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26例喉鳞状细胞癌微卫星不稳定性及杂合性丢失研究
[目的]在喉癌易感染色体区域8p23.2、9p21.1、3p24.3筛查肿瘤相关基因,探讨CSMD1基因与喉鳞癌的相关性.[方法]在8p23.2、9p21.1、3p24.3区域选择D8S518、D8S264、D9S251、D3S2303四个微卫星多态性标记,应用聚合酶链反应(PCR)-变性聚丙烯酰胺凝胶电泳-银染法对26例喉鳞癌进行微卫星不稳定性及杂合性丢失分析.[结果]4个多态性标记中的3个有不同程度的微卫星不稳定性及杂合性丢失.其中D9S251位点MSI检出率为19%.D8S518位点LOH发生率为5%,MSI的发生率为10%,总的突变率为15%.D8S264位点MSI发生率为9.5%.[结论]8p23.2、9p21.1区域可能存在与喉鳞癌发生有关的基因,CSMD1基因可能是一个与喉鳞癌有关的抑癌基因.
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FHIT基因微卫星变异与宫颈癌关系的分析
[目的]探讨FHIT基因微卫星变异与宫颈癌的关系.[方法]选取FHIT基因的两个微卫星多态标记,采用聚合酶链反应法(PCR)对50例宫颈癌及40例宫颈上皮内瘤样病变(CIN)组织进行杂合性丢失(LOH)和微卫星不稳定性(MI)的检测.[结果]在D3S1234位点上宫颈癌的LOH发生率为46%(23/50),CIN的LOH发生率为40%(16/40),宫颈癌与CIN的LOH发生率差异无统计学意义(P>0.05),宫颈癌的MI发生率为18%(9/50),CIN的MI发生率为12.5%(5/40),差异无统计学意义(P>0.05);在D3S4103位点上宫颈癌的LOH发生率为40%(20/50),CIN的LOH发生率为37.5%(15/40),差异无统计学意义(P>0.05),宫颈癌的MI发生率为14%(7/50),CIN的MI发生率为7.5%(3/40),差异无统计学意义.但宫颈癌在两位点上LOH和MI发生频率均高于CIN,且高级别CIN发生率高于低级别CIN.[结论]FHIT基因的变异发生在宫颈癌变的晚期;FHIT基因的LOH与MI对于宫颈癌的筛查、早期诊断及判断预后可能具有临床实用价值.
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前列腺癌源于基因丢失
山西省肿瘤医院病理科主任王全红等应用显微切割法从基因水平探测前列腺癌的起源并得出了结论，揭示前列腺癌源于基因丢失。这一成果已通过山西省科委专家鉴定。前列腺癌是一种多基因组合改变的肿瘤，病理变化和临床表现多种多样，传统方法是根据癌组织形态和细胞特点判断病变原因，极不准确，往往导致治疗上的盲从，影响预后。王全红等7名研究人员依据基因理论，采用近年来发展起来的基因检测手段，用显微切割法技术，对19例前列腺癌中40个癌灶的纯DNA基因变化情况进行探测，结果发现15例多灶前列腺癌的基因系杂合性丢失，而且是体现在8号和17号染色体上，从病理上探明前列腺癌的基因变化情况，为前列腺癌的早期诊断、预防提供了科学依据，并对将来的基因治疗具有积极意义。
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食管鳞癌FRA189A处微卫星DNA杂合性丢失
检测食管癌组织FRA189A处微卫星DNA标记杂合性丢失情况,为新抑癌基因定位提供依据.[方法]应用聚合酶链式反应(PCR),结合SSLP-硝酸银染色技术以D18S978位点为遗传标记,检测和分析食管癌及癌旁组织中杂合性丢失情况.[结果]26例食管癌中23例为信息个体,杂合性丢失频率为60.8%(14/23信息个体),染色体定位于18q12.2.[结论]FRA189A处D18S978位点杂合性丢失可能与食管癌发生有关,提示此处可能存在新抑癌基因.
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肝原发性淋巴瘤抑制基因杂合性缺失分析
目的探讨肿瘤抑制基因杂合性缺失(LOH)在肝原发性淋巴瘤(PHL)发生中的作用.方法采用显微组织切割术从石蜡组织切片中提取DNA,在PCR基础上进行毛细管电泳DNA测序,对9例手术切除的PHL标本进行了视网膜母细胞瘤1基因(Rb1)、腺瘤性息肉病基因(APC)、结直肠癌突变基因(MCC)、结直肠癌缺失基因(DCC)等4种肿瘤抑制基因(TSGs)LOH检测.结果 B细胞系PHL中APC基因LOH发生率为50.0%,其余3种基因未检测到LOH,T细胞系PHL中LOH发生率为APC(33.3%)、Rb1(50.0%)、DCC(20.0%)、MCC(0.0). 结论 PHL中有较高频的APC和Rb1基因LOH,提示在PHL的形成过程中APC和Rb1基因的变异起重要作用.
