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蛋白酶激活受体-2与呼吸系统疾病
蛋白酶激活受体(protease-activated receptors,PARs)属于G蛋白偶联的受体家族,目前发现四个亚型,分别命名为:PAR-1、PAR-2、PAR-3和PAR-4.凝血酶可激活PAR-1、PAR-3及PAR-4;胰蛋白酶、纤维蛋白溶酶及TF/VIIa (组织因子/活化的凝血因子Ⅶ)复合物、活化的凝血因子X (Xa)等可以激活PAR-2.PAR-3和PAR-4主要表达于血小板膜表面,介导凝血酶反应,引起血小板激活、 血液凝固等反应;而PAR-1和PAR-2则表达于多种组织、细胞(包括肿瘤细胞),介导炎症反应、血管生长、动脉粥样硬化、恶性肿瘤侵袭与转移等过程.
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蛋白酶激活受体-2对缺血再灌注大鼠心肌细胞凋亡的影响
目的 探讨蛋白酶激活受体2(PAR-2)对缺血再灌注大鼠心肌细胞凋亡的影响.方法 40只雄性SD大鼠随机分为5组:假手术组(sham组),缺血再灌注组(I/R组)和丝-亮-异亮-甘-精-亮-酰胺(SLIGRL-NH2)低剂量组(0.5 mg/kg)、中剂量组(1 mg/kg)、高剂茸组(3 mg/kg),每组8只,建立大鼠在体心肌缺血再灌注模型.采用末端标记法(TUNEL)和DNA琼脂糖凝胶电泳的方法检测心肌细胞凋亡,免疫组织化学法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达,实时荧光定量PCR检测心肌细胞PAR-2mRNA的表达情况.结果 (1)SLIGRL-NH2中、高剂量组凋亡指数明显低于I/R组(SLIGRL-NH2中、高剂量组分别为23.36%±3.77%、15.56%±1.24%比I/R组35.19%±4.50%,P<0.05～0.01);凋亡相关蛋白Bcl-2高于I/R组(SLIGRL-NH2中、高剂量组分别为0.983±0.103、1.197±0.119比I/R组0.761±0.043,P<0.05～0.01);凋亡相关蛋白Bax的表达显著低于I/R组(SLIGRL-NH2中、高剂量组分别为0.646±0.041,0.578±0.029比I/R组0.759±0.035,P均<0.01);PAR-2mRNA的表达明显高于I/R组(SLIGRL-NH2中、高剂量组分别为3.73±0.45,7.62±0.81比I/R组1.42±0.41,P均<0.01).(2)DNA凝胶电泳结果显示,I/R组、SLIGRL-NH2低剂量组可见到DNA梯带,假手术组和SLIGRL-NH2中、高剂量组则无明显DNA梯带.结论 PAR-2激动剂SLIGRL-NH2可上调并激活PAR-2,并通过增加Bcl-2/Bax的比值抑制大鼠缺血再灌注心肌细胞的凋亡而发挥心肌保护效应,且该作用具有一定的剂量依赖效应.
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蛋白激酶激活受体-2在人类结直肠癌中表达的研究
目的 研究蛋白酶激活受体-2(PAR-2)在结直肠癌中的蛋白表达和mRNA表达的水平,并探讨其临床价值.方法 采用免疫组织化学法、免疫荧光分析法和实时荧光定量PCR的方法,检测38例结直肠肿瘤患者的正常肠黏膜组织、癌旁组织和癌组织PAR-2的蛋白和mRNA的表达情况.结果 (1)PAR-2在结直肠正常肠黏膜、癌旁组织和癌组织中表达阳性率分别为25%、45%和85%;(2)PAR-2的表达强度的IOD值由弱到强依次为正常肠组织(681±101)、癌旁组织(6627±971)和癌组织(15861±2709),三组间经方差分析差异有统计学意义(F=132.6,P＜0.05);(3)PAR-2 mRNA在正常肠组织、癌旁组织和癌组织的表达水平分别为1.57±0.69、2.91±1.4和4.09±1.99,三组间的差异有统计学意义(F=9.688,P=0.00);结论 PAR-2的表达在结直肠肿瘤中高表达;PAR-2的表达和结直肠肿瘤的发生和发展密切相关.
