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长托宁对大鼠急性全脑缺血再灌注后NF-κB的影响
目的:探讨长托宁对大鼠急性全脑缺血再灌注后的脑组织NF-κB的影响.方法:参照Pulsinelli四血管阻断法建立大鼠GCIRI模型.大鼠全脑缺血10 min后于再灌注的同时分别给予山莨菪碱和长托宁腹腔注射,于再灌注2 h、6 h、12 h和24 h通过免疫组化方法检测大鼠大脑皮质和海马区脑组织NF-κB的活化情况,用HE染色法检查脑组织受损情况.结果:GCIRI后脑组织NF-κB在再灌注2 h即有明显表达,于再灌注6 h达到高峰,以后表达逐渐下降,HE染色光镜下神经细胞变性坏死随再灌注时间延长逐渐加重.长托宁组和山莨菪碱组各时间点NF-κB活化较模型组明显下降,神经细胞受损减轻,且长托宁组与山莨菪碱组比较亦明显下降.结论:长托宁可以明显抑制GCIRI时脑组织NF-κB的活化表达,从而减轻缺血再灌注时脑组织损伤,起到脑保护作用,且较山莨菪碱效果明显.
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沙鼠全脑缺血再灌注后海马神经营养保护作用研究
目的 沙鼠全脑缺血再灌注后给予神经营养保护,观察海马神经元细胞中凋亡相关蛋白表达变化.方法 通过夹闭沙鼠双侧颈总动脉法制作全脑缺血再灌注模型54只,随机分为神经营养因子治疗组、丹参治疗组以及生理盐水对照组3组.在沙鼠全脑缺血30 min再灌注后,分别在6 h、连续3 d、连续7 d给予腹腔注射神经营养因子、丹参以及生理盐水,采用免疫组化法观察海马神经元细胞胞浆中凋亡相关蛋白表达的变化.结果 生理盐水组中,B细胞淋巴瘤2蛋白表达无论是在第6小时,还是第3天或者第7天,都明显低,而丹参组次之,神经营养因子治疗组表达高;同组内不同时间相比,B细胞淋巴瘤2蛋白在第6 小时表达高.B细胞淋巴瘤2相关X蛋白无论是在第6小时,还是第3天或者第7天,在生理盐水对照组中都有阳性表达;但在神经营养因子治疗组及丹参治疗组,B细胞淋巴瘤2相关X蛋白几乎没有表达或者表达极低;在同组内不同时间,B细胞淋巴瘤2相关X蛋白表达没有明显的差异.结论 神经营养因子和中药丹参对全脑缺血再灌注所致的神经细胞损伤具有一定的保护作用且6 h内神经营养保护效果较好.
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δ阿片受体激动剂DADLE对全脑缺血再灌注大鼠大脑组织病理影响
目的:观察δ阿片受体激动剂DADLE对全脑缺血再灌注大鼠大脑组织结构病理变化的影响,探讨DADLE在脑复苏中的神经保护作用.方法:50只SD大鼠随机分为5组,每组各10只:①假手术组(N):不制模不干预;②模型组(I/R):单纯制作全脑缺血再灌注模型;③DADLE预处理组(D1):在缺血前给予DADLE;④DADLE缺血后处理组(02):在缺血后给予DADLE;⑤DADLE再灌注期处理组(D3):在再灌注早期给予DADLE.实验结束后,取大脑组织进行形态学检查.结果:全脑缺血再灌注大鼠大脑出现大量神经元坏死、胞浆浓缩、核固缩现象.DADLE各处理组缺血再灌注损伤的病理改变明显减轻.模型组和DADLE各处理组海马神经元细胞密度均低于假手术组(P<0.01),而DADLE各处理组海马神经元细胞密度高于模型组(P<0.01),DADLE各处理组之间海马神经元细胞密度差异没有统计学意义(P>0.05).结论:δ阿片受体激动剂DADLE对大鼠全脑缺血再灌注损伤具有一定的保护作用.
