首页 > 文献资料
-
急性心肌梗死患者骨髓单个核细胞移植前后血浆尾加压素Ⅱ和脑钠肽的变化
目的 本研究旨在明确急性心肌梗死(AMI )患者骨髓单个核细胞(MBMC)移植前后,尾加压素Ⅱ和脑钠肽的变化.方法 23例AMI患者(AMI组)与22例无冠状动脉病变的患者(对照组)做对照,AMI组MBMC移植前,移植后1、7 d,对照组入选时放射免疫法测定血浆尾加压素II和脑钠肤水平.结果 AMI组尾加压素Ⅱ水平在MBMC移植前[(0.37410.189)ng/ml]较对照组[(0.046±0.017 )ng/ml]显著升高(P<0.01),移植后[(0.223±0.043 )ng/ml]较对照组[(0.46210.115 )ng/ml]显著降低(P<0.01),移植1d后显著升高,和移植前相比增加到129%,移植后7d再次降低.AMI组脑钠肤水平,在MBMC移植后1d与移植前相比降低到61%,移植后7d降低更明显.结论 MBMC移植的疗效可能与其对尾加压素Ⅱ和脑钠肤水平的调节有关.
-
骨髓单个核细胞Coombs试验在全血细胞减少症中的意义
目的了解骨髓单个核细胞直接抗人球蛋白试验(BMMNC-Coombs)对全血细胞减少症鉴别诊断的意义.方法对30例全血细胞减少症患者进行BMMNC-Coombs试验,流式细胞术检测CD+19和CD+19CD+5表达.聚合酶链反应(PCR)检测TCRVrⅠ-Jr基因重排.结果 30例全血细胞减少症患者,入院后进一步检查有15例分别确诊为阵发性睡眠性血红蛋白尿(2例)、慢性再生障碍性贫血(5例)、骨髓增生异常综合征(5例)、缺铁性贫血(1例)和巨幼细胞贫血(2例).15例未能明确诊断的全血细胞减少症患者,其中12例显示BMMNC-Coombs试验阳性,其阳性者CD+19和CD+19CD+5的表达明显高于BMMNC-Coombs试验阴性者(P＜0.01).BMMNC-Coombs试验检测为阳性者具有TCRVrⅠ-Jr基因重排.结论部分全血细胞减少症患者可能是由于免疫异常(特别是自身抗体)所介导的造血细胞破坏所致.BMMNC-Coombs试验在全血细胞减少症的鉴别诊断中有重要作用.
-
MBMC 移植对扩张型心肌病慢性心力衰竭大鼠血中 NO、ET-1 和 CEC 的影响
目的:研究骨髓单个核细胞(MBMC)移植对实验性扩张型心肌病慢性心力衰竭大鼠血一氧化氮(NO)、内皮素-1(ET-1)和循环内皮细胞(CEC)的影响.方法:建立扩张型心肌病慢性心力衰竭大鼠模型.实验组直接心肌注射DAPUI标记过的MBMC.于造模后即刻、移植后4和12周,行血NO、ET-1、CEC检测.结果:实验组移植前血浆NO、ET-1及CEC水平与对照组比较无显著性差异(P＞0.05).造模成功大鼠血浆NO水平明显降低,ET-1及CEC水平明显升高,与移植前比较有显著性差异(P＜0.05).MBMC移植术后4周、12周时,大鼠血浆NO水平继续升高,ET-1及CEC水平持续下降,与移植前、造模成功后4周时比较有显著性差异(P＜0.05).结论:①该大鼠模型有严重的血管内皮损伤；②MBMC移植对其血管内皮损伤具有明显的修复作用；③血中NO、ET-1、CEC水平检测,可作为判断血管内皮损伤程度、评价疗效、判断预后的指标.
