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伴不同并发症2型糖尿病患者红细胞膜流动性的改变
细胞膜的各种重要功能都与膜的流动性密切相关.已知很多因素都可影响膜的流动性[1].大血管病变和血脂异常是否是2型糖尿病患者红细胞膜流动性降低的影响因素,及二者是否存在交互作用,未见报道.本文应用荧光偏振技术,研究了大血管病以及高血脂对2型糖尿病患者红细胞膜流动性的影响,报道如下.
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β-淀粉样蛋白对神经元膜流动性的影响
目的:研究Aβ对神经元膜流动性的影响,探索Aβ的神经毒性机制.方法:制备急性分离的新生SD大鼠海马和皮层神经元细胞悬液,采用显微准弹性激光散射技术和荧光偏振技术.结果:采用显微准弹性激光散射技术发现Aβ25～35作用5min和35min后均降低海马和皮层神经元ACF的衰减速率及频移线宽Γ,而采用荧光偏振技术发现Aβ25～35作用5min和35min后虽然有升高海马和皮层神经元荧光各向异性的趋势,但无统计学意义.结论:提示Aβ可降低神经元膜流动性,显微准弹性激光散射技术比荧光偏振技术更敏感.
关键词： β-淀粉样蛋白 膜流动性 显微准弹性激光散射技术 荧光偏振技术 -
荧光偏振技术同步检测沙眼衣原体解脲脲原体方法的研究
沙眼衣原体(CT)、解脲脲原体(UU)是常见泌尿生殖系感染等病原体,其早期检测对临床诊断治疗十分重要[1].传统的单一检测这两种病原体工作繁琐、费用高.本研究建立了荧光偏振与模板指导的末端延伸反应检测技术(TDI-FP),在同一反应体系应用多重引物,检测CT、UU感染,大大提高了检测时效.
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荧光偏振技术同步检测肺炎支原体肺炎衣原体方法的研究
肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae,MP)、肺炎衣原体(Chlamydophila pneumoniae,CP)是呼吸道感染的常见病因,及早准确地检测,对预防控制相关疾病非常重要[1].本研究采用荧光偏振检测与模板指导的末端延伸反应检测技术相结合(TDI -FP)的方法,建立了在同一反应体系中同步检测肺炎支原体、肺炎衣原体感染的方法.
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模板指导末端延伸法检测内皮型一氧化氮合酶基因多态性研究
糖尿病肾病(DN)是糖尿病的并发症之一,内皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因多态性对DN易感性及预后有重要意义[1].本研究建立了模板指导末端延伸反应结合荧光偏振技术(TDI-FP)检测eNOS基因单核苷酸多态性(SNP)的方法,并对DN患者和正常人检测价值进行了探讨.
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检验医学面临的挑战与学科建设和管理
跨入21世纪,检验医学(Laboratory Medicine) 既面临着良好的发展机遇,也面对着严峻的挑战.如何发挥优势,谋求检验医学专业新的发展,加速学科建设,不断提高科学的管理水平,解决所面临的新情况和新问题,是摆在每个检验人员面前的重要课题.一、检验医学的发展与面临的挑战1.知识经济的兴起和医学科技的飞速发展带来了新的发展机遇.新世纪知识经济强调知识作为创造社会财富诸要素中的基本的生产要素,知识经济也为检验医学的发展提供了机遇与基础.迄今,检验医学技术发展大致有3方面趋势:(1)随着基础医学的发展和高新技术的应用,各类的自动化仪器相继问世,流式细胞仪进入临床实验室极大地拓宽了临床检验的范围,促进了细胞生物学的临床应用;模块、组合式生化分析仪大大提高了临床化学的工作效率;应用荧光偏振技术、化学发光技术及磁性微球免疫化学技术的各类仪器,使免疫化学检测进入了新水平,并逐步替代放射分折技术;全实验室自动化(total laboratory automation,TLA)的概念打破了传统的医学检验技术分工的模式,对检验工作者的技术素质和学术水平提出更高的要求.(2)实验技术向小型化、简单化、"床边"化发展.各类床旁试验(Point of Care test,POCT)使检验人员(或医护人员)可在患者身边进行各项试验并即刻得出结果,大大方便了病人和临床.但应注意其测定的标准化、规范化,质量控制及与自动化仪器结果的可比性.(3)随着基因克隆技术趋向成熟和基因测序工作逐步完善,后基因时代逐步到来.数理科学在生物学领域广泛渗透,在结构基因组学,功能基因组学和环境基因组学逢勃发展形势下,分子诊断学技术将会取得突破性进展.这些工作正逐步从实验基础研究进入临床实践,也给检验医学带来了崭新的领域,为学科发展提供了新的机遇,同时也使检验科的管理模式和人材结构发生了根本变化,实验室标准化,网络化、法制管理、实验方法的标准化及全面质量保证系统的实施与管理成为检验科建设的根本任务.
