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肿瘤坏死因子α致HUVECs内皮型一氧化氮合酶降解
目的 研究肿瘤坏死因子-α(TNF-α)是否可以通过细胞内蛋白质降解途径引起人脐静脉内皮细胞(HUVECs)内皮型一氧化氮合酶(eNOS)的蛋白量减少.方法 建立原代HUVECs培养,选取TNF-α不同浓度(0.01、0.1、1和10 ng/mL)、不同时间(24、48和72 h)处理HUVECs;溶酶体抑制剂氯化铵(NH4Cl)、caspase 抑制剂(caspase inhibitor)和泛素-蛋白酶体抑制剂(MG-132)预处理HUVECs 1.5 h后加入TNF-α(1 ng/mL)共处理 24 h,Western blot方法检测HUVECs中eNOS蛋白表达.结果 与对照组比较,1 ng/mL TNF-α处理细胞24 h,eNOS蛋白量明显减少(P<0.01);MG-132与TNF-α共处理组,eNOS蛋白量明显增加(P<0.01).结论 TNF-α可以通过泛素-蛋白酶体途径引起eNOS蛋白降解.
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蛋白酶体抑制剂MG-132改善大鼠心肌梗死后心肌肥厚
目的 探讨蛋白酶体抑制剂MG-132对大鼠心肌梗死后心肌细胞肥大的影响及机制.方法 制作大鼠心肌梗死模型,随机分为MG-132干预(MG)组和心肌梗死(MI)组,另设假手术(sham)组,每组6只.MG组于术后24 h腹腔注射MG-132[0.1 mg/(kg·d)],MI组及SH组注射0.9％氯化钠注射液对照.连续给药28 d后超声检测心脏左室后壁厚度；称取左室重量,计算左室质量指数；计算非梗死区心肌细胞面积、周长及平均直径.RT-PCR和免疫组化分别检测核转录因子-κB P65 (NF-κB P65)及白介素-1β(IL-1β)的mRNA和蛋白质表达量.结果 与SH组比较,MI组和MG组的左室后壁厚度、左室质量指数、心肌细胞的直径、周长和表面积明显增大,NF-κB P65和IL-1β的mRNA及蛋白质表达量明显增加(P＜0.01).MG组的上述指标明显低于MI组(P＜0.01).结论 MG-132在一定程度上能改善大鼠心梗后心肌细胞肥大,其机制可能与抑制NF-κB激活,下调炎性细胞因子如IL-1β表达有关.
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TSA诱导MOLT-4细胞中p21WAF1/Cip-1表达的功能机制研究
为了研究去乙酰化酶抑制剂TSA诱导MOLT-4细胞周期阻滞和凋亡反应中p21WAF1/Cip-1的表达及其功能,以组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA处理急性淋巴细胞白血病细胞系MOLT-4,流式细胞仪和细胞吖啶橙染色、瑞士染色检测细胞周期和凋亡,Western检测p21WAF1/Cip-1的表达.结果表明:组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA可有效的诱导MOLT-4细胞发生G2/M阻滞和凋亡,并且呈现明显的剂量效应关系和时间效应关系;在此周期阻滞与凋亡反应过程中,p21WAF1/Cip-1蛋白的表达水平在周期阻滞前快速增高,而在凋亡早期开始下降.p21WAF1/Cip-1分子在细胞中的表达规律与TSA诱导的细胞G2/M阻滞和凋亡反应间存在明显的剂量效应关系和时间效应关系;蛋白酶体抑制剂MG-132提升p21WAF1/Cip-1分子在细胞中的表达可以增进细胞的G2/M阻滞反应而延缓凋亡.结论:蛋白酶体途径参与TSA诱导的MOLT-4细胞周期阻滞向凋亡转换过程中p21WAF1/Cip-1分子的降解调控;p21WAF1/Cip-1在TSA诱导的MOLT-4细胞G1/M阻滞和凋亡反应中起着重要调节作用.
