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PARP-1抑制剂下调SIRT1基因表达诱导非小细胞肺癌A549细胞凋亡的机制
目的 观察PARP-1抑制剂Olaparib对非小细胞肺癌A549细胞凋亡的影响及可能机制.方法 常规培养A549细胞,分别给予不同剂量Olaparib(0、5、10、20、50μmol/L)和(或)SIRT1激动剂SRT1720(1μmol/L)、SIRT1抑制剂EX527(1μmol/L)处理24 h,MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western-blot检测细胞SIRT1及凋亡相关基因表达.结果 Olaparib处理A549细胞24 h后,细胞存活率、SIRT1及抗凋亡基因Bcl-2蛋白表达逐渐降低,凋亡率及促凋亡基因Bax、Caspase-3蛋白表达逐渐增加,呈剂量依赖性(P<0.05).单独给予EX527处理A549细胞能够模拟Olaparib的上述作用(P<0.05),但SRT1720和Olaparib联合组能够拮抗Olaparib的上述作用(P<0.05).结论 PARP-1抑制剂Olaparib通过下调SIRT1基因表达抑制A549细胞增殖,并诱导其凋亡.
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SIRT1在糖尿病及其并发症中的研究进展及治疗潜力
SIRT1即沉默信息调节因子1是依赖于烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)的组蛋白脱乙酰化酶,它参与糖代谢和胰岛素的分泌过程.SIRT1基因沉默或蛋白抑制导致SIRTI下调可以诱导胰岛素抵抗(IR),增加SIRT1的表达尤其是在IR的情况下,可以增加胰岛素的敏感性,促进胰岛素分泌,降低血浆葡萄糖的含量,从而改善胰岛素抵抗,成为治疗糖尿病的新潜在靶点.
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植物多酚激活AMPK/Sirt1改善血管内膜功能紊乱的研究
血管内膜功能紊乱是以血管舒张功能减弱、炎症状态及易促发血栓为特征，是冠脉粥样硬化、高血压、心肌梗死、肾功能障碍等心血管疾病的关键致病因素。现在研究发现，植物多酚类化合物可以通过AMPK/Sirt1的方式抗炎从而改善血管内皮功能紊乱。
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SIRT1改善脂肪组织炎症的机制探讨
沉默信息调节因子相关酶(SIRT1)是一种NAD+依赖的组氨酸去乙酰化酶。SIRT1作用于炎症反应、胰岛素通路等而在代谢途径中扮演重要的角色。SIRT1与改善脂肪细胞炎症密切相关。研究SIRT1与脂肪组织炎症的关系为治疗代谢综合征的提供新靶点。
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白藜芦醇诱导沉默信息调节因子1改善阿尔茨海默病记忆能力的研究进展
阿尔茨海默病(AD)以进行性认知功能障碍和记忆能力损伤为主,是一种中枢神经系统退行性疾病.由于AD的病因以及发病机制未明,所以尚无有效治疗药物.近年来相关研究表明白藜芦醇可有效预防AD的发生及发展.白藜芦醇具有神经保护作用,可改善AD动物模型记忆能力,但具体机制未明.白藜芦醇可以诱导沉默信息调节因子1(SIRT1),而且SIRT1具有调节记忆能力的作用,故白藜芦醇可能通过激活SIRT1来提高AD患者记忆能力.本文综述白藜芦醇诱导SIRT1改善AD记忆能力的研究进展,为白藜芦醇防治AD提供参考依据.