-
蛛网膜下腔移植骨髓源干细胞与中药联合干预对缺血再灌注大鼠脑组织中胶质源性神经营养因子的影响
目的 观察骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSC)或骨髓单个核细胞(bone marrow mononuclear cells,BMNC)蛛网膜下腔移植、以及联合中药蝮龙抗栓丸干预对缺血再灌注(middle cerebral arterial occlusion,MCAO)大鼠脑组织中胶质源性神经营养因子(gilial cell-line derived neurotrophic factor,GDNF)含量的影响.方法 分离培养骨髓源干细胞BMNCs、BMSCs,将Wistar 大鼠140只随机分为7组:正常组、假手术组、缺血再灌注模型组、BMNC组、中药联合BMNC组、BMSC组、中药联合BMSC组.除正常组、假手术组外,其余5组建立MCAO大鼠模型,并在模型建立24 h后,应用蛛网膜下腔注射法进行干预:缺血再灌注模型组组注射100μ1 0.01M的PBS溶液;BMNC组、中药联合BMNC组移植100μl的BMNCs悬液2.0×107个;BMSC组、中药联合BMSC组移植100μl BMSCs悬液2.0×107个;中药联合BMNC组、中药联合BMSC组移植当日开始配合中药蝮龙抗栓丸灌胃治疗.移植后4d、28 d应用定量酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测脑组织内GDNF的含量.结果 28 d时,与正常组(53.46±3.91) pg/ml比较,缺血再灌注模型组GDNF含量升高[(62.60±4.05) pg/ml,P＜0.05)];与缺血再灌注模型组比较,在移植后4d、28 d BMNC组(194.21±39.56) pg/ml、(67.70±4.73) pg/ml]、BMSC组[(169.83±28.84) pg/ml、(82.66±32.23) pg/ml],28 d时BMSC组升高明显(P＜0.05).与单纯移植BMNC组、BMSC组比较,4d、28 d中药联合BMNC组[(560.61±194.84) pg/ml、(265.83±93.58) pg/ml]、中药联合BMSC组[(370.93±46.19) pg/ml、(247.34±98.02) pg/ml] GDNF含量均升高(P均＜0.05);且4d时中药联合BMNC组升高明显(P＜0.05).结论 蛛网膜下腔移植BMSC、BMNC可上调MCAO大鼠脑组织中GDNF水平,中药联合BMNC组、中药联合BMSC可提高GDNF水平,中药联合治疗比单纯BMNC或BMSC移植有一定优势.
-
川芎嗪干预BMNCs移植对MCAO小鼠血清bFGF、VEGF的影响
胞,尾静脉注射BMNCs于造模成功的MCAO小鼠体内,腹腔注射川芎嗪注射液进行干预,以酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)测定血清bFGF、VEGF水平.结果 川芎嗪干预的BMNCs移植能够使血清bFGF、VEGF值增高更为显著(P<0.05).结论 川芎嗪干预的BMNCs移植更能促进bFGF、VEGF的分泌,保护神经元、抑制细胞凋亡,改善缺血区脑血液供应.
-
扶正、祛邪中药复方对骨髓增生异常综合征骨髓细胞红系转录因子水平调控的表观遗传学机制
目的:检测骨髓增生异常综合征(MDS)患者骨髓单个核细胞(BMMNCs)红系转录因子(GATA-1),组蛋白去乙酰化酶(HDAC1)的表达水平,分析经HDAC抑制剂(HDACI)伏立诺他(SAHA)、扶正、祛邪中药复方对不同证型MDS患者BMMNCs干预后的HDAC1,GATA-1表达变化,探讨MDS红系转录与表观遗传学组蛋白去乙酰化的可能关联性,以及扶正、祛邪中药对其干预的作用机制.方法:收集确诊MDS患者正虚组10例,瘀毒组5例以及正常组3例BMMNCs进行体外培养.采用实时荧光定量多聚核苷酸链式反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测扶正、祛邪药物及SAHA干预前后HDAC1和GATA-1 mRNA和蛋白水平.结果:MDS患者GATA-1 mRNA和蛋白水平均低于正常人(P＜0.05),HDAC1mRNA和蛋白水平均高于正常人(P＜0.05),正虚型患者与瘀毒型患者间未发现明显差异;经HDACI(SAHA)干预后HADC1水平下降,同时GATA-1水平显著上升(P＜0.01),扶正、祛邪中药能上调各组GATA-1表达水平,下调HADC1表达水平(P＜0.01).结论:表观遗传学组蛋白乙酰化与红系转录水平异常与MDS发病有关,扶正、祛邪中药对正虚、瘀毒型MDS患者BMMNCs的组蛋白乙酰化和GATA-1表达水平均具有调控作用.在MDS患者的BMMNCs中,HDAC1与GATA-1表达呈负相关趋势,可能存在经HDAC调控红系转录的信号通路,中药具有HDACI类似的干预作用,但扶正、祛邪中药间尚未发现明显差异.
