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消化道氮能神经的研究进展
人体消化道的神经构成复杂、功能多样,向来是学术界的研究热点之一.与其相关的新观点、新概念、新物质的报道层出不穷.20世纪末期,基于对一氧化氮(NO)生物学作用广泛而深入地研究,人们发现并明确了NO是一种新型神经递质.由于此类以NO为递质的神经具有重要的生物学效应,学术界提出了氮能神经的概念从而为我们深入了解非肾上腺素能非胆碱能神经开辟了全新的视角,同时也彰显出氮能神经在生物体中潜在的重大作用.本文将针氮能神经在胃、肠道、食管等主要消化道器官的分布情况、对消化道正常生理功能调控、以及与相关消化道疾病病理联系等方面展开综述,并设想了氮能神经可能基于一氧化氮合酶的各种异构体的相关性而在消化道正常、疾病两态之间的平衡机制中存在某种作用和联系.
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一氧化氮合酶抑制剂L-NNA对福尔马林大鼠脑nNOS、iNOS表达的影响
目的探讨一氧化氮合酶抑制剂L-NNA对福尔马林实验大鼠脑一氧化氮合酶表达的影响.方法应用免疫组织化学ABC法研究了nNOS、iNOS在福尔马林大鼠脑内的表达.结果在福尔马林实验大鼠不同脑区,nNOS和iNOS表达较强.一氧化氮合酶抑制剂L-NNA可抑制福尔马林实验大鼠脑nNOS、iNOS的表达,NO生成减少.结论一氧化氮合酶抑制剂L-NNA可通过抑制一氧化氮合酶作用,参与伤害性痛觉调制.一氧化氮在脑的痛觉调制过程中起重要作用.
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戊四氮致癫痫大鼠脑内nNOS表达的实验研究
目的 探讨一氧化氮合酶(NOS)的nNOS(神经元型)亚型在戊四氮致癫痫大鼠模型中海马部位的变化情况.方法 PTZ点燃癫痫大鼠,随机分为对照组、PTZ组观察大鼠癫痫发作后的行为学变化,脑电图描记,采用免疫组化,免疫印迹(Western blot)方法检测大鼠海马组织中nNOS表达的影响.结果 注射PTZ后大鼠出现癫痫发作.EEG表现为尖、棘波节律.nNOS在癫痫大鼠大脑海马区阳性细胞表达升高.结论 PTZ诱导癫痫发作大鼠海马区内nNOS阳性细胞表达升高,起到致癫痫的作用.
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小鼠脑内不同脑区中一氧化氮合酶免疫阳性神经元的分布、形态特征和起源
目的:研究小鼠前脑一氧化氮合酶(nNOS)免疫阳性(nNOS阳性)神经元在成年小鼠大脑的分布、形态特征和起源.方法:免疫组织化学显色观察nNOS阳性神经元在成年小鼠大脑中分布及其形态特征；BrdU标记新生神经元,研究脑内nNOS阳性神经元产生的时间；通过Nkx2.1 (NK2 homeobox 1)-Cre和Shh (Sonic hedgehog)-Cre转基因小鼠与基因报告小鼠杂交后追踪其子代细胞的方法,观察成年小鼠脑内nNOS阳性神经元的起源.结果:nNOS阳性神经元在小鼠大脑中广泛表达；BrdU实验结果表明,皮质和纹状体中nNOS阳性神经元主要在胚胎期13.5d到14.5d产生,而隔区/钭角带中的这部分神经元则主要在胚胎期11.5d到12.5d产生；大部分皮质、纹状体和隔区/DB中的nNOS阳性神经元来源于Nkx2.1子代细胞,另外有部分来源于Shh子代细胞.结论:成年小鼠大脑中分布大量的nNOS阳性神经元；不同区域的这些神经元在胚胎发育的不同时间产生；脑内nNOS阳性神经元主要来源于Nkx2.1子代细胞,部分来源于Shh子代细胞.