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白藜芦醇对博来霉素诱导的硬皮病小鼠肺及皮肤病变的作用
目的 探讨白藜芦醇对SSc动物模型肺及皮肤病变的作用,旨在寻找SSc抗纤维化治疗新的靶点.方法 采用博来霉素诱导BALB/c小鼠SSc模型,观察其肺部及皮肤病变情况及SIRT1的表达情况.然后,应用白藜芦醇饲喂进行干预,观察病变改善情况及SIRT1的表达.观察的主要指标有:肺组织及注射处皮肤苏木精-伊红(HE)染色观察皮肤及肺组织病理改变;应用免疫组织化学法检测注射处皮肤及肺组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)含量;应用荧光定量PCR (Real Time-PCR)法检测肺组织中SIRT1、Ⅲ型前胶原的mRNA表达.组间比较采用单因素方差分析,两两比较采用LSD-t检验.结果 博来霉素连续皮下注射4周后,小鼠HE染色可见皮肤增厚,肺泡间隔增厚、炎性浸润和部分区域纤维化表现,肺及皮肤α-SMA阳性细胞较对照组显著增多[皮肤:(26.4±5.9)个/视野和(4.4±2.2)个/视野,肺:(14.6±4.6)个/视野和(2.4±1.1)个/视野,P＜0.01),肺部Ⅲ型前胶原表达上升(相对GAPDH表达量:1.06±0.24和0.45±0.14,P＜0.05)、SIRT1表达下降(相对GAPDH表达量:1.01±0.51和5.03±1.59,P＜0.05].应用Res干预后,皮肤及肺部病理改变有所减轻,皮肤及肺部α-SMA阳性细胞减少[皮肤:模型组(26.4±5.9)个/视野和高剂量组(10.0±3.5)个/视野,模型组(26.4±5.9)个/视野和中剂量组(13.4±4.4)个/视野,肺:模型组(14.6±4.6)个/视野和高剂量组(8.8±3.5)个/视野,P＜0.05],肺组织中SIRT1及Ⅲ型前胶原表达较模型组差异无统计学意义.结论 博来霉素连续皮下注射可成功诱导SSc小鼠模型;Res干预可作为SSc治疗的新的方向.
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SIRT1在NMDA诱导的兴奋性神经毒中的保护作用
谷氨酸是中枢神经系统重要的神经递质,介导各种兴奋性突触传递.在胚胎期神经发育、成年脑的各种兴奋性突触传递、突触的可塑性等方面发挥重要作用[1].然而,谷氨酸在突触间隙的过度聚集可引起神经元损伤甚至死亡,被称为兴奋性神经毒.兴奋性神经毒参与多种神经病理过程,如脑缺血损伤和各种神经退行性疾病等.而兴奋性神经毒模型是常用(被普遍公认)、具毒性(既可引起坏死,也可引起凋亡)、损伤机制复杂(涉及氧化应激、线粒体功能障碍、细胞坏死及凋亡等)、具临床意义(兴奋性神经毒参与了几乎所有神经病理过程,如脑缺血损伤,各种神经退行性疾病等)的一个神经损伤模型[1,2].
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"益气养阴通络法"通过调控SIRT1延缓糖尿病肾病进展的研究
目的:观察SIRT1在"益气养阴通络法"治疗糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)中的作用.方法:将179例确诊为Ⅲ期和Ⅳ期DN患者随机分为基础治疗对照组(76例)和"益气养阴通络法"综合治疗组(103例),评价两组患者临床症状疗效、尿微量白蛋白 (Alb)及肌酐清除率(Ccr);并通过免疫组化和免疫荧光法分析SIRT1在人肾组织中的表达情况及在DN患者中的变化情况;进一步通过逆转录病毒沉默原代大鼠肾小管上皮细胞(TEC) SIRT1后,观察TEC在AGE-BAS刺激后的凋亡情况.结果:经过6个月治疗,"益气养阴通络法"综合治疗组中医症状积分改善、微量白蛋白排泄率降低及肌酐清除率升高的患者比率明显高于基础治疗对照组(P<0.01);停药6个月后进行随访,"益气养阴通络法"综合治疗组的远期疗效也优于基础治疗对照组(P<0.01).免疫组化和免疫荧光显示,SIRT1在人肾组织的足细胞、内皮细胞及小管上皮细胞等均有表达,并且上述表达在DN患者中明显降低;而经"益气养阴通络法"治疗后SIRT1表达明显增强.进一步通过体外实验证实,沉默SIRT1后,cleaved caspase3蛋白表达在AGE-BSA刺激的TEC中明显升高.结论:"益气养阴通络法"在治疗DN过程中有着显著作用,而上述疗效可能是通过上调肾脏固有细胞中SIRT1实现的.
