首页 > 文献资料
-
miR-30a在心肌梗死大鼠心肌纤维化中的作用机制及对心功能的影响
目的：探讨miR-30a在大鼠心肌梗死后对心肌纤维化的作用机制及对心功能的影响。方法构建携带大鼠miR-30a基因的载体，在HEK293细胞中包装病毒载体rAAV9-miR-30a及阴性对照rAAV9-miR-30a-NC，提取纯化后通过冠脉注射方法分别传导PBS缓冲液、rAAV9-miR-30-NC和rAAV9-miR-30a至大鼠心脏，再建立大鼠心肌梗死模型，分别设为PBS组、miR-30-NC组和miR-30a组，同时设立假手术组（sham组）。用心脏彩色多普勒超声检测心功能指标，包括短轴缩短率（FS）及左室射血分数（LVEF）；Masson染色观察心肌胶原容积分数（CVF）；免疫组化法检测Ⅰ、Ⅲ型胶原表达；实时荧光定量PCR（real-time PCR）检测心肌miR-30a及TGF-β1和CTGF mRNA表达；蛋白印迹法（Western blot）检测TGF-β1及CTGF蛋白的表达。结果 miR-30a组心功能较PBS组及miR-30-NC组显著改善（P＜0.05）。 miR-30a组的心肌CVF及Ⅰ、Ⅲ胶原表达水平、Ⅰ／Ⅲ型胶原比值较PBS组及miR-30-NC组显著降低（P＜0.01）；miR-30a组心肌TGF-β1 mRNA及蛋白表达水平与PBS组及miR-30-NC组比较显著下降（P＜0.001）；CTGF mRNA及蛋白表达水平较PBS组及miR-30-NC组显著降低（P＜0.001）。结论 miR-30a过表达能下调心肌梗死后心肌TGF-β1、CTGF mRNA及蛋白水平，从而减少心肌胶原产生，抑制心肌纤维化，进而改善心功能。
-
miR-30 a抑制人骨肉瘤细胞143 B的迁移、侵袭和活力
目的：探讨miR-30a对人骨肉瘤细胞143B侵袭、迁移和细胞活力的影响。方法过表达或抑制miR-30a分别处理人骨肉瘤细胞143B。划痕实验观察细胞划痕愈合能力；Transwell 实验检测143B细胞迁移和侵袭能力；MTT实验检测细胞活力；定量PCR实验确认过表达miR-30a腺病毒有效性并且检测RUNX2 mRNA表达；Western blot检测细胞中RUNX2总蛋白表达。结果过表达miR-30a抑制了骨肉瘤细胞143B迁移和侵袭（P＜0.05），在72 h时， miR-30a明显抑制细胞活力（ P＜0.01）；抑制miR-30a的内源性表达后，143B细胞的迁移和侵袭能力增加（ P＜0.05），细胞活力也表现出上升水平（ P＜0.01）；同时过表达miR-30 a可以抑制RUNX2的蛋白表达，抑制内源性miR-30a后RUNX2蛋白水平表达增加（P＜0.05）。荧光素酶活性检测，miR-30a可以靶向于RUNX2（P＜0.01）。结论 miR-30a抑制骨肉瘤细胞143B的迁移、侵袭和活力，其作用可以能是通过抑制RUNX2的表达来实现。
-
过表达miR-30a抑制BMP9诱导C2C12细胞的成骨分化
目的 探讨miR-30a在BMP9诱导间充质干细胞C2C12成骨分化中的作用.方法 BMP9条件培养基处理间充质干细胞C2C12诱导成骨分化,用real-time PCR连续检测miR-30家族成员的mRNA.用BMP9条件培养基作用Ad-mmu-miR-30a预处理的C2C12细胞,通过ALP染色和活性检测来反映早期成骨指标ALP的表达、分别在mRNA水平和蛋白水平检测中期成骨指标(OCN)的表达、用钙盐沉积来检测晚期成骨分化,用流式细胞术和MTT检测C2C12细胞的周期与增殖.后探讨miR-30a在BMP9诱导C2C12细胞成骨分化中的作用机制.结果 miR-30家族中,只有miR-30a在BMP9诱导C2C12细胞成骨分化中表达下调,miR-30a过表达后,通过靶基因Runx2使BMP9诱导成骨分化能力减弱,ALP的表达下降(P＜0.05),OCN蛋白水平和mRNA水平也都表达下调(P＜0.05),钙盐沉积受到抑制.结论 miR-30a可以抑制BMP9诱导C2C12细胞的成骨分化.