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蛋白酶激活受体-2在肿瘤细胞的表达及作用
蛋白酶激活受体-2(PAR-2)属于与G蛋白相耦联的受体家族,其N-末端被蛋白酶裂解后形成新的N-末端.新N-末端能够结合、激活受体自身.新资料表明,PAR-2可表达于某些肿瘤组织及培养细胞,与肿瘤细胞的增生、侵袭与转移及血管生成等密切相关.
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蛋白酶激活受体-2对缺血再灌注诱导心肌细胞凋亡的影响
目的 探讨蛋白酶激活受体-2(PAR-2)活化对缺血再灌注(1/R)大鼠心肌细胞凋亡的影响及细胞外信号调节激酶(ERK)1/2在此过程中的作用.方法 40只雄性SD大鼠随机均分为5组(n=8):假手术组,I/R组,PD组(0.3mg/kg ERK1/2通路制剂PD98059),PAR-2AP组(3mg/kg PAR-2激活肽SLIGRL-NH2),PD+PAR-2AP组.建立大鼠在体心肌I/R模型.采用末端标记法(TUNEL)检测心肌细胞凋亡,免疫组织化学法检测各组凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达,Western blotting检测各组大鼠心肌组织中磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)的表达水平.结果 与假手术组相比,1/R组、PD组、PAR-2AP组、PD+PAR-2AP组的凋亡指数,Bcl-2、Bax蛋白表达及p-ERK1/2水平均明显增高(P＜0.01).与I/R组比较,PAR-2AP可使凋亡指数和Box蛋白表达降低,而使Bcl-2的表达和p-ERK1/2水平增加;与PAR-2AP组比较,PD+PAR-2AP组凋亡指数和Bax蛋白表达增加,Bcl-2的表达和p-ERK1/2水平降低.PAR-2AP抑制凋亡的效应可被PED8059部分阻断.结论 PAR-2活化后可增加Bcl-2蛋白的表达,降低Bax的表达,从而部分抑制大鼠I/R心肌细胞的凋亡,发挥心肌保护效应,其机制可能涉及ERK路径.
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ERK/AP-1途径在蛋白酶激活受体2促进肝癌细胞增殖中的作用
目的 探讨胰蛋白酶和蛋白酶激活受体2(PAR-2)激动剂SLIGKV-NH_2对肝癌细胞增殖的影响及其细胞内信号转导机制.方法 免疫荧光及逆转录(RT)-PCR法检测HepG2细胞PAR-2蛋白及mRNA的表达;用SLIGKV-NH_2、胰蛋白酶、反PAR-2激动肽VKGILS-NH_2及PD98059干预细胞生长.用流式细胞术检测细胞周期改变情况;噻唑蓝(MTT)法检测对细胞增殖能力的影响;RT-PCR法检测PAR-2、c-fos及增殖细胞核抗原(PCNA)mRNA表达变化;Western印迹检测c-fos和PCNA蛋白表达变化.结果 肝癌HepG2细胞存在PAR-2蛋白和mRNA的表达.50μmol/LSLIGKV-NH_2、25 nmol/L胰蛋白酶处理细胞后,PAR-2 mRNA表达量(PAR-2/β-肌动蛋白)分别为0.70±0.04,0.99±0.05,高于对照组(0.35±0.05,F=135.534,P<0.01).胰蛋白酶、SLIGKV-NH_2组G_0/G_1期比例均明显低于对照组[(56.11±0.85)%、(57.85±0.46)%比(79.12±0.67)%,均P<0.01],S期、G_2/M期细胞比例和细胞增殖指数(PI)则明显高于对照组(均P<0.01).胰蛋白酶、SLIGKV-NH_2可以诱导肝癌HepG2细胞增殖(F=319.287,P<0.01),上调c-fos、PCNA mRNA和蛋白的表达(均P<0.01),且这些作用可被ERK激活性蛋白激酶(MEK)抑制剂PD98059抑制(均P<0.01);反PAR-2激动肽VKGILS-NH_2对HepG2细胞增殖能力的影响不明显,与对照组相比差异无统计学意义(均P>0.05).结论 肝癌HepG2细胞表达PAR-2.胰蛋白酶、SLIGKV-NH_2可以通过激活PAR-2诱导HepG2细胞的增殖活性,且该过程部分由ERK/AP-1信号通路所介导.