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蝉花菌丝对糖尿病肾病大鼠的肾脏保护作用机制研究
目的：观察蝉花菌丝对糖尿病肾病（DN）大鼠肾小管沉默信息调节因子2相关酶1（SIRT1）表达及肾小管损伤的影响，探讨蝉花菌丝延缓 DN 进展的作用机制。方法：链脲佐菌素（STZ）诱导大鼠高血糖，糖尿病所致肾损伤的大鼠模型（DN）与正常大鼠一起随机分为4组：对照组、蝉花组、DN 组、DN ＋蝉花组，饲养24周。观察 DN 大鼠肾间质α- SMA、SIRT1表达及纤维化程度，检测血肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）、尿白蛋白、24 h 尿蛋白、尿白蛋白肌酐比（UACR）、肌酐清除率（Ccr）、肾脏指数。结果：DN 大鼠肾小管 SIRT1表达显著下降，α- SMA 表达明显上调，肾小管纤维化加速，BUN、尿白蛋白、尿白蛋白排泄率、24 h 尿蛋白等均显著增加；蝉花菌丝治疗能显著提高 DN 大鼠肾小管 SIRT1表达，延缓肾小管纤维化进程，降低 BUN、尿白蛋白、尿蛋白及尿白蛋白肌酐比；蝉花菌丝对非糖尿病大鼠上述指标无显著影响。结论：蝉花菌丝可改善DN 肾小管病理损伤、延缓 DN 进展，从而发挥肾脏保护作用，其机制可能与上调肾小管 SIRT1表达有关。
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NaDC3抑制人肾小管上皮细胞SIRT1的表达和活性
目的 探讨高亲和力钠依赖性二羧酸转运蛋白(NaDC3)加速肾脏衰老的作用机制.方法 采用解放军总医院肾内科实验室构建的正反义NaDC3的逆转录病毒载体转染人肾小管上皮细胞系(HKC),通过调控NaDC3的表达水平,观察其对蛋白去乙酰化酶(SIRT1)mRNA、蛋白质表达和酶活性的影响.结果 在HKC中NaDC3可通过增强能量代谢,降低尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)+/烟酰胺嘌呤二核苷酸还原态(NADH)的比值,抑制SIRT1的蛋白质表达和酶活性,即在转录后水平调控SIRT1.结论 NaDC3通过能量代谢调控SIRT1的活性加速肾脏衰老.
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SIRT1通路介导紫檀芪减轻大鼠急性心肌梗死损伤研究
目的:探讨紫檀芪对大鼠急性心肌梗死损伤的保护作用及SIRT1/NF-κb信号通路在该过程中的作用机制.方法:选取SD大鼠40只,随机分成4组:假手术组、急性心梗组(AMI)、紫檀芪(PTE)预处理+AMI、PTE预处理+SIRT1抑制剂+AMI.结扎大鼠心脏左前降支根部血管,制作急性心肌梗死模型(AMI),TTC法测定心肌梗死面积,ELISA法测定血清CK-MB、LDH含量,试剂盒测定心肌组织超氧化物歧化酶(SOD)水平,western blot法检测各组SIRT1、NF-κB蛋白表达情况.结果:心肌梗死时,SIRT1、SOD表达下降,NF-κB升高,心肌损伤标记物CK-MB、LDH增加(与假手术组比,P<0.05);紫檀芪预处理后,SIRT1、SOD表达上升,NF-κB下降,梗死面积减少(与心梗组比,P<0.05);加入SIRT1抑制剂后,心肌梗死面积扩大,NF-κB升高(与紫檀芪预处理组比,P<0.05).结论:紫檀芪能减轻大鼠急性心肌梗死损伤,可能与SIRT1/NF-κB通路有关.