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DADLE对大鼠急性全脑缺血再灌注Bax、Bcl-2蛋白表达的影响
目的 观察急性全脑缺血再灌注大鼠脑组织Bax、Bcl-2蛋白表达情况,研究δ阿片受体激动剂DADLE对急性全脑缺血再灌注脑组织凋亡途径的影响以及其与脑保护作用的关系.方法 将健康雌性SD大鼠50只(180 ～ 220 g)随机分为5组:假手术组(Sham组,n=10):只暴露血管而不夹闭；缺血再灌注组(I/R组,n=10):采用改良的二血管阻断加低血压法建立全脑缺血再灌注模型,缺血15rin后给予再灌注；DADLE处理组分为DADLE2 mg/kg组(A组,n=10)、DADLE 3 mg/kg组(B组,n=10)、DADLE 5 mg/kg组(C组,n=10):在I/R组的基础上于再灌注前经颈外静脉注射DADLE.手术结束后,采用免疫组化法检测脑组织Bax、Bcl-2蛋白表达情况.结果 Sham组Bax与Bcl-2阳性细胞数显著少于其他各组(P＜0.05),分别为(20.38±2.84)与(9.62±2.10)；I/R组Bax与Bcl-2阳性细胞数为(52.73±6.08)与(19.49±2.35)；而DADLE处理组中Bax阳性细胞数分别为:A组(43.71±3.85)、B组(37.92±4.08)、C组(36.20±3.94)；Bcl-2阳性细胞数分别为:A组(28.74±2.41)、B组(33.58±2.16)、C组(34.96±1.98).Bcl-2/Bax的比值,Sham组显著高于I/R组[(49.3±3.4)％vs.(35.8±3.2)％,P＜0.05]；DADLE处理组中,A组为(66.4±6.8)％、B组为(85.7±7.3)％、C组为(92.6±6.9)％.结论 在大鼠急性全脑缺血再灌注损伤中,Bax与Bcl-2蛋白的表达均明显上调,而DADLE可以通过影响Bax与Bcl-2的表达程度减少细胞凋亡,发挥脑保护的作用；由Bcl-2/Bax的比值可发现,该作用与使用剂量呈现“S型剂量效应曲线”.
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DADLE对大鼠急性全脑缺血再灌注损伤脑组织ERK信号转导通路影响的研究
目的 探讨DADLE对急性全脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织中ERK信号转导通路的影响及其与脑保护作用的关系.方法 将健康雌性SD大鼠50只(180 ～ 220 g)随机分为5组:假手术组(Sham,n=10):只暴露血管而不夹闭；缺血再灌注组(I/R,n=10):采用改良的二血管阻断加低血压法建立全脑缺血再灌注模型,缺血15 min后再灌注120 min；DADLE处理组分为DADLE 2 mg/kg组(A,n=10)、DADLE 3 mg/kg组(B,n=10)和DADLE 5 mg/kg组(C,n=10):在I/R组的基础上于再灌注前经颈外静脉注射DADLE.HE染色观察各组海马CAI区神经元病理变化情况,western blot测其脑组织内非磷酸化ERK与磷酸化ERK(P-ERK)的表达状况.结果 Sham组ERK与P-ERK蛋白表达水平显著低于其他各组(P＜0.05)；DADLE处理组与I/R组相比,ERK、P-ERK蛋白的表达水平上调(P＜0.05),其中B组、C组ERK与P-ERK蛋白表达水平显著高于A组(P＜0.05),而B组、C组之间ERK、P-ERK表达则无显著性差异(P＞0.05).结论 在急性大鼠全脑缺血再灌注损伤中,ERK信号转导通路的活性明显上调,DADLE可以通过增加ERK的活化而达到降低神经元细胞的损伤,发挥脑保护的作用；同时,该作用呈剂量相关性和有“天花板效应”.
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二血管阻断加低血压法建立大鼠全脑缺血再灌注模型的实验研究
目的 通过二血管阻断加低血压法建立大鼠全脑缺血再灌注模型,探讨全脑缺血再灌注大鼠大脑组织结构变化,为脑复苏中的进一步神经保护作用研究提供条件.方法 30只SD大鼠采用二血管阻断加低血压法制作大鼠全脑缺血再灌注模型;实验结束后,计算成功例数和死亡例数.开颅取大脑组织进行形态学观察.结果 30只大鼠中,26只造模成功,成功率86.67%.全脑缺血再灌注大鼠大脑出现大量神经元坏死、胞浆浓缩、核固缩现象.结论 二血管阻断加低血压法成模效果稳定,死亡率较低.能较好地建立大鼠全脑缺血冉灌注模型,可为脑复苏的的深入研究提供良好实验基础.
