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NOGGIN基因过表达对MDA-MB-231乳腺癌细胞系增殖和侵袭的影响及机制
目的 基因对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、侵袭能力的影响,并初步探讨其机制.方法 表达NOGGIN方法以NOGGIN重组腺病毒感染乳腺癌细胞系MDA-MB-231,MTT法检测细胞增殖能力,划痕修复实验及Transwell细胞侵袭实验检测其运动和侵袭能力,定量RT-PCR和总蛋白Western blot检测CXCR4和MMP1的表达.结果 过表达NOGGIN基因的MDA-MB-231细胞增殖能力增强(P＜0.05)；细胞划痕愈合延迟；NOGGIN组穿膜细胞数为79±4,显著低于空病毒组的135±7(P ＜0.05).过表达NOGGIN后,细胞中CXCR4和MMP1的表达下调(P＜0.05).结论 NOGGIN蛋白可抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231的运动和迁移.其机制可能与下调CXCR4和MMP1的表达相关.
关键词： NOGGIN 乳腺癌 骨转移肿瘤 MDA-MB-231 -
Noggin在大鼠中枢神经系统发育过程中的表达
目的研究Noggin基因在大鼠中枢神经系统(CNS)发育过程中的表达. 方法地高辛标记的cRNA探针原位杂交组织化学技术. 结果 ISHH结果显示,在胚胎期(E16)大鼠,noggin mRNA阳性细胞主要位于大脑皮质、海马、丘脑与下丘脑的部分核团.新生期(P1～P2)大鼠,noggin在大脑皮质与海马的表达均降低,而在丘脑与延脑的表达增强;生后1周(P1W)noggin在脑内的表达明显降低,生后2周noggin在脑内的表达开始升高,在大脑皮质与海马升高尤为明显.生后1个月,noggin表达继续升高,在额叶皮质、顶叶皮质、扣带皮质、梨状皮质及海马的齿状回可检测到强阳性信号;而在丘脑的侧核、网状核、腹内侧核与腹外侧核可见中等强度的阳性信号.此外,在下丘脑的室旁核和视上核亦可见密集深染的阳性神经元.生后3个月,noggin阳性细胞在脑内的表达开始降低;生后18个月,noggin表达降至低,仅见散在的阳性神经元.此外,在不同发育期大鼠的脊髓亦未观察到noggin mRNA阳性细胞. 结论提示noggin基因参与大鼠生后CNS的发育.
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Noggin基因与中枢神经系统发育的研究进展
Noggin作为一种重要的胚胎蛋白,在胚胎背腹轴模式形成、神经管发育及神经诱导方面有重要功能.干细胞研究的新进展提示,中枢神经系统发育将持续至生后及成年,包括胚胎及成体干细胞的增殖与分化,而noggin通过拮抗骨形成蛋白(BMPs)参与胚胎及成体干细胞的增殖与分化.本文就noggin基因在中枢神经系统发育中的重要功能予以阐述.
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Noggin对成骨的作用研究进展
Noggin是对机体多个系统的生长发育和重塑起重要调节作用的一种糖蛋白.其对神经系统和脑发育的影响已经为人们所熟知,近年来随着研究的不断深入,noggin对骨骼系统生长发育的显著作用逐渐被人们所认识:包括调节胚胎的形态发生,抑制体外成骨细胞增值与分化,抑制体内骨形成,调节颅缝融合和关节的正常形成以及辅助治疗骨肿瘤疾病等,是调节骨生长发育的重要细胞因子.其作用机制主要是通过与BMPs相互影响,调节BMPs信号通路的过程,间接调节骨形成.
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重组腺病毒介导noggin诱导骨髓问充质干细胞向神经细胞分化
目的 探讨体外分离、培养大鼠间充质干细胞(MSCs)的方法 ,采用重组腺病毒介导的noggin基因体外诱导方法 ,观察MSCs向神经细胞的定向分化效应.方法 原代培养MSCs 24h开始贴壁,呈梭形,集落样生长,纯化后,采用含noggin基因的重组腺病毒(pAdEasy-1-noggin)感染原代培养的MSCs,诱导骨髓MSCs分化为神经细胞.用鉴定神经特异性烯醇化酶(NSE)、神经元核抗原(NeuN)、神经丝蛋白(NF-200)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的免疫细胞化学方法 对诱导后的细胞进行鉴定.结果 倒置显微镜下观察可见,MSCs经重组腺病毒感染后48h,细胞向神经细胞分化,胞体呈锥形、多角形,由胞体伸出较长的轴突样和树突样突起,且有分支.免疫组织化学鉴定显示,诱导后的细胞能特异性表达NSE、NeuN和NF-200,而GFAP表达阴性.结论 利用密度梯度离心法结合贴壁法可以获得比较纯的MSCs;noggin基因重组腺病毒载体可成功诱导骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化.
