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雄黄诱导维甲酸耐药的急性早幼粒细胞白血病细胞(MR2细胞)凋亡的体外研究
目的:深入了解雄黄治疗急性早幼粒细胞白血病(APL)的机理.方法:以对全反式维甲酸(ATRA)耐药的APL细胞株MR2细胞为体外模型,用不同剂量的雄黄处理细胞一定时间后,利用MTT实验观察细胞的存活、增殖状态,应用细胞形态学、基因组DNA电泳、流式细胞仪检测细胞凋亡,利用流式细胞仪分析细胞周期及细胞膜Annexin Ⅴ的表达.结果:一定浓度范围内雄黄对MR2细胞的生长、增殖有剂量、时间依赖性抑制作用;Wright's及HE染色均可见凋亡细胞,透射电镜下可见核染色质边集、核碎裂及凋亡小体;基因组DNA电泳出现"梯形"条带;流式细胞仪分析出现低于G1期DNA含量的亚二倍体细胞峰;经雄黄处理后Annexin Ⅴ-FITC+/PI-的凋亡细胞逐渐增多.结论:雄黄可诱导ATRA耐药的APL细胞发生凋亡,提示雄黄治疗APL的效应途径可能不同于ATRA.
关键词： 雄黄 急性早幼粒细胞性白血病 细胞凋亡 维生素A酸类 -
口服维A酸类药物常见不良反应的观察及护理
观察了150例皮肤病患者在口服维A酸类药物治疗过程中出现的不良反应,主要有唇炎、口干、皮肤干燥等皮肤黏膜症状,头痛、戒烟样反应、情绪抑郁等中枢神经系统的症状,肌肉、关节疼痛及血清甘油三酯和肝功能的异常等.提出相应的护理措施:积极对症处理,做好皮肤护理;加强安全防护,防止意外发生;将血清肌酸激酶、C反应蛋白、甘油三酯、肝功能及骨X线摄片等内容列入口服维A酸类药物患者的常规检查项目中,定期监测,有效预防神经肌肉功能障碍、骨毒性、心血管疾病的发生和肝脏损害;反复细致做好该类药物知识的宣教,以防范致畸作用的发生.
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全反式维甲酸和Caspase抑制剂Z-VAD-FMK对胰腺癌细胞凋亡的作用
目的观察全反式维甲酸(ATRA)对体外胰腺癌细胞生长的影响以及caspase抑制剂Z-VAD-FMK对细胞凋亡的作用.方法胰腺癌细胞PaTu8988与ATRA或与ATRA+caspase抑制剂Z-VAD-FMK共同孵育后,用MTT方法观察细胞活性,观察细胞超微结构改变,DNA断裂分析,流式细胞仪检测凋亡细胞比例和测定caspase-3活性.结果ATRA对细胞的生长有明显的抑制作用.ATRA诱导后电镜和DNA断裂分析发现典型凋亡特征.与ATRA处理组相比,ATRA和Z-VAD-FMK联合作用对细胞凋亡比例无影响.ATRA组caspase-3蛋白的活性随孵育时间延长而升高,且与凋亡比例相关,Z-VAD-FMK处理组caspase-3活性明显下降.结论ATRA能够抑制胰腺癌细胞生长并诱导细胞凋亡.同时,与Z-VAD-FMK联合作用能抑制caspase蛋白活性,但未使细胞凋亡比例相应降低,提示在胰腺癌凋亡过程中可能有其他蛋白酶的作用.
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脂褐质荧光基团N-亚视黄基-N-视黄基乙醇胺在人视网膜色素上皮细胞蓝光损伤中的作用研究
目的 探讨成人视网膜色素上皮(hRPE)细胞对脂褐质荧光基团N-亚视黄基-N-视黄基乙醇胺(A2E)的摄取及A2E在hRPE细胞蓝光损伤中的作用.方法 全反式视黄醛和乙醇胺混合,体外合成A2E.体外培养hRPE细胞.将A2E加入hRPE细胞培养液中,使A2E的浓度分别为25、50、100 μmol/L.观察hRPE细胞对A2E的摄取.用蓝光(450 nm)照射hRPE细胞20 min,光照强度70 mW/mm2,CCK-8检测细胞活力,Hoechst 33342荧光素染色、流式细胞仪检测细胞凋亡情况.结果 全反式视黄醛(100.0 mg)和乙醇胺(9.5 mg)混合后生成53.8 mg的A2E.吞噬A2E的hRPE细胞中能够检测到自发荧光,主要分布在细胞核周围.蓝光照射后,含有A2E的hRPE细胞活力下降,下降程度随A2E浓度增加而增强.不含A2E的hRPE细胞,经蓝光照射后,细胞活力未见明显下降.蓝光照射含有A2E的hRPE细胞,细胞核中出现浓染的碎块状荧光,流式细胞仪检测可见凋亡细胞特有的亚二倍体峰,加入25 μmol/L的A2E,光照后12、24、36及48 h,细胞凋亡率分别为(12.11±2.32)%、(31.21±3.72)%、(64.23±3.53)%及(58.71±3.48)%.仅接受光照不加入A2E、不接受光照(加入或不加入A2E)的hRPE细胞凋亡率在光照后各时间点的平均值均小于5%.结论 在hRPE细胞蓝光损伤的过程中,单独的光照射不会造成明显的细胞损伤或凋亡,A2E的存在是蓝光损伤的因素之一.提示在老年人中,含有较多脂褐质的hRPE细胞容易受到蓝光损伤.