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氢气对大鼠全脑缺血再灌注损伤海马CA1区神经元的保护作用
目的:观察吸入高浓度氢气对大鼠全脑缺血再灌注(I/R)损伤海马CA1区神经元的影响.方法:雄性SD大鼠105只,采用四血管阻断法(4-VO)建立全脑I/R损伤模型.随机数字表法将大鼠分为3组,即假手术组(SH组,n=15),模型组(4-VO组,n=45),治疗组(4-VO+H2组,n=45).检测各组再灌注72 h、9 d尼氏染色海马CA1区锥形神经元、免疫组织化学法神经元特异性核蛋白抗体(NeuN)、小胶质细胞特异性蛋白抗体(Iba1)染色计数以及免疫荧光双标NeuN与Iba1观察神经元与小胶质细胞的位置关系;再灌注9 d后水迷宫实验,检测大鼠的空间定位和学习记忆能力.结果:与4-VO组相比,4-VO+H2组于再灌注72 h及9 d海马CA1区神经元形态更接近正常,神经元存活数量明显增多(P<0.05);免疫组织化学染色结果显示4-VO+H2组神经元存活数量明显高于4-VO组(P<0.05),4-VO组小胶质细胞数量明显高于4-VO+H2组(P<0.05).水迷宫实验结果显示,4-VO+H2组第4象限游泳时间明显长于4-VO组(P<0.05).结论:再灌注同时吸入高浓度氢气对大鼠全脑I/R损伤海马CA1区神经元可产生明确保护作用,其机制可能与氢气抑制I/R后小胶质细胞的激活与活化有关.
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帕瑞昔布对大鼠全脑缺血再灌注损伤中学习和记忆能力的保护作用
目的：探讨帕瑞昔布对大鼠全脑缺血再灌注损伤中学习和记忆能力的保护作用。方法：雄性Wistar大鼠随机分为S组、I／R组和I／R＋PA组，全脑缺血模型采用改良的Pulsinelli四血管法；再灌注72 h后连续行5 d Morris水迷宫实验评价其空间分辨学习和记忆能力；处死大鼠，灌注取脑行Nissl染色观察海马CA1区神经元的存活情况。结果：与I／R组相比，大鼠潜伏期I／R＋PA组明显缩短（P＜0．05），穿越平台次数和在目标象限的时间增多（P＜0．05），尼氏染色CA1区神经元死亡较少。结论：帕瑞昔布对大鼠全脑缺血再灌注损伤中学习和记忆能力具有一定的保护作用。
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已酮可可碱对大鼠全脑缺血再灌注后炎症反应的影响
目的探讨已酮可可碱(pentoxifylline,PTX)对大鼠全脑缺血再灌注后炎症反应的影响及其治疗作用. 方法采用四血管阻塞的方法,复制出大鼠全脑缺血再灌注模型.采用免疫组化法、原位杂交法和原位末端标记法分别检测假手术组(A组)、全脑缺血再灌注组(B组)、已酮可可碱治疗组(C组)海马CA1区核因子κB(NF-κB)、肿瘤坏死因子-α mRNA(TNF-α mRNA)及细胞凋亡数的变化. 结果与假手术组比较,全脑缺血再灌注组海马CA1区NF-κB和TNF-α mRNA的表达及细胞凋亡数明显增加(P＜0.01);NF-κB和TNF-α mRNA的表达分别于再灌注6h和12h达到高峰,并持续到48h;细胞凋亡数随再灌注时间的延长而逐渐增多(P＜0.01).PTX治疗后,NF-κB和TNF-α mRNA的表达下降,细胞凋亡数减少(P＜0.01).结论在脑复苏救治过程中,PTX可抑制NF-κB与TNF-α mRNA的表达,抑制炎症反应,减少细胞凋亡而发挥脑保护作用.
关键词： 已酮可可碱 全脑缺血再灌注 核因子-κB 肿瘤坏死因子-αmRNA 凋亡 -
白芍总苷对全脑缺血再灌注损伤保护作用的研究
目的 观察白芍总苷对全脑缺血再灌注损伤的保护作用并初探其机制.方法 采用四血管夹闭20 min的方法制备大鼠全脑缺血再灌注模型,白芍总苷(50、100、200 mg/kg)术前30 min灌胃给药.再灌注6h后,记录各组大鼠翻正反射恢复时间和脑电恢复时间,检测脑组织含水量,HE染色法观察大脑海马CA1区神经元形态结构变化,TUNEL法观察海马CA1区神经元凋亡状况:测定海马组织中炎症细胞因子含量,抗氧化酶活性和丙二醛(MDA)含量.结果 中、高剂量白芍总苷能够显著降低全脑缺血再灌注大鼠翻正反射和脑电恢复时间并降低脑组织含水量(P＜ 0.05或P＜ 0.01),明显改善海马CA1区神经元病理性改变和凋亡状况,显著降低凋亡指数(P＜0.01),湿著降低炎症细胞因子(IL-1β、IL-6、TNF-α)含量(P＜0.05或P＜0.01),显著改善抗氧化酶(SOD、CAT、GSH-Px)活性并降低MDA含量(P＜ 0.05或P＜0.01).结论 白芍总苷对全脑缺血再灌注损伤具有一定的保护作用,可能与其保护海马CA1区神经元、抑制氧化应激和炎症反应有关.
