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缝隙连接蛋白36表达变化对帕金森病模型大鼠基底节环路功能的影响
目的 观察缝隙连接蛋白36(Cx36)在帕金森病模型大鼠纹状体和运动皮质区的表达变化,并探讨缝隙连接功能异常与帕金森病基底节环路功能紊乱间的关系.方法 采用6-羟多巴胺注射法建立帕金森病动物模型,免疫组织化学染色及Western blotting法检测纹状体及运动皮质区Cx36表达变化,免疫荧光双标染色进一步分析纹状体脑啡肽阳性传出神经元及Parvalbumin阳性中间神经元Cx36表达变化.结果 (1)免疫组织化学染色显示,帕金森病组大鼠右侧纹状体及运动皮质区Cx36表达水平高于正常对照组(均P＜0.05).(2)免疫荧光双标染色显示,纹状体脑啡肽阳性神经元数目和Cx36表达水平高于正常对照组(均P＜ 0.05),而Parvalbumin阳性神经元数目和Cx36表达水平低于正常对照组(均P＜0.05).(3)Western blotting法检测显示,帕金森病组大鼠右侧纹状体[(119.31±8.92)％]及运动皮质区[(138.20± 17.88)％] Cx36表达水平高于正常对照组[(104.05±3.82)和(105.27±2.82)％,均P＜0.05].结论 帕金森病大鼠右侧纹状体及运动皮质区Cx36表达水平升高,纹状体脑啡肽阳性传出神经元Cx36表达上调,Parvalbumin阳性中间神经元Cx36表达下调.提示缝隙连接异常可能参与帕金森病皮质-基底节-皮质环路功能紊乱的发生机制.
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鼻咽癌中肿瘤转移相关基因Ezrin的表达及临床意义
目的:研究肿瘤转移相关基因Ezrin在鼻咽癌组织中的表达并探讨其临床意义.方法:取38例鼻咽癌患者癌组织及20例鼻咽黏膜慢性炎症患者的鼻咽组织行免疫组织化学二步法检测Ezrin蛋白的表达,比较它们的表达结果;并分析鼻咽癌组织Ezrin的表达与患者的临床资料,如性别、年龄、分期、复发、淋巴结转移等的关系.结果:鼻咽癌组织和癌旁黏膜的Ezrin蛋白表达与鼻咽黏膜慢性炎组织相比差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01),但鼻咽癌组织和其癌旁黏膜Ezrin表达差异无统计学意义(P＞0.05);speanTIan等级相关分析显示,癌组织中Ezrin蛋白表达率随着患者年龄增大而增加(P＜0.05),而与患者性别、临床分期、复发、淋巴结转移无显著相关(均P＞0.05);线性回归分析显示,Ezrin对患者的生存时间有显著影响(P＝0.01).结论:Ezrin对鼻咽癌患者的预后有判断价值.
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心房颤动患者右心房肌闰盘重构的研究
目的:探讨心房颤动(房颤)患者右心房肌细胞间闰盘相关蛋白表达变化与房颤发生并维持的意义.方法:心外科患者53例,其中房颤患者27例(房颤组),窦性心律患者26例(窦律组),在建立体外循环前取右心房组织.分别将心房组织提取mRNA和制作病理组织切片,部分组织送电镜检查.用RT-PCR方法检查Cx40、Cx43 mRNA表达变化,用免疫组化方法检测Cx43、N-钙黏素的分布变化.结果:两组患者Cx40、Cx43 mRNA表达无变化,免疫组化结果显示房颤组缝隙连接、N-钙黏素分布发生不均一,光镜、电镜证实房颤组缝隙连接发生侧边化分布明显.结论:闰盘相关蛋白表达改变在房颤的维持中发挥重要作用.
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连接蛋白与冠状动脉介入治疗术后再狭窄
经皮冠状动脉介入治疗(PCI)已成为冠心病血运重建的重要手段,然而,冠状动脉再狭窄的发生严重影响了介入治疗的长期预后.近年来,一些携带有抗炎、抗增殖或促愈合等药物的新型支架不断涌现,但是,结果并不尽如人意[1].