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子宫颈癌FHIT基因表达与杂合性丢失
目的探讨抑癌基因FHIT基因在子宫颈癌发生中的作用及其失活的可能机制.方法选取FHIT基因内2个微卫星位点D3S1300和D3S1234,对56例经显微切割分离肿瘤组织的原发性子宫颈癌进行杂合性丢失(LOH)分析,同时采用免疫组化方法(S-P法)检测FHIT的表达情况.结果 D3S1300和D3S1234的LOH发生率分别为36.2%(17/47)、32.7%(16/49),52%(29/56)的子宫颈癌组织至少在一个位点存在LOH.57.1%的子宫颈癌FHIT表达减弱或缺失,其中71.9%存在FHIT基因LOH,FHIT低表达与FHIT基因LOH之间有相关性(P<0.01).子宫颈鳞癌组织的LOH发生率及FHIT低表达率均高于腺癌(64.3% vs 14.3%,69.0% vs 21.4%, P<0.05).子宫颈鳞癌LOH发生率及FHIT低表达与组织学分级、FIGO分期均不相关(P>0.05).结论 FHIT基因可能在子宫颈鳞癌发生中起重要作用,杂合性丢失可能是FHIT基因失活的重要机制.
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宫颈上皮内瘤样病变3p14杂合性丢失和微卫星不稳定性研究
目的探讨宫颈上皮内瘤样病变染色体3p14区域D3S1300、D3S1600LOH及MSI与宫颈上皮内瘤样病变病理分级的相关性.方法选择3p14区域两个微卫星多态性位点,显微分离提取42例宫颈上皮内瘤样病变石蜡切片中的正常组织和病变组织,经PCR扩增及聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染色,进行LOH及MSI研究.结果 42例样本中有21例至少存在一个位点的LOH,D3S1300位点LOH的频率为29%,D3S1600位点LOH的频率为26%.MSI发生频率相对较低,D3S1300的MSI频率为5.3%,D3S1600的MSI频率为7.7%.D3S1300、D3S1600位点LOH的发生率与病理分级呈正相关(CMNΧ2=7.773, P＜0.05) ,而MSI与之无相关性(CMNΧ2=1.432, P＞0.05 ).结论 3p14区域内D3S1300、D3S1600位点具有较高的LOH,提示这两个微卫星位点附近可能存在尚未克隆的与宫颈上皮内瘤样病变发生、发展相关的肿瘤抑制基因.宫颈上皮内瘤样病变染色体3p14区域LOH与病理分级成正相关,提示检测该区域的LOH可作为病变进展及预后的重要参考指标.
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宫颈上皮肉瘤样病变杂合性丢失和微卫星不稳定性研究进展
宫颈上皮肉瘤样病变(CIN)是一组与浸润癌密切相关的癌前期病变,包括宫颈癌前期病变和原位癌,反映了宫颈癌(CC)连续发展的过程,即由宫颈不典型增生(轻→中→重)→原位癌-→早期浸润癌→浸润癌的一系列病理变化.近年来随着分子生物学技术的飞速发展,已认识到癌基因及抑癌基因的异常改变在人类恶性肿瘤的发生发展中起着重要的作用,尤其是抑癌基因功能丧失越来越受到人们的重视.本文就CIN和CC组织中杂合性丢失(LOH)和微卫星不稳定性(MSI)的研究现状综述如下.
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子宫内膜癌患者FHIT、SLIT2、EDNRB基因杂合性丢失
目的:探讨子宫内膜癌患者FHT、SLrr2、EDNRB基因3个微卫星位点D3S1287、D4S1593、D13S160杂合性丢失(loss of heterozygosity,LOH),以确定侯选的抑癌基因.方法:应用PCR-变性PAGE-银染方法分别对35例子宫内膜癌患者癌组织及相对应的正常子宫内膜组织在FHIT、SLIT2、EDNRB基因3个微卫星位点D3S1287、D4S1593、D13S160行LOH检测.结果:LOH总检出率为54.3%,D3S1287、ID4S1593、D13S160位点分别为34.5%、20.5%、19.3%.FHIT、SLIT2、EDNRB基因的3个微卫星位点发生LOH率与子宫内膜癌手术-病理分期无明显相关性.结论:子宫内膜癌患者肿瘤组织在FHIT、SLIT2、及EDNRB基因的微卫星位点D3S1287、D4S1593、D13S160均有LOH.FHIT、SLIT2及EDNRB基因为抑癌基因,其失活可能与子宫内膜癌的发生有关.
