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Bmi-1基因对胃癌细胞增殖的影响及机制
目的:探索干扰Bmi-1基因后对其可能的下游基因Akt/PKB活性和P16INK4a基因表达的影响及对肿瘤细胞增殖和细胞衰老的作用.方法:用s iRNA技术干扰Bmi-1表达后,运用Western blot检测Bmi-1蛋白及相关蛋白pAkt、Akt和P16INK4a的表达,同时进行SA-β-Gal染色检测细胞衰老,软琼脂克隆形成实验检测细胞的增殖能力.结果:转染Bmi-1 i质粒组平均细胞衰老率28%±3.5%,而对照Ctrl i组为16%±2.7%,有明显统计学差异( P<0.01).转染Bmi-1 i质粒组细胞平均克隆形成数为3.4±1.4个,而对照Ctrl i组为11±2.3个,两组比较有明显的统计学差异( P<0.01).Bmi-1 i 组较Ctrl i 组Bmi-1和pAkt蛋白表达明显下降,而P16INK4a蛋白表达升高.结论:干扰Bmi-1可以通过降低Akt/PKB活性和上调P16INK4a蛋白表达,促进肿瘤细胞衰老并减弱肿瘤细胞的增殖能力.
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奇果菌素诱导骨肉瘤U2OS细胞凋亡及其机制的研究
目的 研究奇果菌素(grifolin)诱导骨肉瘤U2OS细胞体外生长抑制及诱导凋亡的作用及其机制.方法 应用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定奇果菌素对U2OS细胞的生长抑制实验;荧光显微镜下(Hoechst 33258荧光染色)观察细胞核形态学变化;流式细胞仪检测细胞的凋亡率;Western blot法检测Akt、GSK3、FKHRL蛋白表达.结果 奇果菌素的浓度在50μm以上时对骨肉瘤U2OS细胞具有明显的生长抑制作用,呈明显的时间和浓度效应关系;并能诱导细胞发生凋亡,出现凋亡小体,呈典型的凋亡细胞形态;随着药物浓度的增加和作用时间的延长,细胞的生长抑制率及细胞凋亡率均明显升高,50.0μm的奇果菌素作用U2OS细胞0,6,12,24h后,细胞出现不同程度的亚G1峰,细胞凋亡率分别为1.96%、13.91%、52.6%、63.5%;Western blot法分析表明U2OS细胞经过50.0μm和100μm的奇果菌素作用24h后,U2OS细胞的Akt、FKHRL、GSK3的表达均下调,表示其表达水平及活性显著降低.结论 奇果菌素能够通过诱导人骨肉瘤U2OS细胞发生凋亡而发挥抑制U2OS细胞生长作用,尤其当奇果菌素的浓度＞50.0μm,其对U2OS细胞增生的抑制作用呈剂量和时间依赖性,抑制Akt和GSK3的活性是奇果菌素体外诱导人骨肉瘤U2OS细胞发生凋亡的重要作用机制之一.
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AKT/PKB通路在非小细胞肺癌中作用的研究进展
AKT/~白激酶B(protein kinase B,PKB)是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,传递生长因子等胞外刺激信号,参与调节细胞凋亡、增生、分化和代谢等一系列生理活动.目前在肿瘤的研究中发现AKT/PKB的激活与肿瘤的发生、发展以及肿瘤血管的形成都有密切的关系.本文就AKT/PKB通路在非小细胞肺癌中作用的研究进展进行综述.
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NGF对哮喘小鼠气道阻力和肺组织Akt/PKB表达的影响
目的 探讨NGF介导的Akt/PKB信号转导通路在哮喘小鼠发病中的作用.方法 BALB/c小鼠30只,按随机数字表法随机分为正常对照组、哮喘组、NGF阻断组.利用AniRes2005肺功能仪测小鼠气道阻力,运用免疫组织化学方法测定Akt/PKB的组织表达,Metamoph图像分析系统对结果进行分析.结果 哮喘小鼠吸气阻力和呼气阻力明显高于正常组小鼠(P＜0.01),NGF阻断组小鼠吸气阻力和呼气阻力明显低于哮喘组.免疫组织化学染色结果显示哮喘组Akt/PKB在肺组织炎性细胞的表达及Akt/PKB阳性炎症细胞数明显多于正常对照组(P＜0.05),而NGF阻断组则明显低于哮喘组(P＜0.05).结论 NGF介导哮喘气道高反应和炎症反应, Akt/PKB参与了哮喘发病中NGF介导的信号传导.
