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蛋白酶活化受体1/4参与大鼠蛛网膜下腔出血后脑内小胶质细胞的活化
目的 探讨蛋白酶活化受体1/4(PAR-1/4)对蛛网膜下腔出血(SAH)后大鼠脑内小胶质细胞活化的影响. 方法 雄性SD大鼠100只,随机分为sham组、SAH+ control siRNA组、SAH+ PAR-1 siRNA组、SAH+PAR-4 siRNA组以及SAH +PAR-1/4 siRNA组,每组20只.应用血管内插线法建立大鼠SAH模型,治疗组在术后1h脑室注射相应剂量药物.在SAH后6h和24h,观察了各组大鼠神经功能学缺陷、脑水含量和脑内伊文思蓝含量,同时应用免疫组织化学和Western blotting方法检测了脑内肿瘤坏死因子α(TNF-α)和细胞间黏附分子-1( ICAM-1)的表达. 结果 单独应用PAR-1 siRNA或PAR-4 siRNA均可减轻SAH后大鼠的神经功能缺陷并降低血管通透性(P＜0.05),同时脑内小胶质细胞TNF-α和ICAM-1的表达也明显下降.联合应用PAR-1和PAR-4siRNA的治疗效果为显著. 结论 PAR-1/4参与了蛛网膜下腔出血后大鼠脑内小胶质细胞的活化,而PAR-1/4 siRNA可通过抑制两者的活性减少炎性因子的产生,具有显著的神经血管保护作用.
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凝血酶促进骨髓间充质干细胞增殖的作用与机制
本研究旨在探讨凝血酶促进人间充质干细胞(MSC)增殖及其机制.在无血清基础培养液中添加不同浓度凝血酶,用MTT实验检测人骨髓MSC增殖状态,PCR检测细胞蛋白酶活化受体(PAR)和c-MYC表达,Western blot分析信号通路的变化,并通过特异性抑制剂阻断凝血酶受体和信号通路,验证凝血酶作用的机制.结果显示,凝血酶可显著刺激MSC增殖,效应呈浓度依赖性;当凝血酶浓度为0.5 U/ml时,细胞增殖明显提高,浓度为8 U/ml时,刺激活性达峰值(P＜0.01);PCR结果表明,MSC表达PAR-1和PAR2;当PAR1受体被阻断后凝血酶的促增殖效应被抑制,而PAR2受体被阻断后凝血酶对增殖结果影响不明显;凝血酶刺激MSC后,信号分子AKT发生磷酸化,c-MYC基因表达上调;当AKT信号通路被抑制后,c-MYC表达被抑制,凝血酶刺激细胞增殖效应被明显抑制.结论:凝血酶可通过PAR1受体介导的AKT信号通路的活化,上调MYC基因的表达,从而促进间充质干细胞的增殖.
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蛋白酶活化受体1与4在血小板活化中的作用机制
为了比较蛋白酶活化受体1和4(PAR1, PAR4)合成肽对血小板膜表面糖蛋白GPIbα表达及细胞骨架的影响,揭示蛋白酶活化受体在血小板信号传递中的作用,选择25 μmol/L PAR1与250 μmol/L PAR4两类合成肽分别在不同时间段(0-60分钟)活化血小板,应用流式细胞仪测定血小板膜糖蛋白GPIbα及P-选择蛋白的表达,并结合SDS-PAGE与转移电泳技术比较血小板活化前后细胞骨架GPIbα、肌动蛋白、肌球蛋白的变化,同时对膜骨架成分进行GPIbα免疫沉淀分析. 结果显示,PAR1与PAR4两类合成肽均可促使血小板活化,其P-选择蛋白水平显著升高,GPIbα表达进行性减少又出现逐渐回升的可逆性变化,各时间段引起的GPIbα改变在两者之间都具有显著差异(P<0.05) ,其中PAR1首先发生作用,但PAR4维持时间更长.细胞骨架蛋白分析显示肌动蛋白与肌球蛋白协同GPIbα呈现先增加后减少的动态变化.免疫印迹也表明与GPIbα相连的肌动蛋白及肌球蛋白出现可逆性改变.结论: PAR1与PAR4在血小板信号传递过程中发挥了重要作用,它们能各自独立地介导血小板活化,并导致GPIbα逆转,这与细胞骨架的积极参与相关.PAR1起效较快,PAR4维持作用更长久.