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胃癌组织中琥珀酸脱氢酶基因周围微卫星杂合性丢失的研究
①目的研究胃癌组织中由核DNA编码的琥珀酸脱氢酶(SDHD)基因位点的改变情况.②方法选取与SDHD基因紧密连锁的3个微卫星D11S5017、D11S1347和D11S1328,通过PCR-SSLP的方法检测了35例新鲜胃癌组织中3个微卫星位点的杂合性丢失(LOH)情况.③结果胃癌组织中,D11S5017位点LOH检出率为12.0%,D11S1347位点LOH检出率为10.0%,D11S1328位点LOH检出率为14.3%.3个位点LOH总检出率为19.4%.④结论在胃癌组织中存在着在SDHD基因LOH的现象,说明了它可能是胃癌中的一种特殊类型的肿瘤抑制因子.
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急性白血病p16基因微卫星不稳定性及杂和性缺失的研究
目的 分析急性白血病(AL)患者p16基因连锁的微卫星不稳定性(MSI)和杂和性缺失(LOH),了解p16基因改变与AL发生的关系.方法 采用多重PCR方法检测53例AL患者骨髓及口腔黏膜细胞标本的p16基因连锁的3个微卫星位点(D9S162、D9S1748、D9S171),观察其MSI及LOH情况.结果 53例AL患者中,MSI检出率为43.4%(23/53);位于9p21的p16基因连锁的微卫星D9S162、D9S1748、D9S171的LOH发生率分别为0(0/53)、5.7%(3/53)和9.4%(5/53),MSI发生率分别为13.2%(7/53)、7.6%(4/53)和7.6%(4/53).结论 AL患者p16基因连锁微卫星均可检测到高频率的MSI和LOH,说明p16基因突变与AL发生、发展有关.
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视网膜母细胞瘤中p73基因杂合性丢失
目的探讨在视网膜母细胞瘤(retinoblastoma,RB)中是否存在p73基因杂合性丢失现象及其是否与RB的临床分期有关.方法采用单链构型多态性分析法(single strand conformation polymorphism,PCR-SSCP),对30例RB石蜡标本进行p73基因杂合性丢失的检测.结果 30例RB中有4例存在p73基因杂合性丢失现象(13.33%),p73基因杂合性丢失现象与RB的临床分期无显著性联系.结论在RB中存在p73基因的杂合性丢失现象,与其他人类肿瘤中p73基因杂合性丢失现象频率相近.p73基因杂合性丢失现象与RB的临床分期无显著性联系.
关键词： p73基因 杂合性丢失 单链构型多态性分析法 视网膜母细胞瘤 -
多重置换扩增结合激光捕获显微切割技术在胃癌基因组学研究中的应用
目的 探讨多重置换扩增(MDA)与激光捕获显微切割(LCM)技术相结合,并应用到胃癌细胞杂合性丢失(LOH)分析等研究的可行性.方法 利用LCM技术从胃癌组织冰冻切片中分别获取正常胃黏膜细胞和胃癌细胞,提取基因组DNA后,进行全基因组多重置换扩增.进而,将MDA产物用于聚合酶链反应(PCR)扩增ACE2、TP53和ACTB基因片段,以及微卫星位点的LOH分析.结果 位于不同染色体的3个基因片段均得到较好的扩增,而且MDA产物的扩增效率明显高于未经MDA的基因组DNA.另外,MDA产物的LOH分析结果与未经MDA的基因组DNA结果一致.结论 MDA与LCM技术相结合,是一种可行的全基因组扩增技术路线,可用于后续的基因组学研究.
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DPC4基因在胃癌中的丢失突变研究
我们应用聚合酶链反应-简单重复序列长度多态性(PCR-SSLP)和聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)等方法,对30例胃癌DPC4基因的杂合性丢失和突变状况进行研究,探讨该基因在胃癌发生中的作用.
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食管鳞状经胞癌染色体13q12-13杂合性丢失
目的分析食管鳞状细胞癌(ESCC)在13号染色体长臂12-13区(13q12-13)上的等位基因杂合性丢失(LOH),以期寻找13q12-13区上可能存在的与ESCC有关肿瘤抑制基因(TSG)的缺失区域.方法用8个位于13q12-13区的微卫星标志物,对56例ESCC患者进行PCR-LOH分析,56例ESCC患者包括34例有上消化道癌家族史,22例无上消化道癌家族史.结果56例ESCC患者中,48例(86%)显示一个或更多位点LOH;并发现一个LOH高频率区,位于位点D13S267和D13D219之间,物理距离仅有2.83Mb;在位点D13S1242有上消化道癌家族史组LOH为68%,明显高于无上消化道癌家族史组的18%,(P=0.003);在位点D13S289有上消化道癌家族史组LOH为82%,明显高于无上消化道癌家族史组的31%(P=0.008),有显著意义.结论研究提示染色体13q12-13的LOH可能在食管癌发生发展中起重要作用,在染色体13q12-13区上,可能存在一个或多个与ESCC发生发展有关肿瘤抑制基因(TSG).
