首页 > 文献资料
-
共刺激分子CTLA-4的研究进展及在风湿病治疗中的应用
细胞毒T淋巴细胞抗原-4(CTLA-4)是免疫应答反应起始阶段T细胞活化的重要共同活化分子,它与T细胞表面的配体结合后可以抑制T细胞功能,使T细胞不能被激活,从而抑制免疫反应的发生.在多种风湿病中都发现有CTLA-4等位基因异常和蛋白表达异常.CTLA-4免疫球蛋白(CTLA-4Ig)是针对CTLA-4的融合蛋白,能选择性地抑制免疫反应,改善患者的临床症状,达到控制疾病进展的目的.但目前的临床研究尚仅限于类风湿关节炎.临床研究的初步结果表明CTLA-4Ig治疗类风湿关节炎是有效而安全的,但由于其临床应用时间短,在风湿病治疗中的作用还有待进一步的长期临床观察来证实.
-
CTLA-4Ig抑制嗜酸性粒细胞的抗原呈递过程
目的 探讨嗜酸性粒细胞(EOS)在体外培养条件下将抗原呈递给致敏T淋巴细胞的机制.方法 应用流式细胞仪检测了小鼠EOS于重组粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子刺激前后表达作为协同刺激因子主要成员的CD80和CD86分子的水平;并观察应用细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白-4融合蛋白(CTLA-4Ig)封闭CD80和CD86分子以阻断协同刺激通路对EOS呈递抗原的影响.结果 小鼠EOS即使新鲜分离也可以表达CD80和CD86,经粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子刺激24 h后所表达的CD80和CD86水平明显升高(P＜0.01),CTLA-4Ig明显地抑制EOS的抗原呈递过程.结论 EOS必须提供协同刺激信号才可作为抗原呈递细胞将摄入和处理的抗原信息传递给T细胞,从而促使后者出现增殖反应.
-
CTLA-4Ig融合蛋白抑制apoE基因缺陷小鼠动脉粥样硬化机理研究
目的 探讨CTLA-4Ig融合蛋白抑制高脂饮食饲养的载脂蛋白E基因缺陷小鼠(apoE-/-)动脉粥样硬化(AS)的作用机理.方法 30只10周龄apoE-/-小鼠,随机分为3组(每组10只),高脂饮食饲养,分别采用CTLA-4Ig、IgGI、PBS腹腔注射(每周2次).12周后取小鼠主动脉进行病理学检查,检测AS病变相关指标.包括斑块面积/管腔面积比、血管内膜/中膜厚度比,斑块内脂质、胶原和平滑肌细胞含量;取血清检测总胆固醇浓度和CRP、sICAM-1、IFN-γ、IL-10、TGF-β1浓度.结果高脂饮食饲养12周后,形成明显AS斑块,但CTLA-4Ig组病变轻.CTLA-4Ig组、IgG1组和PBS组的斑块面积/管腔面积比、血管内膜/中膜厚度比、斑块内脂质含量和胶原含量差异均有统计学意义(P<0.05),CTLA-4Ig组斑块面积/管腔面积比、血管内膜/中膜厚度比和斑块内脂质含量均显著低于IgG1组和PBS组(P<0.05),其斑块内胶原含量高于IgG1组和PBS组(P<0.05),而后2组间上述指标的差异均无统计学意义(P>0.05);3组间斑块内平滑肌细胞含量差异不具有统计学意义(P>0.05).CTLA-4Ig组、IgG1组和PBS组的血清总胆固醇浓度差异不具有计学意义(P>0.05),3组的血清CRP、sICAM-1、IFN-γ、IL-10、TGF-β1水平差异均有统计学意义(P<0.05),CTLA-4Ig组血清CRP、sICAM-1、IFN-γ水平降低,血清IL-10、TGF-β1水平升高,而后2组间上述指标的差异均无统计学意义(P>0.05).结论 CTLA-4Ig融合蛋白抑制高脂饮食饲养的apoE(-/-)小鼠动脉粥样硬化进程,可能与阻断B7/CD28通路、抗炎作用、促进Th2极化、及影响调节性T细胞功能等有关.