关键词： TSA MOLT-4细胞 p21WAF1/Cip-1 G2/M阻滞 MG-132 -
不同剂量蛋白酶体抑制剂MG-132在诱导K562细胞株凋亡中的作用
本研究探讨不同剂量蛋白酶体抑制剂MG-132对人慢性粒细胞白血病急性红白血病细胞株K562的干预作用.应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测不同剂量(0、2、4、8、16、32 μmol/L)的MG-132作用48小时对K562细胞株增殖的影响;应用免疫细胞组织化学法检测相同条件下MG-132对K562细胞株中的核因子-κB(NF-κB)及糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor,GR)表达的影响;采用流式细胞术检测相同条件下MG-132对K562细胞株凋亡的影响.结果表明:不同剂量的MG-132作用48小时后K562细胞株的抑制率呈剂量依赖性,实验组的抑制率明显高于对照组,以32 μmol/L剂量组的抑制率高,为(45.24±4.12)%;K562细胞株中的NF-κB、GR的表达水平均表现出对MG-132剂量的依赖性,NF-κB的表达水平实验组明显低于对照组,以32 μmol/L剂量组表达低,为63.60±2.95.GR在16 μmol/L剂量组表达高,为75.62±2.70.K562细胞株的凋亡率亦表现出对MG-132剂量的依赖性,而且在实验组明显高于对照组,以32 μmol/L剂量组的凋亡率高,为(21.37±2.02)%.结论:MG-132可能是通过下调NF-κB、上调GR的表达诱导了K562细胞的凋亡和抑制,其效应表现为剂量的依赖性.
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蛋白酶体抑制剂MG-132诱导L1210细胞凋亡及其机制研究
为了观察蛋白酶体抑制剂MG-132对淋巴细胞白血病细胞株L1210的致凋亡作用.探讨MG-132的致凋亡机制,分别以不同浓度的蛋白酶体抑制剂MG-132处理L1210细胞,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞活力,应用Annexin-V和PI双染色细胞流式细胞术检测细胞凋亡率,比色法测定细胞中caspase 3的活性,采用Westernblot法检测细胞NF-κB P65核蛋白的表达.结果表明:在相同的作用时间下,随着MG-132浓度的增高(0、2.5、5、10、加μmol/L),细胞增殖抑制率、凋亡率、caspase 3活性逐渐升高;Western-blot法检测显示,细胞NF-κB P65核蛋白表达水平降低.结论:蛋白酶体抑制剂能够诱导L1210细胞凋亡,其机制可能是通过下调NF-κB的表达,进一步活化caspase 3的活性而诱导凋亡.
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核转录因子NF-κB在TRAIL诱导肝癌细胞凋亡中作用的研究
目的 初步探讨核转录因子NF-κB在TRAIL诱导肝癌细胞发生凋亡过程中的作用和可能机制.方法 应用流式细胞仪技术检测经TRAII和(或)MG-132处理后,肝癌细胞SMMC-7721凋亡发生情况;采用蛋白印渍技术检测TRAIL处理后SMMC-7721细胞凋亡相关蛋白表达情况;并用ELISA法检测NF-κB活性变化.结果 单独使用TRAIL后,肝癌细胞发生凋亡,其凋亡指数为15.1%;若联合应用NF-κB抑制剂MG-132后,则凋亡指数达27.4%,明显高于前者(P＜0.01);同时,两者均高于对照组(P＜0.01).SMMC-7721细胞经TRAIL处理后,抗凋亡蛋白表达增加,而促凋亡蛋白表达下降.另外,经TRAIL单独处理后,细胞的NF-κB活性(0.49±0.02)明显高于其余各组(P＜0.01).结论 NF-κB在TRAIL诱导的肝癌细胞凋亡过程中被激活,而NF-κB又可能通过促进抗凋亡蛋白的表达、抑制促凋亡蛋白的表达,从而抑制肿瘤细胞的凋亡.
