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粪便DNA甲基化分析对结直肠癌早期诊断的意义
目的 探讨人粪便中分泌武警战型卷曲相关蛋白 2(SFRP2)基因甲基化分析用于结直肠癌(CRC)早期诊断的可行性.方法 从30例结直肠癌人及30例正常对照者的粪便中分别提取DNA,采用甲基化特异件PCR(MSP)技术分析其SFRP2基因甲基化状态.结合临床病理对照,用统计学方法计算该检测的敏感度,特异性.确证粪便SFRP2基因甲基化分析可望成为CRC早期无创诊断或CRC高风险人群筛查的新途径.
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白头翁皂苷调控RA模型大鼠FLS SFRP2表达
目的:研究中药白头翁主要活性成分白头翁皂苷(pulchinenoside,PULC)对类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)模型大鼠成纤维细胞样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS) SFRP2表达的调控.方法:采用大鼠关节炎评分法和足爪肿胀评分法评价PULC对RA模型大鼠的治疗作用,MTT法检测PULC灌胃治疗后对FLS增殖抑制作用.RT-PCR,Western blotting检测PULC灌胃治疗对FLS SFRP2基因表达的调控作用,对Wnt通路关键基因β-catenin,Wnt通路下游效应基因C-myc的调控作用.结果:RA模型大鼠FLS中SFRP2基因表达明显下调,经PULC灌胃治疗后,RA模型大鼠FLS中SFRP2表达上调,β-catenin和C-myc基因表达明显下调.结论:PULC通过对Wnt通路的调控抑制RA模型大鼠滑膜异常增殖.
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白头翁皂苷影响RA模型大鼠FLS MeCP2表达
研究中药白头翁主要活性成分白头翁皂苷(PULC)对类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)模型大鼠MeCP2表达的调控作用.采用佐剂性关节炎大鼠为RA模型,原代培养RA模型大鼠滑膜成纤维细胞样滑膜细胞(FLS),Real time qPCR,Western blotting检测100 mg·kg-1PULC灌胃治疗对RA模型大鼠FLS MeCP2表达的调控作用,MTT检测PULC治疗对FLS增殖的影响,MeCP2 siRNA干扰RA模型大鼠FLS MeCP2表达后SFRP2,β-catenin表达的变化.检测发现经100mg·kg-1PULC灌胃治疗后,RA模型大鼠FLS中MeCP2表达明显降低,SFRP2表达升高,RA模型大鼠FLS增殖活力降低,MeCP2 siRNA抑制RA模型大鼠FLS MeCP2表达后,SFRP2表达明显上调,β-catenin表达明显降低.PULC可能通过抑制MeCP2表达上调SFRP2表达,抑制RA模型大鼠滑膜Wnt通路活性,抑制RA模型大鼠滑膜异常增殖.
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SFRP2和β-catenin在大肠癌中的表达及其临床意义
目的:探讨分泌型Frizzled相关蛋白2(Secreted Frizzled-related proteins 2,SFRP2)和β-连接素(β-catenin)在大肠癌发生、发展中的作用.方法:采用免疫组化SP法检测20例正常大肠黏膜、加例非腺瘤性息肉、36例大肠腺瘤和42例大肠癌组织中的SFRP2和β-catenin蛋白的表达情况,分析二者表达的差异及其与临床病理参数的关系.结果:大肠癌和大肠腺瘤组SFRP2的阳性表达率显著低于正常大肠黏膜和非腺瘤性息肉组(28.57% VS 100.0%,95.0%;36.11% VS 100.0%,95.0%,均P＜0.05);大肠癌中β-catenin膜表达缺失率显著高于正常大肠黏膜、非腺瘤性息肉及大肠腺瘤组(52.4% VS 0%,0%,11.1%,均P＜0.05);大肠癌和大肠腺瘤组β-catenin异位表达率显著高于正常大肠黏膜和非腺瘤性息肉组(64.3% VS 0%,0%;30.6% VS 0%,0%,均P＜0.05),大肠癌β-catenin异位表达率高于大肠腺瘤(P＜0.05);SFRP2表达、β-catenin膜表达缺失及异位表达与大肠癌患者的肿瘤部位、大体形态、肿瘤直径、淋巴转移和Dukes分期无明显关系,而与大肠癌的分化程度密切相关,其中SFRP2表达还与大肠癌的浸润深度密切相关:SFRP2表达与β-catenin膜表达缺失、异位表达均呈明显负相关(r=-0.452,P=0.003;r=-0.519,P=0.000),而β-catenin膜表达缺失与异位表达呈明显正相关(r=0.782,P=0.000).结论:SFRP2和β-catenin的表达与大肠癌的发生、发展密切相关,可能是大肠癌发生的早期事件,且SFRP2表达与β-catenin膜表达缺失、异位表达均呈负相关,前者起抑癌作用,后者起促癌作用.