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新疆哈萨克、汉族原发性高血压与Cx37基因多态性相关性研究
目的：探讨新疆哈萨克族（哈族）、汉族人群缝隙连接蛋白(Cx)37基因多态性与原发性高血压（EHT）的相关性。方法新疆地区EHT患者（EHT组）500例，哈、汉族各250例；同期健康体检者（NT组）500例，其中哈、汉族各250例。比较2族EHT组与NT组人群年龄、体质量指数（BMI）、收缩压（SBP）及舒张压（DBP）等一般临床特征情况。Cx37基因rs1630310、rs697372、rs705193的单核苷酸多态性（SNP）位点基因多态性，对疾病人群进行Hardy-Weinberg平衡检测，计算各组哈族和汉族各位点基因型频率及基因频率差异。结果哈族、汉族EHT组与NT组BMI、SBP、DBP、载脂蛋白比值及同型半胱氨酸差异均有统计学意义(P<0.05)。EHT组与NT组rs705193位点基因型频率和基因频率差异均无统计学意义(P>0.05)。哈族rs1630310位点基因型频率及基因频率差异均有统计学意义(P<0.01)；哈族rs697372位点基因型频率差异无统计学意义（P>0.05）,但基因频率差异有统计学意义（P<0.05），汉族2组rs1630310、rs697372位点基因型频率及基因频率差异均无统计学意义。结论 Cx37基因多态性与新疆哈族EHT的发生有关，rs1630310及rs697372位点多态性可能与哈族EHT的发生有关。
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气道上皮细胞紧密连接在小鼠哮喘中的病理学改变
目的 探讨小鼠支气管哮喘(哮喘)中气道上皮紧密连接的病理学改变.方法 10只小鼠随机分为对照组和哮喘组,每组5只.哮喘组于第0、7天腹腔注射鸡卵清蛋白(OVA)溶液,在第14、15、16天以雾化的OVA熏诱小鼠,1 h/次、1次/d;对照组用PBS溶液替代OVA;2组小鼠在第18天回收肺组织,采用免疫荧光染色法评价小鼠哮喘模型的有效性,荧光定量PCR检测紧密连接相关蛋白基因Claudin 1、Claudin 3、Claudin 4、Claudin 5、Claudin 7、Clau-din 10在肺组织中的表达.结果 哮喘组Claudin 3、Claudin 4、Claudin 10 mRNA水平较对照组低(P<0.05),而Clau-din 1、Claudin 5、Claudin 7 mRNA水平与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 哮喘病理过程中气道上皮细胞紧密连接松散,提示气道上皮屏障破坏.
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缝隙连接蛋白43与心律失常关系的研究进展
近年来心律失常的治疗由电生理转向细胞间分子的传递与交换.本文以缝隙连接蛋白43为着眼点,综述了缝隙连接、连接蛋白43的基本功能、病理机制以及与室性心律失常、心房纤颤发生的关系.同时总结了目前作用于缝隙连接、连接蛋白43表达的中西药,预测了近年该类药物的发展方向.
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重组人膜联蛋白A5对内毒素诱发心肌细胞员伤时p-PKCα和p120-catenin表达的影响
目的 评价重组人膜联蛋白A5对内毒素诱发心肌细胞损伤时磷酸化蛋白激酶Cα(p-PKCα)和p120-catenin表达的影响.方法 体外培养H9c2心肌细胞,采用随机数字表法分为3组(n=18):对照组(C组)、内毒素组(L组)和重组人膜联蛋白A5组(A组).A组加入重组人膜联蛋白A5(终浓度5 ng/ml)孵育2h,然后L组和A组给予内毒素(终浓度1μg/ml)孵育.于孵育4h时,采用凋亡试剂盒检测细胞凋亡率,免疫共聚焦法测定细胞间隙,采用Western blot法测定p-PKCα和p120-catenin的表达.结果 与C组比较,L组细胞凋亡率升高,细胞间隙增加,p120-catenin表达下调,p-PKCα表达上调(P＜0.05);与L组比较,A组细胞凋亡率降低,细胞间隙减少,p120-catenin表达上调,p-PKCα表达下调(P＜0.05).结论 重组人膜联蛋白A5可抑制PKCα磷酸化,进而上调p120-catenin表达,减轻内毒素诱发的心肌细胞损伤.