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视网膜色素上皮氧化损伤SIRT1表达改变
目的 明确氧化应激对视网膜色素上皮细胞(RPE)中去乙酰化酶1(SIRT1)表达的影响.方法 以人RPE细胞为实验对象,不同浓度H2O2(0、200、300 μmol/L)处理RPE细胞,观察处理后24h细胞形态的改变情况,检测处理后24 h与72 h细胞中SIRT1的mRNA与蛋白表达情况.结果 H2O2作用后,随H2O2浓度的增加,RPE细胞的形态受损,有凋亡小体的出现;在氧化应激24 h后细胞内SIRT1的转录水平增加,而在氧化应激72 h后SIRT1的蛋白表达显著下降.结论 氧化应激可导致RPE细胞形态改变,SIRT1在RPE细胞内维持着氧化与抗氧化应激系统平衡,因此将SIRT1可作为临床上年龄相关性黄斑变性病(AMD)治疗的靶点.
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通便汤调节SIRT1通路恢复慢传输型便秘大鼠结肠动力的机制研究
目的:观察SIRT1在慢传输型便秘中的表达情况,并探讨通便汤恢复慢传输型便秘大鼠结肠动力的作用机制.方法:采用大黄酸法制备大鼠慢传输型便秘模型,造模组40只大鼠,大鼠随机分为模型组、通便汤低、中和高剂量组(每组各10只),另取10只作为正常组.记录大鼠一般情况、粪便含水量、测定结肠肌电变化、肠道传输功能及结肠超微结构情况,并运用免疫组织化学技术检测结肠SIRT1蛋白的分布、表达及相对含量.利用RT-PCR法测SIRTI、Fox01mRNA表达情况并进行统计学分析.结果:与模型组相比,通便汤高剂量组可显著增加粪便含水量(P＜0.05),通便汤中、高剂量组可降低频率和振幅变异系数(P＜0.05),稳定结肠慢波节律.除此之外,通便汤低、中和高剂量组可显著减少肠嗜铬细胞和神经分泌颗粒.免疫组化结果显示通便汤低、中、高剂量组能不同程度提高SIRT1蛋白表达(P＜0.05),以通便汤高剂量组为明显.RT-PCR结果显示通便汤各剂量组大鼠结肠组织SIRT1、Fox01 mRNA显著升高(P＜0.05).结论:慢传输型便秘发生发展过程中SIRT1信号通路发生改变,通便汤恢复结肠动力的机制可能通过提高SIRT1活性,使得FoxO1去乙酰化,增强FoxO1活性.
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白藜芦醇抑制哮喘幼鼠肺组织Sirt1与AMPK的表达
目的 探讨白藜芦醇对哮喘幼鼠肺组织沉默信息调控因子1(Sirt1)与腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)表达的影响.方法 45只BALB/c幼鼠随机分为对照组、哮喘组和白藜芦醇组.采用卵清蛋白(OVA)刺激,建立幼鼠哮喘模型.HE染色观察各组幼鼠肺组织病理学改变,测定各组幼鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞总数及嗜酸粒细胞(EOS)数,Western blot方法检测各组幼鼠肺组织Sirt1与AMPK的蛋白表达变化,real time PCR方法检测各组幼鼠肺组织Sirt1 mRNA与AMPK mRNA的表达水平.结果 与对照组相比,哮喘组幼鼠肺组织可见明显的炎性细胞浸润,气道管壁明显增厚,BALF中细胞总数及嗜酸粒细胞计数显著升高;与哮喘组相比,白藜芦醇组幼鼠肺内炎性细胞浸润明显减轻,BALF中细胞总数及嗜酸粒细胞计数显著降低.与对照组相比,哮喘组幼鼠肺组织Sirt1与AMPK的蛋白与mRNA表达水平显著升高;与哮喘组相比,白藜芦醇组幼鼠肺组织Sirt1与AMPK的蛋白与mRNA表达水平升高更为显著.结论 白藜芦醇能够促进哮喘幼鼠肺组织Sirt1与AMPK的表达.