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泛素蛋白酶体抑制剂MG-132对高氧肺损伤大鼠肺上皮细胞凋亡的影响
目的 观察泛素蛋白酶体抑制剂MG-132对高氧肺损伤大鼠肺上皮细胞凋亡的影响并初步探讨相关机制.方法 实验采用完全随机设计.将26只SD大鼠分为4组:高氧组(n=8)、高氧+MG-132组(n=8)、空气对照组(n=5)、MG-132对照组(n=5).成功制备高氧肺损伤大鼠模型后,观察肺组织病理学改变,TUNEL法检测细胞凋亡,免疫组化法检测Bax、Bcl-2蛋白的表达并计算Bcl.2/Bax值.结果 高氧组SD大鼠肺组织可见明显急性炎症反应.高氧组、高氧+MG-132组的凋亡指数分别为66.76±7.64、34.78±4.40,明显高于空气组与MG-132对照组(14.48±1.75、12.88±1.95),但高氧+MG-132组的凋亡指数要低于高氧组,差异有显著性(P<0.05).高氧+MG-132组Bcl-2/Bax值(1.22±0.15)高于高氧组(0.87±0.11),差异有显著性(P<0.05).结论 高氧诱发肺组织细胞发生凋亡,蛋白酶体抑制剂MG-132可以通过调节Bcl-2与Bax的表达减轻高氧引起的细胞凋亡.
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内质网应激表达在蛋白酶抑制剂MG-132诱导人类脑胶质瘤细胞凋亡中的作用
目的 探讨内质网应激(ERS)指标在MG-132诱导人类脑胶质瘤细胞SHG-44凋亡中的作用.方法 通过传代法培养人类脑胶质瘤细胞,选择MG-132处理24 h,采用处理前(对照组)和不同浓度(5、10、15、50 μmol/L)处理后的胶质瘤细胞,用MTT比色法榆测细胞活力,RT-PCR和Western blotting方法检测ERS指标GRP78和凋亡指标Caspase-12的表达.结果 MTT比色法检测结果显示,MG-132处理24 h后,SHG-44细胞活力明显下降(39%)(P<0.05),且随着MG-132浓度的加大,继续呈现显著下降的趋势(P<0.05).RT-PCR结果显示,经过MG-132处理24h后,SHG-44细胞ERS相关蛋白GRP 78表达5、10、15、50 μmol/L处理后显著增加,Caspase-12表达在经5 μmol/L处理后显著增加,10、15 μmol/L处理后表达较5 μmol/L处理后增加不明显,50 μmol/L处理后与5、10、15 μmol/L3组比较差异有统计学意义.Western blotting结果显示,ERS相关蛋白GRP78表达在经5 μmol/L处理后显著增加,10、15 μmol/L处理后表达较5 μmol/L处理后增加不明显,50 μmol/L处理后达高峰.结论 在MG-132处理诱导胶质瘤细胞凋亡的过程中,ERS是发挥作用的主要通路之一.
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MG-132活化人支气管上皮细胞表达IL-6
目的探讨核因子(NF-κB)抑制剂MG-132对支气管上皮细胞释放细胞因子白细胞介素(IL)-6的影响.方法人支气管上皮细胞系BEAS-2B细胞与MG-132(10μmol·L-1)共同培养12h,细胞核中NF-κB活性和细胞培养上清液中IL-6浓度用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法定量,BEAS-2B细胞总IL-6 mRNA表达,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)分析.结果 BEAS-2B细胞与MG-132共同培养过程中,BEAS-2B细胞IL-6 mRNA上调,细胞培养上清液中IL-6释放量显著增加,而且IL-6增加量与细胞培养液中MG-132浓度呈正相关,但与NF-κB活性无关.结论 MG-132可诱导BEAS-2B细胞释放IL-6,但不是通过NF-κB活化途径.