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蛋白激酶CK2抑制剂TBB对甲状腺鳞癌细胞株SW579CK2β和Akt表达的影响
目的:观察四溴苯三唑(TBB)对甲状腺鳞癌SW579细胞株CK2β和Akt表达的影响,探讨TBB抗甲状腺癌的作用机制.方法:体外培养SW579细胞,实验分为对照组(未加任何处理组和DMSO组)、TBB组(终浓度为25 μmol· L-1)和Wortmannin组(终浓度为100 nmol·L-1).MTT比色法测定细胞生长抑制率,同时测定蛋白激酶CK2的活性.采用RT-PCR方法检测SW579细胞CK2β及Akt的mRNA表达,分析各处理组CK2β及Akt基因表达变化.采用Western blotting方法检测SW579细胞CK2β及Akt的蛋白表达,分析各处理组CK2β及Akt的蛋白表达变化.结果:与对照组比较,TBB组SW579细胞生长抑制率明显增加(P＜0.01),细胞内CK2的活性明显降低(P＜0.01).RT-PCR结果表明,与对照组比较,TBB组CK2β的mRNA表达水平显著降低(P＜0.01),Akt的mRNA表达水平无明显变化(P＞0.05).Western blotting结果表明,与未处理组比较,Wortmannin组内源性CK2的活性无明显变化(P＞0.05),TBB组CK2β的表达明显降低(P＜0.01),同时Akt Thr308和Ser473磷酸化状态受到抑制(P＜0.01),总Akt水平无明显变化.结论:TBB可降低SW579细胞蛋白激酶CK2β的表达,进而再下调Akt的活性.
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Akt信号分子和结直肠癌的关系
在我国,结直肠癌是常见的恶性肿瘤之一,且是癌症相关死亡因素的第三大主要原因.近年来,结直肠癌的发病率和病死率呈逐年上升的趋势.在结直肠癌的发生、发展过程中,PI3 K/Akt/mTOR信号通路的异常活化起到十分重要的作用.其中,Akt作为该通路的中间信号分子,在蛋白质合成、细胞代谢、细胞增殖与分化、抗凋亡及血管新生等事件中均起到十分关键的作用.本文就Akt信号分子及其在结直肠癌发生发展中的作用以及对结直肠癌预后和生存的影响进行综述.
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选择性抑制剂celecoxib诱导肝癌细胞凋亡及其相关分子机制的实验研究
目的:研究环氧合酶-2(COX-2)选择性抑制剂celecoxib抑制肝癌细胞增殖和诱导肝癌细胞凋亡过程中的作用及其可能的机制.方法:采用celecoxib作用于Bel-7402、SMMC-7721的2种肝癌细胞株,以四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定肿瘤细胞的增殖抑制率、TUNEL实验、流式细胞术检测细胞凋亡率、免疫细胞化学和Western blot实验测定细胞凋亡及Akt信号转导途径相关蛋白的激活状态.结果:MTT法显示celecoxib可抑制上述两株肝癌细胞增殖;TUNEL实验及流式细胞术结果证实,celecoxib处理后的肿瘤细胞可发生细胞凋亡;免疫细胞化学及Western blot实验显示,celecoxib诱导凋亡主要是通过抑制Akt的Thr308磷酸化,进而激活caspase-9、caspase-3进行的.结论:celecoxib明显抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡,其主要机制可能通过Akt信号转导途径、激活caspase通路实现的.
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病毒感染与PI-3K-Akt/PKB信号转导通路
在漫长的进化过程中,病毒发展了一些机制来延迟或抑制细胞凋亡,以保证病毒蛋白和核酸的合成、病毒颗粒的装配以及病毒在人体内的扩散和致病.近年研究表明,磷脂酰肌醇-3激酶-丝/苏氨酸蛋白激酶(PI-3K-Akt/PKB)信号转导通路在维持细胞生存和抑制细胞凋亡中起关键作用,许多病毒可通过激活PI-3K-Akt/PKB信号转导通路抑制感染细胞的凋亡,从而维持病毒在人体内的感染和生存.文章就病毒激活PI-3K-Akt/PKB信号转导通路的可能机制作了综述.
