首页 > 文献资料
-
PI3K和MEK联合抑制增强对K-ras基因单突变肺癌细胞的生长抑制作用
目的 观察RAS/MEK/ERK通路单独抑制或联合PI3K/AKT/mTOR通路抑制对非小细胞肺癌A549细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其相关分子机制.方法 常规培养A549细胞,分别以不同浓度的PI3K抑制剂GDC-0941和MEK抑制剂AZD6244单独或联合处理,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测抑制剂对细胞增殖的影响,根据MTT法检测结果确定联合给药的浓度.将A549细胞分为空白对照组、0.5 μmol/L GDC-0941处理组、低浓度联合组(0.5 μmol/L AZD6244+ 0.5μmol/LGDC-0941)、5.0 μmol/L GDC-0941处理组和高浓度联合组(5.0 μmol/L AZD6244+ 5.0 μmol/L GDC-0941),采用流式细胞术检测细胞周期和凋亡,采用Western blot法检测抑制剂靶点下游与细胞周期和凋亡相关的蛋白表达.结果 AZD6244对A549细胞的增殖抑制作用呈浓度依赖性,但浓度平台出现时,增殖抑制率仅为25.5％.AZD6244联合GDC-0941对A549细胞的生长抑制作用增强,但联合用药的效果与两种抑制剂联合使用的浓度有关.0.5 μmol/L GDC-0941处理组和低浓度联合组A549细胞的凋亡率分别为(20.70±0.99)％和(18.65±0.92)％,差异无统计学意义(P＞0.05);5.0μmol/L GDC-0941处理组和高浓度联合组A549细胞的凋亡率分别为(37.85 ±3.18)％和(52.27±4.36)％,差异有统计学意义(P＜0.01).低浓度联合组A549细胞的细胞周期没有明显改变;高浓度联合组中G0/G1期细胞增加,S期细胞减少.单独使用AZD6244可明显抑制pERK的表达水平,但pAKT的表达增加.单独使用GDC-0941可明显抑制pAKT的表达水平,但pERK的表达增加.低浓度联合组中,细胞周期和凋亡蛋白的表达均没有发生明显改变;高浓度联合组中,cyclin D1、cyclin B1表达量受到抑制,PARP剪切增加,Bcl-2/Bax比值下降.结论 对于K-ras基因单突变的非小细胞肺癌A549细胞,单独使用一条信号通路的抑制剂会反馈性激活另一信号通路.RAS/MEK/ERK和PDK/AKT/mTOR两条通路的同时抑制呈协同作用,这种协调作用受到抑制剂浓度的影响.靶向治疗时,联合使用两条通路的抑制剂是必要的.
-
粪便中检测K-ras基因突变对老年大肠癌诊断价值的研究
探讨粪便K-ras基因检测在老年大肠癌临床诊断中的价值. 收集连续就诊的23例老年大肠癌患者、20例结肠腺瘤性息肉患者及20名健康老年查体者的粪便,并从中提取DNA,应用等位基因特异性杂交技术检测粪便K-ras基因第12位密码子第1、2位碱基突变情况.结果 K-ras基因突变率在大肠癌患者为56.52%(13/23),明显高于正常查体者的5%(1/20)(P<0.01),与结肠腺瘤性息肉组的30%(6/20)比较,差异无显著性意义(P>0.05).92.31%(12/13)的大肠癌K-ras基因突变位点发生在第12位密码子第2位碱基.研究表明,结肠癌患者组织及粪便中K-ras基因突变的检出具有良好的一致性,提示粪便中检测K-ras基因突变是一种无创性的老年大肠癌的诊断方法.
-
肺腺癌患者GSTM1基因型与K-ras突变相关性分析
目的 探讨肺腺癌患者谷胱苷肽-S-转移酶μ1(GSTM1)基因型与癌基因K-ras突变的相关关系.方法 收集45例肺腺癌患者标本,抽提基因组DNA,PCR扩增GSTM1基因和K-ras基因的第12位密码子,利用PCR法来检测肺癌组织中GSTM1基因型和K-ras基因的突变情况,分析两者之间的相关性.结果 在人的肺腺癌组织中,K-ras基因突变率为43.2%,GSTM1基因的缺失率达52.6%,其中GSTM1基因缺失者与非缺失者的K-ras突变率分别为65.6%和13%,二者之间有显著性差异(P＜0.05).结论 在人肺癌组织中,GSTM1基因的多态性与K-ras基因突变明显相关,这些发现提示GSTM1基因的缺失导致肺腺癌易感性部分是K-ras基因的突变引起.