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激光共聚焦显微镜观测蛋白酶抑制剂MG-132诱导人脑胶质瘤细胞凋亡的研究
目的 探讨MG-132诱导人脑胶质瘤细胞SHG-44损伤中钙超载的作用.方法 通过传代方法 培养人脑胶质瘤细胞.选取MG-132处理24小时,采用处理前(对照组)和不同浓度(5、10,1 5、50μmol/L)处理后的胶质瘤细胞,采用MTT比色法检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,激光共聚焦检测细胞内钙离子荧光强度.结果 MTT比色法检测发现,MG-132处理24h后,SHG-44细胞活力明显下降43%(P<0.05),且随着MG-152浓度的加大,继续呈现显著下降的趋势(P<0.05).流式细胞仪检测结果 发现,与对照组比较,MG-132作用24h后.各组细胞凋亡率显著升高(P<0.05),5、10,15μmol/L组细胞调往情况相似(P>0.05),但50 μmol/L细胞凋亡率升高较为明显(P<0.05).激光共聚焦测钙离子荧光强度结果 显示,与空白对照组相比钙离子荧光强度明显升高(P<0.05),5、10,15μmol/L组钙离子荧光强度相似(P>0.05),但50μmol/L细胞钙离子荧光强度明显升高(P<0.05).结论 MG-132处理可以通过激发细胞内钙超载诱导胶质瘤细胞凋亡.
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MG-132对雨蛙肽诱导的急性胰腺炎小鼠细胞间黏附分子1表达的影响
目的 研究蛋白酶体抑制剂MG-132对雨蛙肽诱导的急性胰腺炎(AP)小鼠核因子κB(NF-κB)与细胞间黏附分子1(ICAM-1)表达的影响.方法 45只BalB/c小鼠按随机数字表法分为9组,即对照3、6、12 h组,AP3、6、12 h组和MG-132 3、6、12 h组,每组5只.AP组小鼠雨蛙肽100μg/kg腹腔内注射诱导,1次/h,共6次.对照组则腹腔内注射相同剂的生理盐水.MG-132组在AP诱导前30 min腹腔注射MG-132 10 mg/ks.检测血清淀粉酶和可溶性ICAM-1(sICAM-1)的浓度变化,观察胰腺的病理学变化,经免疫组化法检测胰腺组织中NF-κB的表达,采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测胰腺组织中ICAM-1 mRNA的表达.结果 MG-132各组血清淀粉酶(U/L)、血清sICAM-1(pg/ml)的浓度均低于相应时间点AP各组(1629±59、1794±123、2910±152比1282±61、1525±103、1809±117,133±10、157±10、217±43比106±6、135±4、163±19,P<0.05或P<0.01),MG-132各组胰腺组织的病理评分均分别低于相应时间点AP各组(5.7±1.0、7.1±1.2、9.6±2.1比3.2±1.0、5.3±1.0、6.9±0.8,P<0.05或P<0.01),MG-132组胰腺组织中NF-κB蛋白表达及ICAM-1 mRNA的表达均明显低于相应时间点AP各组(3.8±1.1、4.6±1.2、6.7±0.4比1.9±0.6、3.1±1.0、4.7±1.0,0.3±0.1、1.0±0.2、1.2±1.0比0.3±0.2、1.8±0.2、2.1±0.2,P<0.05或P<0.01)的表达.结论 蛋白酶体抑制剂MG-132对雨蛙肽诱导的AP具有保护作用,其机制可能与抑制NF-κB的活化、下调包括黏附分子在内的细胞因子的表达有关.
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蛋白酶体抑制剂MG-132逆转人结肠癌细胞获得性TRAIL耐药
目的:探讨蛋白酶体抑制剂MG-132逆转人结肠癌细胞获得性TRAIL耐药的作用及其可能的机制.方法:在MG-132和TRAIL蛋白联合处理获得性TRAIL耐药的人结肠癌细胞DLD1-TRAIL/R后,MTT法检测细胞的存活率,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blotting检测细胞中各种凋亡相关蛋白的表达和JNK激酶的磷酸化水平.结果:MG-132联合TRAIL蛋白处理DLD1-TRAIL/R细胞后,其细胞存活率明显下降(P<0.01),而细胞凋亡率则明显增加(P<0.01).Western blotting检测显示,联合处理后DLD1-TRAIL/R细胞中各种凋亡信号分子包括caspase-8、caspase-9、caspase-3、Bid和PARP蛋白均明显活化,线粒体中细胞色素C和Smac蛋白大量释放;进一步的Western blotting检测显示,死亡受体DR5和凋亡诱导蛋白Bik的表达水平明显增高,而其他凋亡信号分子包括DR4、Bax、Bak、Bcl-XL、XIAP和Survivin等则无明显改变;检测结果还显示,MG-132能诱导JNK激酶发生磷酸化,使用JNK激酶抑制剂SP600125能够阻断MG-132诱导的DR5表达,但不影响Bik的表达,并且不能减弱MG-132和TRAIL蛋白联合处理对DLD1-TRAIL/R细胞的致凋亡效应(P<0.05).结论:蛋白酶体抑制剂MG-132能逆转人结肠癌细胞DLD1-TRAIL/R的获得性TRAIL耐药,其机制可能与Bik蛋白上调后启动线粒体凋亡途径有关,与JNK通路激活无关.