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火把花根对急性肺损伤大鼠肾组织紧密连接蛋白claudin-5及ZO-1表达的影响
目的 评价火把花根对急性肺损伤大鼠肾组织紧密连接蛋白claudin-5及ZO-1表达的影响.方法 清洁级健康雄性SD大鼠24只,12～13周龄,体重250～ 300 g,采用随机数字表法分为3组(n=8):对照组(C组)、急性肺损伤组(ALI组)和火把花根组(H组).采用尾静脉注射油酸0.04 ml/kg的方法制备大鼠急性肺损伤模型.H组尾静脉注射前给予火把花根片600 mg·kg-1·d-1溶液连续灌胃10d,第10天灌胃后1h尾静脉注射油酸,6h后采集腹主动脉血样,测定血浆肌酐(Cr)和尿素氮(BUN)浓度,随后处死大鼠取肺和肾,计算肺湿重/干重(W/D)比值,观察肺组织病理学结果,采用免疫组化法和Western blot法检测肾组织claudin-5和ZO-1的表达,光镜下观察肾组织病理学结果,并行肾小管损伤评分(RTDS).结果 与C组比较,ALI组肺W/D比值、血浆Cr和BUN浓度、RTDS升高,肾组织claudin-5和ZO-1表达下调(P＜0.01);与ALI组比较,H组肺W/D比值、血浆Cr和BUN浓度、RTDS降低,肾组织claudin-5和ZO-1表达上调(P＜0.01).H组肺组织和肾组织病理学损伤较ALI组明显减轻.结论 火把花根可通过上调肾组织紧密连接蛋白claudin-5及ZO-1的表达减轻急性肺损伤大鼠的肾损伤.
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1,6-二磷酸果糖预先给药对大鼠急性心肌缺血时缝隙连接蛋白43的影响
目的 探讨1,6-二磷酸果糖(FDP)预先给药对大鼠急性心肌缺血时缝隙连接蛋白43(Cx43)的影响.方法 健康成年雄性SD大鼠36只,体重220～280 g,周龄8～12周,随机分为3组(n=12):假手术组(S组)开胸前即刻经股静脉注射生理盐水5 ml,仅游离血管穿线不结扎;缺血组(I组)在心肌缺血前10 min经股静脉注射生理盐水5 ml;FDP组(F组)在心肌缺血前10 min经股静脉注射10%FDP 100 mg/kg (5 m1).I组和F组采用结扎冠状动脉左前降支30 min的方法制备大鼠急性心肌缺血模型,记录结扎后30 min内心律失常的发生情况,评价心律失常严重程度.结扎30 min后快速摘取心脏.测定左心室面积(LVA),缺血区面积(AAR)和梗死区面积(IA),计算AAR/LVA和IA/AAR.测定心肌Cx43表达.结果 与S组比较,I组和F组心肌Cx43表达下调,心律失常严重程度升高(P<0.05).与I组比较,F组心肌Cx43表达上调,IA/AAR降低,心律失常严重程度降低(P<0.05).结论 FDP预先给药可减轻大鼠急性心肌缺血损伤,其机制与上调心肌Cx43表达有关.
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低温联合七氟醚对兔心肌缝隙连接蛋白connexin43表达的影响
目的 探讨低温联合七氟醚对兔心室肌缝隙连接蛋白connexin43(Cx43)表达的影响.方法 成年家兔,体重1.5 ～2.0 kg,雌雄不拘,成功制备Langendorff模型的40个心脏,采用随机数字表法,将其分为4组(n=10),平衡灌注15 min时,正常对照组(C组)继续灌注37℃K-H液；七氟醚组(S组)灌注2.4％七氟醚饱和的37℃K-H液；低温组(H组)灌注30℃ K-H液；低温联合七氟醚组(HS组)灌注2.4％七氟醚饱和的30℃K-H液,于灌注30 min时取左心室前壁组织,分别采用免疫组化及Westem blot法检测心肌细胞Cx43表达情况.结果 与C组比较,H组心肌细胞Cx43表达下调(P＜0.05),S组和HS组心肌细胞Cx43表达差异无统计学意义(P＞0.05),S组和HS组Cx43主要表达细胞两端的闰盘处,H组Cx43在闰盘处分布较少,而在侧侧连接处增多.结论 七氟醚可抑制低温诱导兔心肌Cx43表达下调和分布紊乱,可能是七氟醚抑制低温诱发心律失常发生的机制.