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毛囊干细胞及Noggin对其调控作用的研究进展
毛囊干细胞(HFSC)通常能够分化为角质细胞、皮脂腺细胞和短暂扩充祖细胞,因其快速增殖的能力,HFSC为细胞的治疗提供了构建干细胞来源的基础.本综述将系统描述HFSC的定位、培养以及分子标志物,为鉴定、分离细胞提供有力的参考.同时针对HFSC增殖和分化调控的关键基因Noggin,从基因发现、分子功能等进行全面阐述,并结合BMP信号通路叙述Noggin调控HFSC研究的新进展.
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1型糖尿病模型大鼠股骨骨代谢紊乱及唑来膦酸的影响
背景：糖尿病引起的骨质疏松作为常见的继发性骨质疏松，近年来越来越受到重视；唑来膦酸作为新型治疗骨质疏松的药物，其对体内成骨细胞的作用尚未完全清楚。目的：观察1型糖尿病大鼠股骨干骺端骨形态发生蛋白2与Noggin的表达变化，以及唑来膦酸的干预作用。方法：随机取130只Wistar大鼠腹腔注射链脲佐菌素建立1型糖尿病模型，3 d后连续3次血糖>16.7 mmol/L鼠为造模成功鼠，共120只，随机等分为模型组、预防组和治疗组。后2组大鼠分别在造模后当天和2周后一次性静脉给予唑来膦酸(0.1 mg/kg)。另取40只大鼠注射柠檬酸缓冲液作为对照组。结果与结论：与对照组相比，模型组大鼠股骨骨密度、血清碱性磷酸酶水平、股骨骨形态发生蛋白2 mRNA表达水平明显降低(P <0.05)，Noggin mRNA表达水平显著升高(P <0.05)。与模型组相比，预防组和治疗组大鼠骨密度和骨形态发生蛋白2 mRNA表达水平显著升高(P <0.05)，Noggin mRNA表达水平显著降低(P <0.05)，血清骨碱性磷酸酶水平也逐渐恢复。提示1型糖尿病大鼠骨代谢紊乱在病程早期即出现，而应用唑来膦酸可以促进骨形成，增加骨密度，改善骨代谢。
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牙齿移动过程中骨形态发生蛋白-1与Noggin在牙周组织表达研究
目的 探讨牙齿移动过程中骨形态发生蛋白(BMP)-1与Noggin在牙周组织中的表达及作用.方法 2010年7月至2011年3月在大连医科大学附属第二医院分别建立以大鼠切牙及种植体为支抗的正畸牙齿移动模型,测量磨牙移动距离,用苏木精—伊红(HE)染色观察被移动磨牙牙周组织形态学变化,应用免疫组化方法检测BMP-1与Noggin在牙周组织改建过程中的表达情况.结果 以种植体为支抗的正畸牙齿移动模型,其磨牙的移动距离和速度优于以切牙为支抗组.BMP-1与Noggin在牙周组织的分布及表达在空间和时间上具有明显的一致性:均表现为实验组表达明显强于对照组,张力侧表达强于压力侧;二者在牙周组织中的表达水平均在第7天组强,到第28天组便基本接近对照组的水平.结论 以种植体为支抗的正畸牙齿移动模型优于传统方法.BMP-1与Noggin均参与了牙周组织的改建过程,且可能在该过程中发挥重要的调节作用.
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神经前体细胞基因调控研究进展
神经前体细胞的基因调控主要包括基因修饰、基因转录的诱导、miRNA的调控等.其中,目前研究较多的基因是HOX -B基因、Sonic hedgehog基因、Noggin基因和miRNA.本文重点就这些基因对神经前体细胞的增殖和分化的调控作一综述.