-
参芪扶心口服液对急性心肌梗死患者骨髓单个核细胞移植后血浆尾加压素Ⅱ和脑钠肽的影响
目的:观察参芪扶心口服液对急性心肌梗死( AMI)患者骨髓单个核细胞(MBMC)移植后尾加压素Ⅱ(UⅡ)和脑钠肽(BNP)的影响.方法:80例发病12h以上错过急诊经皮冠脉介入(PCI)佳时机的住院AMI患者,随机分为治疗组(43例)与对照组(37例).对照组予MBMC移植.治疗组在对照组MBMC移植方案基础上加用参芪扶心口服液,MBMC移植前开始服用参芪扶心口服液,每次10mL,每日3次.移植前及移植后1d、7d放射免疫法测定血浆UⅡ和BNP水平.结果:治疗组和对照组患者UⅡ水平在细胞灌注1d后显著升高,和移植前相比均有增加,分别为136％(P＜0.01)和129％( P＜0.01),但对照组在细胞移植后7d再次减低,而治疗组在细胞移植后7d无明显下降,与对照组相比有显著性差异(P＜0.05).治疗组与对照组BNP水平在细胞移植后1d与移植前相比,分别降低到52％和61％,两组相比无显著性差异,对照组细胞移植7d后BNP水平为移植前的87％.治疗组患者BNP水平在细胞移植后7d未再显著升高,与对照组相比有显著性差异(P＜0.05).结论:参芪扶心口服液有可能通过影响BNP和UⅡ水平而提高细胞移植的疗效.
-
自体骨髓单个核细胞移植治疗大鼠后肢缺血
目的 探讨自体骨髓单个核细胞(BM-MNC)移植用于大鼠缺血后肢的治疗后实现血管再生的能力.方法 建立大鼠后肢缺血动物模型,将取于自体的BM-MNC制成细胞悬液注射于缺血部位,分别在移植后2和30 d时行动脉造影,用免疫组化方法 检测内皮祖细胞(EPC),毛细血管密度以及测定血管内皮生长因子(VEGF)的表达.结果 缺血肌组织中的EPC含量增高(P<0.01).BM-MNC移植组在移植早期VEGF表达显著增高(P<0.01).细胞移植后30 d BM-MNC移植组毛细血管密度明显高于其他组(P<0.01),血管造影可见侧支循环建立.结论 自体骨髓单个核细胞移植于大鼠后肢缺血区能促进血管新生,改善侧支循环,可望成为一种简单有效的治疗下肢缺血的方法 .
-
当归多糖对衰老模型大鼠骨髓造血功能的影响及其机制
目的 探讨当归多糖(ASP)对衰老模型大鼠骨髓造血功能的影响及其机制.方法 6～8周雄性SD大鼠40只,随机分为正常组(n=10)、ASP正常组(n=10)、衰老模型组(n=10)和ASP衰老模型组(n=10).药物注射完成第2天,取眼球血检测外周血常规,取股骨测定每根股骨骨髓单个核细胞(BMNCs)总数;CCK8测定BMNCs增殖能力;流式细胞术检测BMNCs增殖周期与活性氧簇(ROS)含量;造血祖细胞混合集落(CFU-Mix)培养检测BMNCs形成集落能力;衰老β半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色观察衰老BMNCs百分率;酶学法检测细胞总抗氧化能力(T-AOC);Western blotting检测P53和P21蛋白表达;激光扫描共焦显微镜检测P53蛋白表达及定位.结果 与衰老模型组比较,ASP衰老模型组外周血红细胞、血小板和白细胞总数下降得到抑制;股骨BMNCs细胞数升高;增殖能力提高;形成CFU-Mix数增加;SA-β-Gal染色阳性BMNCs百分率显著降低;G1期细胞比例降低,S期细胞比例升高,细胞内ROS含量显著降低;T-AOC升高;P53和P21表达显著上调.结论 ASP能延缓或拮抗D-半乳糖致大鼠骨髓造血细胞衰老,其机制可能与ASP抑制氧化应激,下调p53/p21通路有关.