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Akt/PKB异常与消化系统肿瘤的研究进展
Akt/PKB信号通路是细胞内信号传导的重要环节,参与腚细胞代谢、生存/凋亡、分化和增殖等过程.细胞内Akt/PKB活性状态依赖于其磷酸化与去磷酸化之间的平衡.蛋白磷酸酶PP2A使Akt/PKB去磷酸化而失活,而Ser/Thr蛋白磷酸酶抑制剂冈田酸(okadaic acid)可以增加活化的Akt/PKB.Akt/PKB信号通路调节异常可见于肿瘤、糖尿病甚至精神分裂症等.肿瘤组织中Akt/PKB活性水平高可以是Akt/PKB信号通路上游调节异常造成的,如P13K亚基或:PTEN的基因突变,或者Akt/PKB基凶扩增造成的.Akt/PKB被认为参与了多种肿瘤的发生、发展及侵袭转移.近年Akt/PKB信号通路正逐渐成为肿瘤发牛机制及治疗的研究热点,本文就Akt/PKB异常与消化系统肿瘤的研究进展作一综述.
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Akt信号通路与细胞存活的研究进展
Akt/PKB是一种丝/苏氨酸蛋白激酶,由三个高度同源的Akt1、Akt2和Akt3组成.在对Akt/PKB的上游机制中不断了解的同时,我们也认识到Akt的下游途径与协调信号的特异性有关,通过影响下游多种效应分子的活化状态,发挥着调节细胞存活、代谢、增殖的作用.Akt/PKB信号通路在与肿瘤、心血管疾病、神经系统疾病的发生发展密切相关而受到重视.本文主要对Akt/ PKB信号通路的组成与功能,调节及抗凋亡方面的研究进展作一综述,期待为以Akt/PKB为作用靶点的治疗研究提供参考.
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PKB/Akt-NF-κB通路与糖尿病血管内皮细胞功能的调节
糖尿病血管病变是糖尿病患者致死率和致残率增高的主要原因.血管内皮细胞是介于循环血液和管壁之间的第一道屏障,与糖尿病血管病变的病理生理联系尤为密切.蛋白激酶B(PKB)/Akt、核因子(NF)-κB是细胞内重要的信号分子,它们之间相互作用、相互影响,在血管内皮细胞中协同调控内皮细胞的炎症、凋亡、增殖等.本文对PKB/Akt-NF-κB的关系及其对糖尿病血管内皮细胞功能的调节作一综述.
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冬凌草甲素作用PI3K/AKT通路诱导HeLa细胞凋亡
[目的]研究冬凌草甲素诱导HeLa细胞凋亡的作用及其机制.[方法]MTT法测定冬凌草甲素对HeLa细胞的生长抑制实验,Hoechst33342荧光染色等观察细胞核形态学变化;LDH法研究细胞死亡的途径.流式细胞仪检测细胞的凋亡,免疫印迹实验检测相关蛋白的表达.[结果]25 μmol/L以上的冬凌草甲素对宫颈癌HeLa细胞具有明显的生长抑制作用,并能诱导细胞发生凋亡,随着药物浓度的增加和作用时间的延长,细胞的生长抑制率及细胞凋亡率均明显升高,冬凌草甲素抑制细胞生长及诱导细胞发生凋亡的过程中,细胞端粒酶Akt、FKHRL、GSK3表达水平及活性显著降低.[结论]冬凌草甲素能够通过诱导人子宫颈癌HeLa细胞发生凋亡而发挥抑制HeLa细胞生长作用,抑制Akt和GSK3的活性是冬凌草甲素体外诱导人子宫颈癌HeLa细胞发生凋亡的重要作用机制之一.