-
miR-30a表达载体构建、病毒包装和表达活性的检测
目的 构建携带miR-30a的慢病毒表达载体,为研究miR-30a在慢性粒细胞白血病中的作用机制及对伊马替尼耐药性的影响奠定基础.方法 提取人骨髓细胞基因组DNA,扩增miR-30a的前体序列,克隆到plVTHM慢病毒表达载体上,测序鉴定.重组载体进行病毒包装,感染K562细胞,测定病毒滴度.感染的K562细胞用流式细胞仪分选带有绿色荧光的GFP阳性的细胞,对分选的细胞用实时荧光定量PCR法检测miR-30a在细胞内的表达水平.后用CCK-8法检测各组细胞的增殖情况.结果 重组慢病毒表达载体测序完全正确;病毒滴度检测为6×106 TU/mL;选用160 μL病毒液/1 mL培养基感染K562细胞;感染的K562细胞中miR-30a的表达水平显著增强(P＜0.05);过表达miR-30a后K562细胞增殖水平显著下降(P＜0.05).结论 成功构建了miR-30a慢病毒表达载体,并可在K562细胞中稳定表达,且miR-30a有抑制K562细胞增殖的作用.
-
微波辐射对大鼠海马组织miR-30a表达和分布的影响研究
目的 研究微波辐射对大鼠海马组织中miR-30a表达和分布的影响及其意义.方法 采用30 mW/cm2微波辐射110只二级雄性Wistar大鼠,于辐射后7d、14 d、1 m和2m,分别采用实时荧光定量PCR和原位杂交技术检测海马组织miR-30a表达水平和组织分布;采用Image-pro Plus病理图像分析系统,对miR-30a原位杂交结果进行积分光密度(IOD)和平均光密度(MOD)分析.结果 实时荧光定量PCR显示,与假辐射组相比,30 mW/cm2微波辐射组大鼠海马组织miR-30a在辐射后7d、14 d和1 m显著下降(P＜0.01);原位杂交结果显示,假辐射组大鼠海马组织miR-30a在辐射后7d和14 d于海马DG区锥体细胞胞浆和胞核呈阳性;30 mW/cm2微波辐射组大鼠海马组织miR-30a在辐射后7d和14 d于海马组织DG区锥体细胞胞浆和部分胞核呈弱阳性.定量分析结果显示,辐射后7d和14 d,大鼠海马组织miR-30a的IOD和MOD均明显减少(P＜0.01或P＜0.05).结论 30 mW/cm2微波辐射可致大鼠海马组织miR-30a表达下调、分布减少,可能参与了微波辐射致海马组织损伤的病理生理过程.
-
肠胃清方对人结肠癌HCT116/L-OHP裸鼠皮下移植瘤miR-30a/Beclin1通路的影响
目的 本课题旨在分子生物学技术和中医基础理论指导下,从miRNAs与自噬相关联的角度,讨论miR-30a与自噬基因Beclin1在结肠癌化疗耐药中的相关性,并探讨肠胃清对miR-30a介导自噬的调控作用及逆转结肠癌耐药的分子机制.方法 建立人结肠癌耐奥沙利铂(L-OHP)细胞株HCT 116/L-OHP裸鼠皮下移植瘤模型,随机分为空白组、L-OHP组、肠胃清方组、肠胃清方低剂量+L-OHP组、肠胃清方高剂量+L-OHP组.治疗结束后采用RT-PCR、免疫组织化学、Tunnel等研究肠胃清对瘤体组织中miR-30a、Beclinl、LC3的表达及细胞凋亡的影响.结果 奥沙利铂组可见Beclinl、LC3的上调,miR-30a的下调,细胞凋亡的减少.而肠胃清联用奥沙利铂组可见Beclinl、LC3的下调,miR-30a的上调,细胞凋亡的增加(P＜0.05或P＜0.01).结论 奥沙利铂诱导保护性自噬导致细胞凋亡减少可能是其耐药的机制.肠胃清可通过调控miR-30a/Beclinl通路而抑制自噬逆转结肠癌耐药.