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转染Noggin基因的骨髓基质干细胞体外分化为神经元样细胞的研究
目的 构建Noggin基因的表达载体,分离骨髓基质干细胞(BMSCs),探讨转染Noggin基因的BMSCs在体外分化为神经元样细胞的情况.方法 应用RT-PCR技术扩增Noggin基因,利用基因工程技术构建载体pCS2+[Tα1]-Noggin,分离、培养大鼠BMSCs,借助脂质体将Noggin基因转入BMSCs.观察诱导后细胞形态变化,利用免疫细胞化学方法 鉴定分化细胞是否表达神经细胞特异性烯醇化酶(NSE)、微管相关蛋白-2(MAP-2)以及胶质纤维酸性蛋白(GFAP).利用RT-PCR方法 检测神经细胞标记物mRNA的表达.结果 成功构建Noggin基因的真核表达载体并分离培养BMSCs.转染Noggin基因表达载体后, 分化的BMSCs形态似神经细胞;免疫化学检测到NSE、MAP-2特异性标志物表达,未检测到GFAP表达;RT-PCR测得神经细胞标记物GAP43、NCAM、SYN1表达.结论 从形态、蛋白、基因水平证实转染Noggin基因的BMSCs在体外可以分化为具有部分功能的神经细胞.
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人Noggin基因神经细胞特异性表达载体的构建
目的构建具有神经细胞表达特异性的人Noggin基因的真核表达载体,进一步研究Noggin基因在神经系统发育成熟、功能机制方面的作用.方法根据人Noggin基因的cDNA序列,设计合成一对5' 端分别含有HindⅢ和XbaⅠ酶切位点的特异性引物,运用RT-PCR方法克隆人Noggin基因的cDNA序列;回收PCR产物,并将其与pMD18 simple T 载体连接,进行HindⅢ和XbaⅠ双酶切鉴定和DNA测序鉴定;真核表达载体pCS2+[Tα1]-GFP带有神经细胞特异性启动子(alpha1-微管蛋白启动子),用HindⅢ和XbaⅠ双酶切后琼脂糖凝胶电泳回收带有特异性启动子的片断和T载体上人Noggin基因,在T4 DNA连接酶作用下将二者连接,并筛选鉴定.结果 RT-PCR 产物含有人Noggin基因,DNA测序结果显示重组的pMD18-Noggin载体中含有正确的人Noggin基因序列,重组的pCS2+[Tα1] -Noggin载体中含有人Noggin基因的cDNA序列以及alpha1-微管蛋白启动子.结论成功构建了人Noggin基因的神经细胞特异性真核表达载体pCS2+[Tα1]-Noggin.
关键词： NOGGIN alpha1-微管蛋白 基因 启动子 真核表达载体 -
转染Noggin基因的骨髓基质细胞在体外分化为神经元样细胞的初步研究
目的 构建Noggin 基因的表达载体,初步探讨转染Noggin基因的骨髓基质细胞(BMSCs)在体外分化为神经细胞的情况.方法 应用RT-PCR技术,从正常人胎脑组织中扩增出Noggin基因,利用基因工程技术构建载体pCS2+[Tα1]-Noggin.用Percoll分离液分离出大鼠BMSCs,借助脂质体将Noggin基因转入BMSCs.观察细胞形态的改变,并利用免疫组化鉴定分化细胞是否表达神经细胞特异性烯醇化酶(NSE)、微管相关蛋白-2(MAP-2)以及胶质纤维酸性蛋白(GFAP).结果 成功构建Noggin基因的真核表达载体pCS2+[Tα1]-Noggin.Percoll分离液分离出BMSCs,转染Noggin基因表达载体后,形似神经细胞;免疫组化检测到NSE、MAP-2表达,未检测到GFAP表达.结论 转染Noggin基因的BMSCs在体外可以分化为神经元样细胞.
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移植Noggin基因修饰的神经干细胞对于大鼠MCAO模型梗死区域生长相关蛋白GAP-43 MAP-2表达的影响
目的 探讨移植携带Noggin基因的神经干细胞对MCAO动物模型神经功能修复及相关蛋白表达的作用.方法 应用RT-PCR技术扩增大鼠Noggin基因,构建载体pEGFP-N1-Noggin,转染入原代培养的大鼠神经干细胞(NSCs).线栓法制作大鼠MCAO模型,造模后3d,移植人Noggin基因修饰的NSCs.分别于移植后2d、7d、14d,应用免疫组化方法检测移植后缺血脑组织中GAP-43、MAP-2的表达情况.结果 转染神经干细胞后可以稳定表达Noggin,神经干细胞移植后2d、7d、14d,NOG组MAP-2表达显著高于生理盐水移植组(NS组)和空质粒组(P＜0.05),神经干细胞移植后2d、7d、l4 d,NOG组GFAP表达显著低于生理盐水移植组(NS组)和空质粒组(P＜0.05).结论 Noggin可以促进脑梗死区域生长相关蛋白GAP-43及微管结合蛋白MAP-2的表达.