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食管鳞癌3p14.2-14.1上缺失区的检测
目的 寻找食管鳞癌(ESCC)的3号染色体短臂(3p)上微小重叠缺失区,为筛选与ESCC发病相关的肿瘤抑制基因提供实验依据.方法 采用微卫星分析方法检测食管鳞癌及其配对的癌旁正常组织杂合性丢失情况.结果 食管癌中5个分布在3p21.1-p13区域的微卫星标志出现高频改变,连锁分析发现这一区域存在一个微小重叠缺失区,该区分布在3p14.2 p14.1,介于D3S2452、D3S3040和D3S1766之间,大小约283 kb.结论 在3p14.2-p14.1区域可能存在一些新的肿瘤抑制基因,可进一步在此区域作ESCC相关基因研究.
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胶质母细胞瘤6号、8号染色体杂合性丢失的初步研究
目的寻找胶质母细胞瘤(GBM)6号、8号染色体上可能存在肿瘤抑制基因的杂合性丢失(LOH)区域,为发现和定位肿瘤抑制基因(TSG)提供线索和依据.方法应用PCR方法和DNA序列自动分析仪,分析了21例GBM 6号、8号染色体上20个、14个微卫星多态性标记的LOH.结果6号染色体的LOH率为47.6%,在28.1%能提供信息位点上检测到了LOH.其中,6p和6q的LOH率分别是28.6%、38.1%,在6qtel 上距短臂端粒201.1cM的微卫星位点D6S281检测到了较高的LOH率(50%),6q16.3上D6S287的LOH率也高达50%,另外,6p21.1-p21.3上D6S276的LOH率也较高(35.3%).本组病例的8号染色体LOH率较低(23.8%),在16.3%能提供信息位点检测到LOH.其中8p12-p22上D8S550和D8S549的LOH率较高,分别是27.8%、30.0%.结论6号染色体分子遗传学变化可能在GBM的发病中起着重要作用,8号染色体异常改变所起的作用可能不如6号染色体重要,但在8p12-p22上D8S550-D8S549位点间区域也有可能存在与GBM相关的TSG.
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食管鳞癌MLH1基因杂合性丢失分析
目的hMLH1是位于3p23-21.3上的一个DNA错配修复基因,有研究认为MLH1的缺失较为多见,本研究旨在了解食管鳞癌中MLH1基因杂合性丢失情况.方法用微卫星分析法检测食管鳞癌中MLH1基因丢失情况.结果66.7%的受检食管鳞癌在MLH1基因内STS标志D3S1611位点表现为杂合性丢失.结论食管鳞癌中MLH1存在较高的等位基因丢失,MLH1可能是食管鳞癌基因改变的靶点.
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食管鳞癌3p14.2-14.1上一个新的重叠缺失区
目的 食管鳞癌(ESCC)3号染色体短臂(3p)经常发生DAN拷贝数的丢失,分析ESCC的3p上微小重叠缺失区以为筛选与ESCC发病相关的肿瘤抑制基因提供实验依据.方法 用微卫星分析方法观察食管鳞癌及其配对的癌旁正常组织以评估其杂合性丢失( LOH)情况.结果 和正常食管组织比较,食管癌中7个分布在3p21.1-p13区域的微卫星标记中出现高频改变,存在一个微小重叠缺失区,该区分布在3p14.2-p14.1,介于D3S3571,D3S4542和D3S3644之间,大小约373kb.结论 在3p14.2-p14.1区域可能存在一些肿瘤抑制基因,提示可进一步在此区域作ESCC相关基因研究.
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原发性胃癌SMAD2杂合性丢失的研究
目的探讨原发性胃癌中SMAD2杂合性丢失(LOH)的情况及其与胃癌临床病理学之间的关系.方法用多聚酶链反应-单链构相多态性 (PCR-SSCP) 银染法分析50例原发性胃癌SMAD2的LOH.结果 D18S450位点发生LOH的频率为48.9%(22/45),D18S460为33.3%(16/48);SMAD2发生LOH的频率为55.1%(27/49).在25例淋巴结有转移的胃癌中,18例(72%)发生SMAD2 LOH;24例无转移者中,9例(37.5%)发生SMAD2 LOH(P＜0.05).在24例TNM Ⅲ期和Ⅳ期原发性胃癌中,有17例(70.8%)发生 SMAD2 LOH;而25例TNMⅠ期和Ⅱ期原发性胃癌中,仅10例(40.0%)发生SMAD2 LOH (P＜0.05).SMAD2与患者的性别,年龄,肿瘤的部位、大小、组织学分级,Lauren及Borrmann分型均无明显相关(P>0.05).结论 SMAD2的LOH可能在胃癌的发展和转移中起重要作用,是胃癌发展后期的重要分子事件.