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sFRP2和Wnt/β-catenin通路在结直肠癌发生发展中的作用
目的 研究分泌型卷曲蛋白2(Secreted Frizzled-related proteins 2,sFRP2)与Wnt/β-catenin通路在结直肠癌发生发展中的作用.方法 首先对正常结直肠黏膜组织和结直肠癌组织行免疫组化实验,检测sFRP2及 β-catenin的表达水平和阳性率.其次通过质粒转染,使得sFRP2在HCT116细胞中的表达上调,通过Western blot实验验证,然后行CCK-8实验、划痕实验、Transwell实验,分析sFRP2表达上调后对细胞增殖、迁移和侵袭的影响.结果 正常结直肠黏膜组中sFRP2阳性表达率显著高于结直肠癌组(χ2=35.902,P=0.000).相反,结直肠癌组中 β-catenin膜表达缺失率和异位表达率显著高于正常结直肠黏膜组(χ2=23.149,P=0.000;χ2=27.002,P=0.000).sFRP2阳性表达、β-catenin膜表达缺失、异位表达与肿瘤组织分化明显相关(χ2=5.420,P=0.020;χ2=6.472,P=0.011;χ2=7.158,P=0.007),而与性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤大小、肿瘤分期和淋巴结转移无关(P>0.05).sFRP2的阳性率与 β-catenin的膜表达缺失率及异位表达率呈负相关,β-catenin的膜表达缺失率和异位表达率呈正相关.转染后sFRP2及 β-catenin表达水平显著升高(t=25.430,P=0.001;t=15.000,P=0.001).sFRP2转染组与对照组及空载质粒组相比,细胞增殖速度及迁移速度明显减慢(t=16.890,P=0.001;t=7.206,P=0.002).与对照组相比,sFRP2转染组透膜细胞数明显少于对照组(t=25.459,P=0.001),细胞侵袭能力显著下降.结论 sFRP2与Wnt/β-catenin通路相互作用,在结直肠癌的发生发展中起着重要作用.sFRP2的上调明显抑制了HCT116细胞的增殖、迁移和侵袭.
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大肠癌中SFRP2和β-catenin的表达及意义
目的 探讨分泌型Frizzled相关蛋白2(Secreled Frizzled-relaled proleins2,SFRP2)和β-连接素(β-calenin)在大肠癌发生、发展中的作用.方法 采用免疫组化方法检测20例正常大肠黏膜20例非腺瘤性息肉、36例大肠腺瘤和42例大肠癌组织中的SFRP2和β-calenin蛋白的表达情况分析二者表达的差异及其与临床病理参数的关系.结果 大肠癌和大肠腺瘤组SFRP2的阳性表达率分别为28.6%和36.1%显著低于正常大肠黏膜(100.O%)和非腺瘤性息肉组(95.0%)(P<0.05).大肠癌中β-calenin膜表达缺失率为52.4%,显著高于正常大肠黏膜(O%)、非腺瘤性息肉(0%)及大肠腺瘤组(11.1%)(P<0.05).大肠癌和大肠腺瘤组β-calenin异位表达率分别为64.3%和30.6%显著高于正常大肠黏膜(0%)和非腺瘤性息肉组(0%)(P<0.05),大肠癌β-calenin异位表达率高于大肠腺瘤(P<0.05).SFRP2表达、β-calenin膜表达缺失及异位表达与大肠癌患者的肿瘤部位、大体形态、肿瘤直径、淋巴转移和Dukes分期无明显关系,而与大肠癌的分化程度密切相关,其中SFRP2表达还与大肠癌的浸润深度密切相关SFRP2表达与β-calenib膜表达缺失、异位表达呈显著负相关(P<0.01)而β-calenin膜表达缺失与异位表达呈显著正相关(P<0.01).结论 SFRP2和β-calenin的表达与大肠癌的发生、发展密切相关可能是大肠癌发生的早期事件,且SFRP2表达与β-calenin膜表达缺失、异位表达均呈负相关,前者起抑癌作用,后者起促癌作用.
