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蛋白酪氨酸磷酸酶SHP2与呼吸系统疾病
蛋白酪氨酸磷酸酶SHP2是一种在人类细胞中广泛表达的含有SH2结构域的蛋白磷酸酶,与细胞增殖分化、死亡调控、免疫调节及肿瘤发生等密切相关.SHP2在一些细胞信号转导途径中发挥重要的调节作用,如RTK/Ras/MAPK、JAK/STAT及PI3 K/Akt等.本文简介SHP2的结构、功能、信号转导以及阐述它在相关呼吸系统疾病中的作用.对SHP2研究的进一步深入可能为一些疑难的呼吸系统疾病的诊治提供新的策略.
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Shp2分子在肝癌干细胞中的表达及意义
目的 分析Shp2分子在肝癌干细胞(LCSC)中的表达和对肝癌(HCC)干性调控的意义,进而阐明Shp2调控LCSC的分子机制,探讨其作为HCC治疗靶点及HCC个体化治疗标志物的可行性.方法 采用real-time PCR检测化学治疗抵抗HCC皮下荷瘤中Shp2的表达,进而利用多种分选技术在HCC细胞系富集的干性样本中,通过real-time PCR技术检测Shp2的表达.采用干扰Shp2细胞系,通过Western blot方法明确Shp2对LCSC可能的调控机制.结果 裸鼠体内实验发现,Shp2在化学治疗抵抗HCC细胞皮下荷瘤中表达升高.细胞体外实验中Shp2在富集HCC干性细胞系中表达特异性升高.而在建立的HCC干扰Shp2细胞系中Shp2的表达与β-catenin密切相关,提示Shp2可能通过Wnt/β-catenin通路促进HCC干性形成能力.结论 本研究发现Shp2在HCC细胞中通过激活Wnt/β-catenin信号通路,促进LCSC的扩增.提示Shp2可能作为LCSC的标志物,为临床探索LCSC的靶向治疗提供新的分子靶点和临床转化依据.
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蛋白酪氨酸磷酸酶SHP2抑制剂的研究进展
SHP2是蛋白酪氨酸磷酸酶(PTP)家族的重要成员之一,参与了发育、新陈代谢、免疫反应以及肿瘤发生等重要的生理病理过程.大量的临床和基础研究显示,在努南(Noonan)综合征、黑色素瘤、白血病和实体瘤等多种疾病中存在SHP2的激活突变或高表达.因此,SHP2已成为肿瘤药物治疗的重要靶点.葡萄糖酸锑钠已完成黑色素瘤的Ⅰ期临床试验,磷酸雌莫司汀已进入前列腺癌的Ⅱ～Ⅲ期临床试验,新型特异性SHP2抑制剂PHPS1,NSC87877,Ⅱ-B808,呋莫索酮(Fumos)和变构霉素等均显示出一定的抗肿瘤作用.本文就近年来SHP2结构及其抑制剂的研究进展进行综述.
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环境污染物As及SHP2D61G/+激活对小鼠成纤维母细胞miRNA表达谱的影响
目的 建立环境致癌物与基因突变联合因素影响下的miRNA表达谱,为肿瘤发生机制的进一步研究提供新线索.方法 同等条件下,首先制备SHP2+/+野生型(wild type,Wt)及SHP2D61G/+激活突变(gain-of-function mutation,GOF mutation)小鼠永生化的成纤维母细胞(mouse embryonic fibroblasts,MEFs)细胞,之后以0.5 μmol/L的三氧化二砷急性处理MEFs细胞48 h后提取细胞总RNA,用小鼠miRNA芯片杂交/分析,建立miRNA(microRNA,miRNA,miR)表达谱,筛选差异表达显著者,用RT-PCR进行验证.结果 重金属化合物三氧化二砷处理SHP2+/+野生型和SHP2D61G/+突变的MEFs细胞48h后,数十个miRNAs出现差异性表达,miRNA在三氧化二砷诱导前后的细胞或SHP2激活突变与否的细胞出现表达增加或减少,且发现受三氧化二砷和SHP2激活突变影响变化一致的miRNAs,如mmu-miR-100(表达下降)、mmu-miR-1907(表达升高)等,RT-PCR检测发现mmu-miRNA-100、mmu-miRNA-1907的表达趋势与芯片结果是一致的.结论 基因突变与环境污染可以影响MEFs细胞的miRNA表达谱出现明显改变,这些改变可能是细胞恶性转化及肿瘤发生的基础.