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大鼠前扣带皮层中PSD-95和nNOS在痛情绪中的作用
目的 探讨大鼠前扣带皮层(ACC)中PSD-95和nNOS在痛情绪中的作用.方法 40只SD大鼠随机分为正常组(N组)、F组(福尔马林)、NS-CPA组(生理盐水-CPA)、F-CPA组(福尔马林-CPA)、CCI-CPA组.完成CPA训练后,将各组大鼠麻醉后取ACC,用Western blot方法检测PSD-95和nNOS蛋白的表达.结果 与CPA训练前比,F-CPA组和CCI-CPA组大鼠经过出现了明显的回避行为(P＜0.05).与NS-CPA组比较,F-CPA组、CCI-CPA组大鼠ACC中PSD-95、nNOS的表达上调(P＜0.05),其中F-CPA组PSD95的表达上调较明显(P＜0.05),而CCI-CPA组nNOS的表达上调更明显(P＜0.05).结论 大鼠ACC中PSD-95和nNOS表达上调可能参与了痛情绪的形成.
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缺血再灌注损伤后nNOS、eNOS及iNOS表达的变化
目的 观察脑缺血再灌注后中晚期三型NOS表达的变化规律.方法 采用蛋白质印迹法检测大鼠缺血再灌注后人脑皮层NOS的表达.结果 三型NOS在缺血再灌注12、24、72h后与正常对照组比较均明显增加.iNOS在12～72h表达逐渐增加,nNOS在12～72h表达逐渐减少,eNOS在12～72h表达呈逐渐减少趋势.结论 缺血再灌注12～72h,随着时间的延长及神经元损伤程度的增加,nNOS、eNOS所起的作用逐渐减弱,而iNOS的表达却越来越强,可见在缺血再灌注中晚期损伤的病理进程中三种NOS担当着不同的作用,提示在此期间选择应用iNOS抑制剂有可能减少迟发性神经元损伤.
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NMDAR/PSD-95/nNOS复合物在神经病理性疼痛中的研究进展
神经病理性疼痛是一种常见的慢性疼痛疾病，发病机制复杂且临床治疗效果欠佳。近研究表明， N-甲基-D-天冬氨酸受体/突触后致密蛋白95/神经元型一氧化氮合酶（NMDAR/PSD-95/nNOS）复合物在神经病理性疼痛中发挥重要作用。研究发现，如果不直接抑制NMDAR或nNOS，选择性阻断NMDAR/PSD-95或者nNOS/PSD-95的相互作用，可以在不影响NMDAR和nNOS生理功能的前提下抑制神经病理性疼痛中NO的病理性释放，可能获得没有明显副作用的安全有效的神经病理性疼痛的治疗药物。故本文对NMDAR/PSD-95/nNOS复合物在神经病理性疼痛中的研究进展进行综述。
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高糖对体外培养的Cajal间质细胞nNOS、HO-2表达的影响
目的:观察高糖对体外培养的Cajal间质细胞(interstitial cells of Cajal,ICC)的nNOS、HO-2表达的影响,探讨NO、CO在糖尿病胃肠功能紊乱的细胞机制.方法:以小鼠小肠为ICC的组织来源,应用酶解法分离、培养ICC.实验分组:正常对照组(葡萄糖浓度为5.5 mmol/L);甘露醇渗透压对照组(葡萄糖浓度为5.5 mmol/L、甘露醇浓度为27.5 mmol/L);高糖组(葡萄糖浓度为33 mmoI/L).通过倒置显微镜观察细胞形态、MTT比色法检测细胞活力、用Western-Blot方法对细胞内的nNOS、HO-2的表达进行分析.结果:与正常组比较,加入葡萄糖后的ICC细胞变圆,突起变短,与周围的邻近细胞网络不明显、细胞活力也下降,而加入甘露醇后的ICC基本没有变化.免疫印迹法检测到甘露醇组的nNOS、HO-2的表达与正常组无明显差异,而高糖组的nNOS、HO-2与正常组比较其表达明显下降.结论:高糖改变了体外培养的ICC的细胞形态、降低了ICC的细胞活力及其细胞内nNOS、HO-2的表达,提示胃肠道组织中的ICC的形态、活力及其胞内的NO、CO可能涉及糖尿病胃肠功能紊乱的发病机制.
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nNOS PDZ抑制剂的合成及其神经保护作用研究
目的:合成nNOS PDZ抑制剂并评价其神经保护作用.方法:根据nNOS PDZ结构域配体结合部位多碱性中心的结构特点设计并合成多系列双羧酸及其醋类化合物,用谷氨酸诱导的神经元细胞乳酸脱氢酶释放模型评价化合物的神经保护作用.结果:合成了18个目标化合物,其中N-(2-甲氧羰基乙酰基)-D-缬氨酸甲酯(1)、N-(2-羧基乙酰基)-D-缬氨酸甲酯(2)、N-(2-甲氧羰基乙酰基)-L-缬氨酸甲酯(7)、N-(2-羧基乙酰基)-L-缬氨酸(9)显示较强的神经保护作用.结论:nNOS PDZ结构域抑制剂具有神经保护作用.