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蛋白酶活化受体的心血管效应
蛋白酶活化受体为一类G蛋白偶联受体,氨基末端被丝氨酸蛋白酶水解,新末端能激活受体自身,启动细胞内信号转导.本文综述了该类受体酶解活化在心血管系统中的生理作用和病理生理效应(炎症和修复等).
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蛋白酶活化受体对支气管哮喘炎症细胞功能调控的研究进展
蛋白酶活化受体(PAR)为7次跨膜G蛋白耦联受体,广泛分布于参与支气管哮喘(简称哮喘)的各种炎症细胞.内源性和外源性的蛋白酶通过激活PAR可调控炎症细胞的功能,从而影响哮喘气道炎症的发生和发展.本文综述蛋白酶受体对哮喘炎症细胞功能调控的研究进展.
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蛋白酶活化受体4在外周痛觉信号调节作用的研究进展
蛋白酶活化受体4(PAR4)是G蛋白偶联受体家族成员之一,可被凝血酶、胰蛋白酶活化.PAR4是血小板活化和炎症的强力调节受体,活化的PAR4可作为潜在的内源性镇痛因子,在正常和炎症条件下参与调节外周疼痛反应.PAR4通过致敏TRPV1、细胞内Ca<'2+>的释放和刺激周围感觉神经末梢释放P物质和CCRP参与了炎症和疼痛的周围机制.PAR4直接与电压门控Ca<'2+>通道的相互作用可能是PAR4对细胞除极诱发的Ca<'2+>信号产生抑制作用和PAR4参与镇痛的作用机制.
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蛋白酶活化受体1在B16F10瘤细胞体内外迁移中的作用
目的:研究蛋白酶活化受体1(PAR1)在肿瘤细胞转移过程中的作用,评估凝血系统与肿瘤转移的关系.方法:首先通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western-blot方法检测了siRNA对B16F10黑色素瘤细胞中PAR1的内源表达的影响,然后在PAR1受siRNA干扰的情况下检测B16F10细胞在体内外迁移能力,其结果与未受siRNA干扰的试验结果相对照,来确定PAR1在B16F10瘤细胞体内外迁移中的作用.结果:75 nmol/L的siRNA干扰48 h后可明显抑制B16F10中PAR1的表达,其转录水平抑制率是60%,蛋白水平的抑制率为85%;体外迁移实验表明,PAR1表达量减少后与对照组相比细胞迁移能力减弱(P＜0.01);动物实验表明,干扰B16F10细胞中的PAR1后,肿瘤细胞经血管迁移能力减弱,在肺部形成的转移瘤数目减少(P＜0.01).结论:PAR1具有促进肿瘤细胞迁移作用.开发PAR1封闭剂有望抑制肿瘤转移,可作为研制抗肿瘤转移药物的新靶点.
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蛋白酶活化受体2与心肌细胞凋亡
蛋白酶活化受体-2(protease-activated receptors-2,PAR-2)是蛋白酶活化受体(PARs)家族中的一员,属于典型的G蛋白耦联受体家族(G protein-coupled receptors,GPCRs)的重要成员.氨基末端被胰蛋白酶等水解,新末端能结合和激活受体自身,启动细胞内信号转导,参与炎症、血管发生、疼痛与修复及凋亡等多种生理及病理生理过程.近年研究表明,PAR-2与心血管系统疾病关系密切,本文就PAR-2与心肌细胞凋亡关系作一综述.
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蛋白酶活化受体在胎儿真皮成纤维细胞上的表达
成纤维细胞上存在蛋白酶活化受体(PARs),它是独特的跨膜受体,属G蛋白偶联受体(GPCR),目前人们在人与小鼠组织细胞中共发现4种PAR[1].凝血酶可激活PAR-1、PAR-3和PAR-4,而胰蛋白酶和类胰蛋白酶则激活PAR-2[1].不同器官来源的成纤维细胞表达不同类型的PAR,如皮肤成纤维细胞表达PAR-1和PAR-3基因.笔者前期研究证实培养的成人真皮成纤维细胞高表达PAR-1 mRNA,中度表达PAR-3 mRNA,弱表达PAR-2 mRNA,同时也表达PAR-1、PAR-3蛋白.胎儿皮肤原代成纤维细胞培养和表达PAR尚未见报道.为此我们建立体外培养胎儿原代皮肤成纤维细胞方法;检测并比较成人与胎儿皮肤成纤维细胞PAR的表达情况,为进一步研究其功能奠定基础.