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腺病毒介导noggin基因修饰神经干细胞
目的:以重组腺病毒介导的noggin基因修饰小鼠海马源性神经干细胞,为基因修饰的神经干细胞移植治疗中枢神经系统疾病提供依据.方法:以重组腺病毒介导的noggin基因转染体外培养的神经干细胞,MTT法检测转染前、后神经干细胞的生长活性,应用免疫细胞化学及Western blot检测转染后Noggin蛋白在神经干细胞中的表达及noggin基因对神经干细胞定向分化的影响.结果:重组腺病毒pAdEasy-1-noggin转染神经干细胞后,神经干细胞中Noggin蛋白表达持续增加;转染后的NSCs在含血清的培养液中能定向分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞,并且其分化为神经元的数量明显增加.结论:重组腺病毒介导的noggin基因在细胞中可持续稳定表达,noggin基因能够促进神经干细胞定向分化为神经元,抑制其向星形胶质细胞方向分化,为下一步进行神经干细胞体内移植治疗提供了实验依据.
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海人酸致癫痫大鼠海马结构中noggin表达变化
目的:研究海人酸(kainic acid,KA)侧脑室注射并诱发癫痫持续状态(status epilepticus,SE)后大鼠海马结构中noggin基因在大鼠海马的表达变化.方法:大鼠在侧脑室注射KA后1、3、7、14、30和60d等不同时间,采用RT-PCR研究noggin mRNA含量变化,采用免疫组化观察noggin蛋白表达变化.结果:在正常大鼠海马结构中noggin mRNA有少量表达.noggin阳性细胞主要位于齿状回及CA3、CA1区,数量较少.侧脑室注射KA诱发SE后, noggin表达持续升高,3d达到高峰;7d在脑内的表达开始降低;注射后2个月, noggin表达降至术前水平,仅见散在的阳性细胞. 结论:侧脑室注射KA并诱发SE后,大鼠海马结构中noggin表达明显增加.
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反义Noggin基因对成年大鼠海马内Nestin及GFAP表达的影响
目的探讨Noggin基因对成年大鼠海马内Nestin及GFAP表达的影响.方法反义寡核苷酸技术封闭内源性Noggin基因的表达,免疫组化法检测成年大鼠海马内Nestin与GFAP的表达.结果侧脑室连续4 d注射Noggin基因的反义寡核苷酸后,可见海马齿状回(dentate gyrus,DG)内Nestin阳性细胞数与GFAP阳性细胞数较对照组显著增加;室下区GFAP阳性细胞数亦明显增加.结论Noggin对成年海马干细胞的分化有重要作用,内源性Noggin基因的表达可使神经干细胞向神经元方向分化.
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脂肪间充质干细胞中Noggin下调能够促进GDF5的表达
目的:通过抑制细胞中Noggin的表达,观察其对大鼠脂肪间充质干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)中生长分化因子5(growth differentiation factor 5,GDF-5)表达量的影响,探究两者之间的关系.方法:构建GDF5慢病毒过表达载体(Lv-GDF5)及Noggin干扰载体(Lv-Noggin shRNA),根据目的基因的不同,将实验分成4组,分别使用重组慢病毒转染大鼠ADSCs:A组为Lv-EGFP转染ADSCs(空载体病毒转染组);B组为Lv-Noggin shRNA转染ADSCs;C组为Lv-GDF5转染ADSCs;D组为Lv-GDF5+Lv-Noggin shRNA共转染ADSCs.通过实时定量PCR技术和Western blot技术检测转染后14 d GDF5和Noggin的表达量,进行对比分析.并检测软骨基质二型胶原(collagenⅡ,Col-Ⅱ)mRNA的表达,进行组间比较.结果:实时定量PCR结果显示:转染后14d,A、B、C、D组GDF5 mRNA表达量呈递增趋势,两两之间比较,除B组与C组之间差异无统计学意义外,其余各组间差异均有统计学意义(P＜0.05);各组间Noggin mRNA表达量比较,A组＞C组＞B组＞D组,两两比较,除A组与C组间差异无统计学意义外,其余各组间差异均有统计学意义(P＜ 0.05);Col-ⅡmRNA表达量呈递增趋势,两两比较,差异均有统计学意义(P＜ 0.05).Western blot结果显示:转染后14d,A、B、C、D组GDF5蛋白表达量呈递增趋势,两两比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);各组间Noggin蛋白表达量比较,A组＞C组＞B组＞D组,两两比较,A组与C组、C组与B组间差异无统计学意义,其余组间差异均有统计学意义(P＜0.05).结论:抑制大鼠ADSCs Noggin的表达,GDF5表达量相应增加,两者呈负相关关系.