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SHP2与乳腺癌侵袭转移相关性的研究进展
含Src同源区2蛋白质酪氨酸磷酸酶（Src homology 2 domain containing protein tyrosine phosphatases，SHP2）是一种跨膜型蛋白酪氨酸磷酸酶，通过调节细胞内蛋白质的酪氨酸磷酸化水平，在细胞信号转导通路及控制细胞活性中发挥重要的作用。其活化状态与乳腺癌发生发展过程中的Ras/ERK，PI3K/Akt/mTOR等信号通路、激素水平、侵袭转移、肿瘤干细胞的生物学行为等密切相关。SHP2基因的敲除或抑制SHP2蛋白表达，可不同程度阻断与乳腺癌侵袭、转移相关的信号通路，从而抑制肿瘤生长，甚至不可逆地使肿瘤丧失重新获得干细胞特性的能力。因此，SHP2很可能为抗肿瘤药物的研发提供一个新的靶点。本文就SHP2与乳腺癌侵袭转移的相关研究进展进行综述。
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SHP2介导IL-6促进乳腺癌细胞侵袭作用机制的研究
目的：探讨非受体型酪氨酸磷酸酶SHP2介导白细胞介素-6（interleukin-6，IL-6）促进人乳腺癌细胞侵袭的作用，以及相应的分子机制。方法：利用外源性重组IL-6处理人乳腺癌细胞T47D，采用表达IL-6的慢病毒感染T47D细胞使其内源性表达IL-6，观察细胞的形态学改变情况，分析细胞迁移和侵袭能力的变化。采用小RNA干扰的方法下调IL-6信号通路中关键分子SHP2的表达，观察其表达下降对IL-6促进乳腺癌细胞侵袭能力的影响，同时采用Western blot方法检测Erk1/2磷酸化变化。结果：上调IL-6在乳腺癌细胞中的表达显著促进乳腺癌细胞的迁移和侵袭能力，且细胞发生由上皮形态向类成纤维细胞形态的变化，同时伴随着上皮标志性蛋白E-cadherin表达下调和间质标志Vimentin表达上调。下调SHP2的表达明显抑制IL-6诱导乳腺癌细胞的上皮间质转化（epithelial mesenchymal transition，EMT）和侵袭能力，同时伴随着细胞内Erk1/2磷酸化水平的下降。结论：SHP2通过介导IL-6诱导的EMT促进乳腺癌细胞的迁移和侵袭能力。
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SHP2不同突变体对乳腺癌细胞迁移和侵袭能力的影响
目的：采用慢病毒感染的方式将SHP2基因和SHP2突变体导入乳腺癌细胞系MDA-MB-231中，研究SHP2及其各突变体对乳腺癌细胞迁移和侵袭能力的影响。方法：构建SHP2-WT和SHP2-T468M、SHP2-N308D和SHP2-2YF 3个突变体的慢病毒载体，完成慢病毒包装后，感染乳腺癌细胞系MDA-MB-231稳定表达。通过蛋白免疫印记检测高表达情况，免疫荧光观察定位情况，划痕、Transwell实验检测细胞的迁移和侵袭能力。结果：SHP2-WT增强了乳腺癌细胞迁移和侵袭能力，SHP2-T468M，SHP2-N308D与对照相比无显著影响，SHP2-2YF与对照相比降低了乳腺癌细胞的迁移和侵袭能力。结论：SHP2-WT能显著增强乳腺癌细胞迁移和侵袭能力，这可能与其磷酸酶活性无关，而与其542位和580位酪氨酸的磷酸化有关。
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人肝癌细胞中原癌基因Pokemon上调Shp2的表达
目的 研究人肝癌细胞中Pokemon对Shp2表达的影响.方法 通过RT-PCR、Real time PCR和Western blot方法检测人肝癌细胞系QGY-7703和人正常肝细胞系HL-7702中Pokemon和Shp2的mRNA和蛋白表达水平差异；并通过瞬时转染si-Pokemon RNA沉默QGY-7703细胞中Pokemon使其低表达,再检测Shp2的mRNA和蛋白水平变化.结果 Pokemon在人肝癌细胞系QGY7703中的表达水平高于人正常肝细胞系HL-7702,Shp2的表达水平高低与Pokemon表达一致；在QGY-7703细胞中沉默Pokemon表达之后,Shp2的表达也相应降低.结论 原癌基因Pokemon作为一种转录因子,可能调控Shp2的表达.