-
血浆miR-30a对老年急性心肌梗死患者的诊断价值研究
目的 研究血浆中miR-30a对老年急性心肌梗死(AMI)患者的临床诊断价值.方法 随机选取2016年2月~2017年2月于湖北武汉市第八医院和湖北武汉市中医院进行治疗的58例老年急性心肌梗死患者和46例老年健康体检人群作为研究对象,实时荧光定量检测两组研究人群血浆miR-30a的相对表达量,ROC曲线法分析miR-30a诊断老年AMI诊断价值.结果 与健康老年人相比,老年AMI患者血清miR-30a明显升高[(0.08±0.04) vs. (0.16±0.06)],P<0.05;Pearson法分析显示,miR-30a相对表达量与血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)(r=0.721,P<0.05)和cTnI(r=0.698,P<0.05)呈正相关;ROC曲线显示,miR-30a诊断老年AMI的敏感度为84.2%,特异度为69.6%.结论 miR-30a在老年急性心肌梗死患者血清中呈现高表达,并对老年急性心肌梗死具有一定的诊断价值.
-
血浆hsa-miR-30a与高血压左室肥厚患者预后的关系
目的 探讨血浆hsa-miR-30a与高血压左室肥厚(LVH)患者预后的关系.方法 随机入选118例高血压LVH患者,分为预后良好组(n=82)和预后不良组(n=36).用real-time PCR法检测血浆hsa-miR-30a的含量.研究预后不良的高血压LVH患者血浆hsa-miR-30a的变化.用Logistic回归研究血浆hsa-miR-30a是否是高血压LVH患者预后不良的独立预测因子.结果 与预后良好组比较,预后不良组高血压LVH患者血浆hsa-miR-30a升高[(20.87±4.36)2-△ct*104比(11.24±2.15)2-△ct*104,P＜0.05].血浆hsa-miR-30a升高是高血压LVH患者预后不良的独立预测因子(OR =2.57,P＜0.05).结论 血浆hsa-miR-30a升高对高血压LVH患者预后不良有预测价值.
-
Mir-30a抑制自噬及上皮细胞间质化增强肺腺癌细胞对克唑替尼的敏感性
目的 探索上调肺腺癌细胞中Mir-30a的表达水平能否增强细胞对克唑替尼的敏感性,观察细胞增殖率的变化及克唑替尼IC50等的变化,并探索相关的机制.方法 使用Lipofectamine2000携带Mir-30a对H3122细胞进行瞬时转染,并与克唑替尼共同作用.将肺腺癌H3122细胞分为对照组、克唑替尼与联合组.MTTT法检测各组细胞增殖率变化,Transwell检测细胞侵袭性.Western blot检测ALK、c-MET、Beclin-1、E-eadherin及Vimentin蛋白的表达.结果 在H3122细胞中Mir-30a转染与克唑替尼共同作用较克唑替尼单独作用有更显著的细胞杀伤作用.转染后的细胞较单独应用克唑替尼组侵袭力减弱.转染与克唑替尼联合组Beclinl、ALK、c-MET及Vimentin的蛋白的表达有明显下降,E-cadherin稍有增强.结论 Mir-30a增强肺腺癌细胞对克唑替尼的敏感性,可能与过量表达的Mir-30a抑制癌细胞的自噬及上皮细胞间质化相关.