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PAR-2在恶性肿瘤的增殖、转移及侵袭中的作用
蛋白酶激活受体-2 (protease-activated receptor 2,PAR-2)是一种G蛋白偶联受体,其活化后可通过多条信号通路调节肿瘤细胞的生物学特性,并与恶性肿瘤的增殖、侵袭转移密切相关.目前关于PAR-2影响恶性肿瘤增殖、转移和侵袭的信号通路包括以下四条通路:(1)PLC激活后可以增加细胞Ca2+内流,继而激活MAPK信号通路及其下游的级联反应.(2)MAPK信号通路激活后使JNK磷酸化,使核内的转录因子c-Jun氨基末端的丝氨酸残基磷酸化,进而激活c-Jun而增强其转录活.(3)MAPK通路激活后使JNK磷酸化,抑制p53基因的表达,使细胞凋亡失控.(4)MAPK信号通路激活后使JNK磷酸化进而激活STAT3,STAT3的过度激活增强了EMT、VEGF、ECM降解等多个环节的发生,从而促进了肿瘤的侵袭和转移.同时,PH结构域、testisin及MMPs与恶性肿瘤的发生、发展有着密不可分的联系.本文就PAR-2的结构、功能及其对恶性肿瘤增殖、转移及侵袭的影响进行综述.
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肥大细胞及PAR-2与间质性膀胱炎纤维化的相关性研究
目的：探究肥大细胞及 PAR-2与间质性膀胱炎纤维化的相关性。方法：腹腔注射环磷酰胺建立大鼠模型，肥大细胞用甲苯胺蓝染色，PAR-2用免疫组化显示，计数。结果：肥大细胞数目在实验组与空白组差异显著，实验组与对照组、对照组与空白组相比无明显差别，PAR-2阳性细胞数在实验组、对照组、空白组三组两两比较时均无显著性差异。结论：肥大细胞与间质性膀胱炎的纤维化呈正相关，PAR-2与间质性膀胱炎的纤维化无关，肥大细胞致纤维化的其中一个机制是否通过 PAR-2尚未确定。
关键词： 肥大细胞(MC) PAR-2 间质性膀胱炎(IC) 纤维化 -
肥大细胞与狼疮肾炎肾间质纤维化关系的初步探讨
目的初步探讨狼疮肾炎(LN)患者肾间质中肥大细胞(MCs)与肾间质纤维化之间的关系.方法随机选取Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型LN患者各10例作为研究对象,微小病变病(MCD)患者11例作为对照组.采用免疫组织化学、免疫荧光双重染色方法观察肾组织中类胰蛋白酶(Try)染色阳性MCs、蛋白酶活化受体-2(PAR-2)、转化生长因子-β1(TGF-β1)及Ⅰ型胶原(ColⅠ)表达的变化.结果3个LN组肾间质MCs数量、肾小管上皮细胞PAR-2和TGF-β1及肾间质Col Ⅰ表达面积均较MCD对照组明显升高,其中Ⅳ型LN组上述4项指标增加明显,Ⅲ型LN组次之.MCs数量与肾小管上皮细胞PAR-2、TGF-β1及肾间质ColⅠ阳性染色面积呈显著正相关;肾小管上皮细胞PAR-2与TGF-β1阳性染色面积间呈显著正相关;MCs数量与肾间质PAR-2和TGF-β1阳性染色细胞数量分别呈显著正相关;PAR-2阳性染色细胞数量和TGF-β1阳性染色细胞数量间也呈显著正相关;肾间质中Try阳性染色细胞与PAR-2或TGF-β1阳性染色细胞存在部分重叠.结论MCs可能参与LN肾间质细胞外基质蓄积,推测可能与释放Try、活化PAR-2、增加TGF-β1表达相关.