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绿原酸通过Shp2激活Erk1/2促进大鼠成骨细胞增殖的实验研究
目的 研究从杜仲叶中提取的绿原酸对大鼠成骨细胞的促增殖作用.方法 MTT法检测分别用0、0.1、1、10 μmol/L 4种不同浓度梯度的绿原酸和0.1μmol/L绿原酸+10μmol/L Shp2抑制剂NSC87887处理大鼠成骨细胞增殖情况;用无血清无酚红DMEM培养基培养的饥饿大鼠成骨细胞用上述药物处理后,用Western blot检测其p-Shp2(Tyr580)、Shp2、P-Erk和Erk蛋白表达.结果 MTT法结果显示绿原酸(0～1μmol/L)促进大鼠成骨细胞的增殖,呈浓度依赖性;Western blot结果显示绿原酸可以诱导大鼠成骨细胞的p-Shp2 (Tyr580)和Erk磷酸化水平升高,而NSC87887可以抑制其促进作用.结论 绿原酸能够促进大鼠成骨细胞的增值,并且是通过Shp2/Erk途径实现的.
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蛋白酪氨酸磷酸酶SHP2在幼鼠细菌性脑膜炎中的表达及意义
目的 研究蛋白酪氨酸磷酸酶SHP2在细菌性脑膜炎中的表达及意义.方法 脑池内注射肺炎链球菌诱导幼鼠脑膜炎模型,对照组脑池内注射0.9%氯化钠灭菌溶液.应用反转录(RT)-PCR、免疫印迹、免疫组织化学技术检测不同时间点脑组织酪氨酸磷酸酶SHP2的表达,观察SHP2蛋白表达与脑脊液TNF-α、WBC计数的关系.正态分布的两组数据比较采用t检验,多组数据的两两比较采用q检验.非正态分布的数据采用Kruskal-Wallis检验.相关性分析用Pearson检验.结果 与健康对照组相比,细菌性脑膜炎引起皮层SHP2在mRNA和蛋白水平表达均明显升高(F=12.74,P<0.01;F=198,P<0.01).SHP2 mRNA在脑膜炎第3天达高峰,约为健康对照的5倍,第7天仍维持在较高水平.SHP2蛋白表达在脑膜炎第3天开始升高,第7天达高峰,约为健康对照的9倍,第14天时仍维持较高水平.免疫组织化学显示,SHP2在皮层神经元和胶质细胞广泛表达,脑膜炎组第三脑室周围免疫染色阳性细胞数明显增多,从形态上看主要为胶质细胞.皮层SHP2蛋白表达与脑脊液WBC计数呈显著正相关(r=0.77,P<0.01),而与脑脊液TNF-α浓度无明显相关性.结论 SHP2参与了细菌性脑膜炎的病理生理过程,可能发挥抑制炎性反应、促进炎性反应修复的作用,可作为病情变化的参考指标.
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基于酪氨酸磷酸酶SHP2变构抑制剂的肿瘤靶向治疗
蛋白质酪氨酸磷酸化对细胞的生命活动至关重要,其调控异常与多种疾病的发生密切相关.在酪氨酸磷酸酶家族中,SHP2是目前唯一被证实的原癌蛋白,参与调控多个癌症相关过程.其活化突变会导致白血病、黑色素瘤、乳腺癌及肺癌的发生.2016年以来,随着高特异性、可口服的SHP2新型变构抑制剂成功开发,靶向抑制SH-P2在抑制肿瘤生长以及改善肿瘤耐药性方面逐渐显现出了强大的临床应用潜力,提示SHP2抑制剂有望成为首个靶向酪氨酸磷酸酶的抗肿瘤靶向药物.