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MG-132诱导Tca-8113细胞凋亡的机制探讨
目的:探讨内质网应激在蛋白酶抑制剂MG-132诱导人舌鳞癌细胞株Tca-8113细胞凋亡中的作用.方法:使用含10%胎牛血清的RPMI-1640培养基常规培养Tca-8113细胞,实验分为5组,3个实验组分别加入MG-132,终浓度为10.0、20.0、30.0μmol/L;阳性对照组加入毒胡萝卜素,终浓度为5.0μmol/L;阴性对照组加入1640培养液.培养24h后,Hoechst 33258 染色法观察凋亡细胞形态学变化:Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率,RT-PCR检测GRP78 mRNA,Western 印迹检测caspase-12 蛋白的表达,ELISA 法检测人泛素蛋白连接酶E3浓度.应用SPSS16.0软件包对结果进行统计学分析.结果:MG-132作用Tca-8113细胞24 h后,细胞出现典型的凋亡形态;MG-132实验组细胞凋亡率随MG-132浓度升高而逐渐升高,存在浓度依赖性;MG-132 组 GRP78 的 mRNA 及caspase-12蛋白表达增强;MG-132 组人泛素连接酶E3的浓度分别为28.75±2.28、18.16±0.65、8.85±0.72.结论:MG-132可通过内质网应激途径诱导Tca-8113细胞的凋亡,MG-132可抑制人泛素连接酶E3的表达.
关键词： 泛素-蛋白酶体抑制剂 MG-132 内质网应激 Tca-8113细胞 凋亡 E3 -
泛素-蛋白酶体抑制剂MG-132对胃癌细胞增殖和凋亡的影响
目的:研究泛素-蛋白酶体抑制剂对胃癌细胞增殖和凋亡的影响.方法:将泛素-蛋白酶体抑制剂MG-132加入胃癌细胞SGC-7901,用四氮唑蓝(MTT)法测定细胞生长抑制效应,流式细胞仪检测细胞凋亡,免疫细胞化学检测生存素的表达.结果:MG-132对胃癌细胞有显著的抑制作用,24,48 h的IC50分别为80.9,9.1 μmol·L-1;MG-1325.0 μmol·L-1作用胃癌细胞24,48,72,96 h后,细胞凋亡率分别为(4.2±s 0.6)%,(30±4)%,(47±6)%,(53±6)%,生存素在胃癌细胞中呈高表达,经MG-132作用后,表达明显降低.结论:MG132能显著抑制胃癌细胞的增殖、诱导其凋亡,并下调生存素的表达.
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MG-132对缺氧、血清饥饿诱导的MSCs凋亡和旁分泌的影响
本研究采用缺氧、血清饥饿(hypoxia and serum deprivation,H/SD)联合处理骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs),模拟MSCs移植的心脏缺血微环境,研究蛋白酶体抑制剂MG-132对H/SD诱导的MSCs凋亡和旁分泌的影响.采用Annexin V/PI流式细胞术检测细胞凋亡,real-time PCR检测白介素-1β (IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-10 (IL-10)mRNA表达,免疫荧光染色检测NF-κBp65细胞核转位,Western blot检测IL-1β和TNF-α蛋白表达,ELISA检测IL-10细胞分泌.结果显示,MG-132能够抑制H/SD诱导的MSCs凋亡,并通过抑制NF-κBp65细胞核转位抑制IL-1β和TNF-α mRNA转录；MG-132能够明显增强H/SD诱导的IL-10 mRNA转录和IL-10分泌.上述结果提示,MG-132能够抑制缺血诱导的MSCs凋亡和炎症因子IL-1β和TNF-α表达,增强抗炎症因子IL-10的分泌.MG-132预处理有可能成为提高MSCs移植存活率、增强MSCs旁分泌效应的有效策略.