-
胰岛移植免疫耐受的研究进展
随着2000年Edmonton方案提出并应用到胰岛移植后,使得移植的成功率大大提高.该方案之所以取得极大的成功,其中尤为重要的是其对以往的免疫抑制方案的改进,这使得免疫耐受的诱导成为近年来胰岛移植领域的研究热点之一.首先新型免疫抑制药物,如脱氧精胍菌素、来氟米特等,在延长同种异体胰岛移植的存活时间的同时,且无任何β细胞毒性作用,提高了胰岛移植的成功率.其次,通过TNF/TNFR家族和B7/CD28家族共刺激分子的阻断,同样具有相似的效果,抗CD40L抗体和CTLA-4 Ig诱导移植免疫耐受已经进入临床研究阶段.而通过调节细胞因子网络(如IL-4、IL-6和IGF)干预Thl/Th2转换亦可诱导移植耐受,但孤立的细胞因子治疗并不足以诱导耐受发生和维持.而让胰岛细胞表达可抑制细胞凋亡基因,同样对移植物功能存活具有重大意义,研究表明Fas/FasL、DCR3和A20基因等均能对移植胰岛的存活起保护作用.随着研究的深入和免疫学的发展,将对免疫耐受的机制有更为深人地了解,相信在未来的胰岛移植治疗糖尿病领域,移植排斥现象将能得到高效可靠的解决方法.
-
CTLA-4Ig融合蛋白对ApoE基因缺陷小鼠动脉粥样硬化的抑制作用
[目的] 探讨CTLA-4Ig融合蛋白对高脂饮食饲养的载脂蛋白E基因缺陷小鼠(ApoE-/-)动脉粥样硬化病变的抑制作用.[方法] 25只10周龄ApoE-/-小鼠,高脂饮食饲养4周后,随机取5只验证AS病变(对照组);剩余20只随机分为4组(每组5只),继续高脂饮食饲养,分别采用CTLA-4Ig、PBS、IgG1腹腔注射,第4组不予处理;8周后取小鼠主动脉进行病理学检查,检测AS相关指标,包括斑块面积/管腔面积比、血管内膜/中膜厚度比,斑块内脂质、胶原和平滑肌细胞含量.[结果] 高脂饮食饲养4周后,出现明显AS病变.继续高脂饮食饲养8周,形成典型AS斑块,CTLA-4Ig组、PBS组、IgG1组和空白组的斑块面积/管腔面积比分别为0.27 ± 0.08、0.40 ± 0.08、0.43 ± 0.08和0.46 ± 0.10,较4周时(0.05 ± 0.01)明显增加(P ＜ 0.05),4组的血管内膜/中膜厚度比分别为2.6 ± 0.6、6.0 ± 0.9、5.7 ± 0.8和5.9 ± 0.6,高于对照组(0.5 ± 0.1,P ＜ 0.05),4组斑块内脂质含量(%)分别为26.0 ± 3.0、40.8 ± 5.7、40.6 ± 3.0和43.2 ± 5.7较4周时明显增加(7.2 ± 1.4,P ＜ 0.05 ).采用CTLA-4Ig进行干预后,其斑块面积/管腔面积比、血管内膜/中膜厚度比和斑块内脂质含量显著低于PBS、IgG1和空白处理组(P ＜ 0.05),而后3组间上述指标的差异无统计学意义(P ＞ 0.05);CTLA-4Ig组斑块内胶原含量(16.0 ± 1.1)% 高于其他3组[(8.6 ± 1.2)%、(9.2 ± 1.5)%和(9.0 ± 1.3)%,P ＜ 0.05)],其斑块内平滑肌细胞含量(11.8 ± 1.0)%明显高于其他3组[(7.8 ± 0.8)%、(7.5 ± 0.9)%和(7.3 ± 0.7)%,P ＜ 0.05)],另外3组间上述指标的差异无统计学意义(P ＞ 0.05).[结论] CTLA-4Ig融合蛋白能够阻抑高脂饮食饲养的ApoE-/- 小鼠动脉粥样硬化进程,其增加斑块内血管平滑肌细胞生成胶原作用有助增加AS斑块的稳定性.