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蛋白酪氨酸磷酸酶Shp2与肿瘤
Shp2(SH2 domain-containing protein-tyrosine phosphatase-2)分子由PTPN1基因编码,是一个在体内广泛存在的非受体型蛋白酪氨酸磷酸酶,既可以通过磷酸酶的催化活性来正向调控下游信号转导通路,也可以作为磷酸酶非依赖性的接头蛋白发挥正向调控作用,在特定的条件下亦可发挥负向调控作用,从而广泛参与细胞的分化、迁移等生物学功能的调控及相关的信号转导过程.PTPN11突变被认为是青少年粒单细胞白血病(juvenile myelomonocytic leukemia,JMML)的高危因素,同时,因其在不同类型白血病中均存在着Shp2的异常活化和突变而被认为是白血病的原癌基因；在前列腺癌、乳腺癌、胰腺癌、胃癌和神经胶质瘤中,Shp2也被报道呈过度活化状态；在肺癌中Shp2作为癌基因通过调控多种机制促进肿瘤的发生、发展.但在肝癌发生过程中,Shp2却在特定环境的影响下发挥抑癌基因的作用.总之,作为重要的节点分子,Shp2在肿瘤发生、发展的过程中发挥着重要的调控作用,是潜在的治疗靶点.
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SHP2在幽门螺杆菌脂多糖介导STAT3通路调控IL-6表达的作用
目的 探讨SHP2在幽门螺杆菌脂多糖(Hp-LPS)介导STAT3通路调控IL-6表达的作用.方法 Hp-LPS0、1、10μg/ml刺激胃癌细胞MKN4512h,采用RT-PCR检测STAT3、SHP2mRNA表达,Western blot检测STAT3、SHP2蛋白表达.Hp-LPS 1μg/ml刺激胃癌细胞MKN450、1、10、30、60min以及Hp-LPS 0、1、10、20、40μg/ml刺激胃癌细胞MKN4530min时,采用Western blot检测p-STAT3和p-SHP2蛋白表达.ELISA法检测SHP2阻断前后IL-6水平变化.结果 STAT3mRNA相对表达量随Hp-LPS浓度升高而升高(P<0.01),SHP2 mRNA相对表达量随Hp-LPS浓度升高而降低(P<0.05).不同浓度Hp-LPS刺激细胞MKN45的STAT3和SHP2蛋白相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05).Hp-LPS刺激细胞各时间点p-STAT3蛋白相对表达量差异有统计学意义(P<0.05).p-STAT 3蛋白相对表达量随着Hp-LPS浓度的增加而增高(P<0.05).阻断SHP2后的IL-6水平高于阻断前[(15.17±1.16)pg/ml vs.(10.63±0.66)pg/ml](P<0.05).结论 SHP2是Hp-LPS激活STAT3通路和促进IL-6表达的重要调控因子.
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杜仲叶通过Shp2激活Erk1/2促进BMSCs增殖的研究
目的 研究杜仲叶提取物对大鼠BMSCs的增殖作用及其分子机制.方法 使用密度梯度离心和贴壁培养法从SD大鼠股骨骨髓中获取BMSCs,通过流式细胞仪检测细胞表面抗原；分别用0,5,20,60,100 mg/ml的杜仲叶提取物和20mg/ml杜仲叶提取物+10 μmol/L Shp2抑制剂NSC87887处理BMSCs,2d后BrdU检测细胞增殖情况；用无血清无酚红培养基饥饿大鼠BMSCs 6 h后,一组分别加入0,5,20,60,100 mg/ml的杜仲叶提取物处理15 min,另一组用10 μmol/LShp2抑制剂处理预处理2h后加入20 mg/ml杜仲叶提取物处理15 min,Western blot检测p-Shp2(Tyr580)和Erk1/2磷酸化水平的变化.结果 流式细胞仪细胞表面抗原检测显示CD29、CD90呈阳性,CD34、CD45呈阴性；BrdU结果显示杜仲叶提取物促进BMSCs增殖,并具有浓度依赖性,NSC87887可以抑制其促进作用；杜仲叶提取物可以诱导BMSCs的p-Shp2 (Tyr580)和Erk1/2磷酸化水平升高,而对诱导Erk1/2磷酸化的促进作用是通过激活Shp2来完成的.结论 杜仲叶提取物通过Shp2/Erk途径促进大鼠BMSCs增殖.