关键词： 肺腺癌 谷胱苷肽-S-转移酶μ1基因 基因多态性 K-ras基因 突变 -
K-ras基因突变型晚期大肠癌患者一线化疗及靶向治疗疗效分析
目的 探讨K-ras基因突变型晚期大肠癌患者一线化疗及联合靶向治疗方案的疗效.方法 回顾性分析2008年1月-2013年12月本院收治的经病理确诊的55例K-ras基因突变型晚期大肠癌患者的临床及病理特征,并行疗效观察及生存分析.结果 随访至2013年12月31日,55例中45例(81.8％)死亡,中位总生存期为14.4个月,中位无进展生存期为5.7个月,1年生存率为66％.在客观缓解率方面,奥沙利铂组客观缓解率(objective response rate,ORR)(32％)较伊立替康组ORR(23.1％)高,伊立替康+BEV组ORR(37.5％)较伊立替康组ORR(23.1％)高,但差异均无统计学意义;在疾病控制率方面,伊立替康+BEV组治疗疾病控制率(disease control rate,DCR)(100％)较伊立替康组DCR(84.6％)高,但亦无统计学差异.结论 K-ras突变型患者使用以奥沙利铂为主的化疗方案更有利于客观缓解率的提高;化疗联合贝伐珠单抗对于K-ras突变型患者生存期的延长显示出一定作用.
-
K-ras基因突变对Ⅲ期大肠癌术后辅助化疗疗效的预测意义
目的 探讨K-ras基因突变与接受术后辅助化疗的Ⅲ期大肠癌患者预后的关系.方法 收集2005年1月-2010年12月在我院接受手术治疗及术后辅助化疗的Ⅲ期大肠癌病例40例,采用PCR扩增和DNA测序技术检测K-ras第12、13位密码子的突变情况,分析患者临床病理特征、分子特征与生存规律的关系.结果 K-ras基因突变率为15％(6/40),性别、年龄、病灶部位、病理分级、病理类型、T分期、N分期与K-ras基因突变无相关性.截至2010年12月31日,34例(85％)出现复发转移,9例(22.5％)死亡,中位总生存期(overall survival,OS)48.460个月,中位无疾病生存期(disease-free survival,DFS) 11.992个月,1年、3年、5年生存率分别为97％、73％、51％.单因素分析显示K-ras野生组较突变组DFS显著延长(P＜0.001),而其余病理特征对DFS无明显影响；年龄(P=0.037)、病理分级(P=0.015)及1年内是否复发转移(P=0.010)是影响OS的预后因素,而其余病理特征及K-ras基因状态对OS无影响.COX多因素分析显示K-ras基因状态(P＜0.001)是DFS的独立预后因素；年龄(P=0.010)和1年内是否复发转移(P=0.006)是OS的独立预后因素.结论 对于接受手术治疗及以氟尿嘧啶为基础的术后辅助化疗Ⅲ期大肠癌患者,K-ras野生型患者的DFS优于突变型患者,提示K-ras基因可能是预测Ⅲ期大肠癌患者术后辅助化疗疗效的指标.
-
结直肠癌患者不同组织中K-ras基因研究
目的 研究结直肠癌患者不同组织中K-ras基因的临床意义.方法 采用实时荧光定量PCR方法检测患者原发灶组织100例、转移淋巴结组织64例、远处转移灶13例、腺瘤组织19例中K-ras基因突变情况.结果 结直肠癌原发灶、转移淋巴结组织、远处转移灶、腺瘤组织的K-ras基因检出率分别为100％、92.2％、92.3％、89.5％;K-ras基因突变率分别为39.0％、30.5％、33.3％、17.6％.主要突变基因第12编码子34位G＞T,G＞A,G＞C,35位G＞A,G＞T,G＞C;第13编码子37位G＞C,38位G＞A等8种基因发生突变.结论 结直肠癌原发灶、转移淋巴结组织、远处转移灶的K-ras基因突变率基本—致,而腺瘤组织K-ras基因突变率明显低于原发灶、转移淋巴结组织、远处转移灶组织.K-ras基因突变在结直肠癌的发生、发展中起重要作用,这对结直肠癌的防治有重要的指导意义.