-
CTLA-4Ig对大鼠同种异体肾移植移植肾功能的影响
目的 研究CTLA-4Ig对大鼠同种异体肾移植移植肾功能的影响,为CTLA-4Ig作为一种新型的生物免疫抑制剂应用于临床提供实验依据.方法 以LEW大鼠作为受体,BN大鼠作为供体,建立大鼠同种异体肾移植模型.受体LEW大鼠随机分四组,每组35只:①对照组:术中给予等体积生理盐水;②CTLA-4Ig低浓度组:术中给予CTLA-4Ig 1 mg/kg;③CTLA-4Ig中浓度组:术中给予CTLA-4Ig 10 mg/kg;④CTLA-4Ig高浓度组:术中给予CTLA-4Ig 20 mg/kg.给药途径为腹腔注射.分别于实验前、 术后2小时、 术后4小时、 术后12小时、 术后24小时、 术后2天及术后3天收集血液标本,检测血浆CTLA-4Ig浓度及血清肌酐水平.结果 对照组大鼠血浆中未检测到明显的CTLA-4Ig.给予不同浓度的CTLA-4Ig,大鼠血浆CTLA-4Ig浓度随之变化.给予CTLA-4Ig 1 mg/kg能有效保护同种异体肾移植的移植肾功能,保护作用随着浓度增加而增加,但CTLA-4Ig 10 mg/kg时保护作用已是大,再加大给药浓度对移植肾功能保护没有意义.结论 CTLA-4Ig能减轻排斥反应,有效保护大鼠同种异体肾移植的移植肾功能.
-
CTLA-4Ig预防小鼠自身免疫性肝炎的实验研究
目的 研究CTLA-4Ig在防治C57BL/6小鼠自身免疫性肝炎上的作用。方法 通过用C57BL/6近交系小鼠的肝特异性抗原与弗氏完全佐剂混合物免疫攻击小鼠，同时用CTLA-4Ig治疗，观察小鼠的肝脏组织学改变。结果 随着免疫次数的增多，治疗组结果与正常对照组相似；而病理模型组发现炎细胞的浸润，肝细胞的肿胀、灶性坏死甚至广泛坏死，这与正常对照组有明显差异。结论 CTLA-4Ig能有效地预防C57BL/6小鼠自身免疫性肝炎。
-
腺病毒介导的CTLA-4Ig基因转染人骨髓间充质干细胞成骨特性研究
目的 通过腺病毒介导CTLA-4Ig基因转染人骨髓间充质干细胞(human marrow mesenchymal stem cells, hMSCs),观察被修饰细胞CTLA-4Ig蛋白表达情况,以及基因修饰对hMSCs诱导成骨特性的影响.方法 采用荧光显微镜观察腺病毒介导CTLA-4Ig基因转染hMSCs的绿色荧光蛋白表达,流式细胞术检测确定转染率,观察对比转染前后细胞形态和细胞周期,用免疫细胞化学方法检测转染hMSCs的CTLA-4Ig蛋白表达,转染hMSCs成骨诱导培养3周后进行成骨特异性标记检测.结果 分离培养的hMSCs CD105表达阳性, CD34表达阴性.重组腺病毒介导的CTLA-4Ig基因转染hMSCs的转染率为81.14%, CTLA-4Ig基因转染hMSCs(CTLA-4Ig-hMSCs)的形态无明显变化,生长良好.免疫细胞化学结果显示,CTLA-4Ig-hMSCs的CTLA-4Ig蛋白表达阳性,诱导培养3周的CTLA-4Ig-hMSCs,碱性磷酸酶染色呈强阳性,免疫细胞化学检测骨钙素表达阳性,钙的四环素荧光标记法显示细胞间有钙的沉积.结论 腺病毒介导的CTLA-4Ig基因转染hMSCs能够分泌CTLA-4Ig蛋白,并保持了成骨分化潜能,可用于异基因hMSCs作为骨组织工程种子细胞的应用研究.