-
miR－30a影响MSCs的细胞周期及其对DCs的抑制作用
目的：间充质干细胞（ MSCs）是一群具有自我更新能力和多向分化潜能的多功能干细胞。已经有研究表明， miR－30a在一些免疫相关疾病的MSCs中的表达发生变化。但对于miR－30a如何调控MSCs影响其免疫调节功能还未有报道。本研究探究了miR－30a对MSCs的表型、活力、凋亡、周期和免疫调节功能的影响。方法：用混合酶法分离人脐带来源的间充质干细胞；用流式细胞仪分析了高表达miR－30a对MSCs表型的影响；用CCK－8法检测了miR－30a对MSCs的活力的影响；用Annexin V／PI双染法检测了高表达miR－30a后细胞凋亡的情况；用Q－PCR和蛋白质免疫印迹的方法检测了miR－30a对周期蛋白Cyclin E2（CCNE2）的影响；通过Targetscan预测软件分析miR－30a与CCNE2的靶向关系，并通过荧光素酶检测试验进行验证；另外通过MSCs与树突状细胞（ DCs）共培养探讨了高表达miR－30a的MSCs对DCs的成熟的影响。结果：高表达miR－30a不影响MSCs的表型、活力和凋亡，但能抑制CCNE2的表达，使细胞周期阻滞在G0／G1期；进一步通过检测DCs的CD40和CD86表达发现，与普通MSCs相比，高表达miR－30a的MSCs能明显抑制DCs的成熟。结论：miR－30a可能通过抑制CCNE2表达影响MSCs的细胞周期，且miR－30a能增强MSCs对DCs的免疫抑制作用。
-
miR-30a对实验性自身免疫性脑脊髓炎模型小鼠发病的作用
目的:探讨在体过表达miR-30a对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型小鼠脱髓鞘病变的作用.方法:构建含稳定表达miR-30a的shRNA慢病毒载体,以含有空载体的慢病毒为对照(LV-ctrl).雌性C57BL/6小鼠随机分为正常对照组(normal)、对照慢病毒(LV-ctrl)组和miR-30a慢病毒(LV-miR-30a)组,2组慢病毒经尾静脉注射,注射7d后用MOG35-55多肽免疫小鼠.Kon0 5分法检测发病情况,快蓝(LFB)染色及透射电镜检测脊髓脱髓鞘程度及髓鞘结构的变化.结果:Lv-ctrl组小鼠在MOG35-55多肽免疫的第10天开始发病,到第21天,其Kono评分为2.57±0.79,LV-miR-30a组小鼠的Kono评分显著低于LV-ctrl组小鼠;miR-30a处理可显著提高小鼠体质量增长率,同时LFB评分也较LV-ctrl组显著增加;髓鞘超微结构显示LV-ctrl组小鼠脊髓髓鞘板层松解且稀疏,而LV-miR-30a组小鼠的髓鞘结构相对完好,髓鞘厚度显著大于LV-ctrl组.结论:过表达miR-30a可以明显减缓EAE的发病,减轻脊髓脱髓鞘程度.
-
miR-30a对人乳腺癌细胞系增殖、迁移和侵袭能力的影响
目的：探讨miR-30a在人乳腺癌细胞系中的表达，及其对乳腺癌细胞系增殖、迁移和侵袭的影响，并寻找作用靶基因。方法：用qRT-PCR法检测miR-30a在人乳腺癌细胞系(MCF-7、MDA-MB-231、SK-BR3、MDA-MB-468、MDA-MB-453、T47D)和人乳腺正常上皮细胞（HBL-100）中的表达。构建miR-30a过表达的人乳腺癌细胞系MCF-7-miR-30a、MDA-MB-231-miR-30a，分别用CCK8法、transwell法检测过表达miR-30a对于乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。通过Western印迹法检测靶蛋白的表达，并通过Luciferase双荧光素酶报告系统验证其抑制作用。结果：与乳腺正常上皮细胞相比，miR-30a在人乳腺癌细胞系中均呈低表达(P<0.05)。在MCF-7、MDA-MB-231乳腺癌细胞系中过表达miR-30a后，乳腺癌细胞系的增殖、迁移和侵袭能力均有不同程度的抑制(P<0.05)。Western印迹法和双荧光素酶报告系统检测均提示，叉头盒蛋白A1（forkhead-box A1，FOXA1）为miR-30a的下游靶基因，miR-30a可靶向抑制其表达。结论：miR-30a在人乳腺癌细胞系中低表达，过表达miR-30a可不同程度抑制乳腺癌细胞系的增殖、迁移和侵袭能力。 FOXA1是miR-30a的下游靶基因。
