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白头翁皂苷对佐剂性关节炎大鼠FZD8表达的影响
研究中药白头翁有效成分白头翁皂苷(pulchinenoside,PULC)对佐剂性关节炎(adjuvant arthritis,AA)大鼠Frizzled(FZD)表达的影响.采用足跖注射完全弗氏佐剂制备AA大鼠,原代培养AA大鼠滑膜成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like syno-viocytes,FLS),Real-time qPCR检测PULC灌胃治疗对AA大鼠FLS FZD8表达的影响,MTT,ELISA检测FZD8敲除对FLS增殖和IL-1,IL-6,IL-8表达的影响,Real-time qPCR检测miR-375在FZD8异常表达中的作用.检测发现经PULC灌胃治疗后,AA大鼠FLS中FZD8表达明显降低,FZD8敲除后FLS增殖明显减弱,IL-1,IL-6,IL-8表达明显减少,PULC灌胃治疗后miR-375表达明显升高,上调表达的miR-375能够抑制FZD8的表达.PULC可能通过上调miR-375表达抑制FZD8的表达.
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白头翁皂苷调控RA模型大鼠FLS SFRP2表达
目的:研究中药白头翁主要活性成分白头翁皂苷(pulchinenoside,PULC)对类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)模型大鼠成纤维细胞样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS) SFRP2表达的调控.方法:采用大鼠关节炎评分法和足爪肿胀评分法评价PULC对RA模型大鼠的治疗作用,MTT法检测PULC灌胃治疗后对FLS增殖抑制作用.RT-PCR,Western blotting检测PULC灌胃治疗对FLS SFRP2基因表达的调控作用,对Wnt通路关键基因β-catenin,Wnt通路下游效应基因C-myc的调控作用.结果:RA模型大鼠FLS中SFRP2基因表达明显下调,经PULC灌胃治疗后,RA模型大鼠FLS中SFRP2表达上调,β-catenin和C-myc基因表达明显下调.结论:PULC通过对Wnt通路的调控抑制RA模型大鼠滑膜异常增殖.
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白头翁皂苷影响RA模型大鼠FLS MeCP2表达
研究中药白头翁主要活性成分白头翁皂苷(PULC)对类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)模型大鼠MeCP2表达的调控作用.采用佐剂性关节炎大鼠为RA模型,原代培养RA模型大鼠滑膜成纤维细胞样滑膜细胞(FLS),Real time qPCR,Western blotting检测100 mg·kg-1PULC灌胃治疗对RA模型大鼠FLS MeCP2表达的调控作用,MTT检测PULC治疗对FLS增殖的影响,MeCP2 siRNA干扰RA模型大鼠FLS MeCP2表达后SFRP2,β-catenin表达的变化.检测发现经100mg·kg-1PULC灌胃治疗后,RA模型大鼠FLS中MeCP2表达明显降低,SFRP2表达升高,RA模型大鼠FLS增殖活力降低,MeCP2 siRNA抑制RA模型大鼠FLS MeCP2表达后,SFRP2表达明显上调,β-catenin表达明显降低.PULC可能通过抑制MeCP2表达上调SFRP2表达,抑制RA模型大鼠滑膜Wnt通路活性,抑制RA模型大鼠滑膜异常增殖.
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白头翁皂苷在大鼠体内的肠吸收研究
建立HPLC-ELSD法对白头翁皂苷在大鼠体内的小肠吸收情况进行考察.结果显示5种白头翁皂苷中B3和BD的吸收系数(Ka),B3和B7的渗透系数(Peff)在不同肠段具有显著性差异(P＜0.05),5种白头翁皂苷的渗透系数(Peff)在不同肠段的吸收为十二指肠＞空肠＞结肠＞回肠;0.05 ～2.5 g· L-1质量浓度内,5种白头翁皂苷随着浓度提高出现过饱和现象,该类皂苷在十二指肠的渗透系数(Peff)与浓度间的线性关系不明显(0.600 7≤R2≤0.772 7);加入地高辛后,白头翁皂苷的渗透系数明显降低,而加入维拉帕米后,渗透系数明显提高,其中B3,BD,B7和B11有显著性差异(P＜0.05).以上结果表明B3,BD,B7受吸收部位影响较大,十二指肠是该类皂苷的主要吸收部位;白头翁皂苷不完全依赖浓度梯度转运,细胞膜上的载体蛋白参与了药物的转运过程,其小肠吸收机制并不完全为被动转运;白头翁皂苷可能是P-gp底物.