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单侧输尿管结扎幼鼠肾组织肥大细胞类胰蛋白酶蛋白酶活化受体-2表皮生长因子蛋白的表达
目的：通过单侧输尿管结扎模型模拟临床肾纤维化的病理过程，观察肥大细胞与肾间质纤维化的关系，进一步探讨肥大细胞相关因子类胰蛋白酶、蛋白酶活化受体-2、表皮生长因子在肾间质纤维化中的表达。方法将大鼠随机平均分为3组，每组于术后3、7、11、14 d各取6只，留取左肾，检测胶原纤维的程度[采用（Masson）染色]及肥大细胞相关因子类胰蛋白酶、蛋白酶活化受体-2（PAR-2）、表皮生长因子（EGF）在单侧输尿管结扎（UUO）介导肾间质纤维化中的表达（采用免疫组织化学法）。结果 UUO模型组各时间点tryptase、PAR-2、EGF的表达水平显著高于假手术组（P＜0．05）；而雷帕霉素治疗组各时间点tryptase、PAR-2、EGF的表达水平均低于模型组（P＜0．05），但比假手术组的表达水平高（P＜0．05）。结论肥大细胞可能通过tryptase-PAR-2-EGF途径促进肾间质纤维化，而雷帕霉素治疗组可能有防治纤维化的作用。
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外搽非光敏中药组方对大鼠表皮c-KIT和
目的:探讨非光敏中药组方中药2号临床治疗白癜风有效的可能机制.方法:中药2号乙醇提取液外搽大鼠背部皮肤,并以75%乙醇外搽作为阴性对照,4周后取组织活检.采用免疫组化检测大鼠表皮中S100、干细胞因子受体(c-KIT)和蛋白酶激活受体-2(PAR-2)表达量的变化.结果:与75%乙醇外搽相比,中药2号外搽后S100阳性细胞数无显著性差异(P>0.05);c-KIT和PAR-2阳性细胞数均有增加,差异有显著性(P<0.05).讨论:中药2号外搽治疗白癜风有效的机理可能与促进细胞移行、黑素转运有关;而与黑素细胞增殖无关.
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蛋白酶激活受体2介导肥大细胞IL-4分泌
目的:探讨蛋白酶激活受体2(Proteinase activated receptor-2,PAR-2)的激活对肥大细胞P815介质分泌的影响.方法:肥大细胞培养后用PAR-2激动肽,胰蛋白酶、类胰蛋白酶、弹性蛋白酶结合PAR-2拮抗肽激发肥大细胞,收集上清并用ELISA方法检测组胺、IL-4和IL-6的水平.结果:PAR-2激动肽、胰蛋白酶、类胰蛋白酶以浓度依赖的方式促进肥大细胞P815分泌IL-4.PAR-2拮抗肽能阻断胰蛋白酶和类胰蛋白酶引起的肥大细胞IL-4分泌(P<0.05).胰蛋白酶、类胰蛋白酶以及PAR-2激动肽对肥大细胞IL-6的分泌和组胺释放无明显影响.弹性蛋白酶对肥大细胞IL-4、IL-6分泌及组胺释放功能无影响.结论:PAR-2的激活介导肥大细胞P815分泌IL-4;胰蛋白酶和类胰蛋白酶刺激肥大细胞IL-4分泌的发现为肥大细胞激活的自我放大机制提供了新的理论依据.