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nNOS磷酸化在大鼠神经病理性疼痛发病中的作用及其机制
目的:探索神经结扎(spinal nerve ligation,SNL)模型大鼠脊髓内神经元型一氧化氮合酶(neuronal nitric oxide synthase,nNOS)的磷酸化是否对神经病理性疼痛具有调节作用,研究nNOS磷酸化在神经病理性疼痛中的作用机制.方法:选用雄性SPF级SD大鼠60只,随机分为4组.假手术组:只暴露脊神经,不结扎;实验组:制作SNL模型,鞘内注射钙依赖性蛋白激酶Ⅱ(phosphorylated calcium/calmodulin dependent kinase Ⅱ,p-CaMK Ⅱ)抑制剂KN93;阴性对照组:制作SNL模型,鞘内注射DMSO;模型组:制作SNL模型,不给药.于术前1d、术后1～5 d以及鞘内给药后1～4 h测定机械痛阈值.采用Western blot检测腰段脊髓组织p-CaMK Ⅱ、nNOS与p-nNOS的表达水平,利用免疫共沉淀以及免疫荧光实验检测nNOS与其接头蛋白CAPON是否具有相互作用.结果:SNL可导致大鼠机械疼痛阈值降低(P＜0.01),脊髓组织p-CaMKⅡ的表达增加(P＜0.05),p-nNOS的表达下降(P＜0.05),髓鞘内注射KN93可反转神经结扎所致的上述趋势;nNOS与其接头蛋白CAPON在大鼠体内存在相互作用,nNOS的磷酸化能降低其与CAPON的相互作用强度.结论:nNOS的磷酸化参与了SNL诱导的神经病理性疼痛的维持,p-CaMK Ⅱ通过对nNOS的磷酸化,降低nNOS与其接头蛋白CAPON在体内的相互作用强度,针对nNOS的磷酸化信号途径的治疗可为神经病理性疼痛的治疗提供新的视野.
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17β-estradiol通过促进PSD95/nNOS耦联抑制皮层海马神经元的存活
目的:检测17β-estradiol对皮层海马神经元存活的影响,并判断其与nNOS/PSD95耦联的关系.方法:采用原代培养的ICR小鼠皮层海马神经元.培养7天后分溶剂对照组和给药组分别给予溶剂DMSO和浓度为10 μmol/L的17β-estradiol,LDH法判断细胞损伤,测定给药30 min后细胞死亡情况,并拍摄光镜照片观察细胞形态.同时利用免疫共沉淀法检测DMSO组,10nmol/L17β-estradiol组.10 μmol/L 17β-estradiol组的nNOS和PSD95的耦联情况,观察药物对其影响.结果:给药30 min后,与对照组相比,10 μmol/L 17 β-estradiol组LDH漏出率增加.同时nNOS/PSD95耦联增加,而10 nmol/L 17β-estradiol对nNOS/PSD95耦联并没有影响.结论:浓度为10 μmol/L的17β-estradiol会损伤皮层海马神经元,而且这一结果可能是通过促进nNOS/PSD95耦联实现的.
关键词： nNOS PSD95 雌激素 17β-estradiol 细胞死亡 -
7-NI和AMT在脑缺血再灌注中保护作用的比较
目的探讨神经型一氧化氮合酶(nNOS)的抑制剂7-硝基吲唑(7-nitroindazole,7-NI)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的抑制剂AMT(2-Amino-5,6-dihydro-6-methyl-4H-1,3-thiazine)对大鼠脑缺血再灌注后海马CA1区细胞的保护作用.方法建立SD大鼠全脑缺血动物模型,处理组大鼠每组在缺血前20min给药,缺血15 min后再灌注5天,应用焦油紫染色方法检测7-NI和AMT对大脑海马CA1区细胞的保护作用.结果假手术组海马CA1区细胞无死亡,缺血对照组几乎全部死亡,7-NI组保护37.4%,DMSO组几乎全部死亡;AMT组保护82.3%;生理盐水组几乎全部死亡.结论AMT对大鼠脑缺血复灌后海马CA1区细胞的保护作用大于7-NI的保护作用.