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SIRT1基因shRNA慢病毒载体构建及干扰效应检测
背景:SIRT1基因在细胞能量代谢、凋亡及衰老过程中发挥极重要的作用,另有研究发现SIRT1可能在炎症反应方面起着调控作用.目的:构建SIRT1特异性的shRNA慢病毒载体,并初步检测其对THP-1细胞SIRT1基因的抑制效应.方法:设计SIRT1靶点特异性的寡核苷酸序列,连接到经Age Ⅰ和EcoR Ⅰ酶切线性化的pGCSIL-GFP载体,包装293T细胞产生慢病毒,再转染THP-1细胞,通过实时荧光定量PCR实验及Western Blot检测对SIRT1靶基因的抑制情况.结果与结论:阳性克隆PCR及测序证实SIRT1基因shRNA慢病毒载体构建成功,实时荧光定量PCR及Western Blot检测该载体在mRNA和蛋白水平能抑制THP-1细胞的SIRT1表达.
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过氧化氢刺激人牙髓干细胞的衰老进程
背景：细胞移植治疗受区存在氧化应激过程，影响疗效。研究氧化应激对牙髓干细胞的影响及机制方面的报道较少。
目的：分离培养人牙髓干细胞，分析加入过氧化氢(H2O2)对其衰老程度的影响。
方法：牙髓干细胞分为3组，分别用PBS、100μmol/L H2O2、200μmol/L H2O2刺激2 h。倒置显微镜下观察细胞形态，β-半乳糖苷酶染色观察细胞衰老程度，BrdU试剂盒和细胞计数法检测细胞增殖能力，免疫荧光检测细胞骨架排列情况和sirt1蛋白的表达，Western Blot法测定sirt1、p16蛋白的表达。结果与结论：①牙髓干细胞呈成纤维细胞样梭形外观。②H 2O2刺激后，细胞体积增大、β-半乳糖苷酶染色加深、细胞增殖能力降低，随着H2O2浓度增加，牙髓干细胞衰老增强，在此过程中，p16表达上调，sirt1表达受到抑制。③结果表明H2O2刺激促进牙髓干细胞衰老，sirt1、p16参与了此过程，为牙髓干细胞移植提供了理论基础和实验支持。 -
miR-34a调节SIRT1表达抑制结肠癌干细胞增殖和侵袭
背景:miR-34a是一种起抑癌作用的miRNA,它能调节多个靶基因的表达,有可能成为治疗肿瘤的新靶点.目的:探讨miR-34a及其靶基因SIRT1对结肠癌干细胞体外增殖、凋亡、侵袭能力的影响.方法:采用无血清悬浮培养法从人结肠癌细胞株HCT116中富集肿瘤干细胞,流式细胞仪检测CD44+/CD133+细胞所占的比例进行鉴定.利用脂质体转染法将miR-34a模拟物转染结肠癌干细胞,并设miRNA无序阴性对照物和未转染组.CCK-8增殖实验、细胞凋亡实验、细胞侵袭实验检测结肠癌干细胞增殖、凋亡、侵袭情况.采用qRT-PCR和Western blot法检测miR-34a转染后细胞中SIRT1 mRNA和蛋白的表达水平.结果与结论:①无血清悬浮培养法富集的肿瘤干细胞球中含有较高比例的 CD44+/CD133+表型细胞,所占比例为(78.3±6.7)%;②miR-34a转染组的miR-34a表达量高于未转染组和miR-34a对照组(P < 0.05);③与未转染组和miR-34a对照组比较,miR-34a转染组的细胞增殖能力明显降低(P < 0.05);细胞凋亡率明显升高(P < 0.05);侵袭细胞数明显降低(P < 0.05);④miR-34a过表达后,miR-34a转染组的SIRT1 mRNA和蛋白的表达水平均明显低于未转染组和miR-34a对照组(P < 0.05);⑤结果表明,过表达miR-34a可抑制结肠癌干细胞增殖、侵袭并诱导凋亡,可能与其下调SIRT1的表达有关.