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PARs对肝纤维化大鼠HSC活化和增殖的调控作用
目的 探讨蛋白酶活化受体(proteinase-activated receptors,PARs)对大鼠肝组织中肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)活化和增殖的调控及其在肝纤维化中的作用.方法 应用改良的Friedman方法和Nycodenz一步密度梯度离心法分离和培养结扎胆管诱导的肝纤维化SD大鼠HSC.观察HSC形态学变化,MTT法观察细胞的增殖能力,Western blotting检测a-SMA、PAR1和PAR2在HSC的表达,同时设立正常对照组和假手术组.结果 随着培养HSCs时间的延长,HSC的VitA和脂滴逐渐减少,甚至消失,HSC形态发生改变呈星状,细胞增殖活跃,而a-SMA、PAR1和PAR2随着培养时间延长其表达逐渐增强,原代培养14天达到高峰,a-SMA与PAR1和PAR2的表达呈一致关系.结论 PARs可促进a-SMA的表达,PARs表达与HSC的活化和增殖相关,参与了肝纤维化的形成.
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胆管结扎大鼠肝纤维化模型中HSC的分离和培养及PARs的表达
目的 探讨胆管结扎诱导的大鼠肝纤维化模型的制备和改良的Friedman方法分离和培养肝星状细胞(HSC),以及HSC蛋白酶活化受体(PARs)的表达与HSC活化的关系.方法 采用结扎大鼠胆管诱导肝纤维化动物模型,应用改良的Friedman方法和Nycodenz一步密度梯度离心法分离肝纤维化大鼠HSC.病理学检测大鼠肝纤维化分级,免疫组化检测Desmin、α-SMA和PARs在HSC的表达,实验同时设立阴性对照.结果 模型组大鼠肝纤维化病理学分级第1周为0,第2～3周多为1～2级,第4、5周为2～3级,第6周肝组织结构破坏,肝细胞变性坏死,炎性细胞浸润,病理学分级多为4级.改良的Friedman方法大鼠肝脏可获得5×106～1×107个细胞,存活率在96%以上,纯度平均为95%～96%.免疫组化检测α-SMA和PARs在培养的HSC于7、14天其表达逐渐增多,二者表达呈一致关系.结论 结扎大鼠胆管建立的肝纤维化模型形成时间较短,实验中无有毒物质接触,是肝纤维化的理想模型;改良的Friedman方法分离和培养HSC,在保证HSC纯度的同时,提高了产量和活率,是研究HSC的有效方法;PARs的表达与HSC活化相关.
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蛋白酶活化受体-2的研究进展
蛋白酶活化受体(protease-activated receptors,PARs)属于G蛋白偶联受体家族成员,其N 末端被蛋白酶裂解后,可形成新的N 末端.新N 末端能够结合、激活自身受体.PAR-2是PARs的成员之一,其激活、灭活、脱敏、复敏及其与信号转导途径的关系,尤其是与疾病(如参与炎症、止血、疼痛与修复)的关系正倍受关注.本文就PAR-2的活化及其在部分组织器官的作用综述如下.
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蛋白酶活化受体4 的研究进展
蛋白酶活化受体4(protease-activated receptor 4,PAR4) 是蛋白酶活化受体PARs (protease-activated receptors , PARs)的成员之一, PARs属于G蛋白偶联受体家族成员,其N-末端被蛋白酶裂解后,可形成新的N-末端,新N-末端能够结合、激活自身受体.
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脑内蛋白酶活化受体的表达及其功能的研究进展
凝血酶、组织纤溶酶原激活剂及纤溶酶等蛋白酶在人体内分布广泛,参与如消化、体内内环境稳态、生殖、免疫反应及转录等多种病理生理过程.在脑内,这些蛋白酶直接参与了神经突触联系的建立及脑卒中、PD、AD等疾病的过程[1].