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基于H1R、PAR-2/TRPV1痒信号通路探讨马齿苋对急性湿疹的干预作用
目的:探讨马齿苋提取液对急性湿疹大鼠背部皮肤组胺受体1(H1R)、蛋白酶激活受体2(PAR-2)和瞬时感受器电位受体1(TRPV1)表达的影响及其对H1R、PAR-2/TRPV1信号通路的调控作用.方法:SD大鼠30只,分为正常组、模型组、马齿苋组,各组10只.采用二硝基氯苯(DNCB)建立急性湿疹模型,正常组除外.造模成功后,各组分别给予相应药物.末次给药后对各组大鼠进行湿疹面积及严重度指数(EASI)评分.免疫组化法检测H1R、PAR-2和TRPV1的表达,流式细胞技术测定细胞内钙离子(Ca2+)浓度.结果:与正常组比,模型组大鼠EASI(P<0.01)、H1R(P<0.05)和PAR-2(P<0.01)的含量、Ca2+浓度(P<0.01)显著增加,TRPV1增加差异不明显(P>0.05).与模型组比,马齿苋组大鼠EASI(P<0.01)、H1R(P<0.01)和PAR-2(P<0.01)的含量及Ca2+浓度(P<0.05)显著减少,TRPV1减少差异不明显(P>0.05).结论:马齿苋可减少H1R、PAR-2含量及降低Ca2+浓度,发挥治疗急性湿疹的作用,其机制可能是通过降低上游分子H1R、PAR-2含量,使其下游分子TRPV1失活,减少Ca2+内流,达到抗瘙痒的作用.
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肥大细胞和蛋白酶激活受体-2表达在胃食管反流病中的意义
背景:既往研究显示食管黏膜暴露于酸或胆汁引起的肥大细胞(MC)脱颗粒释放炎症介质以及蛋白酶激活受体-2(PAR-2)相关通路参与了胃食管反流病(GERD)的发病机制.人MC上可能存在PAR-2,但尚未见两者在GERD中关系的报道.目的:研究GERD患者食管黏膜上皮中的MC数量和PAR-2表达情况以及其间的相关性,明确两者在GERD发病中的意义.方法:以免疫组化方法检测30例糜烂性食管炎(EE)、32例非糜烂性反流病(NERD)以及20例正常对照者食管黏膜上皮中的MC数量和PAR-2表达.结果:EE组和NERD组类胰蛋白酶阳性MC数量和PAR-2表达强度均明显高于正常对照组,差异有统计学意义(P＜0.01),EE组与NERD组间差异无统计学意义.EE组和NERD组中的MC数量均与PAR-2免疫组化评分呈正相关(r=0.875,P＜0.01;r=0.884,P＜0.01).结论:GERD患者食管黏膜上皮中的MC数量增多、PAR-2表达上调且两者呈正相关.推测MC表面的PAR-2活化可激活MC脱颗粒,而MC释放的类胰蛋白酶又可激活PAR-2,两者共同参与了GERD的发病机制.
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肠道丝氨酸蛋白酶与腹泻型肠易激综合征
肠易激综合征(IBS)为临床常见功能性肠病,其病理生理学机制迄今尚未完全阐明.近年研究发现腹泻型IBS(IBS-D)患者肠黏膜和肠腔内丝氨酸蛋白酶的表达水平和活性明显增高,丝氨酸蛋白酶可能通过激活蛋白酶激活受体-2(PAR-2)引起肠黏膜通透性增加和内脏敏感性增高,在IBS-D的发病中起重要作用.本文就肠道丝氨酸蛋白酶与IBS-D的研究进展作一综述.
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蛋白酶活化受体2与心肌细胞凋亡
蛋白酶活化受体-2(protease-activated receptors-2,PAR-2)是蛋白酶活化受体(PARs)家族中的一员,属于典型的G蛋白耦联受体家族(G protein-coupled receptors,GPCRs)的重要成员.氨基末端被胰蛋白酶等水解,新末端能结合和激活受体自身,启动细胞内信号转导,参与炎症、血管发生、疼痛与修复及凋亡等多种生理及病理生理过程.近年研究表明,PAR-2与心血管系统疾病关系密切,本文就PAR-2与心肌细胞凋亡关系作一综述.