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高龄小鼠沉默信息调节因子1基因敲除后膝骨关节炎模型的建立
背景:国内外学者对骨关节炎的发病机制和治疗方法进行了大量的研究,近期发现沉默信息调节因子1(SIRT1)基因在骨关节炎的发病中有着重要的意义,但对其研究尚少,用于该基因研究的骨关节炎模型也鲜有报道.目的:建立特异性的高龄SIRT1基因敲除小鼠膝骨关节炎模型,以期为骨关节炎的研究提供便利条件.方法:采用随机对照分组的方法,将小鼠分为4组,即SIRT1+/+小鼠假手术组(A组)、SIRT1+/+小鼠骨关节炎模型组(B组)、SIRT1-/-小鼠假手术组(C组)及SIRT1-/-小鼠骨关节炎模型组(D组),每组6只.行单侧膝关节前交叉韧带横断加内侧半月板切除建立骨关节炎模型,荧光定量聚合酶链反应检测SIRT1基因敲除情况;苏木精-伊红染色、番红O-固绿双染色观察膝关节软骨形态结构改变,Mankin评分评价膝骨关节炎程度.结果与结论:SIRT1-/-小鼠SIRT1 mRNA表达量明显低于SIRT1+/+小鼠(P＜0.01),说明SIRT1基因敲除成功.染色结果显示,B、D两组膝关节软骨破坏明显,Mankin评分明显高于A、C两组(P＜0.01),并且SIRT1基因敲除后Mankin评分升高更明显(P＜0.05).提示软骨组织特异性SIRT1基因敲除膝骨关节炎小鼠动物模型建立成功.
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大鼠胰岛B细胞长寿基因SIRT1与转录调节因子FOXO1表达及其相关性研究
目的 探讨大鼠胰岛B细胞在衰老进程中长寿基因SIRT1与转录调节因子FOXO1表达的相关性.方法 2005年10月至2006年10月,在汕头大学医学院第二附属医院将11只18月龄健康雄性SD大鼠随机分为热量限制(CR)组6只和正常喂养对照组5只,饲养6个月后取胰尾组织,应用免疫组化染色分别检测胰岛中SIRT1、FOXO1和胰岛素表达及分布,衰老相关β-半乳糖苷酶(β-Gal)染色以反映胰岛B细胞衰老情况.结果 SIRT1与FOXO1均可表达于胰岛细胞胞浆、胞核中;β-Gal和胰岛素表达于细胞浆中;与对照组大鼠相比,CR组大鼠胰岛SIRT1表达量较多(P＜0.05),衰老相关β-Gal染色强度较弱(P＜0.01),胰岛素表达量较低(P＜0.05),但FOXO1表达量差异无显著性意义(P＞0.05),伴随着SIRT1表达增加,FOXO1胞核阳性率明显降低(P＜0.01).结论 热量限制诱导了大鼠胰岛B细胞SIRT1蛋白高表达;SIRT1可能通过抑制FOXO1活性而调控胰岛B细胞的衰老,有利于2型糖尿病的防治.
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Sir1:心血管疾病药物治疗的潜在靶点
沉默信息调节因子家族成员Sirt1是一种具有去乙酰化酶活性的多功能调节因子.它参与众多基因转录、能量代谢以及细胞衰老等病理生理过程的调节.研究表明Sirt1不仅参与心肌细胞的生长发育和血管的形成,还调节心肌细胞、血管内皮细胞的能量代谢与氧化应激,预示着Sirt1在心血管疾病临床应用和研究中可能具有应用价值.