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MK801对大鼠全脑缺血/再灌注ASK1信号通路影响以及神经元的保护
目的 探讨MK801(dizocilpine,地佐环平)对全脑缺血/再灌注后神经型一氧化氮合成酶(nNOS)介导的凋亡信号调节激酶1(apoptosis signal-regulating kinase 1,ASK1)信号通路及海马CA1区细胞凋亡的影响.方法采用四动脉结扎法构建大鼠全脑缺血模型.SD大鼠腹腔注射MK801(30 mg·kg-1).通过"生物素转化法"(Biotin-Swich method)检测蛋白质的S-亚硝基化.然后运用免疫印迹、免疫共沉淀和免疫组织化学等方法对蛋白质的磷酸化以及蛋白质之间的相互作用进行研究;应用焦油紫染色的方法检测脑缺血/再灌注后海马CA1区的细胞凋亡情况.结果 脑缺血/再灌注引起了ASK1的S-亚硝基化;MK801明显地抑制了脑缺血/再灌注诱导的ASK1的S-亚硝基化的增加;MK801明显降低了Thr845的磷酸化水平、增加了Ser83位的磷酸化水平,从而降低了ASK1的活性;MK801引起ASK1下游MKK4/7-JNK信号通路及下游凋亡的核通路也产生了相应的变化.结论 MK801能够抑制SD大鼠全脑缺血/再灌注引起ASK1的S-亚硝基化,进而影响ASK1凋亡信号通路,对神经元损伤起到保护作用.
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出生前后铝暴露对大鼠学习记忆及海马NO、nNOS的影响
目的 研究出生前后不同浓度慢性铝暴露后年轻大鼠海马NO含量和nNOS表达的变化,探讨铝损害学习记忆的突触机制.方法 对照组、低剂量和高剂量组大鼠从孕期开始分别自由饮用蒸馏水15 mmol·L-1和30 mmol·L-1的AlCl3水溶液;采用原子吸收石墨炉法测定血铝和脑铝含量;跳台法测试学习记忆能力;硝酸还原酶法检测NO含量;免疫组化方法观察nNOS阳性细胞表达.结果 与对照组相比,两铝暴露组大鼠血铝和脑铝含量明显升高,学习记忆能力明显下降,海马NO含量明显降低且nNOS阳性神经元表达明显减少.结论 出生前后慢性铝暴露损害了大鼠的学习记忆行为,可能与海马NO含量减少及nNOS神经元表达降低有关.
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nNOS基因在慢性吗啡作用的SK-N-SH细胞的表达及调控
cAMP和转录因子CREB磷酸化水平升高是慢性吗啡依赖及耐受形成的基础.对于CREB与其调控的下游基因在其中的表达变化研究较少.首次研究了在慢性吗啡诱导的SK-N-SH细胞CREB的DNA结合活性及nNOS基因表达变化.该细胞株以1.5∶1的比例表达μ及δ受体,故实验结果更可靠.
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NMDAR/PSD-95/nNOs复合体及其解偶联剂在治疗缺血性卒中的应用
缺血性脑卒中是一种高死亡率、高致残率、高复发率的疾病。目前认为，脑卒中是由各种血管性病因引起的急性或局灶性脑功能障碍，且持续时间超过24 h或引起死亡的临床症候群。随着对脑卒中发病机制的深入研究，其治疗药物也日新月异，该文综合国内外文献，根据NMDAR/PSD-95/nNOs复合体结构特点及其如何在缺血性脑卒中产生病理作用，阐明新型解偶联药物在治疗缺血性卒中的应用前景。
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左旋丁基苯酞对Aβ1-42诱导的体外原代培养神经元损伤的影响
目的 研究左旋丁基苯酞对β-淀粉样蛋白(Aβ)诱导的原代培养海马及基底前脑神经元损伤的保护作用.方法 运用细胞原代培养的方法培养大鼠基底前脑及海马胆碱能神经元并进行鉴定,用2 μmol/L的Aβ1-42建立神经细胞损伤模型,将细胞分为对照组、Aβ1-42模型组和Aβ1-42+左旋丁基苯酞(0.1、1、10 μmmol/L)处理的低、中、高剂量组.倒置显微镜下观察给药前后细胞形态变化,Western Blot检测NF-kB及nNOS的含量.结果 与对照组比较,Aβ1-42作用于原代神经元48 h后,神经细胞形态发生显著改变,NF-kB表达增高,nNOS表达降低(P均＜0.05),低、中、高剂量的左旋丁基苯酞能够显著改善细胞形态,抑制NF-kB活化,提高nNOS的表达(P均＜0.05).结论 左旋丁基苯酞对Aβ1-42诱导的原代神经元保护作用可能与其抑制NF-kB活化,上调nNOS的表达有关.