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异维A酸治疗重度痤疮的疗效观察
痤疮是皮肤科常见的慢性炎症性毛囊皮脂腺疾病,好发于青春期男女.按照目前常用的国际改良分级法,重度痤疮是指结节性、囊肿性或聚合性痤疮,伴疼痛并形成囊肿,病灶数多于100个,结节或囊肿多于3个[1].现就我院皮肤科门诊2008年1月—2012年1月经异维A酸治疗的198例重度痤疮患者的临床疗效进行回顾性分析.
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不同品牌高效液相色谱仪-二极管阵列检测器灵敏度比较
目的 对4种品牌不同型号的高效液相色谱仪-二极管阵列检测器(HPLC-DAD)的灵敏度进行评价.方法 配制不同浓度的维生素A醋酸酯、脱水穿心莲内酯和青蒿素溶液,分别采用Hitachi、Waters、Agilent和Shimadzu公司4种不同型号的HPLC-DAD,比较210、250和328 nnl波长处信噪比为3时的检测量.结果 以上4种HPLC-DAD检测,得到维生素A醋酸酯的检测限分别为(390±s 6)×10-3、(480±10)×10-3、(660±10)×10-3和(770±12)×10-3ng,脱水穿心莲内酯的检测限分别是(170.0±2.5)×10-3、(260±4)×10-3、(250±4)×10-3和(450±4)×10-3ng,青蒿素的检测限分别是(530±7)×10-3、(1 400±14)×10-3、(1 830±24)×10-3和(2 320±6)×10-3ng.L-2455 DAD检测的3种样品的检测限均显著低于其他仪器的检测结果(P<0.01).结论 L-2455 DAD的灵敏度较其他3种型号检测器的灵敏度高.
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维A酸的抗炎作用及在炎症性皮肤病中的应用
维A酸类药物通过与维A酸受体结合调节上皮细胞的增殖和分化,具有抗炎和免疫调节作用,在多种自身免疫炎症性疾病的治疗中起作用.维A酸通过影响中性粒细胞、单核/巨噬细胞、树突细胞、肥大细胞、T细胞和B细胞等免疫细胞和多种细胞因子参与机体的免疫防御和抗炎过程.维A酸用于治疗银屑病、痤疮、扁平苔藓等多种炎症性皮肤病获得良好疗效.
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新型维A酸ECPIRM及全反式维A酸对白细胞介素17刺激HaCaT细胞白细胞介素1β表达的影响
目的 探讨新型维A酸ECPIRM及全反式维A酸(ATRA)对白细胞介素17(IL-17)刺激人表皮角质形成细胞株(HaCaT细胞)IL-1β表达的影响.方法 MTT法检测不同浓度ECPIRM及ATRA与IL-17共同作用于HaCaT细胞后对其细胞增殖活力的影响;IL-17(20 μg/L)刺激HaCaT细胞或与ECPIRM(80 μmol/L)、ATRA(5 μmol/L)共培养24 h,收集细胞培养上清液并提取总RNA,分别进行酶联免疫吸附实验(ELISA)和荧光定量PCR,检测IL-1β蛋白及IL-1β mRNA水平的变化.数据处理采用单因素方差分析,组间比较采用LSD法.结果 低浓度ECPIRM可促进HaCaT细胞增殖,随着药物浓度和时间的增加,对HaCaT细胞生长出现抑制现象,并呈浓度及时间依赖性.ATRA抑制HaCaT细胞生长呈浓度及时间依赖性.IL-17刺激HaCaT细胞后细胞培养上清液中IL-1β蛋白及IL-1β mRNA水平(20.312±2.053 ng/L、4.05±0.47)与对照组(11.427土0.929 ng/L、1.00±0.03)相比明显升高,差异有统计学意义(P＜ 0.05);ECPIRM作用后IL-1β蛋白及IL-1βmRNA水平(12.470±1.897 ng/L、0.82±0.12)与IL-17刺激组(20.312±2.053 ng/L、4.05±0.47)相比降低,差异有统计学意义(P＜ 0.05);ATRA作用后IL-1β蛋白及IL-1β mRNA水平(12.694±1.478 ng/L、0.87±0.16)与IL-17刺激组(20.312±2.053 ng/L、4.05±0.47)相比明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05),同时ECPIRM处理组、ATRA处理组与溶媒对照组比较差异无统计学意义.结论 IL-17可促进HaCaT细胞分泌IL-1β,ECPIRM及ATRA对其诱导的HaCaT细胞IL-1β的表达具有明显的抑制作用.
