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P27基因联合中药片仔癀对人骨肉瘤抑制作用观察
目的:观察P27基因重组腺病毒联合中药片仔癀对人骨肉瘤裸鼠移植瘤体内生长的抑制作用.方法:①用人骨肉瘤细胞株MG-63接种于裸鼠腋部皮下,连续传代3次,肿瘤生长稳定后,再用组织移植法构建人MG-63细胞裸鼠原位骨肉瘤模型;②肿瘤细胞接种l周肿瘤长至0.7cm左右时,选择40只肿瘤体积均一的裸鼠随机分成5组:空白对照组(8只),PBS溶液注射治疗;P27基因治疗组(8只),raav-P27病毒液注射治疗;Paav-MCS空载体组(8只),raav-MCS病毒注射治疗;片仔癀组(8只),片仔癀溶液灌胃治疗;联合治疗组(8只),raav-P27病毒液注射联合片仔癀灌胃治疗.③观测指标:骨肉瘤裸鼠成瘤率、荷瘤裸鼠生活质萤及毒副反应、肿瘤块的体积和肿瘤的生长抑制率.结果:①成功构建了裸鼠原位骨肉瘤模型;②单纯灌服片仔癀溶液、P27基因治疗及片仔癀、P27基因联合治疗组肿瘤的生长明显受到抑制,与空白对照组及空载体组差异显著(P＜0.05),肿瘤生长抑制率分别达32.24%,55.25%与61.84%.空白对照组与空载体组相比,无显著差异(P＞0.05);③荷瘤裸鼠一般情况良好,活动能力较强.结论:①腺相关病毒介导的p27基因能有效抑制入骨肉瘤MC-63的生长.②P72基因与片仔癀联合应用后,产生协同作用,其抑瘤效果与改善荷瘤裸鼠的生存情况比单用片仔癀治疗或单用P27基因治疗更明显.③中药片仔癀对提高荷瘤裸鼠的生活质量有一定的帮助.
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奇果菌素诱导骨肉瘤U2OS细胞凋亡及其机制的研究
目的 研究奇果菌素(grifolin)诱导骨肉瘤U2OS细胞体外生长抑制及诱导凋亡的作用及其机制.方法 应用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定奇果菌素对U2OS细胞的生长抑制实验;荧光显微镜下(Hoechst 33258荧光染色)观察细胞核形态学变化;流式细胞仪检测细胞的凋亡率;Western blot法检测Akt、GSK3、FKHRL蛋白表达.结果 奇果菌素的浓度在50μm以上时对骨肉瘤U2OS细胞具有明显的生长抑制作用,呈明显的时间和浓度效应关系;并能诱导细胞发生凋亡,出现凋亡小体,呈典型的凋亡细胞形态;随着药物浓度的增加和作用时间的延长,细胞的生长抑制率及细胞凋亡率均明显升高,50.0μm的奇果菌素作用U2OS细胞0,6,12,24h后,细胞出现不同程度的亚G1峰,细胞凋亡率分别为1.96%、13.91%、52.6%、63.5%;Western blot法分析表明U2OS细胞经过50.0μm和100μm的奇果菌素作用24h后,U2OS细胞的Akt、FKHRL、GSK3的表达均下调,表示其表达水平及活性显著降低.结论 奇果菌素能够通过诱导人骨肉瘤U2OS细胞发生凋亡而发挥抑制U2OS细胞生长作用,尤其当奇果菌素的浓度＞50.0μm,其对U2OS细胞增生的抑制作用呈剂量和时间依赖性,抑制Akt和GSK3的活性是奇果菌素体外诱导人骨肉瘤U2OS细胞发生凋亡的重要作用机制之一.
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RECK与MMP-9在人骨肉瘤组织中的表达及相关性分析
目的 探讨伴有kazal域的富含半胱氨酸的逆转诱导蛋白(RECK)与基质金属蛋白酶9(MMP-9)在人骨肉瘤组织中的表达及相关性.方法 选取唐山市人民医院2001年1月～2010年12月临床及病理资料完整存档的人骨肉瘤组织标本34例为观察组,另取临床及病理资料完整存档的骨软骨瘤组织标本34例为对照组,采用免疫组织化学法检测RECK和MMP-9,采用定量PCR法检测RECK和MMP-9的mRNA,并分析指标相关性.结果 观察组RECK阳性率(58.8％)低于对照组(91.2％),而MMP-9阳性率(64.7％)高于对照组(11.8％),差异有统计学意义(P＜0.05).RECK阳性率、RECK的mRNA表达、MMP-9阳性率、MMP-9的mRNA表达在年龄、性别、病发部位方面比较,差异无统计学意义(P＞0.05).RECK阳性率、RECK的mRNA表达、MMP-9阳性率、MMP-9的mRNA表达在转移、复发以及生存时间方面比较,差异有统计学意义(P＜0.05).RECK与人骨肉瘤组织呈明显负相关(r=-0.561,P=0.000).MMP-9与人骨肉瘤组织呈明显正相关(r=0.613,P=0.000).结论 RECK可抑制MMP-9表达,发挥抑癌作用,有望成为未来诊断以及治疗人骨肉瘤的潜在靶标.
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薯蓣皂苷配基对人骨肉瘤U-20S细胞的生长抑制作用
长期以来,手术、放疗和化疗已成为恶性肿瘤治疗的主要方法,传统的化疗对肿瘤治疗起着重要作用,但由于毒副反应大、选择性差,使其临床应用受到很大限制,因此探索新的化疗药已成为全球众多科学工作者追求的目标,本实验就薯蓣皂苷配基(diosgenin)对人骨肉瘤U-20S细胞的生长抑制作用进行探索,现报告如下.