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疏肝健脾饮对糖尿病性胃轻瘫大鼠的干预作用
目的 观察疏肝健脾饮对链脲佐菌素致糖尿病性胃轻瘫大鼠的胃肠推进指标及nNOS、5-HT4R、β2-AR等指标的影响并探讨其作用机制.方法 以2%链脲佐菌素(STZ)加不规则饮食4周造成糖尿病性胃轻瘫大鼠模型,将30只模型大鼠随机分为模型组和中药组,4周后中药组以相当于成人临床常用剂量的2倍灌胃给药,模型组灌胃等剂量生理盐水,1次/d,给药4周.另取10只正常大鼠作为正常组.实验通过胃肠推进指标和nNOS、5-HT4R、β2-AR免疫组化的结果 观察疏肝健脾饮对糖尿病性胃轻瘫大鼠的干预作用.结果 疏肝健脾饮不仅降低糖尿病性胃轻瘫大鼠的血糖,还可以明显改善胃肠推进,并改善nNOS、5-HT4R、β2-AR等指标,与模型组比较有显著性差异(P＜0.05).结论 疏肝健脾饮能降低糖尿病性胃轻瘫大鼠的血糖,加速胃排空,并改善nNOS、5-HT4R、β2-AR等免疫组化指标.
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司来吉兰联合左旋多巴对帕金森病模型大鼠结肠 TH 及nNOS表达的影响
目的：观察司来吉兰联合左旋多巴对帕金森病模型大鼠结肠中 T H及nNOS表达的影响，探讨司来吉兰联合左旋多巴对帕金森病消化系统功能紊乱的可能机制。方法72只健康雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组及联合治疗组，每组均设4 d及8 d2个时间点。采用颈背部皮下注射鱼藤酮制备帕金森病模型大鼠，模型制备成功后，联合治疗组每日灌胃1次司来吉兰0.5 mg／kg及2次左旋多巴15 mg／kg ，直至试验时间点。对照组及模型组每只每日均连续灌胃等体积生理盐水至试验时间点。应用免疫组化法S‐P法以及Western blotting检测T H及nNOS在对照组、模型组以及联合治疗组大鼠结肠组织中的表达情况。结果造模成功后，免疫组化及Western blotting结果均显示，模型组大鼠结肠中的T H表达较对照组明显减低（P＜0.05）；通过司来吉兰联合左旋多巴治疗后，联合治疗组TH表达显著高于模型组，但仍低于对照组（P＜0.05），治疗8 d时较治疗4 d时，TH表达无显著差异（P＞0.05）。nNOS在模型组中的表达较对照组以及联合治疗组明显增多（P＜0.05），且联合治疗组中nNOS表达较对照组增多（P＜0.05），治疗8 d时较治疗4 d时，nNOS表达无显著性差异（P＞0.05）。结论帕金森病大鼠结肠组织中的T H表达降低，而nNOS表达增加。司来吉兰联合左旋多巴能缓解PD后T H的降低以及nNOS的升高，能有效缓解帕金森大鼠的肠道功能紊乱。
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尼莫地平对慢性脑缺血大鼠认知和海马CA1区NOS亚型的影响
目的 探讨尼莫地平对慢性脑缺血大鼠海马CA1区三种一氧化氮合酶亚型(nNOS、iNOS、eNOS)的表达和认知的影响.方法 24只大鼠随机分为假手术组、模型组和治疗组,双侧颈总动脉永久结扎造模,治疗组于术后24h开始用尼莫地平(10mg/kg,2次/d)灌胃,连续60d,各组于60d后用Y型迷宫测试认知功能,测试结束后做免疫组化染色,观察计算海马CA1区每个高倍镜视野下的阳性细胞均数.结果 与假手术组相比,模型组认知能力下降,海马CA1区nNOS和eNOS表达下降,iNOS表达增强,治疗组的各项指标介于两者之间.结论 尼莫地平能改善慢性脑缺血大鼠的认知能力,其机制可能与提高海马CA1区nNOS和eNOS的表达及抑制iNOS的表达有关.