-
非霍奇金淋巴瘤患者骨髓单个核细胞BCL-2/IgH、IgH基因重排的检测
本研究检测非霍奇金淋巴瘤(NHL)患者BCL-2/IgH基因主要断裂区重排、IgH基因重排,并探讨其对疾病的早期诊断、疗效评价等方面的意义.分别提取70例NHL(60例B-NHL、10例T-NHL)、7例淋巴结炎性肿大患者、20名正常人的骨髓单个核细胞DNA,通过PCR方法检测BCL-2/IgH、IgH基因重排,以凝胶电泳出现相应条带者为阳性,并与患者病理组织学检查进行比较,探讨此两种基因重排发生的相关因素,比较化疗后的动态变化.结果表明,①30例弥漫大B细胞淋巴瘤患者(DLBCL)中,10例骨髓BCL-2/IgH重排阳性(33.3%),与30例其它B-NHL(除外滤泡淋巴瘤FL及DLBCL)阳性率(6.7%)、20名正常人阳性率(5%)比较均有显著性差异(p均<0.05).所有T-NHL及7例淋巴结炎性肿大患者BCL-2/IgH重排均为阴性;②对8例BCL-2/IgH基因重排阳性患者进行动态监测,经2个疗程R-CHOP治疗后BCL-2/IgH基因重排明显减少,PCR半定量结果均值由初治0.59降至0.16(p<0.05),6个疗程R-CHOP治疗后PCR半定量均值为0,BCL-2/IgH基因重排完全转阴;③BCL-2/IgH基因重排阳性患者中LDH水平升高占81.8%,在重排阴性患者中占28.6%,两组间有统计学差异(p<0.05).然而,BCL-2/IgH基因重排与淋巴瘤分期、是否伴有全身症状、β2-MG水平、骨髓侵犯、肝脏脾脏侵犯均无显著相关性;④20例DLBCL(均为初治)骨髓单个核细胞DNA检测显示,9例IgH基因重排阳性(45%);30例其它B-NHL(均为初治或复发患者,DLBCL除外)中14例IgH基因重排阳性(46.7%),其两组间无统计学差异性(p>0.05),但对照组20名正常人、10例T细胞淋巴瘤患者及7例淋巴结炎性肿大患者均为阴性;⑤对7例IgH基因重排阳性患者进行动态监测表明,1个疗程的R-CHOP治疗就能显著减少IgH基因重排,PCR半定量结果均值由初治0.42降至0.13(p<0.05),2个疗程后PCR半定量均值为0,重排完全消除;⑥IgH基因重排阳性患者中LDH水平升高占90%,在重排阴性患者中占30%,两组间有统计学差异(p<0.05);IgH基因重排与淋巴瘤分期、是否伴有全身症状、β-MG水平、骨髓侵犯、肝脏脾脏侵犯均无显著相关性.结论:BCL-2/IgH、IgH基因重排均可作为B-NHL早期诊断及评价疗效的特异性指标,这两种重排均与LDH水平相关;BCL-2/IgH基因重排对DLBCL特异性较高.
-
91例急性白血病患者骨髓单个核细胞CD96分子的表达研究
本研究旨在检测91例急性白血病患者骨髓单个核细胞(BMMNC)表面分子CD96的表达情况,并结合临床资料进行分析.采用流式细胞术检测91例初治急性白血病患者骨髓单个核细胞表面分子CD96,以15例健康成人作为对照组.结果表明:21例B-ALL患者BMMNC(CD45+ CD34+ CDl9+)中CD96平均表达水平为(17.41±27.97)%,11例T-ALL患者BMMNC(CD45+ CD34+ CD7+)中CD96平均表达水平为(46.98±45.55)%,59例AML患者BMMNC(CD45+ CD34+ CD38-)中CD96平均表达水平为(16.69±25.08)%,与健康对照组BMMNC 的CD96平均表达水平(0.52±1.84)%相比,差异有统计学意义(p＜0.05);正规治疗后,CD96+及CD96-组的未缓解率(分别为52%,10.6%)差异有统计学意义(p＜0.05);另外,复查治疗后CD96在BMMNC的平均表达水平显示,达到完全缓解的CD96+组为(1.68±2.31)%,与对照组比较,差异无统计学意义(p＞0.05);而未达到完全缓解的CD96+组为(62.39±26.29)%,与对照组比较,差异有统计学意义(p＜0.05).以上各组CD96+与CD96-患者白细胞计数、血红蛋白及血小板计数无明显差异(p＞0.05).CD96+患者与CD96-患者相比,其分子生物学及细胞遗传学无特征性改变.结论:CD96分子在不同类型的急性白血病中均有不同程度表达,急性白血病BMMNC表面CD96的阳性表达可能与原发耐药或复发进展有关,CD96分子可作为判断急性白血病预后的一个相关指标.