-
人CTLA-4Ig融合基因减毒鼠伤寒沙门菌真核表达载体的构建及表达
目的构建能稳定表达人CTLA4Ig融合基因的减毒鼠伤寒沙门菌真核表达载体,探讨其在哺乳动物细胞中的表达并对表达产物进行鉴定.方法用touchdown PCR法扩增CTLA-4Ig融合基因,将PCR产物连接真核表达载体pcDNA3.1(+),构建pcDNA3.1(+)-CTLA-4Ig,用电穿孔仪转入减毒鼠伤寒沙门菌SL7207.将表达质粒转染COS-7细胞,SDS-PAGE、Western blot检测转染细胞裂解上清中目的蛋白的表达.结果酶切鉴定和基因序列测定显示重组质粒构建成功.在pcDNA3.1(+)-CTLA-4Ig质粒转染后48 h细胞裂解上清中,检测到CTLA-4Ig融合蛋白的表达,该蛋白能与抗人CTLA-4单抗特异结合.结论成功构建了能稳定表达人CTLA4Ig融合基因的减毒鼠伤寒沙门菌真核表达载体,并在哺乳动物细胞中成功表达有生物学活性的重组人CTLA-4Ig蛋白.
-
CTLA-4Ig对大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎的BAEP、SEP的影响
目的 探索CTLA-4Ig转基因治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)的疗效和安全性.方法 用AdCTLA-4Ig注射到Wistar大鼠EAE模型侧脑室内,观察临床发病情况和电生理改变,以判断其疗效.结果 EAE大鼠侧脑室注射AdCTLA-4Ig后,大鼠EAE发病时间延迟,发病率显著下降.且脑干听觉诱发电位和体感诱发电位反映的中枢传导功能显著改善.结论 CTLA-4Ig对EAE有明显疗效.
-
重组腺病毒介导的CTLA-4Ig cDNA在体外培养细胞中的表达
1 材料 293细胞购自ATCC（美国），鼠抗人CTLA-4Ig单抗购自Pharmingen公司，5 ml亲合层析柱HiTrap Protein A为Pharmacia公司产品。2 方法2.1 细胞培养 293细胞用含10%小牛血清的DMEM培养液；人成纤维细胞、人脐静脉内皮细胞、HeLa细胞均用含5%小牛血的DMEM培养液。培养条件均为37 ℃，5%CO2，饱和湿度细胞培养箱中培养。
-
CTLA-4Ig治疗C57BL/6小鼠自身免疫性肝炎的实验研究
目的研究CTLA-4Ig在治疗C57BL/6小鼠自身免疫性肝炎上的作用.方法通过用C57BL/6近交系小鼠的肝特异性抗原与弗氏完全佐剂混合物免疫攻击小鼠,随后用CTLA-4Ig治疗,观察小鼠的临床经过、血生化、肝脏组织学改变.结果随着免疫次数的增多,治疗组临床经过、血生化、肝脏组织学改变逐步与正常对照组相似,而病理模型组与前两组有明显差异:血生化可见天冬氨酸氨基转移酶、球蛋白显著升高;肝组织学检测可见炎细胞的浸润,肝细胞的肿胀、灶性坏死甚至广泛坏死;肝组织免疫荧光检测提示有大量免疫球蛋白沉着.结论 CTLA-4Ig能有效地治疗C57BL/6小鼠自身免疫性肝炎.