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咖啡酸对全脑缺血再灌注模型大鼠脑损伤的保护作用研究
目的:探讨咖啡酸对全脑缺血再灌注模型大鼠脑损伤的保护作用及其机制.方法:将大鼠随机分为假手术组(生理盐水)、模型组(生理盐水)和咖啡酸低、中、高剂量组(咖啡酸溶液,10、30、50mg·kg-1),每组7只,分别腹腔注射相应药物后建立全脑缺血再灌注模型,以寻台潜伏期为指标,用Morris水迷宫检测大鼠空间学习记忆能力,其后,采用苏木精-伊红染色法观察各组大鼠海马组织病理学变化和固定视野内神经元细胞计数,并考察海马组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量及核转录因子NF-κBp65阳性细胞的表达.结果:与模型组比较,咖啡酸低、中、高剂量组大鼠5d内的寻台潜伏期明显缩短(P<0.05或P<0.01),海马CA1区神经元损伤程度降低、神经元细胞数目明显增加(P<0.05或P<0.01),海马组织中SOD活性明显增加、MDA含量和NF-κBp65阳性细胞表达明显降低(P<0.05或P<0.01).结论:咖啡酸可能通过降低NF-κBp65阳性细胞表达,抑制中枢神经系统炎症反应和氧化应激来实现时全脑缺血再灌注模型大鼠脑损伤的保护作用.
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茶多酚抗全脑缺血再灌注继发肺损伤的作用及机制研究
目的:研究茶多酚对全脑缺血再灌注引起的肺损伤的保护作用及机制.方法:采用改良的4动脉阻断法制备大鼠全脑缺血15min、再灌注3h的损伤模型.观察不同剂量茶多酚静脉内给药对大鼠脑、肺组织形态学变化、肺组织超氧化物歧化酶(SOD)活力、丙二醛(MDA)含量以及内毒素受体CD14表达的影响.同时设立假手术组、模型组和尼莫地平组进行对照.结果:与假手术组比较,模型组大鼠脑、肺组织出现病理损伤及肺组织CD14阳性细胞的表达;与模型组比较,茶多酚与尼莫地平组均可明显升高SOD活力(P<0.05)、降低MDA含量(P<0.01)及CD14袁达阳性率(P<0.01),且有明显量-效关系.结论:茶多酚可使全脑缺血再灌注大鼠脑、肺组织损伤程度明显减轻,其作用机制可能与降低肺组织内自由基含量、加强对自由基清除酶的保护作用以及减轻内毒素攻击相关.
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COX-2在全脑缺血再灌注大鼠皮层时程表达变化
目的 观察COX-2 mRNA与蛋白在全脑缺血再灌注大鼠皮层的时程表达变化特征.方法 采用夹闭双侧颈总动脉合并低血压的方法建立大鼠全脑缺血再灌注脑损伤模型;水迷宫检测大鼠空间学习记忆能力;HE染色观察大鼠皮层神经元形态结构改变;黄嘌呤氧化酶法、TBA法分别测定大鼠皮层中SOD活性和MDA含量变化;RT-PCR及Westemblot分别检测大鼠皮层COX-2 mRNA与蛋白表达情况.结果 与假手术组比较,缺血再灌注组大鼠寻台潜伏期显著增加,寻台次数显著减少(P＜0.05),通过目标象限百分比明显减少(P＜0.01);皮层神经元出现严重核固缩,细胞层次紊乱;SOD活性随再灌注时间延长而降低,在7d时达低(P＜0.01),MDA含量随再灌注时间延长而增加,在7d时达峰值(P＜0.01);COX-2 mRNA及蛋白表达明显增加,mRNA再灌注后48 h达峰值(P＜0.05),蛋白再灌注后7d达峰值(P＜0.01),15 d时均仍高于假手术组(P＜0.05).结论 全脑缺血再灌注诱导大鼠皮层COX-2表达明显增加,并具有时间依赖性.