-
儿童先天性心脏病心力衰竭与血清miR-30a水平的关系
目的：探讨血清miR-30a水平与先天性心脏病（CHD）患儿心功能的相关性及其对心力衰竭的诊断价值。方法2013年1月至2013年6月选取CHD患儿65例，依据改良Ross评分法分为心力衰竭组（40例）和无心力衰竭组（25例）。采用荧光定量PCR法测定血清miR-30a水平，超声心动图检测左室射血分数（LVEF）；Spearman相关分析分析miR-30a与改良Ross评分和LVEF的相关关系，绘制ROC曲线并计算miR-30a曲线下面积。结果心力衰竭组患儿血清miR-30a水平较无心力衰竭组显著增高，LVEF明显降低，差异有统计学意义（P均<0.001）；血清miR-30a水平与改良Ross评分呈正相关（r=0.63，P<0.01），与LVEF呈负相关（r=-0.32，P<0.01）；miR-30a诊断心力衰竭的ROC曲线下面积为0.744。结论 miR-30a与CHD患儿的心功能相关，可作为CHD合并心力衰竭的检测指标之一。
-
TGF-β上调lncRNA-ATB促进骨肉瘤细胞MG-63细胞转移的实验研究
目的:探讨lncRNA-ATB在TGF-β促进骨肉瘤细胞转移中的作用和机制.方法:用脂质体法将pro-ATB和shRNA-ATB的质粒转染到人骨肉瘤细胞MG-63细胞,用嘌呤霉素筛选稳定细胞株;用脂质体法将过表达mimics-30a或inhibitor-30a转染到MG-63细胞;Q-PCR法检测lncRNA-ATB和miR-30家族表达;Transwell法检测细胞转移能力;western blot检测ZEB1和E-cadherin蛋白表达.结果:TGF-β促进lncRNA-ATB和ZEB1蛋白表达,抑制miR-30a家族和E-cadherin蛋白表达,增加MG-63细胞转移能力;而敲低lncRNA-ATB表达后TGF-β的作用明显减弱.过表达lncRNA-ATB的MG-63细胞转移能力明显增强,ZEB1蛋白表达增加,miR-30a和E-cadherin蛋白表达下降;而mimics-30a可以抑制lncRNA-ATB的作用.相反,敲低lncRNA-ATB后,MG-63细胞转移能力和ZEB1蛋白表达明显减弱,miR-30a和E-cadherin蛋白表达增加,而inhibitor-30a可以逆转敲低lncRNA-ATB对MG-63细胞的影响.结论:TGF-β通过上调lncRNA-ATB抑制miR-30a表达,进而增加ZEB1表达及下调E-cadherin蛋白,从而促进骨肉瘤细胞转移.
关键词： 骨肉瘤细胞转移 LncRNA-ATB miR-30a TGF-β -
miR-30a与肾脏病理生理
微小核糖核苷酸(microRNA)在机体的生长发育、疾病的发生发展过程中发挥重要的调节作用.多种microRNA在维持肾脏正常功能及肾脏疾病病理中发挥功能,其中miR-30a在肾脏的发育与肾脏疾病进展中具有广泛的调节作用.现对miR-30a在肾脏病理中的作用做简要综述.
-
miR-155和miR-30a在胃癌组织中的表达及临床意义
目的 探讨胃癌组织和癌旁组织miR-155和miR-30a的表达差异及其临床意义.方法 收集手术切除的胃癌标本52例,采用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应( RT-qPCR)检测癌及癌旁组织标本miR-155和miR-30a的表达水平,分析其与临床病理的关系.结果 miR-155在胃癌组织中表达量(0.84 ±2.27)显著高于其在配对癌旁组织中的表达值(0.28 ±0.56,P＜0.05)；miR-155高表达与淋巴结转移有关(P＜0.05).miR-30a在胃癌组织中表达量(3.16±8.11)显著低于其在配对癌旁组织中的表达值(15.87±35.58,P＜0.05).miR-30a的低表达与肿瘤侵犯层次、淋巴结转移有关(P＜0.05).结论 miR-155和miR-30a与胃癌发生发展密切相关,可能成为胃癌的潜在诊断及治疗靶点.