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应用蛋白质组学方法筛选人骨肉瘤多药耐药蛋白
多药耐药(MDR)是导致肿瘤化疗失败的一个重要原因[1].大量研究表明[2,3],骨肉瘤多药耐药与P-糖蛋白(P-gp)、多药耐药相关蛋白(MRP)、谷胱甘肽转移酶(GST)、DNA拓扑异构酶Ⅱ(Topo Ⅱ)等异常表达有关,我们应用蛋白质组学方法筛选耐药细胞与亲本细胞中差异表达的蛋白.
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p19ARF和p16INK4a在人骨肉瘤中表达的比较研究
目的 比较p16INK4a和p19ARF两种抑癌基因在可切除的人骨肉瘤组织中的表达形式,探讨其在人骨肉瘤的发生、发展中的意义.方法 人骨肉瘤切除石蜡标本37例,用单克隆抗体间接免疫荧光法同时测定肿瘤组织的p16、p19蛋白的表达.结果 p16INK4a表达率56.8%(21/37),p19ARF表达率40.5%(15/37);p16与p19表达无相关性;p16和p19与骨肉瘤的外科分期、病理分级、血管浸润和肺部转移均无显著相关.结论 p16、p19的下调都很可能是骨肉瘤发生发展的重要原因之一,未发现这两种抑癌基因之间的表达有显著关系.
关键词： 人骨肉瘤 p16INK4a p19ARF 周期蛋白依赖激酶抑制剂 -
灵芝酸A对人骨肉瘤细胞增殖、凋亡和迁移的影响
目的：探讨灵芝酸A对骨肉瘤细胞增殖、凋亡和迁移的影响。方法体外培养人骨肉瘤HOS和mg-63细胞与0.1、0.25和0.5 mmol/L的灵芝酸A孵育，采用CCK8检测HOS和MG-63细胞的增殖，流式细胞仪检测细胞凋亡，Transwell检测细胞的迁移和侵袭。Western blot检测细胞中p-STAT3、STAT3、p-p38、p38和NF-ΚB1蛋白的表达变化。结果灵芝酸A能够显著抑制人类骨肉瘤HOS和MG-63细胞的增殖，促进细胞凋亡以及抑制细胞迁移，并且这种效应存在剂量依赖性。与0.5 mmol/L灵芝酸A孵育能够显著降低HOS和MG-63细胞中STAT3的磷酸化水平，增加p38磷酸化水平，同时增加NF-κB1的表达水平。结论灵芝酸A能够杀死人类骨肉瘤HOS和MG-63细胞，可以作为抗骨肉瘤的药物进行开发。
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牛蒡子苷元对人骨肉瘤MG-63细胞增殖及细胞凋亡的影响
目的 探讨牛蒡子苷元对人骨肉瘤MG-63细胞系增殖及凋亡的影响.方法 以人骨肉瘤MG-63细胞系为研究对象,采用不同浓度(1μg/mL、5μg/mL、10μg/mL)的牛蒡子苷元处理细胞.采用CCK-8法测定细胞体外增殖能力,流式细胞术检测各组细胞凋亡情况,荧光定量PCR检测Bcl-2、Bax和VEGFR-2基因的表达水平变化.结果 牛蒡子苷元能够抑制骨肿瘤细胞MG-63的增殖,促进细胞凋亡,随着药物浓度的增加能够降低Bcl-2基因的表达,升高Bax基因的表达,抑制VEGFR-2基因的表达.结论 牛蒡子苷元可诱导人骨肉瘤MG-63细胞系发生凋亡,抑制其细胞增殖能力,并能抑制Bcl-2和VEGFR-2基因的表达水平,同时能够诱导促凋亡基因Bax表达水平的上升,这些结果阐明了其抗肿瘤作用中存在的作用机制.
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人骨肉瘤中肾上腺髓质素和整合素αvβ3的表达及相关性研究
目的：研究肾上腺髓质素（ADM ）和整合素αvβ3在人骨肉瘤组织的不同临床分期、病理分级及组织学分型中的表达情况，并探讨二者之间的关系。方法应用免疫组化SABC法和图像分析技术的方法检测30例骨肉瘤组织中ADM 和整合素αvβ3表达的阳性率、强度和平均光密度（ALD）。每张切片分别由两名病理医师在未知临床和病理资料的情况下独立观察切片，随机观察（至少5个具有代表性的高倍视野，计数100个细胞）判定肿瘤分期、分级及细胞染色程度。结果 ADM 与整合素αvβ3表达的阳性率和表达强弱均随着骨肉瘤分期增加而上调（P＜0．05），并在各期之间的差异有统计学意义（P＜0．05）。ADM 与整合素αvβ3的表达水平呈正相关。结论 ADM和整合素αvβ3在骨肉瘤中的表达强弱与骨肉瘤的恶性程度密切相关，且二者的表达变化呈正相关。
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抗人骨肉瘤单克隆抗体5D3的特异性鉴定
目的鉴定抗人骨肉瘤单克隆抗体(mAb) 5D3的特异性.方法用免疫组化染色法检测mAb 5D3与骨肉瘤细胞系、骨肉瘤组织、其它肿瘤组织及正常组织的反应性.结果免疫组化染色检测发现,mAb5D3相应抗原在部分骨源性肿瘤,特别是骨肉瘤组织及骨肉瘤细胞系呈高度表达,中度以上染色者占阳性总数的77%以上,主要分布于细胞核上.14种正常组织中未见阳性反应.结论 mAb5D3具有高度特异性,为骨肉瘤的早期诊断及免疫治疗提供了可能性.