-
热休克蛋白70及pim-1基因在白血病骨髓单个核细胞的表达特点及临床意义
本研究观察热休克蛋白70(HSP70)基因/蛋白,pim-1基因在白血病患者骨髓单个核细胞(BMMNC)中的表达,确定其表达是否与白血病类型、肿瘤负荷程度及预后有规律性联系.用RT-PCR技术检测40例白血病患者和10例对照BMMNC HSP70 mRNA及pim-1 mRNA的表达并半定量;用Western blot检测34例白血病患者和10例对照BMMNC HSP70蛋白表达并半定量,并结合白血痛类型、肿瘤负荷程度及对治疗的反应进行分析.结果表明:白血病组与对照组BMMNC均存在HSP70 mRNA和蛋白表达,在白血病组显著高于对照组;CML组、AML组HSP70 mRNA/蛋白表达的平均ODR值均显著高于ALL组;肿瘤重度负荷的急性白血病患者组HSP70 mRNA/蛋白表达显著高于肿瘤轻度负荷组;白血病患者化疗后HSP70 mRNA/蛋白表达显著高于化疗前;白血病组及对照组BMMNC均表达pim-1 mRNA,在白血病组显著高于对照组;ALL组pim-1 mRNA表达显著高于AML组和CML组;经相关性分析,白血病患者HSP70 mRNA表达与pim-1 mRNA表达成正相关(r=0.327,P<0.05).结论:白血病患者BMMNC存在HSP70、pim-1高表达,其中pim-1 mRNA表达与HSP70 mRNA表达呈正相关,HSP70与pim-1基因/蛋白过表达亦与白血病肿瘤负荷程度有关.
-
急性髓系白血病骨髓单个核细胞糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D mRNA的表达与意义
本研究探讨糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D(glycosylphosphatidilinoditol-specific phospholipase D,GPI-PLD)在急性髓系白血病病人骨髓单个核细胞中的表达及其意义.采用半定量RT-PCR和酶转化底物的百分率的方法检测急性髓系白血病初发组、难治复发组、缓解组与正常对照组骨髓单个核细胞GPI-PLD酶活性和mRNA表达,并比较它们之间的差异.结果显示:急性髓系白血病初治组骨髓单个核细胞GPI-PLD mRNA表达和GPI-PLD活性分别为1.86±0.32、(46.96±7.15)%;缓解组分别为1.26±0.29和(33.36±5.13)%;难治复发组分别为1.79±0.19和(44.31±7.22)%;而正常对照组分别为1.27±0.23和(35.38±5.15)%.初治组和难治复发组的GPI-PLD活性与mRNA表达均明显高于正常对照组,差异具有统计学意义(p＜0.01);而缓解组与正常对照组之间比较,差异无统计学意义(p＞0.05).结论:GPI-PLD活性和mRNA表达水平变化一致;初治组和难治复发组急性髓系白血病病人骨髓单个核细胞GPI-PLD活性与mRNA表达水平明显高于正常组.GPI-PLD是否在白血病的发生、发展过程中发挥一定作用,有待进一步研究.