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汉黄芩素对高脂喂养加小剂量STZ诱导的2型糖尿病小鼠空腹血糖的影响
目的：观察汉黄芩素对高脂喂养加小剂量链脲佐菌素（ STZ）诱导的2型糖尿病小鼠空腹血糖的影响。方法将造模成功的20只2型糖尿病小鼠分为3组：糖尿病模型组（DM组，n＝6）、二甲双胍组（Met组，n＝6）以及汉黄芩素组（Wog组，n＝8），普通饲料组则作为正常对照组（NC组，n＝10）。 Met组以二甲双胍0.30 g／kg灌胃，Wog组以汉黄芩素40 mg／kg灌胃，NC组及DM 组则用等量生理盐水灌胃，1次／d，在同一时间，连续2周。实验过程中除NC组动物予普通饲料外，余组小鼠均继续给予高脂饲料饮食，自由摄水。检测体重、药物干预前后空腹血糖变化、空腹胰岛素（ FINS）及血脂，应用半定量反转录聚合酶链式反应（ RT－PCR）测定小鼠骨骼肌蛋白激酶B（AKT／PKB）及葡萄糖转运蛋白4（GLUT4）的mRNA表达，应用Western blot检测小鼠骨骼肌磷酸化AKT（p－AKT）（Ser473）及GLUT4的蛋白表达。结果至第5周末，与NC组比较，DM组、Met 组及Wog 组小鼠体重增加；STZ腹腔注射及灌胃后各组小鼠体重呈下降趋势，但差异均无统计学意义；至第8周末，各组小鼠体重差异均无统计学意义（P＞0.05）。与药物干预前比较，Met组及Wog 组药物干预后空腹血糖降低，而两组间降糖幅度无差异。与NC组比较，DM 组、Met 组及Wog 组FINS均降低，TC、HDL－C、LDL－C 分别升高，DM 组AKT、GLUT4 mRNA及蛋白表达均减少，而3组间以上指标差异无统计学意义（P＞0.05）；4组间TG差异均无统计学意义（P＞0.05）。与DM 组比较，Met组及Wog 组FINS有所升高，Met 组AKT mRNA 及蛋白表达差异无统计学意义（P＞0.05）、GLUT4 mRNA及蛋白表达增加（ P＜0.05）；而Met 组较Wog 组FINS、AKT、GLUT4的mRNA 及蛋白表达水平高（P＜0.05）。结论汉黄芩素可降低2型糖尿病小鼠的空腹血糖，可能与其上调骨骼肌AKT的基因表达及蛋白活化，增加GLUT4基因及蛋白表达，促进骨骼肌利用葡萄糖相关。
关键词： 汉黄芩素 C57BL/6J小鼠 空腹血糖 Akt/PKB GLUT4 -
Akt/PKB信号通路调控机制的研究进展
Akt也被称为蛋白激酶B(protein kinase B,PKB),是一种分子量约为60 kDa的丝/苏氨酸蛋白激酶~([1]),处于多条信号通路的重要交叉点,可调节细胞因子、生长因子和癌基因Ras激活的细胞生存信号,在真核生物的调控网络中普遍存在.Akt信号通路与恶性肿瘤、糖尿病、类风湿关节炎等多种疾病的发生发展密切相关~([2]),也因此越来越受关注.近年来,不断的研究使人们不仅对Akt生物学作用的了解更加深入,对Akt信号通路调控机制的研究也有了很多重大突破,它在人类一些疾病中发挥的具体作用及其分子调节机制正逐渐被阐明~([2-3]).
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关于GRK2在阿尔茨海默病发病机制中作用的研究
阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)是一类病因未明的神经退行性疾病.临床以老年斑(senile plaques,SP)和神经纤维缠结(neurofibrillary tangles,NFTs)为特征,其病理变化以细胞外β淀粉样蛋白(β-amyloid,Aβ)沉积导致SP的形成及细胞内自我聚集的高度磷酸化tau蛋白,形成NFTs为结构基础.GRK2是十分重要的细胞内信号转导分子,在AD发病机制中通过激活丝裂原活化蛋白激酶(mitogenactivated protein kinase,MAPK)及调节Akt/蛋白激酶B(Protein Kinase B,PKB),eNOS等胞内信号分子的磷酸化及活性,在细胞生物信号转导中起着关键作用.本文研究GRK2在调节β淀粉样蛋白代谢与转运、tau蛋白磷酸化及血脑屏障通透性中的作用,进一步探讨GRK2在AD发病机制中的分子机制.