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抑郁症患者的血浆同型半胱氨酸水平
据世界卫生组织调查显示,抑郁症目前已经上升到心理疾病的首位,由于它是一种常见的、容易复发的慢性疾病,已成为威胁人类健康、影响人们生活质量的一大杀手.抑郁症患者心理、生理改变引起体内有关的生物学变化诸见报道,但关于同型半胱氨酸(HCY)水平与抑郁症的关系,国内尚未见详细报道,所以我们对此做了一些工作.
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丹参注射液对实验性输卵管炎性阻塞家兔红细胞膜脂流动性影响
目的：观察丹参注射液对实验性输卵管炎性阻塞家兔红细胞膜脂流动性的影响。方法：制备输卵管炎性阻塞的家兔模型，iv给予丹参注射液1.5 g/kg，3 g/kg，1次/d，连续(43.3±4.89)d，测试对红细胞膜脂流动性的影响。结果：丹参注射液组与模型对照比较可使输卵管炎性阻塞家兔红细胞膜脂的荧光偏振度减小，使红细胞膜脂区微粘度明显降低。结论：丹参注射液对炎症时的兔红细胞膜有明显的保护作用。
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单标记延伸结合荧光偏振技术快速检测B型流感亚系方法的建立及应用
目的 建立一种单标记延伸(OLE)结合荧光偏振技术(FP)快速检测B型流感By和Bv亚系的新方法.方法 从GenBank下载By和Bv血凝素(HA)基因各50条序列,通过MEGA软件进行分析,利用Primer Premier 5.0设计B型流感病毒亚系特异性引物和单标记延伸引物,RT-PCR扩增目的片段,用OLE引物添加亚系特异性荧光标记的双脱氧核糖核苷酸,建立单碱基延伸终止荧光偏振检测方法.结果 RT-PCR扩增产物的大小分别为349、397和713 bp.OLE sense引物检测Bv亚系双脱氧三磷酸胸苷(ddTTP)的FP值高于双脱氧三磷酸胞苷(ddCTP)的FP值(P＜0.01),而By亚系则正好相反,ddCTP的FP值高于ddTTP(P＜0.01)；OLE anti-sense引物检测Bv亚系和By亚系ddGTP和ddATP的FP值均差别不大(均P＞0.05).Bv样品毒株ddTTP的FP值均值为(159±10)mp,与Bv参照株(162 mp)相近；By样品毒株ddCTP的FP值均值为(163±10)mp,与By参照株(165 mp)相近.结论 该方法操作简便、敏感性及特异性高、判读结果直观明确、检测费用低,适合于流感监测实验室对流感病毒的快速分子诊断.
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嗜热厌氧杆菌Ana.Pif1解旋酶核心结构域蛋白与DNA底物结合的反应特性
目的:探究嗜热厌氧杆菌的Ana.Pif1解旋酶核心结构域蛋白(Ana.Pif1-HD)与DNA底物结合的反应特性.方法:利用DNAman、CluxtalX等软件,对Ana.Pifl的核心结构域蛋白进行系统进化树分析与同源序列比对;Ana.Pif1-HD表达载体构建后转入大肠杆菌进行原核表达,并通过Ni-NTA、SUMO酶切、S200分子筛等层析柱纯化获得Ana.Pif1-HD蛋白;利用Stopped-flow FRET技术监测Ana.Pif1-HD蛋白的解旋活性,利用荧光偏振检测技术分析Ana.Pif1-HD与不同长度、不同结构DNA底物的结合反应各向异性值,并进行拟合分析与统计.结果:Ana.Pif1的核心结构域蛋白为靠近N-端的448氨基酸,通过原核表达与纯化获得纯度为97％、浓度为5 g/L的Ana.Pif1-HD蛋白,并利用Stopped-flow FRET与荧光偏振等技术验证其具有Ana.Pif1全长蛋白90％的解旋活性与95％的结合活性;Ana.Pif1-HD的佳结合反应条件是42℃在pH 6.0含20 mmol/L NaCl及3 mmol/L MgCl2的溶液中进行;Ana.Pif1-HD与不同长度ssDNA底物结合时的解离速率常数递增,并明确其ss-DNA的binding-size为10.34 nt;研究首次揭示Ana.Pif1-HD与不同复制中间体DNA结合反应的底物特异性ss-G4 DNA＞ G4 DNA＞ 3'-ssDNA-dsDNA≈Y-型＞其它底物.结论:成功表达纯化具有全长活性的Ana.Pif1解旋酶核心结构域蛋白,首次揭示该解旋酶核心蛋白与各类不同DNA底物的结合反应特性.