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蛋白酶活化受体2在皮肤生理病理功能中的研究进展
蛋白酶活化受体2在皮肤的多种细胞均有表达,包括角质形成细胞、成纤维细胞、汗腺、真皮血管内皮细胞和外周神经纤维以及免疫活性细胞,如中性粒细胞、嗜酸粒细胞和肥大细胞.炎症性皮肤病如特应性皮炎、银屑病中PAR-2的表达显著上升,而在白癜风和基底细胞癌中则表达下凋.蛋白酶活化受体2可被各种内外源性丝氨酸蛋白酶激活,活化后引起各种细胞因子和趋化因子的分泌和释放,主要发挥前炎症效应,促进炎症的发生,亦可调节皮肤的自我平衡和肿瘤监视.
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皮肤瘙痒发病机制和药物治疗的新靶点
皮肤瘙痒的神经生理学机制一直未被阐明,传递瘙痒特定神经纤维亚单位的发现极大增加对瘙痒发病机制的认识,临床上抗组胺药物常被用来治疗皮肤瘙痒,但对于改善患者慢性皮肤瘙痒的症状疗效不高,多种内源性物质包括生长冈子、神经肽、类花生酸类物质和细胞因子可以引起皮肤瘙痒.蛋白酶活化受体-2和辣椒素受体成为药物治疗的新靶点.
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蛋白酶激活受体2与表皮黑素转运
蛋白酶激活受体2属于耦联G蛋白受体家族的蛋白,它是一种存在于多系统的多功能分子,参与腺体分泌、平滑肌收缩、痛觉、组织纤维化等多种生理及病理过程.在表皮黑素单位中,蛋白酶激活受体2激活后以Rho依赖性吞噬作用介导黑素转运,在表皮的黑素转运、紫外线照射后皮肤色素加深、炎症及炎症后皮肤色素沉着中发挥重要调节作用.
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蛋白酶激活受体2在人角质形成细胞中的表达及功能测定
目的 分析人皮肤角质形成细胞中蛋白酶激活受体2(PAR2)的表达及其生物学功能,探讨其在皮肤屏障中的作用.方法 以体外培养的人皮肤角质形成细胞原代细胞或细胞系N//TERT细胞为研究对象,通过免疫荧光染色及蛋白印迹分析细胞中PAR2的表达及分布特点,采用荧光标记的钙流释放法测定PAR2的生物学功能,利用PAR2的天然底物胰蛋白酶或其激活肽、对照肽及拮抗肽诱导PAR2的活化,观察不同作用底物诱导PAR2活化的特点.结果 在正常培养条件下,PAR2在皮肤角质形成细胞中呈中低水平表达,不同的培养基组成及培养时间对PAR2的表达水平无明显影响.PAR2的作用底物诱导细胞的钙流释放具有时间及浓度依赖性特点,其中使用50 ～ 250 nmol/L胰蛋白酶作用于角质形成细胞后,可以诱导细胞内钙流释放；使用75 ～ 250 μmol/L PAR2特异性激活肽PAR2-AP(H2N-SLIGKV-COOH)处理角质形成细胞后,即可大程度地诱发PAR2的活化.而在相同浓度PAR2的拮抗肽PAR2-ANTAP(H2N-FSLLRY-COOH)作用下,PAR2的作用底物所诱导的细胞钙流释放明显受到抑制.分析比较相关荧光强度发现,PAR2激活底物诱导的细胞内钙流释放可以在瞬间(0～ 250 s)完成,以50 s的作用时间点细胞内钙流释放强度大.此外,PAR2的激活可以显著增加皮肤角质形成细胞ERK蛋白的磷酸化水平,从而激发细胞内MAPK信号转导通路.结论 皮肤角质形成细胞表面表达有PAR2受体,该受体活化受胰蛋白酶及PAR2的特异性激活肽调控,PAR2的活化可影响角质形成细胞的生理功能,诱导细胞内钙流释放.