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MG-132对CVB3病毒性心肌炎小鼠心肌细胞凋亡因子的作用研究
目的:观察蛋白酶体抑制剂MG-132对病毒性心肌炎小鼠心肌细胞凋亡因子的作用,进一步探讨泛素蛋白酶体系统在病毒性心肌炎凋亡过程中的具体机制.方法:随机将90只雄性BALB/C小鼠分为3组:正常对照组(n=30),心肌炎组(n=30),心肌炎+ MG-132处理组(n=30).腹腔接种柯萨奇B3病毒(CVB3)诱发急性心肌炎,次日处理组分别腹腔注射蛋白酶体抑制剂MG-132,连续给药7d;对照组及心肌炎组腹腔注射DMSO溶剂.第14天观察小鼠存活率、心功能指标、心肌病理及心肌细胞凋亡因子变化.结果:与心肌炎组相比,MG-132组核因子-κB水平显著降低(P＜0.05),促凋亡因子Bax水平明显降低(P＜0.05),抑制凋亡因子Bcl-2水平明显上调(P＜0.05),Bcl-2/Bax比值显著增加(P＜0.05).与心肌炎组相比,MG-132处理组显著减少心肌炎小鼠心肌细胞凋亡、改善血流动力学状况及生存率.结论:蛋白酶体抑制剂MG-132通过下调核因子-κB和Bax、上调Bcl-2水平,抑制急性病毒性心肌炎小鼠心肌细胞凋亡,改善心功能及生存率,具有心肌保护作用.
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蛋白酶体抑制剂减少病毒性心肌炎小鼠炎症因子IL-6和TNF-α的表达
目的:研究泛素蛋白酶体抑制剂对病毒性心肌炎小鼠炎症反应的作用,探讨泛素蛋白酶体系统在病毒性心肌炎发病中的作用机制.方法:将100只雄性BALB/C小鼠随机分为正常对照组,心肌炎组,心肌炎+ bortezomib处理组与心肌炎+ MG-132处理组,每组各25只.腹腔接种柯萨奇B3病毒(CVB3)诱发急性心肌炎,次日处理组分别腹腔注射蛋白酶体抑制剂bortezomib或者MG-132,连续给药7d;对照组腹腔注射空白溶剂.第8天小鼠取材,观察心肌组织的炎症病理改变,电镜观察心肌细胞的超微结构改变,ELISA法检测心肌组织炎症因子IL-6、TNF-α的蛋白表达水平,嗜中性多型核白细胞(polymorphonuclear neutrophils,PMN)计数以及各组存活率.结果:与正常对照组相比,心肌炎组的IL-6、TNF-α水平,PMN计数均显著增加(P＜0.05).电镜下观察可见心肌炎组弥漫性心肌细胞肿胀、大量肌丝溶解线粒体肿胀空化.与心肌炎组相比,心肌炎+ bortezomib处理组及MG-132处理组炎症因子的表达及PMN的浸润显著减少,心肌细胞损伤程度明显减轻,生存率显著提高(P＜0.05).结论:泛素蛋白酶体抑制剂通过降低CVB3心肌炎小鼠心肌组织中炎症因子的表达,减轻心肌损伤,提高生存率.泛素蛋白酶体系统参与了CVB3心肌炎的发病过程,此酶体系统可能是急性病毒性心肌炎治疗的潜在靶点.