-
自噬相关基因Beclinl和MAPLC3在急性白血病骨髓单个核细胞中的表达及其意义
本研究旨在检测人急性白血病(AL)骨髓单个核细胞中自噬相关基因Beclinl和微管相关蛋白质轻链3(MAPLC3)的表达,并探讨其意义.采用透射电子显微镜(TEM)和RT-PCR方法检测初治、复发难治、完全缓解(CR)的急性白血病患者和正常人骨髓单个核细胞(BMMNC)中的自噬活性以及Beclinl、MAPLC3 mRNA的表达.结果表明:急性白血病初治组骨髓单个核细胞自噬活性、Beclinl和MAPLC3 mRNA表达分别为80%、0.68±0.18、0.24±0.06;在难治复发组分别为100%、0.79±0.09、0.30±0.07;在完全缓解组分别为40%、0.52±0.15、0.16±0.04;在正常对照组分别为20%、0.57±0.13、0.16±0.05.初治组和难治复发组自噬活性和Beclinl、MAPLC3mRNA的相对表达量均高于正常对照组,差异有统计学意义(p＜0.05).完全缓解组和正常对照组之间比较差异无统计学意义(p＞0.05).结论:初治组急性白血病骨髓单个核细胞中自噬活性和自噬相关基因Beclin1、MAPLC3mRNA的表达均上调,在难治复发组自噬活性和自噬相关基因Beclin1、MAPLC3 mRNA的表达上调尤为明显,这可能与急性白血病的发生、发展及其耐药相关.
-
骨髓单个核细胞中B淋巴细胞诱导成熟蛋白-1表达对多发性骨髓瘤患者预后的影响
目的:研究分析骨髓单个核细胞中B淋巴细胞诱导成熟蛋白-1(B lymphocyte induced maturation protein 1,Blimp1)的表达对多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)预后的影响.方法:选取本院2014年1月-2015年1月期间收治的48例MM患者,检测所有入组患者骨髓中Blimp1表达水平,依据Blimp1转录表达水平的中位值将入组患者分为低表达组(L组,22例)和高表达组(H组,26例),比较分析Blimp1不同表达水平的相关影响因素,比较Blimp1不同表达水平患者的临床疗效、免疫表型变化及无进展生存期差异.结果:2组患者在性别、年龄、分型、分期及治疗阶段等方面均无统计学差异(P＞0.05).低表达组总缓解率明显高于高表达组,差异有统计学意义(P＜0.05).治疗前两组患者CD19、CD38、CD56、CD138及微小病灶残留阳性率均无统计学差异(P＞0.05);治疗后低表达组患者CD38、CD56、CD138及微小病灶残留阳性表达率均明显低于高表达组,CD19+表达率明显高于高表达组(P＜0.05).低表达组1、2、3年无进展生存期(PFS)均明显高于高表达组(P＜0.05).结论:分期越高,治疗难度越大的MM,其患者Blimp1表达水平越高,低B limp1表达水平的患者,其临床疗效及预后均明显优于高表达患者.
关键词： B淋巴细胞诱导成熟蛋白-1 多发性骨髓瘤 骨髓单个核细胞 -
硫化砷对骨髓增生异常综合征骨髓单个核细胞体外凋亡的作用
为了研究硫化砷(As2S2)在体外对骨髓增生异常综合征患者骨髓单个核细胞增殖的影响,并探讨其可能的作用机制,采用MTF法、流式细胞术、RT-PCR等多参数检测不同浓度As2S2诱导MDS细胞的凋亡.结果表明:①低浓度(0-0.6 mg/L)的硫化砷对MDS细胞无明显抑制作用;②相对高浓度的硫化砷(1.5-50 mg/L)对低危组MDS以及高危组MDS的单个核细胞均有诱导凋亡作用,且呈时间浓度依赖关系;bcl-2 mRNA在As2S2作用后表达明显下调,bc1-2/bax比例明显下降(P＜0.05);③MDS病人存在骨髓造血细胞的过度凋亡.结论:MDS病人存在骨髓造血细胞的过度凋亡;低浓度的硫化砷对MDS细胞没有明显的增殖抑制作用,高浓度的硫化砷主要通过诱导凋亡使MDS细胞死亡.