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Wnt拮抗基因SFRP1、SFRP2启动子区甲基化与贲门腺癌关系的研究
目的 研究贲门腺癌(GCA)中分泌型卷曲相关蛋白1(SFRP1)、分泌型卷曲相关蛋白2(SFRP2)基因启动子区甲基化状态与贲门腺癌的关系.方法 采用甲基化特异性PCR(MSP)方法检测GCA癌组织及相应癌旁正常组织中SFRP1和SFRP2基因的甲基化状态,分析其与临床病理特征之间的关系.结果 94例GCA组织中SFRP1、SFRP2基因甲基化率分别为87.2%(82/94)和83.0%(78/94),显著高于癌旁正常组织14.9%(7/47)和55.3%(26/47)(P<0.001).GCA患者中无淋巴结转移组SFRP1基因甲基化发生率73.7%(28/38)显著低于有淋巴结转移组的甲基化率96.4%(54/56)(P<0.05);SFRP2基因的甲基化与有无淋巴结转移无关.SFRP1和SFRP2基因的甲基化与GCA的组织分化无关.63例贲门腺癌组织中SFRP1和SFRP2基因同时发生甲基化,其中有淋巴结转移的36例高于无淋巴结转移的27例,高中分化腺癌组26例,低于低分化腺癌组37例.侵及肌层及浆膜层的16例低于侵及周围软组织的47例,但以上差异均无统计学意义(P>0.05).结论 SFRP1、SFRP2基因可能参与了贲门腺癌的发生发展,并且SFRP1高甲基化状态与贲门腺癌的恶性行为有关.
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Wnt通路拮抗基因SFRP1SFRP2SFRP4SFRP5甲基化状态与肾透明细胞癌关系的研究
目的:研究SFRPs家族中SFRP1、SFRP2、SFRP4、SFRP5基因启动子区甲基化状况,探讨基因的甲基化与肾透明细胞癌发生发展的关系.方法:采用甲基化特异性PCR(methylation specific PCR,MSP)方法检测66例肾透明细胞癌及30例癌旁组织中SFRP1、SFRP2、SFRP4、SFRP5基因启动子区甲基化状态及其与临床病理学资料之间的关系.结果:肾透明细胞癌组织中SFRP1、SFRP2、SFRP4、SFRP5基因甲基化率分别为77.3%(51/66)、72.7%(48/66)、59.1%(39/66)、69.7%(46/66)均显著高于相应的癌旁组织,结果有统计学意义(P<0.05).与临床病理学资料相联系,肾透明细胞癌组织中SFRP1、SFRP5基因,甲基化与肿瘤TNM分期相关;SFRP4基因甲基化与肿瘤的病理学分级相关(P<0.05).结论:SFRP1、SFRP2、SFRP4、SFRP5基因的甲基化均可能参与肾透明细胞癌的发生.SFRP1、SFRP5基因甲基化可能与肾透明细胞癌的发展,浸润和转移有关.SFRP4基因甲基化可能与肾透明细胞癌的恶性行为有关.