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白头翁总皂苷对日本血吸虫虫卵毛蚴尾蚴的作用
目的 观察白头翁总皂苷(Pulsatilla chinensis(Bunge)Regel saponins,PRS)对日本血吸虫虫卵、毛蚴、尾蚴的杀灭效果,为白头翁总皂苷作为抗血吸虫新药提供理论和实验依据.方法 采用尾蚴腹部贴片法感染ICR小鼠,感染后42 d的鼠肝脏经研磨、过筛获得虫卵,毛蚴由虫卵孵化,尾蚴由阳性感染钉螺光照逸出,采用0、1、2、3、4、5、6、7、8 μg/ml的PRS药液分别于不同时间作用虫卵、毛蚴、尾蚴.结果 不同浓度PRS及对照药物吡喹酮(PZQ)对日本血吸虫虫卵作用24 h的孵化结果显示,PRS对虫卵孵化的抑制效果略优于PZQ,尤其在4μg/ml浓度时,日本血吸虫虫卵对PRS的作用更敏感.1、2、3、4、5、6、7、8 μg/ml的PRS药液作用于毛蚴30 min后,毛蚴死亡率分别为13.47％、26.05％、60.99％、90.84％、100％、100％、100％、100％.作用于尾蚴30 min后,尾蚴的死亡率分别为5.32％、18.81％、44.7％、76.87％、98.28％、100％、100％、100％.毛蚴、尾蚴的死亡率对PRS的作用时间和浓度有一定依赖性.结论 体外实验显示PRS对日本血吸虫虫卵、毛蚴、尾蚴均有杀伤作用,有望成为新的抗血吸虫药物.
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RRLC-ESI-MS/MS分析白头翁皂苷在大鼠体内的组织分布
目的 研究白头翁皂苷在大鼠体内的分布规律和蓄积情况.方法 以300 mg·kg-1白头翁皂苷提取物均匀分散混悬液单次灌胃给予大鼠后,采用RRLC-ESI-MS/MS对白头翁皂苷中的有效成分B3,BD,B7,B10,Bll在动物体内的组织分布情况进行考察.结果 白头翁皂苷在动物体内的分布迅速且广泛,给药0.25 h后,各组织脏器中即可检测到较高水平的药物浓度.5种皂苷在大部分组织器官中的达峰时间为30 min,给药2h后,白头翁皂苷的浓度逐渐下降,给药6h后,药物基本消除.在动物脑中亦可检测到药物的存在.结论 白头翁皂苷在体内不易蓄积,主要分布在心脏、肝、肺、肾、小肠等器官,心脏中药物浓度高,且可以透过血脑屏障.