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维A酸涂膜剂对兔耳早期增生性瘢痕的影响
目的 研究维A酸涂膜剂对兔耳早期增生性瘢痕的影响,探讨其防治瘢痕的可行性.方法 选取新西兰白兔24只,建立兔耳增生性瘢痕模型后,随机分为4组,每组6只.A组:对照组,B组:涂膜剂组,C组:0.05％维A酸涂膜剂组,D组:0.1％维A酸涂膜剂组,连续用药6周,期间观察记录瘢痕大小、厚度、颜色、硬度,6周后分别切取兔耳瘢痕组织,HE染色,胶原染色(VG法),行病理学观察、检测及分析.结果 A组瘢痕颜色深、厚而硬,并明显高于皮肤,表面凹凸不平;B组、C组、D组瘢痕颜色浅,质地软,厚度薄,皮下结节小,其中C、D组与周围正常皮肤接近,D组瘢痕表面有脱皮现象.HE、VG染色中,A组胶原排列紊乱,有旋涡状结构;C组和D组单位面积内成纤维细胞、微血管数量、胶原沉积量较A组和B组少,且胶原排列整齐,与瘢痕长轴平行.瘢痕增生指数(HI):A组3.17±0.26,B组2.46±0.19,C组1.91±0.21,D组1.90±0.23;成纤维细胞密度(NA):A组5836.70±527.03,B组4128.73±387.66,C组3207.59±439.17,D组3200.28±421.48;胶原纤维的面密度(AA):A组45.38±5.83,B组36.57±6.84,C组28.09±3.82,D组28.07±3.47.A组与B、C、D组比较,HI、NA、AA值差异均有统计学意义(P＜0.01);B组与C、D组比较,HI、NA、AA值差异均有统计学意义(P＜0.01);C组与D组比较,HI、NA、AA值差异无统计学意义(P＞0.05).结论 维A酸涂膜剂可以抑制兔耳早期瘢痕增生,可为防治瘢痕提供一种新的外用方法.
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NB-UVB和阿维A对角质形成细胞肝素结合表皮生长因子样生长因子mRNA的影响
目的 探讨阿维A和窄谱中波紫外线(NB-UVB)对培养的正常人角质形成细胞增殖和肝素结合表皮生长因子样生长因子(HB-EGF)mRNA表达的影响.方法 用1 μmol/L阿维A和/或100 mJ/cm2NB-UVB处理正常人角质形成细胞12 h后,用MTT法、RT-PCR和实时荧光定量RT-PCR法分别检测细胞增殖和HB-EGF mRNA表达的改变.结果 1μmol/L阿维A和100 mJ/cm2 NB-UVB单独作用时,均可抑制角质形成细胞的增殖和上调HB-EGF mRNA的表达,两者联合作用时,对角质形成细胞增殖的抑制和HB-EGF mRNA的诱导作用更强,分别为19.7%和8.6倍,之后依次为1 μmol/L阿维A(14.4%,7.1倍)和100 mJ/cm2 NB-UVB(8.7%,2.5倍).结论 阿维A和/或NB-UVB处理后,可协同上调HB-EGF的表达,可能参与调节二者对角质形成细胞增殖的抑制作用.
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γ-干扰素、全反式维A酸对皮肤鳞状细胞癌SCL-1细胞表达生存素的影响
目的 探讨γ-干扰素、全反式维A酸(ATRA)对皮肤鳞状细胞癌细胞株(SCL-1)表达生存素的影响.方法 采用RT-PCR、免疫印迹(Western blot)分析方法分别检测γ-IFN、ATRA作用前后SCL-1细胞株生存素mRNA及蛋白表达的差异.结果 γ-IFN处理后,生存素在SCL-1细胞表达较对照组明显下降(P＜0.05),且具有时间依赖性和剂量依赖性;ATRA可以增强γ-IFN对生存素的抑制作用.结论 γ-IFN联合ATRA诱导皮肤鳞状细胞癌细胞发生细胞凋亡的机制之一可能与下调生存素的表达相关.