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脊髓kindlin-1在大鼠神经病理性痛中的作用:与Wnt3a的关系
目的 评价脊髓kindlin-1在大鼠神经病理性痛中的作用及其与Wnt3a的关系.方法 清洁级健康雄性SD大鼠18只,体重250～ 280 g,10～12周龄,采用随机数字表法分为3组(n=6):假手术组(S组)、神经病理性痛组(NP组)和kindlin-1抑制组(K组).采用坐骨神经慢性压迫法建立大鼠神经病理性痛模型,S组仅暴露坐骨神经不结扎.K组于术前21 d鞘内注射shRNA抑制kindlin-1表达,S组和NP组于术前21 d鞘内注射空载病毒.分别于术前1d及术后1、4、7、10、13d时测定机械缩足反应阈(MWT)和热缩足潜伏期(TWL).于术后13d时痛阈测定结束后处死大鼠取脊髓组织,采用Western blot法检测脊髓kindlin-1和Wnt3a表达,RT-PCR法检测脊髓Wnt3a mRNA表达.结果 与S组比较,NP组术后4、7、10和13 d时MWT降低,TWL缩短,脊髓Wnt3a及其mRNA、kindlin-1表达上调(P＜0.05);与NP组比较,K组术后4、7、10和13d时MWT升高,TWL延长,脊髓Wnt3a及其mRNA、kindlin-1表达下调(P＜0.05).结论 kindlin-1通过上调Wnt3a表达参与大鼠神经病理性痛的发生发展过程.
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异丙酚对多西紫杉醇致转染Cx32宫颈癌Hela细胞毒作用的影响
目的 评价异丙酚对多西紫杉醇致转染Cx32宫颈癌Hela细胞毒作用的影响.方法 将转染Cx32的宫颈癌HeLa细胞用高密度接种法(1×l05个/ml)和低密度接种法(500个/ml)获得生长融合和生长未融合细胞,加入多西环素培养48 h后,采用随机数字表法,将两种方法获得的细胞各分为5组(n=8):空白对照组(C组)；多西紫杉醇组(D组)加入多西紫杉醇5 nmol/L；多西紫杉醇+脂肪乳组(D+I组)加入多西紫杉醇5 nmol/L及脂肪乳10 μg/ml；多西紫杉醇+18-α-GA组(D+18-α-GA组)加入多西紫杉醇5 nmol/L及18-α-GA 10 μmol/L;多西紫杉醇+异丙酚组(D+P组)加入多西紫杉醇5nmol/L及异丙酚2.8 μg/ml.18-α-GA、脂肪乳及异丙酚于多西紫杉醇之前加入,18-α-GA单独的作用时间为lh,后两者均为2h.3种药物与多西紫杉醇共同的作用时间均为2h.采用标准细胞集落形成分析法计算细胞集落形成率.结果 高密度接种法处理的D组细胞集落形成率比低密度接种法处理的D组明显降低(P＜0.05).在高密度接种法处理的细胞中,与C组比较,其余各组细胞集落形成率降低(P＜0.05)；与D组和D+I组比较,D+18-α-GA组和D+P组细胞集落形成率升高(P＜0.05)；D组和D+I组间上述指标差异无统计学意义(P＞0.05).在低密度接种法处理的细胞中,与C组比较,其余各组细胞集落形成率降低(P＜0.05)；其余各组间上述指标比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 异丙酚可减弱多西紫杉醇对转染Cx32宫颈癌HeLa细胞毒作用,其作用机制与抑制细胞缝隙连接功能有关.