关键词： 白头翁皂苷 RRLC-ESI-MS/MS 组织分布 -
不同浓度白头翁皂苷对口腔鳞癌细胞增殖、迁移和钙蛋白酶1、E-cadherin、N-cadherin蛋白的影响
目的:探究白头翁皂苷对口腔鳞癌细胞增殖、迁移及钙蛋白酶1(calpain1)表达的影响.方法:用0,1. 0,2. 0,4. 0,8. 0, 12. 0 mg·L-1白头翁皂苷处理人口腔鳞癌CAL27细胞.四甲基偶氮唑(MTT)法检测白头翁皂苷对CAL27细胞增殖的影响;细胞划痕实验与Transwell实验检测白头翁皂苷对CAL27细胞迁移与侵袭能力的影响;蛋白质印迹(Western blot)技术检测CAL27细胞calpain1、E-cadherin、N-cadherin蛋白的表达变化.结果:与空白对照组比较,白头翁皂苷对CAL27细胞的增殖抑制率显著增加(P<0. 05),且具有时间-剂量依赖关系. 12. 0 mg·L-1白头翁皂苷处理48 h后CAL27细胞细胞形态从长梭形间质样变成鹅卵石状上皮样.随着白头翁皂苷处理浓度的增加,CAL27细胞迁移与侵袭能力逐渐减弱(P<0. 05);CAL27细胞中calpain1、N-cadherin蛋白表达水平逐渐降低(P<0. 05),E-cadherin蛋白表达水平逐渐升高(P>0. 05).结论: 白头翁皂苷可抑制口腔鳞癌CAL27细胞增殖、迁移与侵袭过程,其机制可能与calpain1、N-cadherin表达下调、E-cadherin表达上调有关.
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等辐射分析法研究3种白头翁皂苷抗血吸虫的相互作用
目的:采用等辐射分析法研究3种抗血吸虫的白头翁皂苷相互作用关系.方法:将血吸虫随机分成B3组(A组)、B7组(B组)、B9组(C组)、B3/B7组(D组)、B3/B9组(E组)、B7/B9组(F组)、B3/B7/B9组(G组)7组.各组给予不同剂量的单体及配伍复合药物,以血吸虫虫体活力降低率为指标,采用SPSS 11.5软件计算药物的ED50(半数有效量),等辐射图分析3药之间的相互作用.结果:A组的ED500为21.13μg·ml-1(95％可信限为14.96～30.96 μg·ml 1),B组为2.56 μg·ml-1 (95％可信限1.89～3.12 μg·ml-1),C组为15.00μg·ml-1(95％可信限10.68～21.77 μg·ml-1),D组为11.02/1.92 μg·ml-1(95％可信限8.05/1.31～14.41/2.47 μg·ml-1),E组为12.99/8.57 μg·ml-1(95％可信限9.43/6.10～18.02/12.22 μg·ml-1),F组为1.84/2.42 μg·ml-1(95％可信限1.33/1.40～2.21/3.85μg·ml 1),G组为3.56/2.39/2.52 μg·ml1(95％可信限1.17/1.91/1.00～6.57/2.89/5.25 μg·ml-1).在研究对血吸虫的杀灭作用时,F,G组ED50偏离相加线有显著性差异(P＜0.05),D,E组在给药前后无显著性差异(P＞(0.(05).结论:等辐射分析法能方便、准确地反映出药物间的相互作用,等辐射图可知,B3/B7(剂量比6∶1),B3/B9(剂量比3∶2)合用对血吸虫杀灭作用具有相加效应,而B7/B9(剂量比1∶1.5),B3/B7/B9(剂量比2∶1∶1.5)具有协同效应,优化后的混合物的抗血吸虫活性优于普通提取物.
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白头翁皂苷成分及药理作用研究进展
白头翁是常用传统中药,三萜皂苷类是其主要药效成分,具有抗肿瘤、抗炎、抗菌、抗氧化等药理作用.归纳总结白头翁中主要的三萜皂苷类成分,并对其主要药理作用进行综述,为进一步开发利用白头翁提供参考.
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白头翁皂抑制佐剂性关节炎大鼠成纤维样滑膜细胞凋亡
目的:研究白头翁皂苷(pulchinenoside,PULC)对佐剂性关节炎(adjuvant arthritis,AA)大鼠成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS)凋亡的影响.方法:60只SD大鼠被随机分为正常对照组、AA组、PULC低剂量组(50 mg/kg)、PULC中剂量组(100 mg/kg)、PULC高剂量组(150 mg/kg)、布洛芬8 mg/kg阳性药物组,每组10只.原代培养AA大鼠FLS,real time qPCR检测PULC灌胃治疗对AA大鼠FLS抗凋亡基因Bcl-2,促凋亡基因Bax和细胞凋亡因子caspase-3表达的调控作用;MTT检测PULC治疗对FLS增殖的影响;ELISA检测PULC对FLS的IL-6和IL-8表达的影响.结果:与AA组比较,各治疗组FLS中抗凋亡基因Bcl-2表达明显降低(均P＜0.05),促凋亡基因Bax和细胞凋亡因子caspase-3表达显著升高(均P＜0.05),AA大鼠FLS增殖活力明显降低(均P＜0.05),IL-6和IL-8表达显著下降(均P＜0.05).结论:PULC可能通过促进FLS凋亡而抑制AA大鼠滑膜的异常增殖.