-
结直肠癌K-ras基因的研究进展
K-ras基因在结直肠癌(CRC)发生、发展中均有重要作用,K-ras野生型的CRC患者对西妥昔单抗(C225)敏感,而突变型者不敏感.目前K-ras状态已确定为是否对CRC患者使用C225的标准.CRC的K-ras突变主要发生在第一外显子的12、13位点,原发灶是常用的检测标本,转移灶及晚期患者的血浆检测也有一定意义.K-ras突变的检测方法很多,目前测序法仍是金标准.
-
结直肠癌分子靶向治疗的进展
结直肠癌为全球第4位的常见恶性肿瘤,靶向治疗药物表皮生长因子受体(EGFR)抑制剂西妥昔单抗可明显改善晚期患者的生存率和生存质量.如何预测患者应用靶向药物是否有效,已成为目前急需解决的问题.近5年各国学者的多项临床和实验研究表明:西妥昔单抗与细胞毒药物联合应用可明显提高其疗效.且其疗效与忠者的EGFR表达情况及K-ras基因突变发生率明显相关.很多国家已经将检测K-ras基因作为是否选择EGFR拮抗剂治疗的指标.
-
K-ras基因与大肠癌关系的研究进展
Ras基因的突变在大肠细胞癌变过程中起启动作用并是一个早期事件,突变产生具有致癌活性的p21蛋白,通过Ras信号转导通路,激活下游信号分子,持续刺激细胞生长、发育、增殖,引起细胞恶变.可以检测大肠癌手术标本,血清等K-ras基因的突变.
-
K-ras基因点突变在肺癌中的研究进展
Ras基因初是在和Kirston和Hayvey大鼠肉瘤中首先发现的,转导了ras基因的NIH/3T3细胞能发生恶性转化,从而确定了其癌基因的地位.
-
K-ras基因突变与胰腺癌关系的研究进展
所有恶性肿瘤中胰腺癌的K-ras基因突变率高,K-ras基因突变通过多条细胞信号传导途径促使细胞增生,转化和抗凋亡,后恶变.胰腺癌患者的K-ras基因第12密码子点突变是对胰腺癌有效的早期基因诊断方法,而K-ras联合其他基因或肿瘤标志物的检测可以提高检测的特异性和敏感性.本文总结近10余年来胰腺癌K-ras基因突变研究的进展及其在胰腺癌筛检和诊断中的价值.
-
应用ADx-ARMS法对大肠癌组织中K-ras基因突变的检测
目的 探讨ADx-ARMS法对大肠癌组织中K-ras基因突变的检测情况.方法 选择首都医科大学附属北京世纪坛医院2012年4～8月的大肠癌石蜡标本40例.应用ADx-ARMS法检测大肠癌石蜡标本中的K-ras基因7个热点突变,分析与年龄、性别、组织学分型以及病理分化程度的关系.结果 40例大肠癌样本中共发现K-ras基因突变14例,突变率约为35.0%.K-ras基因突变与年龄及组织学分型无关(P > 0.05),与患者性别(P < 0.05)及腺癌分化程度(P < 0.01)有关.结论 ADx-ARMS法检测大肠癌组织中K-ras基因突变效果满意,值得临床应用.
-
SPC-CRE-Kras双阳性转基因小鼠自发肺部肿瘤模型的建立
目的 构建一种利用Cre重组酶体内低表达诱导K-ras G12D在小鼠肺部活化的慢性自发性肺部肿瘤模型.方法 首先构建一种肺脏特异性低表达Cre重组酶的SPC-CRE转基因小鼠,利用SPC-CRE转基因小鼠与LSL K-ras G12D 转基因小鼠杂交,获得SPC-CRE-Kras双阳性转基因小鼠.对4月龄,5月龄,7月龄,9月龄SPC-CRE-Kras双阳性转基因小鼠肺部进行取材,固定并进行常规石蜡切片及HE染色,镜下观察小鼠肺部病理特征.使用micro-CT对7月龄,9月龄SPC-CRE-Kras双阳性转基因小鼠肺部肿瘤结节进行检测.结果 获得了SPC-CRE-Kras双阳性转基因小鼠,该小鼠在肺组织特异性低表达Cre重组酶,并诱导K-ras G12D在肺组织的表达,由K-ras G12D引起肺组织肿瘤的发生.SPC-CRE-Kras双阳性转基因小鼠4月龄肺部出现轻度炎症反应,5月龄开始肺部可见散在腺瘤样的结节,成瘤率为100%(雌6/6,雄6/6),随着月龄增加,小鼠肺腺瘤结节呈增大趋势,病理变化呈进展状态,9月龄时通过micro-CT可以检测到肺部少量散在孤立的肿瘤结节.结论 利用肺组织特异性低表达Cre重组酶的方式,建立了一种从肺部炎症反应到肺腺瘤进展时程较长的慢性自发肺部肿瘤小鼠模型,为肺癌发生的研究提供了更长的窗口期.