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异丙酚对大鼠肝BRL-3A细胞缝隙连接功能及顺铂诱导肝BRL-3A细胞毒性的影响
目的 探讨异丙酚对大鼠肝BRL-3A细胞缝隙连接功能及顺铂诱导肝BRL-3A细胞毒性的影响.方法实验Ⅰ:将体外培养的大鼠肝BRL-3A细胞接种于12孔板内,采用随机数字表法,将其随机分为6组(n=8):对照组(C组)、脂肪乳组(10μg/ml,Ⅰ组)、油酸酰胺组(25 μmol/L,O组)和不同浓度异丙酚组[P1组(1.5 μg/ml)、P2组(2.8μg/ml)、P3组(4.1μg/ml)].采用细胞接种荧光示踪法计算荧光示踪剂传递率和抑制率.实验Ⅱ:用不同密度接种方法获得大鼠肝BRL-3A细胞的高密度组(接种密度为1×105个/ml)和低密度组(接种密度为500个/ml),采用随机数字表法,将两组各分为5个亚组(n=8):空白对照亚组;顺铂亚组加入顺铂2.5 μmol/L;顺铂+脂肪乳亚组加入顺铂2.5 μmol/L及脂肪乳10 μg/ml;顺铂+油酸酰胺亚组加入顺铂2.5 μmol/L及油酸酰胺25 μmol/L;顺铂+异丙酚亚组加入顺铂2.5 μmol/L及异丙酚2.8μg/ml,其中油酸酰胺和异丙酚均于顺铂之前加入,单独的作用时间分别为1 h和3 h,与顺铂共同的作用时间为1 h.采用标准细胞集落形成分析法评估异丙酚对顺铂的细胞毒性.结果 与C组比较,O组、P1组、P2组和P3组荧光示踪剂传递率降低,抑制率升高(P＜0.05);异丙酚呈浓度依赖性地降低荧光示踪剂传递率及升高抑制率(P＜0.05).在高密度组中,异丙酚和油酸酰胺可升高细胞集落形成率(P＜0.05),但在低密度组中,未见上述效应(P＞0.05).结论 异丙酚呈浓度依赖性地抑制大鼠肝BRL-3A细胞的缝隙连接功能;异丙酚可减弱顺铂诱导的大鼠肝BRL-3A细胞毒性,其机制可能与抑制细胞缝隙连接功能有关.
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慢性神经痛大鼠脊髓背角星形胶质细胞缝隙连接蛋白43表达的变化
目的研究慢性神经痛大鼠脊髓背角星形胶质细胞缝隙连接蛋白43(Cx43)表达的变化.方法20只SD大鼠随机分为两组,神经痛模型(CCI)组:结扎右侧坐骨神经,假手术(Sham)组:未结扎坐骨神经,每组10只.分别于手术前1 d、术后1、3、5、7、14 d(分别记为T0、T1、T3、T5、T7、T14)观察大鼠疼痛行为学变化,测定右后肢热刺激回缩潜伏期(PWTL)、电刺激回缩阈值(PWET),并于T14取L4～5脊髓,采用免疫组化法分析Cx43和胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)表达的变化.结果与T0比较,CCI组T1～14PWTL缩短、PWET降低(P＜0.01),Sham组T1～5 PWTL缩短、PWET降低(P＜0.01),T7后恢复至术前水平(P＞0.05).CCI组右侧脊髓背角GFAP、Cx43染色均强于Sham组,且主要集中在Ⅰ～Ⅱ层.CCI组右侧脊髓GFAP、Cx43阳性染色面积均大于Sham组(P＜0.01),CCI组、Sham组GRAP阳性染色面积分别占(29±7)%、(19±5)%、Cx43阳性染色面积分别占(17±3)%、(4±1)%.两组左侧脊髓GFAP与Cx43染色差异无显著性.结论慢性神经痛大鼠脊髓背角星形胶质细胞Cx43与GFAP增加,提示星形胶质细胞缝隙连接可能在神经痛的形成和维持中起重要作用.