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维胺酯对HaCaT细胞增殖和分化的影响
目的 探讨维胺酯对体外培养角质形成细胞(HaCaT细胞)增殖和分化的影响.方法 将浓度为2,5,10,15,20,25,30 μg/mL的维胺酯作用于培养的HaCaT细胞,采用MTT法检测维胺酯对HaCaT细胞体外增殖的影响,流式细胞仪测定细胞周期及凋亡率变化,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)半定量检测分化标记物角蛋白10及内披蛋白mRNA的表达水平.结果 2 μg/mL维胺酯处理的HaCaT细胞,48 h时表现出对细胞增殖的抑制作用,随着时间延长和药物剂量加大,抗增殖作用愈明显;当药物质量浓度达到30 μg/mL时,48 h和72 h时的抑制率分别为57.67%和82.00%.与对照组相比,经维胺酯作用48 h后,细胞G1期比例显著增加,S期与G2期比例则显著下降,并可抑制G1/G2期转换,但对细胞凋亡无影响.细胞内披蛋白mRNA表达水平随维胺酯处理浓度增高而上升,药物浓度达30μg/mL时,表达水平由对照组的40.80%增高至156.12%;而角蛋白10 mRNA表达水平则下降,由96.46%降至14.60%.结论 维胺酯具有抑制角质形成细胞增殖及诱导其分化的作用.
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市售六种维A酸外用制剂对皮肤累积刺激性的评估
目的评价常用维A酸外用制剂对皮肤的累积刺激作用.方法采用随机对照、双盲法将试验药与对照药分为7组.对受试者每周每种药品进行4次24 h的斑贴试验和1次72 h的斑贴试验观察.共进行3周的观察.结果累积刺激小的是0.1%阿达帕林凝胶组,累积刺激指数为0.09±0.11,其20 d的累积刺激指数为0.09±0.11;累积刺激作用大的0.1%维A酸霜组为0.59±0.24,2组比较差异有显著性(P＜0.001).0.1%阿达帕林凝胶的累积刺激指数还明显小于0.025%维A酸霜组(0.41±0.22)和0.05%维A酸霜组(0.25±0.22).结论国内外常用的治疗痤疮的维A酸外用制剂是安全的.外用阿达帕林凝胶的刺激作用不但明显小于0.1%维A酸霜,也小于0.05%维A酸霜.
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他扎罗汀联合干扰素γ对角质形成细胞HLA-DR表达的影响
目的探讨他扎罗汀对角质形成细胞(KC)增殖及他扎罗汀、干扰素(IFN)-γ及二者联合对HLA-DR在KC上表达的影响,为他扎罗汀的抗增殖作用及其对炎症的影响进行初探.方法①体外培养正常人KC;②用MTT法检测他扎罗汀对KC增殖的影响;③用免疫组化的方法,分别观察他扎罗汀组、IFN-γ组及二者联合组对HLA-DR在KC上表达的影响.结果①10-7～10-5 mol/L他扎罗汀作用KC 24 h、48 h后,处理组的细胞增殖较对照组显著降低且呈剂量依赖性;②正常人KC基本不表达HLA-DR;③10-6 mol/L他扎罗汀作用24 h后,不能诱导KC表达HLA-DR;④500 U/mL IFN-γ处理24 h后可明显诱导KC表达HLA-DR;⑤10-7～10-5 mol/L他扎罗汀联合IFN-γ组作用24 h后,KC上HLA-DR的表达诱导作用较单独IFN-γ组显著增强(P＜0.005),且呈剂量依赖性.结论他扎罗汀对体外培养的KC增殖有抑制作用;他扎罗汀对IFN-γ诱导KC表达HLA-DR有增强作用.