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乳腺癌中GRP BPAG1和SFRP2间相关性的初步研究
目的:对通过生物、数学、信息学等多学科合作初步提出的GRP基因、BPAG1基因、SFRP2基因间的乳腺癌转移相关调控通路存在的假设,应用相关生物学方法加以验证.方法:以石蜡包埋组织切片,免疫组化二步法染色分别检测70例浸润性导管癌的原发灶及其相应淋巴结转移灶中GRP、BPAG1、SFRP2的表达情况;体外培养乳腺癌MCF-7细胞系并转染GRP增强质粒和GRPshRNA质粒,通过实时定量PCR及Western-blotting检测细胞中BPAG1和SFRP2的变化.结果:在人体乳腺癌组织与相应的淋巴结转移灶中,GRP基因、BPAG1基因、SFRP2基因间存在相同的变化趋势;转染GRP增强质粒和GRPshRNA质粒后,BPAG1和SFRP2基因的相对含量也同时分别增高和下降,转染GRP增强质粒后BPAG1在蛋白水平的表达量增高.结论:GRP基因、BPAG1基因、SFRP2基因间可能存在与乳腺癌转移相关的调控通路.
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分泌型卷曲相关蛋白2基因超甲基化与大肠癌的研究
目的:研究分泌型卷曲相关蛋白2(SFRP2)基因启动子超甲基化与大肠癌的关系.方法:用甲基化荧光定量PCR(MethyLight)技术检测44例散发型大肠癌和20例癌旁组织中SFRP2基因的启动子甲基化状况,20例健康志愿者大肠组织作为对照组.同时分析SFRP2基因超甲基化与临床病理特征的关系.结果:44例大肠癌组织中检出SFRP2基因超甲基化36例(36/44,81.8%),20例大肠癌旁组织中检出SFRP2基因超甲基化8例(8/20,40%),20例正常大肠黏膜组织中没有显示SFRP2基因任何甲基化条带.大肠癌中SFRP2基因甲基化较正常黏膜和邻近的正常黏膜更频繁.并且SFRP2基因超甲基化与任何包括性别、年龄、肿瘤分期、位置、组织学分级等临床病理特征之间没有显著的关联.结论:SFRP2基因超甲基化与大肠癌的发生有关,SFRP2基因超甲基化可以作为大肠癌筛检的高潜力标记.
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2型糖尿病大鼠主动脉Wnt/β-catenin信号通路的变化及SIRT1的调节作用
目的：检测Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白及沉默信息调节因子( SIRT1)在2型糖尿病大鼠主动脉中的表达变化,探究SIRT1对Wnt/β-catenin信号通路的调节作用,明确二者在糖尿病主动脉病变发生发展中的作用。方法高脂饮食联合链脲佐菌素建立2型糖尿病大鼠模型,实验将大鼠分为空白对照组、糖尿病2、4、8和12周模型组,血清检测空腹血糖( FBG),总胆固醇( TC)、甘油三酯( TG)、高密度脂蛋白( HDL-C)、低密度脂蛋白( LDL-C),空腹胰岛素( FINS), HE染色法观察主动脉病理结构变化,RT-PCR法和Western blot法检测主动脉Wnt2、β-catenin、TCF4、SIRT1和sFRP2等相关蛋白基因转录及表达变化。结果与正常组比较,2型糖尿病大鼠TC、TG、LDL-C水平明显升高,HDL-C水平明显降低,随着时间延长,糖尿病大鼠各时间点模型组与2周模型组相比较,TC、TG、LDL-C水平升高越来越明显,HDL-C水平降低更明显,差异均具有显著性( P<0．01)；显微镜下糖尿病组大鼠主动脉可见不同程度局灶性内皮细胞空泡变性、甚至坏死。糖尿病组大鼠相对于正常对照组主动脉Wnt2和β-catenin的表达在2周及4周明显增加( P<0．01),4周后维持在较高水平；而TCF4、SIRT1的表达与正常对照组相比表现为持续的增加( P<0．01)；sFRP2的表达在持续的降低(P<0．01)。结论2型糖尿病大鼠主动脉病变发生发展过程中, SIRT1通过调节 sFRP2的表达来调控 Wnt/β-catenin信号通路的激活,参与糖尿病主动脉损伤的发生发展过程,进一步研究其在糖尿病主动脉损伤中的作用机制可能为糖尿病主动脉病找到新的治疗靶点。
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SFRP2启动子CpG岛高甲基化与结直肠癌的相关性
目的:研究SFRP2启动子中CpG岛高甲基化与结直肠癌临床特点之间的相关性.方法:通过基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱分析技术检测特定CpG岛甲基化程度,采用Sequenom EpiTYPER技术检测20例结肠癌中正常组织和肿瘤组织中SFRP2启动子甲基化状态.结果:SFRP2_01_CpG_5 (P=0.018)、SFRP2_02_CpG_5 (P=0.018)与肿瘤位置相关,SFRP2_02_CpG_6、7、8、9 (P=0.039)与淋巴结转移个数有关.SFRP2_01_CpG_1.2(P=0.043)、SFRP2_02_CpG_16(P=0.044)与肿瘤直径大小相关.结论:启动子CpG位点甲基化水平与结直肠癌的临床及病理特点有相关性,表明SFRP2启动子可能是结直肠癌的现阶段和未来进展的潜在的表观遗传学的生物学标志物.