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术后认知功能障碍老龄大鼠海马神经元缝隙连接蛋白36表达的变化
目的 评价术后认知功能障碍老龄大鼠海马神经元缝隙连接蛋白36(Cx36)表达的变化.方法 健康雄性SD大鼠90只,20月龄,体重500～600 g,按随机数字表法,将其随机分为3组(n=30):正常对照组(C组)、假手术组(S组)和术后认知功能障碍组(POCD组).采用脾脏切除术制备老龄大鼠术后认知功能障碍模型,分别于脾脏切除术后1、3、7 d(T1-3)时每组各取10只大鼠,经旷场分析和Y型迷宫实验测试大鼠认知功能,随后处死大鼠取海马,采用免疫组化法检测海马神经元Cx36的表达.结果 与C组比较,S组各项认知功能指标和海马神经元Cx36表达水平差异无统计学意义(P＞0.05),POCD组中央格停留时间延长,跨格次数、站立次数和正确反应次数减少,全天总反应时间增加,海马神经元Cx36表达水平降低(P＜0.05)；与S组比较,POCD组大鼠T1时中央格停留时间延长,跨格次数、站立次数和正确反应次数减少,全天总反应时间增加,海马神经元Cx36表达水平降低(P＜0.05),T2,3时各项认知功能指标及海马神经元Cx36表达水平差异无统计学意义(P＞0.05).结论 术后认知功能障碍可能与老龄大鼠海马神经元Cx36表达下调有关.
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胃腺癌组织中紧密连接蛋白7和紧密连接蛋白18及E钙黏素的表达及其意义
目的 探讨胃腺癌组织中紧密连接蛋白7(claudin-7)、紧密连接蛋白18(claudin-18)及E钙黏素(E-cadherin)的表达及其意义,为肿瘤生物学研究提供参考.方法 选择我院2005年收治的胃腺癌患者81例,收集其手术切除后存档的腺癌蜡块组织为观察组.选择同期在我院进行胃镜检查正常者70例,收集其胃体正常黏膜组织为对照组.应用免疫组织化学法检测两组claudin-7、claudin-18和E-cadherin的表达,分析三者阳性表达率与胃腺癌患者临床特征的关系及三者之间的相关性.随访并计算观察组患者5年生存率.结果 对照组和观察组claudin-7(89.33% vs.25.93%)、claudin-18(64.29% vs.33.33%)和E-cadherin(57.14% vs.22.22%)阳性表达率比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).claudin-7、claudin-18和E-cadherin阳性表达率在不同肿瘤分化程度、有无淋巴结转移及不同增殖细胞核抗原表达的胃腺癌患者中比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).线性相关分析显示,胃腺癌组织中claudin-7与claudin-18(r=0.43)、claudin-18与E-cadherin(r=0.45)、claudin-7与E-cadherin(r=0.40)均呈正相关(P＜0.05).观察组患者5年生存率claudin-7阳性表达者(14/21,66.67%)与阴性表达者(3/60,5.00%)比较、claudin-18阳性表达者(16/27,59.26%)与阴性表达者(1/54,1.85%)比较、E-cadherin阳性表达者(14/18,77.78%)与阴性表达者(3/63,4.69%)比较,差异均有统计学意义(χ2值分别为24.5880、14.7868和13.2048,P均＜0.05).结论 claudin-7、claudin-18和E-cadherin在胃腺癌组织中呈低表达,与患者肿瘤分化程度、淋巴结转移及增殖细胞核抗原表达相关;三者具有协同作用,联合检测三者的表达有助于判断患者预后,即claudin-7、claudin-18和E-cadherin同时低表达的患者预后较差.