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苦参碱对宫颈癌HeLa细胞JAK-STAT通路负调控机制研究
目的:观察苦参碱对宫颈癌HeLa细胞中JAK-STAT信号通路的负性调控作用.方法:以不加药细胞为对照组,实验组加入不同浓度苦参碱(0.5、1.0、2.0 mg/mL)作用24 h,Western blot法检测SHP2、SOCS3、PIAS1蛋白表达、Real-Time PCR检测SHP2、SOCS3、PIAS1的mRNA表达.结果:与对照组比较,各给药组细胞SHP2、SOCS3蛋白及mRNA表达显著上调(P＜0.05),其作用呈浓度依赖性;各组PIAS1蛋白及mRNA表达差异均无统计学意义(P＞0.05).结论:苦参碱通过上调HeLa细胞中SHP2、SOCS3蛋白及mRNA水平,负性调节JAK-STAT信号通路活性,抑制宫颈癌HeLa细胞增殖.
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SHP2在非小细胞肺癌中的表达及意义
背景与目的 以往研究表明,异常的酪氨酸磷酸化与癌的发生密切相关,本研究旨在采用组织芯片技术结合免疫组化方法来研究蛋白酪氨酸磷酸酶SHP2在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中的表达及意义.方法 80例NSCLC石蜡标本制成组织芯片,采用链菌素亲生物素-过氧化物酶法(SP)进行免疫组化检测.结果 SHP2在NSCLC中的表达率为70.00%(56/80),其中鳞癌为72.5%(29/40),腺癌为67.50%(27/40);有无淋巴结转移的患者SHP2的阳性表达率分别为73.61%(53/72)和37.50%(3/8)(P<0.05);SHP2的表达与患者性别、年龄、肿块大小、病理类型、分化程度、临床分期间无统计学差异(P<0.05).结论 SHP2在NSCLC中有较高的表达率,且与淋巴结转移密切相关,提示肺癌的发生、发展可能与SHP2有关,SHP2可能是肺癌新的标志物及治疗靶点.
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SH2域、SHP2 cDNA的克隆鉴定和在大肠杆菌中的表达及其与CagA的相互作用
目的研究SH2(Src同源体2)域和SHP2(含2个SH2域的蛋白酪氨酸磷酸酶)蛋白的基因克隆和表达.方法根据Gene Bank中SH2和SHP2的基因序列设计引物,以PCR法扩增出SH2和SHP2基因,将其插入pQE30质粒中,转化进E.coli 感受态细胞中,筛选阳性克隆并研究其表达.结果所克隆的目的基因片断经PCR法鉴定和序列分析证明正确.结论已成功地扩增SH2和SHP2基因并克隆到pQE30 载体上,转化大肠杆菌菌株有表达,并探讨其与CagA(细胞毒性关联的基因A抗原)的相互作用及导致胃细胞癌变的原因.
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SHP2与肿瘤相关性的研究进展
蛋白酪氨酸磷酸酶SHP2(Src homology-2 domain-containing phosphatase 2)是蛋白酪氨酸磷酸酶家族成员之一,在细胞增殖、凋亡等过程中起重要的作用.SHP2与多种肿瘤的发生发展密切相关,如血液系统恶性肿瘤、乳腺癌、肺腺癌等.SHP2通过参与调节多种不同的信号转导通路发挥不同的作用,既可促癌也可抑癌.因此,深入研究SHP2在肿瘤中的作用机制,以此作为癌症治疗的分子靶点具有重大意义.