关键词： Cre/Loxp重组酶系统 转基因小鼠 K-ras基因 小鼠肿瘤模型 -
K-ras基因突变通过调节E-cadherin/β-catenin/p120蛋白复合体形成和RhoA蛋白活性对结肠癌细胞株Caco-2转移的影响
目的 观察K-ras基因突变通过调节E-cadherin/β-catenin/p120蛋白复合体形成和RhoA蛋白活性对结肠癌细胞株Caco-2转移的影响,探讨其促进结肠癌转移的相关机制.方法将培养的结肠癌细胞株Caco-2分别给予空白质粒phr-GFP转染(对照组)、K-ras基因突变型质粒phr-K-ras(Vail2)转染(转染组)、phr-K-ras(Val12)质粒转染+丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)途径特异性抑制剂PD98059处理(MAPK抑制组)和phr-K-ras(Val12)质粒转染+磷脂酰肌醇3激酶(PI-3K)途径特异性抑制剂LY294002处理(PI-3K抑制组),Transwell细胞迁移实验检测细胞迁移率,细胞免疫荧光检测E-cadherin、β-catenin蛋白表达及其在细胞内定位,Western blot检测细胞内p120蛋白的表达,免疫沉淀检测与E-cadherin结合的β-catenin蛋白水平,Pull-down实验检测RhoA蛋白活性.结果 转染组Caco-2细胞的迁移率为(19.8±5.6)%,明显高于对照组的(14.0±4.2)%(P=0.001)和MAPK抑制组的(15.8±1.2)%(P=0.044),但与PI-3K抑制组的(17.5±2.8)%差异无统计学意义(P=0.095).细胞免疫荧光检测结果显示,转染组细胞膜上的E-cadherin和β-catenin蛋白表达减少.Western blot检测结果显示,转染组和PI-3K抑制组细胞内p120总蛋白表达减少.免疫沉淀检测结果显示,转染组和PI-3K抑制组细胞内与E-eadherin结合的β-catenin蛋白水平下降.Pull-down实验检测结果显示,转染组细胞内的RhoA蛋白活性增加.结论 K-ras基因突变可以促进结肠癌细胞株Caco-2的转移,其可能是通过MAPK途径减少E-cadherin/β-catenin/p120蛋白复合体形成,增强RhoA蛋白活性来实现的.
-
K-ras基因与胰腺癌关系
胰腺癌是常见消化系统恶性肿瘤,预后极差,世界范围内的统计资料显示,即使行胰腺癌的彻底根治术,其5 a存活率仍不足5%[1].引起胰腺癌预后差的主要原因目前尚无有效的筛查或早期诊断方法,确诊时往往已有转移,手术切除率低、治疗手段单一.
-
痰液脱落细胞k-ras基因检测对肺癌诊断的临床价值
目的通过痰脱落细胞k-ras基因点突变的检测探讨其对肺癌诊断的临床应用价值.方法应用多聚合酶链反应结合限制性长度片段多态性分析法(PCR-RFLP),检测50例肺癌(其中腺癌22例,鳞癌24例,小细胞癌4例)和48例肺部良性疾病患者痰标本中k-ras基因第12密码子的突变情况,检测结果进行对比分析.结果k-ras基因在肺癌组的突变检出率为24.00%(12/50),非肺癌组突变检出率为2.08%(1/48),二者有显著性差异(P＜0.01).其中腺癌突变率40.90%(9/22),鳞癌突变率12.50%(3/24),小细胞癌未检出突变.在肺癌早期(Ⅰ期和Ⅱ期)中,k-ras基因突变明显高于肺良性病变组,且肺癌组中,吸烟者k-ras基因突变率34.48%(10/29)高于非吸烟者9.52%(2/21),两者有统计学差异(P＜0.05).k-ras基因突变与年龄、性别和临床分期无明显关系.结论k-ras基因突变与肺癌的发生存在一定的相关性,痰液脱落细胞中R-ras基因检测突变有助于肺癌的临床诊断,对早期诊断亦有一定的意义.