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蛋白酶体抑制剂MG-132对VMC小鼠氧化应激和凋亡的影响
目的:研究泛素蛋白酶体抑制剂MG-132对病毒性心肌炎(viral myocarditis,VMC)小鼠氧化应激和凋亡的作用,探讨泛素蛋白酶体系统在病毒性心肌炎发病学中的作用机制.方法:随机将90只雄性BALB/C小鼠分为3组:正常对照组(n=30),心肌炎组(n=30),心肌炎+ MG-132处理组(n=30).腹腔接种柯萨奇B3病毒诱发急性心肌炎,MG-132处理组腹腔注射MG-132(0.75 mg/kg),连续给药7d;对照组及心肌炎组腹腔注射DMSO溶剂.于第7天及第14天小鼠取材,观察心肌组织的病理改变,测定过氧化物丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平,心肌凋亡变化以及各组存活率.结果:与正常对照组相比,心肌炎组小鼠MDA增高而SOD降低(P＜0.01);心肌炎组的凋亡执行因子Caspase3水平及凋亡指数明显升高(P＜0.01);同时小鼠死亡率显著增加.与心肌炎组相比,心肌炎+ MG-132处理组第7天小鼠MDA水平有降低趋势但无统计学意义,SOD水平增加(P＜0.05),第14天MDA水平降低(P＜0.01),SOD水平增加(P＜0.01);另外MG-132干预后Caspase3水平及凋亡指数明显下降(P＜0.01),小鼠的死亡率减低,心脏病理损伤减轻明显(P＜0.05).结论:MG-132抑制泛素蛋白酶体系统可以减轻CVB3心肌炎小鼠氧化应激损伤及凋亡,具有心肌保护作用.泛素蛋白酶体系统参与了CVB3心肌炎的发病过程,泛素蛋白酶体抑制剂可能为急性病毒性心肌炎提供一种崭新的治疗方法.
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蛋白酶体抑制剂MG-132对柯萨奇B3病毒性心肌炎小鼠的作用研究
目的:研究泛素蛋白酶体抑制剂MG-132对柯萨奇B3(CVB3)病毒性心肌炎小鼠的作用,探讨泛素蛋白酶体系统在病毒性心肌炎发病学中的作用机制.方法:随机将80只雄性BALB/C小鼠分为4组(n=20):正常对照组、心肌炎组、心肌炎+处理组、正常+处理组.腹腔接种CVB3诱发急性心肌炎,次日腹腔注射MG-132,0.75 mg/kg;连续给药7d,对照组腹腔注射PBS.第8天小鼠取材,观察心脏病理变化,测定心肌CVB3病毒复制及血清肌钙蛋白、脑钠肽水平.结果:MG-132显著减轻心肌炎小鼠心脏病理损伤,显著降低心脏重量/身体重量比值,MG-132干预后第8天小鼠血清肌钙蛋白、脑钠肽水平显著降低,同时荧光定量PCR显示CVB3 mR-NA复制水平显著降低.结论:MG-132通过抑制CVB3病毒复制,显著减轻心肌炎小鼠心脏病理损伤,起到保护心肌作用.
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蛋白酶体抑制剂MG-132对胃癌细胞SGC7901内质网凋亡的作用
目的 观察内质网凋亡在泛素-蛋白酶体抑制剂对胃癌细胞增殖和凋亡中的作用.方法 实验组分别给予终质量浓度为0.5、1.0、2.5、5.0、10.0、15.0ìmol/L的MG-132加入胃癌细胞SGC-7901,用噻唑蓝(MTT)法测定细胞生长抑制效应,流式细胞仪检测细胞内质网凋亡标志物CHOP和Caspase-12的表达,透射电镜检测凋亡小体.结果 MG-132对胃癌细胞有显著抑制作用,24、48、72 h的ICS0分别为13.233 82、8.595 85、0.472 28 ìmol/L,回归方程为Y=0.009X1+0.026X2-0.098;在MG-132作用后48 h胃癌细胞明显表达内质网凋亡标志物CHOP和Caspase12,透射电镜下发现大量凋亡小体.结论 MG-132能显著抑制胃癌细胞的增殖、诱导其凋亡,并诱导内质网凋亡.