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纤维连接蛋白瓜氨酸化后对聚蛋白多糖酶-1活性的影响
目的 通过观察聚蛋白多糖酶-1 (ADAMTS-4)与纤维连接蛋白(FN)以及瓜氨酸化的FN(cFN)的结合活性及结合后的酶解活性,探讨ADAMTS-4的活性调节机制.方法 应用肽酰基精氨酸脱亚胺酶4(PADI4)对纤维连接蛋白(FN)进行瓜氨酸化并采用蛋白印迹法进行验证；应用酶联免疫吸附法测定FN和cFN与2种不同相对分子质量的ADAMTS-4的结合活性；使用聚蛋白多糖酶活性分析试剂盒测定2种ADAMTS-4的活性和其与FN、cFN结合后酶活性的变化.统计分析采用单因素方差分析,LSD-t检验或t检验.结果 蛋白印迹法证实PADI4可以使FN瓜氨酸化为cFN; cFN与相对分子质量为93 000的ADAMTS-4的结合活性明显低于FN(分别为0.624±0.033,2.182±0.042;t=50.522,P＜0.01),而两者与缺失碳端的相对分子质量为53 000的ADAMTS-4的结合活性差异无统计学意义(分别为0.934±0.012,0.971±0.024; t=2.388,P＞0.05).相对分子质量为93 000的ADAMTS-4能够酶解聚蛋白多糖产生大量酶解产物[ARGxx肽段浓度:(0.908±0.088) nmol/L],与FN结合后降解聚蛋白多糖的能力明显下降[ARGxx肽段浓度:(0.573±0.000) nmol/L,P＜0.05],与cFN孵育后的ADAMTS-4降解聚蛋白多糖产生的ARGxx肽段浓度[(0.830±0.020) nmol/L]明显高于与FN孵育后产生的ARGxx肽段浓度[(0.573±0.000)nmol/L,P＜0.05].相对分子质量为53 000的ADAMTS-4的酶活性在与FN或cFN孵育前后酶活性无明显变化(P均＞0.05).结论 FN能结合ADAMTS-4并抑制它的活性,PADI4能将FN转化为cFN,cFN与ADAMTS-4的结合活性明显降低,从而对ADAMTS-4的活性抑制作用减弱.
关键词： 连接蛋白类 瓜氨酸 聚蛋白多糖酶1 肽酰基精氨酸脱亚胺酶4 -
CTGF HGF及Cx 43在多囊卵巢综合征大鼠卵巢中的表达及二甲双胍的干预作用
目的 观察结缔组织生长因子(CTGF)、肝细胞生长因子(HGF)、间隙连接蛋白43(Cx43)在多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠卵巢中的表达,并探讨二甲双胍用于治疗PCOS的作用机制.方法 选取6周龄清洁级雌性Wistar大鼠55只,分为对照组15只、模型组40只.应用来曲唑灌胃建立PCOS大鼠模型,模型组40只分取10只作为造模效果评价,余二甲双胍治疗组15只和PCOS组15只分别喂服二甲双胍和生理盐水.14 d后麻醉大鼠并取材,光镜观察卵巢的情况,免疫组织化学法测定卵巢组织中CTGF、HGF、CX43的表达水平.结果 PCOS组卵巢颗粒细胞及卵泡膜细胞CTGF、HGF表达较对照组升高,Cx43的表达降低,而在干预组CTGF、HGF的表达比PCOS组均明显下降,Cx43的表达升高,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 CTGF、HGF、Cx43在PCOS大鼠的发病中起着重要作用,而二甲双胍可调节这3种因子在PCOS大鼠卵巢上的表达,从而起到治疗作用.
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急性肺损伤时间隙连接通道调控肺血管通透性的机制研究
目的 探讨间隙连接通道(GJC)是否通过调节胞内钙离子浓度,进而调控肺血管通透性,终导致急性肺损伤的发病.方法 应用小口径步枪致伤制造急性肺损伤动物模型,检测肺含水量、伊文思蓝漏出率,并应用免疫组织化学方法检测肺血管内皮Cx40表达;培养肺微血管内皮细胞,分别给予达氏修正伊氏培养基(DMEM)、伤后动物血清和GJC通道阻滞剂,应用染料划痕实验检测GJC功能、伊文思蓝漏出实验检测单层内皮细胞通透性、Fluo-3AM钙离子荧光探针检测胞内钙离子浓度.结果 动物实验中,伤后Cx40表达随时间延长逐渐降低,肺血管通透性则呈递增趋势,二者呈负相关(r=-0.934,P<0.05).离体实验中,伤后动物血清降低GJC功能,Cx40表达降低,当应用通道阻断剂后,GJC功能和Cx40表达降低程度更甚;此时肺微血管内皮细胞单层通透性增加,胞内钙离子浓度增加,应用GJC通道阻断剂后,这种效应更加明显.结论 肺血管内皮细胞GJC对肺血管通透性有调节作用,胸部枪弹伤后,肺血管内皮Cx40表达降低,引起GJC功能下降,导致胞内钙超载,终导致肺血管通透性增加和急性肺损伤的发病.