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蓝光及蓝光滤过型人工晶状体对体外培养人视网膜色素上皮细胞的影响
目的 探讨蓝光滤过型人工晶状体(intraocular lens.IOL)对含N-亚视黄基-N-视黄基乙醇胺(A2E)的人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞的细胞活力、氧化应激及分泌血管内皮生长因子(vascu|ar endothe-lial growth factor.VEGF)、色素上皮衍生因子(pigment ep-itllelium deftved factor,PEDF)的影响.方法 体外培养含A2E的RPE细胞,用低强度蓝光持续照射,在光通路上置蓝光滤过型(AcrySof Natural)或紫外线阻挡型(AerySof)IOL.细胞分为:A组(AcrySof Natural IOL,光照);B组(AerySof IOL.光照):C组(光照,无IOL);D组(无光照,无IOL).CCK-8检测细胞活力,流式细胞仪检测活性氧自由基(reactive oxvgen species,ROS)水平,酶联免疫吸附法检测还原型谷胱甘肽(gintathione,GSH)、VEGF、PEDF含量.结果 A、B、C和D组细胞活力分别为(76.9±3.9)%、(42.5±4.3)%、(35.2±4.1)%、(96.7±3.1)%;ROS分别为511.53±67.43、1011.15±174.88、1022.23±158.72、452.82±77.98;GSH分别为(15.34±4.77)μmol/L、(2.57±1.96)μmol/L、(1.58±1.13)μmol/L、(19.73±5.49)μmol/L;VEGF/PEDF比值分别为1.40、9.76、14.86、0.71.同B、C组相比,A组细胞活力和GSH含量明显提高,ROS含量和VEGF/PEDF比值明显下降(19<0.05).结论 蓝光滤过型IOL对A2E介导的RPE细胞蓝光损伤有保护作用,能够降低蓝光诱导的ROS和VEGF水平,优于紫外线阻挡型IOL.
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肿瘤抗异常转录治疗研究进展
肿瘤的发生、发展与转录水平的基因表达调控失常密切相关.对急性早幼粒细胞白血病(APL)发病机制的研究较清晰地阐述了基因转录异常导致肿瘤的机制.抗异常转录治疗即是基于此的一个非常具有吸引力的肿瘤治疗策略,并且其有效性不断被实验研究及临床实践所证明.
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孔源性视网膜脱离患者视网膜下液维A酸含量的分析
采用高效液相色谱法研究56例孔源性视网膜脱离患者的视网膜下液(SRF)及血清维A酸的含量,并观察部分患者服用维生素A对其的影响.结果示,患者SRF中维A酸的含量与增殖性玻璃体视网膜病变(PVR)程度、视网膜脱离范围和术前服用维生素A的天数呈正相关(r1=0.851, P<0.00; r2=0.452,P<0.01; r3=0.431,P<0.05);血清维A酸的含量与眼部病变无关;SRF中维A酸在口服维生素服药第4 d时显著增高.结果表明视网膜脱离后,色素上皮和神经上皮之间代谢关系发生紊乱,造成维A酸循环利用障碍.服用维生素A有利于阻止PVR的发生和发展.
关键词： 维生素A酸类 视网膜下液* 视网膜脱离 增殖性玻璃体视网膜病变* -
BALB/C近交系小鼠腭裂模型的建立及形态学观察
目的:研究维甲酸和地塞米松联合用药对BALB/C 近交系小鼠腭部发育的影响.方法:将BALB/C 系孕鼠分为给药组和对照组,在妊娠第12 d分别给药,并于妊娠期第138, 1320, 148, 1420, 158, 1520, 168 d处死孕鼠,取胎鼠头部做冠状切片,HE 染色,进行观察.结果:维甲酸和地塞米松联合用药可诱导BALB/C 系小鼠形成腭裂,其主要原因是腭突上抬延迟.结论:维甲酸和地塞米松联合应用诱导BALB/C 近交系小鼠形成腭裂是一种稳定的腭裂动物模型.
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维A酸对人类恶性黑色素瘤A375细胞增殖的影响
目的:研究维A酸(RA)抑制人类恶性黑色素瘤A375细胞增殖的作用. 方法:用RA(at-RA, 13-cis-RA和9-cis-RA)、MA(RXR激动剂)及TTNPB(RAR激动剂)处理培养的人类恶性黑色素瘤A375细胞. 用MTT法研究这些试剂对细胞增殖的影响,用流式细胞仪研究这些试剂对细胞周期的影响. 结果:RA和TTNPB均可抑制A375细胞的增殖,而MA无此作用. 在作用24 h时的不同浓度(10-5, 10-6和10-7 mol/L)以及作用48和72 h的10-5 mol/L浓度时,TTNPB的抑制增殖作用均强于其它试剂处理组(P<0.05). 细胞周期分析结果显示RA和TTNPB均可诱导A375细胞G0/G1期阻滞,而MA无此作用. 在作用24和48 h时的10-5 mol/L浓度时,TTNPB的诱导G0/G1期阻滞作用均强于其它试剂处理组(P<0.05). 结论:RA可抑制人类恶性黑色素瘤A375细胞的增殖,并诱导G0/G1期阻滞. RA的这些作用与RXR的激活无关,而可能与RAR的激活有关.