-
局部转染CTLA-4Ig抑制大鼠异体复合组织移植急性排斥反应的研究
目的:观察腺病毒介导融合基因细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4(cytotoxiC T-lymphocyte associated antigen-4,CTLA-4Ig)局部转染大鼠同种异体移植的复合组织对急性排斥反应的抑制作用.方法:以近交系Brown Norway大鼠为供体,Lewi S大鼠为受体,采用腹部游离皮瓣作为异体复合组织移植(composite tissue allotransplantation,CTA)模型.将受者分为3组,A组(空白对照组):异体皮瓣离体保存时不感染腺病毒,只灌注PBS溶液;B组(阴性对照组):异体皮瓣离体保存时灌注携带增强型绿色荧光蛋白的重组腺病毒(Ad-EGFP);C组(基因治疗组):异体皮瓣离体保存时灌注AdCTLA-4Ig.术后观察各组移植皮瓣的排斥情况及存活天数,进行组织病理学检查,并观察CTLA-4Ig在移植组织中的表达情况及对急性排斥反应的抑制作用.结果:①A组、B组皮瓣移植物平均生存时间分别为(7.8±1.5)天和(7.1±1.6)天,C组移植皮瓣平均存活时间为(10.4±2.3)天,C组存活期长于A组和B组,差异有统计学意义(P<0.01):②移植皮瓣病理学检查:术后第7天,A组与B组移植皮瓣均发生严重急性排斥反应,而C组排斥反应较A组和B组轻微,但c组术后第11天也表现出严重急性排斥反应;③移植前后血清白细胞介素2(interleukin-2,IL-2)水平:各组移植术后早期发生急性排斥反应时,IL-2均有明显升高,但实验组血清IL-2水平在第3天、第7天时均明显低于两对照组(P<0.01).结论:建立了一种新的异体复合组织移植局部基因转染模型,皮瓣灌注AdCTLA-4Ig能获得融合基因在移植复合组织中的表达,局部产生的CTLA-4Ig能抑制急性排斥反应的发生,延长移植物存活时间.
关键词： 同种异体复合组织移植 CTLA-4Ig 基因治疗 急性排斥反应 -
CTLA-4Ig在诱导器官移植免疫耐受中的研究新进展
目前器官移植大障碍依然是术后排斥反应的发生.因此,寻找诱导免疫耐受的方法一直是器官移植领域的研究热点.抗原特异性T细胞的有效活化除需要TCR识别抗原提呈细胞(antigen presenting cell,APC)提呈的MHC -肽作为第一信号外,还必需有APC和T细胞表面的共刺激分子之间相互作用所提供的共刺激信号作为第二信号才能顺利完成,阻断该第二信号而仅有第一信号则可以引起T细胞克隆无能甚至是凋亡,从而诱导器官移植免疫耐受.第一个发现可介导协同刺激信号的分子是T细胞表面的CD28分子和APC表面的B7分子,它们在移植后排斥反应的发生中起着非常重要的作用,体外阻断协同刺激反应,尤其是阻断CD28与B7分子的信号转导,可抑制T细胞活化,诱导T细胞克隆免疫无应答.现就利用CTLA-4Ig阻断CD28/B7通路来诱导抗原特异性免疫耐受的研究新进展做一综述.
-
共刺激阻断剂CTLA-4Ig在体外培养细胞中的表达
目的鉴定腺病毒介导免疫调节基因CTLA-4Ig在体外培养细胞中的表达能力和细胞毒性.方法以小鼠成纤维细胞(NIH3H3)、中国仓鼠卵巢细胞(CHO)为靶细胞,观察感染强度为100、200、400时CTLA-4Ig重组腺病毒特染靶细胞后不同时相细胞存活百分率;以免疫组化检测CTLA-4Ig在细胞中的表达.结果转染后2d、4d,转染组两种细胞存活百分率与对照组相比无显著差异;转染后24h CTLA-4Ig在NH3T3和CHO中的阳性表达率分别为961%和94.6%.结论重组腺病毒对非包装靶细胞毒性很小,能够介导CtlA-4IG基因对靶细胞的高效转染,并使靶细胞高效表达CTLA-4Ig,为介导CTLA-4Ig基因转染移植物和抗原提呈细胞提供了一种安全有效的载体.