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慢性粒细胞白血病骨髓细胞的SFRP2基因启动子高甲基化
目的 研究慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)骨髓细胞SFRP2基因启动子甲基化状态,探讨SFRP2基因启动子甲基化在CML发病机制中的作用.方法 分别采用RT-PCR、甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)方法检测CML细胞系K562细胞及骨髓标本SFRP2 mRNA及SFRP2基因启动子CpG岛甲基化状态；并予DNA甲基化转移酶抑制剂5-氮杂-2’-脱氧胞苷(Aza)联合组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古菌素A(TSA)处理K562细胞,观察其SFRP2 mRNA表达情况.结果 SFRP2 mRNA在K562细胞、CML和正常入骨髓标本表达率分别为0、22％( 4/18)、100％(8/8)(P ＜0.05)；SFRP2基因启动子甲基化率在K562细胞、CML和正常人骨髓标本分别为100％、66％ (25/38)、0(0/13) (P ＜0.05)；伴随K562细胞去甲基化药物处理后未甲基化序列的增加,其SFRP2 mRNA恢复了表达.结论 CML骨髓细胞的SFRP2基因启动子存在高甲基化现象,SFRP2基因启动子甲基化可能是CML发生发展的分子机制之一,提示了其甲基化可能成为CML的新的参考标记物.
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SFRP2在抑制宫颈癌细胞株的增殖作用研究
目的 了解SFRP2在人宫颈癌组织中的表达变化,探讨SFRP2对宫颈癌细胞增殖的影响.方法 采用Westernbolt及qRT-PCR检测SFRP2在宫颈癌组织中的表达;用慢病毒构建过表达SFRP2的人宫颈癌细胞株,并用CCK-8及平板克隆分析SFRP2对细胞增殖的影响;Western bolt和qRT-PCR检测SFRP2在肿瘤细胞内对WNT通路的相关蛋白和基因表达的影响.结果 与癌旁组织相比,SFRP2在人宫颈癌组织中低表达;过表达SFRP2的宫颈癌细增殖受抑制;SFRP2抑制细胞增殖是通过WNT信号通路而发生.结论 SFRP2作为宫颈癌新的候选基因作用有待深入研究.
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SFRP2基因重组腺病毒载体的构建与鉴定
目的:成功构建携带SFRP2基因的腺病毒载体.方法:从pGBKT-SFRP2质粒中扩增SFRP2基因,将SFRP2基因亚克隆至质粒穿梭载体pAd-Track-CMV.用脂质体转染法将重组腺病毒pAd-Track-PPAR γ 2-CMV和pAdEasy-1共转染293细胞,成功构建的重组腺病毒Ad-SFRP2,确定转染效率.原代培养增生性瘢痕成纤维细胞,利用Ad-SFRP2感染该细胞.通过RT-PCR和Western Blot分别检测感染后人瘢痕成纤维细胞及对照组细胞中SFRP2基因mRNA和蛋白表达水平.结果:RT-PCR检测结果显示腺病毒Ad-SFRP2的PCR产物约为904bp,SFRP2 mRNA表达水平明显增高；用抗SFRP2多克隆抗体进行Western blot检测为阳性,感染的重组腺病毒载体在人瘢痕成纤维细胞中SFRP2蛋白有较高的稳定表达.结论:成功构建含有人SFRP2基因的重组腺病毒Ad-SFRP2;它可有效提高人增生性瘢痕成纤维细胞中SFRP2基因的表达水平.