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中性粒细胞明胶酶相关运载蛋白在过敏性紫癜患儿中的变化及其临床意义
目的 观察noggin时6-羟基多巴胺(6-OHDA)致帕金森病模型大鼠神经行为的影响及其对黑质神经元的保护作用.方法 随机将60只雄性SD大鼠,分为正常对照组、模型组和模型治疗组.采用脑立体定位右侧纹状体内注射6-OHDA构建帕金森病(PD)模型,模型治疗组纹状体内注射noggin,正常对照组与模型组同时给予等量生理盐水,术后7d于行为检测完毕后行尼氏染色、TH、TUNEL与GFAP免疫组化染色,光镜下观察3组大鼠黑质多巴胺能神经元、凋亡神经元与星形胶质细胞的形态变化并进行计量分析,电镜下观察黑质神经元超微结构变化.结果 模型治疗组大鼠的旋转次数较模型组明显改善(P<0.05),TH阳性神经元较模型组增多,凋亡神经元显著减少(P<0.05),GFAP阳性神经元较模型组减少,胞浆内GFAP阳性产物的平均光密度值亦明显降低(P<0.05);TH、TUNEL与GFAP阳性神经元主要位于黑质致密部;电镜下对照组黑质神经元结构清晰,胞核形态规则,核膜光滑、完整,染色质分布均匀;胞浆电子密度中等,细胞器丰富;模型组黑质神经元胞核皱缩,核膜凸凹不整、异染色质减少,胞浆内大量线粒体嵴断裂消失,粗面内质网扩张;模型治疗组黑质神经元细胞核形态规则,部分线粒体肿胀.细胞器丰富.结论 noggin可改善PD模型大鼠的行为能力、使凋亡神经元及反应性星形胶质细胞数目减少.这些变化可能与noggin能促进黑质内部分神经元再生有关.
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调控基因-Noggin的研究进展
Noggin基因早是由California大学的Harland和William Simth于1992年从非洲爪蟾的胚胎中分离得到的,由于将其mRNA注射入爪蟾的胚胎可使头部明显增大而命名该基因为Noggin(美国俚语中为"头,脑袋"的意思)[1].现在已克隆出人的Noggin基因定位于染色体17q22,大鼠与小鼠的Noggin基因则定位于染色体11[2].Noggin基因在种属间高度保守,其编码产物为26kD蛋白,具有疏水性氨基酸末端,是一种分泌蛋白.Noggin基因在体内对多个系统的发育和/或重塑起重要的调控作用,现就其表达和功能作一简要综述.
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侧脑室注射noggin对海人酸诱导癫痫大鼠学习记忆的影响
目的 观察侧脑室给予noggin对海人酸(kainic acid,KA)诱导的颞叶癫痫大鼠空间学习记忆的影响.方法 侧脑室注射KA诱导大鼠癫痫持续状态(status epilepticus,SE)发作后,连续7 d侧脑室注射noggin,2月后大鼠自发性癫痫出现时,Morris水迷宫试验进行行为学检测,尼氏染色检测海马神经元丢失.结果 KA诱导大鼠颞叶癫痫成功后,海马CA3、CA4区神经元丢失明显,Morris水迷宫实验中大鼠的逃逸潜伏期延长[(27.38±4.75)s],穿过原平台位置次数[(5.35±1.45)次]和在原平台象限探索时间百分率[(28.73±3.10)%]下降.侧脑室注射noggin的大鼠,海马神经元丢失减少,Morris水迷宫试验中大鼠的逃逸潜伏期缩短[(18.45±2.32)s],穿过原平台位置次数[(9.80±1.53)次]和在原平台象限探索时间百分率[(46.58±3.70)%]增加.结论 KA致颞叶癫痫大鼠侧脑室给予noggin可改善大鼠的空间学习记忆能力,可能与noggin能保护海马神经元有关.