-
高血压左心室肥厚患者血浆miR-30a表达的变化
目的 观察高血压左心室肥厚(LVH)人群中血浆miR-30a与LVH的关系,研究血浆miR-30a是否能作为高血压LVH患者临床诊断的标志物.方法 随机入选住院高血压患者中73例LVH患者和77例非LVH患者.行real-time PCR法检测血浆hsa-miR-30a的含量.用ROC曲线和Pearson相关性分析评价血浆hsa-miR-30a诊断高血压LVH的价值.结果 LVH组患者血浆hsa-miR-30a水平升高,患者血浆hsa-miR-30a水平的曲线下面积(AUC)为0.932,血浆hsa-miR-30a水平用于诊断高血压LVH有意义.确定hsa-miR-30a判断高血压LVH的佳临界点为7.267(2-△ct×104),敏感度和特异度分别为94.5％、89.6％.Pear-son相关性分析表明,患者血浆hsa-miR-30a水平与室间隔厚度(IVSd)和左室后壁厚度(LVPWd)均呈正相关(R值分别为0.636和0.637,P值均为0.000).结论 高血压LVH患者血浆hsa-miR-30a升高.血浆hsa-miR-30a水平与IVSd和LVPWd呈正相关,血浆hsa-miR-30a水平用于诊断高血压LVH有意义.
-
MicroRNA-30a在评估慢性肾衰竭血液透析效果中的作用
目的 分析microRNA-30a (miR-30a)在慢性肾衰竭患者透析前后血清中的表达差异,评价其在评估慢性肾衰竭血液透析效果中的作用.方法 选取2012年10月至2013年12月本科收治的慢性肾衰竭患者40例,分别在患者透析前后采血并获得血清样本,采用mirVana PARIS Kit提取血清样本中总RNA,利用qRT-PCR法检测miR-30a的表达,临床生化检测患者透析前后血清中肌酐(Cr)、尿素氮(Ur)及β2微球蛋白(β2-MG)的含量,表达值行曼-惠特尼U检验,工作特征曲线(ROC curve)评估miR-30a在慢性肾衰竭患者透析效果中的价值.结果 miR-30a、Ur和β2-MG在慢性肾衰竭患者透析后的表达显著低于透析前(P＜0.05,P＜0.01),ROC curve显示在患者透析后miR-30a的表达低于透析前0.25倍以上时患者可获得较好的透析效果.结论 miR-30a可作为一种潜在的评估慢性肾衰竭血液透析效果的生物标志物.
-
MicroRNA-30a在胃癌组织的表达分析及其靶基因成纤维活化蛋白α的鉴定
目的 分析microRNA-30a (miR-30a)在胃癌中的表达水平并鉴定其新的靶基因.方法 选取29例胃癌患者的肿瘤组织和癌旁组织,利用qRT-PCR检测miR-30a的表达.通过miRNA靶基因预测数据库TargetScan预测miR-30a的靶基因.构建含有miR-30a结合位点的3'UTR片段的荧光素酶载体(pMIR-FAPα),通过荧光素酶报告实验对预测靶基因进行检测.利用Western blot和qRT-PCR对预测靶基因成纤维活化蛋白α(fibroblast activation proteinα,FAPα)的表达进行检测.结果 miR-30a在胃癌组织样本中的表达明显下调,通过生物信息学预测(TargetScan)和荧光素酶实验表明miR-30a mimic 可与FAPα基因结合,qRT-PCR和Western blot结果表明miR-30a mimic可抑制FAPα mRNA和蛋白质水平的表达.结论 miR-30a在人胃癌组织样本中表达下调,FAPα是其靶基因.