-
应用DNA微阵列对骨髓增生异常综合征患者骨髓单个核细胞基因表达谱的初步研究
为了探讨应用DNA微阵列研究骨髓增生异常综合征(MDS)的基因表达谱的可行性,将2例患者骨髓单个核细胞RNA各取等量混合后进行逆转录Cy5标记,与Cy3标记的正常对照cDNA混合,与H141微阵列杂交、扫描、软件分析.结果H141s芯片中共点样13 484个基因克隆,其中1 064个靶克隆是由针对同一基因内不同序列的cDNA片段重复点样至少2次.重复点样检测结果表明:在2张芯片内各自完全一致的分别为625个(58.7%)和630个(59 2%),而存在完全相反结果的cDNA片段分别有21个(2.0%)和11个(1.0%).1 064个靶克隆中重复点样数据完整且分别在2张芯片内结果一致的共有411个,其中在2张芯片间结果也完全一致的共有400个(97.3%).2张芯片中MDS与正常对照比较存在差异表达的靶基因分别为1 549和1 311个,而2张芯片间表达差异一致的靶基因为409个,其中101个基因参与造血调控,主要涉及转录因子、细胞周期调节蛋白、代谢相关基因、表面黏附分子等.结论:DNA微阵列可用于对MDS患者混合标本的表达谱分析,为深入研究MDS的发病分子机理提供线索,但需要进行重复实验以降低微阵列操作过程引起的表达偏差.
-
骨髓增生异常综合征骨髓单个核细胞内负调控因子的研究
为研究MDS患者细胞凋亡与骨髓内不同T细胞亚群胞内负调控因子的关系,采用胞内细胞因子染色技术对骨髓内不同亚群T细胞胞内的TNF-a和IFN-γ水平进行检测和分析,用RT-PCR技术测定BMMNC的凋亡基因Fas的mRNA水平.结果表明,MDS患者骨髓内产生TNF-α增多的淋巴细胞为CD4+CD45RO+、CD8+CD45RO+细胞,产生IFN-γ增多的为CD4+CD45RO+、CD8+CD45RO+、CD8+CD45RA+细胞,但均以CD8+CD45RO+细胞为主;MDS患者T淋巴细胞产生的IFN-γ与Fas mRNA存在相关性,而TNF-α与Fas mRNA相关性不强.结论:MDS患者造血微环境中不仅T淋巴细胞亚群失调,而且各亚群分泌负调控因子增多;MDS患者髓内IFN-γ主要来自于T淋巴细胞.
-
基质细胞对体外扩增造血细胞造血重建活性的促进作用
本研究探讨骨髓单个核细胞(BMMNC)在不同的培养条件下扩增后是否具有造血重建的活性.在小鼠BMMNC液体培养体系中,分别在含有几种细胞因子组合和(或)基质细胞层存在的条件下进行体外扩增,然后将不同条件下扩增的细胞经尾静脉回输至经致死量照射的小鼠体内,动态观察小鼠的骨髓有核细胞数及各种祖细胞集落数,以观察其造血重建的效果.结果表明:单纯细胞因子介导BMMNC体外扩增后并不能增进这些细胞的造血重建功能,但含有骨髓基质细胞底层的体外扩增,无论是否加入细胞因子,均有明显的促进移植受体造血功能重建的作用.结论:骨髓基质细胞支持下体外扩增的造血细胞具有促进移植受者造血重建的功能,证实了在维持体外扩增造血细胞的移植活性中,基质细胞具有非常重要的作用.
-
AML1a在小鼠造血细胞增殖分化异常中的作用
本研究旨在探讨AML1a在小鼠造血细胞增殖分化异常中的作用及其作用机制.将构建的pMSCV-FLAG-AM1a-IRES- YFP和pMSCV-IRES-YFP分别与辅助质粒pV Pack-Eco(含Env)、pV Pack-GP(含gal-pol)组合,通过磷酸钙沉淀法转染293T细胞,制备逆转录病毒.通过逆转录病毒将AML1a及YFP转导至C57 BL/6J雄性小鼠的骨髓单个核细胞(BMMNC),接种于M3434甲基纤维素完全培养液进行集落形成实验,并置于含mSCF、mIL-3、mIL-6的M5300液体培养液中进行长期培养,观察BMMNC形态变化.结果显示,转导了AML1a的BMMNC集落形成能力增强,集落数量和体积均明显大于对照组,集落以CFU-E和CFU-GEMM为主.长期培养实验中,转导AML1a组细胞形态显示分化阻滞,而对照组细胞则处于更成熟的阶段.结论:AML1a增加了造血干/祖细胞的增殖能力,并将小鼠造血干/祖细胞阻滞于较早的发育阶段.