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基于LC-LITMS/MS法分析白头翁皂苷B7在大鼠体内的代谢产物
目的 鉴定白头翁中齐墩果酸3-α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)[β-D-吡喃葡萄糖基(1→4)-α-L-吡喃阿拉伯糖苷(B7)在大鼠粪便的代谢产物.方法 采用超高效液相色谱-三重四级杆线性离子肼复合质谱法(LC-LITMS/MS)检测大鼠灌胃B7后粪便中的代谢产物.使用Waters-SunFire C18柱(100 mm×2.1 mm,3.5μm),以0.1％甲酸水(A)-乙腈(B)为流动相梯度洗脱进行色谱分离,并与线性离子阱联用.选择增强型母离子扫描(EMS)和预测离子对扫描模式(pMRM)进行质谱扫描,采用Analyst 1.5软件进行数据处理、鉴定代谢产物的化学结构.结果 在大鼠粪便检测到原型M0(B7)及M1(B7去甲基葡萄糖醛酸化产物)、M2(齐墩果酸-3-β-D-吡喃葡萄糖基(1→4)-α-L-吡喃阿拉伯糖苷)、M3(鼠李糖基(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖苷)、M4(齐墩果酸-3-α-L-吡喃阿拉伯糖)和M5(齐墩果酸)等5个代谢产物.结论 B7在大鼠体内以脱糖代谢和葡萄糖醛酸化代谢为主.
关键词： 白头翁皂苷 齐墩果酸 LC-LITMS/MS 代谢产物 -
正交试验优选肠腹宁颗粒中白头翁皂苷B4的提取工艺
目的:优选肠腹宁颗粒佳提取工艺.方法:以浸泡时间、加水量、煎煮时间、煎煮次数为考察因素,以白头翁皂苷B4的含量为评价指标,用正交试验优选提取工艺.结果:提取工艺为浸池45 min,加水15倍量,分2次煎煮,每次煎煮40 min.结论:优选得到的工艺稳定、可行,重现性好.
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白头翁皂苷抑制人HT29结肠癌细胞增殖及诱导凋亡作用研究
目的:考察白头翁皂苷对人结肠癌细胞株HT29的增殖及诱导细胞凋亡的作用.方法:MTT法检测白头翁皂苷对HT29细胞增殖的影响;DAPI染色、Annexin-V/PI染色流式细胞术检测对细胞凋亡的影响;Western blotting检测白头翁皂苷对凋亡相关蛋白cleaved-caspase3的影响.结果:白头翁皂苷能明显抑制HT29细胞的增殖,其20、10、5、2.5、1.25、0.625 μg/ml浓度作用48h对HT29增殖抑制率依次为97.6％、87.1％、76.0％、67.3％、59.4％、41.9％,呈浓度依赖关系,IC50值为1.440μg/ml;DAPI染色可以观察到白头翁皂苷干预后的HT29细胞出现明显的凋亡形态;流式细胞术检测白头翁皂苷5、10、15、20μg/ml诱导HT29细胞凋亡率依次为10.13％、10.93％、13.17％、13.63％;Western blotting检测白头翁皂苷药物(2.5、5、10、15、20μg/ml)干预后HT29细胞出现Cleaved-caspase 3的表达,呈浓度依赖关系,在20μg/ml与对照组比较有显著性差异.结论:白头翁皂苷可明显抑制HT29细胞增殖,其抗肿瘤作用与诱导肿瘤细胞凋亡有关.
