FFN含量,分别选取第90、95、97.5百分位值作为候选值,通过计算约登指数确定预测值,评价预测效果.结果 本研究共310例入选,并完成所有相关检测项目,追踪到妊娠结局.其中发展为HDCP 25例,血压始终正常285例.FFN的预测界值为189.5 mg/L.以FFN≥189.5 mg/L作为预测值差异有统计学意义(P<0.01),其约登指数为0.42,灵敏度为48%,特异度为94%,阳性预测值为40%,阴性预测值为95%.结论 FFN作为一项新的生化指标,在产科的应用中显示出良好的预测价值.