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大鼠全脑缺血再灌注后HAX-1蛋白与皮质神经元凋亡的关系
目的 探讨大鼠全脑缺血再灌注后皮质组织中HAX-1蛋白(HS1-associated protein X-1, HAX-1) 与皮质神经元凋亡的关系.方法 建立大鼠四血管法全脑缺血模型,将实验动物分为5组(n=5):正常组,缺血6、24、48、72 h组.采用HE染色,观察大鼠皮层组织病理变化;采用免疫组化、TUNEL法检测大鼠全脑缺血再灌注后HAX-1蛋白的表达以及皮质神经元凋亡蛋白Caspase-3的表达情况.结果 HAX-1蛋白在缺血后6 h表达高(37.60±3.45),24、48、72 h降低[分别为(11.40±1.14)、(10.40±1.52)、(9.80±1.30)],且低于正常水平(P<0.01);Caspase-3蛋白随着缺血时间的延长逐渐增高[6、24、48、72 h分别为(72.80±5.49)、(106.20±6.91)、(129.00±19.74)、(166.20±15.32)](P<0.01),并伴随神经元凋亡的数目逐渐增加[(92.00±9.06)、(133.80±10.64)、(157.00±10.83)、(187.80±14.96)].结论 全脑缺血再灌注后皮质神经元中HAX-1蛋白在短期缺血中表达升高,可能参与神经元的抗凋亡,随着缺血时间延长,其表达水平降低,与神经元的凋亡增强相关.
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三黄泻心汤对全脑缺血再灌注大鼠氧化应激及炎性损伤的保护作用
目的:研究三黄泻心汤(简称泻心汤)对全脑缺血再灌注(Ischemia Reperfusion,I/R)损伤后大鼠脑组织中氧化损伤及炎性损伤的保护作用.方法:连续给药7天后,采用两侧颈总动脉夹闭结合低血压方法制备全脑缺血再灌注损伤大鼠模型,再灌注后继续给药2d,末次给药0.5h后处死大鼠,测定脑指数、脑组织含水量、脑组织中H2O2、MDA的含量和Na+-K+-ATP、Ca2+-ATP、SOD、CAT、GSH-Px的活力,血清中IL-1β、IL-6、TNF-α的含量,脑组织中NFκBp65蛋白亚基及其磷酸化表达情况,及IL-1β、IL-6、TNF-α等mRNA表达情况.结果:泻心汤8.74 g/kg剂量能降低全脑缺血再灌注模型大鼠的脑指数及脑组织含水量,减少脑内H2O2及MDA含量,提高CAT、SOD、GSH-Px、Na+-K+-ATP、Ca2+-ATP等酶的活力,降低IL-1β、IL-6、TNF-α含量,抑制NFκB p65亚基磷酸化及IL-1β、TNF-α mRNA表达.结论:泻心汤可通过提高模型大鼠脑内Na+-K+-ATP、Ca2+-ATP酶及抗氧化酶活力,减轻受损组织中的水肿及氧化应激损伤,且抑制转核因子的激活及炎性因子的转录,发挥对全脑缺血再灌注大鼠脑组织损伤的保护作用.
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藁本内酯对小鼠海马区损伤的保护作用及其作用机制
目的 研究藁本内酯(Lig)对小鼠海马区损伤的保护作用及其作用机制.方法 将24只小鼠随机均分为假手术组、模型组和Lig组,采用双侧颈总动脉结扎法(2VO)建立全脑缺血再灌注模型;Nissl染色观察小鼠海马CA1、CA2区的神经元计数;免疫组化检测海马区胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、肿瘤坏死因子(TNFα)的表达.结果 与模型组比较,Lig能减轻缺血再灌带来的损伤,减少海马CA1、CA2区神经元的丢失,降低GFAP、TNFα的表达.结论 Lig能明显减轻全脑缺血再灌注所致的小鼠海马区损伤,其机制与抑制星形胶质细胞激活、减轻炎症反应有关.
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低压缺氧对大鼠全脑缺血/再灌注后海马CA1区GLT-1表达的影响
目的 探讨低压缺氧预处理对大鼠全脑缺血/再灌注后的神经保护作用.方法 将Wistar大鼠随机分为假手术组、低压缺氧对照组、全脑缺血/再灌注组、低压缺氧预处理+全脑缺血/再灌注组.间断暴露于低压缺氧(大气压为70.66～70.93kp)环境的大鼠[(1次/d)×4d ]作为低压缺氧对照组.采用Pulsinelli四血管闭塞法复制大鼠全脑缺血/再灌注模型,夹闭颈总动脉造成全脑缺血8min后再灌注.硫堇染色观察大鼠海马组织学改变;免疫组织化学方法观察神经胶质细胞谷氨酸转运体亚型-1阳性细胞表达变化,并将四组结果进行比较.结果 Wistar大鼠低压缺氧预处理全脑缺血/再灌注组海马CA1区存活细胞数较全脑缺血/再灌注组明显增加,其神经胶质细胞谷氨酸转运体亚型-1阳性细胞表达量较全脑缺血/再灌注组显著升高.结论 低压缺氧可通过上调神经胶质细胞谷氨酸转运体亚型-1的表达,减少神经细胞的死亡,发挥神经保护作用.