-
结直肠癌MICA基因的表达与p53K-ras基因突变的关系研究
目的:分析结直肠癌MICA基因的表达与p53、K-ras基因突变的关系.方法:回顾性分析我院2014年3月至2016年3月收治的66例结直肠癌患者的临床资料,应用半定量PCR-SSCP技术,对癌组织mdr1基因表达量与p53、K-ras进行检测,并分析结直肠癌MICA基因表达与p53、K-ras基因突变间的相互关系.结果:经研究发现,MICA表达与结直肠癌患者肿瘤部位、年龄、性别无相关性(P>0.05).于66例患者中,22例淋巴结转移者的MICA平均表达量明显高于淋巴结未转移者,差异具有统计学意义(P<0.05).8例K-ras、p53基因联合突变者MICA基因平均表达量高于非联合突变者,差异具有显著统计学意义(P<0.05),12例K-ras基因突变者MICA平均表达量稍高于未突变者,但比较差异无统计学意义(P>0.05),16例p53基因突变者MICA平均表达量显著优于p53基因未突变者,差异具有统计学意义(P<0.05).结论:MICA基因高表达已成为了结直肠癌的关键检测指标,而p53、K-ras基因与其高表达具有相关性.
-
晚期结直肠癌一线化疗联合贝伐珠单抗疗效与k-ras基因状态的关系
目的:研究晚期结直肠癌( CRC)一线化疗联合贝伐珠单抗的治疗效果与K-ras基因状态的关系.方法:选取2011年5月至2016年5月收治的CRC患者183 例,进行 K-ras 基因检测,给予一线化疗联合贝伐珠单抗的治疗方案.观察 K-ras 基因突变状态与治疗的反应率( RR) 、无进展生存期(PFS)和总生存期(OS)的相互关系.结果:CRC 患者中58.2%存在 K-ras 基因突变. K-ras 基因突变组转移至肺与肝多于K-ras基因野生型组,差异有统计学意义( P＜0.05) .两组总体反应率、PFS比较无显著差异(P＝0.61,0.83). K-ras 基因突变组比基因野生型组 OS 减少,但差异无统计学意义(P＝0. 93) . Cox生存分析模型显示,K-ras基因突变不能作为PFS( P＝0.86)和OS( P＝0.17)的预后因素.结论:K-ras基因突变状态尚不能对CRC一线化疗联合贝伐珠单抗的疗效作出预测.
-
基于小二乘支持向量机的大肠癌K-ras基因突变预测
目的 探讨利用小二乘支持向量机模型对大肠癌K-ras基因突变进行预测的可行性.方法 首先采用测序法检测90例大肠癌患者癌组织K-ras基因突变情况,继而选取特征变量用小二乘支持向量机模型进行预测并与测序结果进行比较.结果 重复100次的小二乘支持向量机模型预测发现,训练集的准确率为100%,方差为0;检验集的准确率为79.4%,方差为4.51.结论 应用小二乘支持向量机预测模型预测大肠癌K-ras基因突变是可行的,有助于指导临床诊断、治疗和评价预后.
-
硫化镍对16HBE细胞中基因的影响
目的检测结晶型硫化镍(NiS)对K-ras基因和P15基因的改变及基因组不稳定性的影响,从而进一步探讨镍化合物致癌的分子机制.方法采用限制性片段长度多态性分析和聚合酶链反应-单链构象多态性分析方法探查结晶型NiS在诱导16人气管上皮细胞(HBE)恶变过程中的K-ras基因Exonl第12密码子及第12密码子以外的密码子改变情况.采用PCR-SSCP分析方法探查结晶型NiS在诱导16HBE细胞恶变过程中的P15基因Exon2存在状况.采用随机扩增多态性技术来对结晶型NiS在诱导16HBE细胞恶变过程中的基因组不稳定性进行分析.结果K-ras基因Exonl和P15基因Exon2未发生改变.本实验所选用的7条随机引物均能扩增出清晰、明显的条带.其中P4、P5、P7两条引物扩增的片段在实验组和对照组之间无差异,其余4条引物均有差异.对于同一随机引物他们都具有特异的带型.结论P15基因第2外显子和K-ras基因第1外显子(包括第12、13密码子)可能不是结晶型NiS作用的靶部位.在结晶型NiS诱发细胞恶性转化过程中,基因组变得逐渐不稳定.
