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大蒜素对烟曲霉菌感染小鼠的细胞免疫功能的影响
目的:探讨大蒜素对烟曲霉菌感染的免疫抑制小鼠细胞免疫功能的影响.方法:将30只昆明种(KM)小鼠随机分为对照组、预防组、治疗组,每组10只.实验前均给予腹腔内注射环磷酰胺(CY)200 mg/kg,制备免疫功能抑制模型鼠.实验时,预防组灌服大蒜素溶液14 d,治疗组灌服大蒜素溶液7 d(第8～14天),对照组灌服等量生理盐水14 d,并于实验第8天时给各组小鼠麻醉后鼻腔滴人烟曲霉菌孢子悬液.采用MTY法检测各小鼠T细胞活性;采用ELISA法检测各小鼠脾细胞培养上清液中IL-12、IFN-γ的表达水平.结果:预防组T淋巴细胞增殖活性、IFN-γ、IL-12水平与对照组比较,差异有显著性(P＜0.01);治疗组与对照组比较,两者间有显著性差异(P＜0.01);预防组和治疗组比较,两组间也有差异(P＜0.05).结论:治疗组和预防组脾脏T淋巴细胞增殖活性、IL-12和IFN-γ的水平均有提高,提示大蒜素可提高小鼠细胞免疫功能,增强机体抵抗烟曲霉菌感染能力.
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烟曲霉菌致肺部感染1例
1 病例报告患者,男,75岁.因发热、咳嗽、咯痰伴心悸、气短且双肺下湿啰音,以肺部感染及呼衰入院.查体:T 37.5℃,P 114次/min,BP 120/70mmHg.血常规 WBC 11.5×109/L,N 84.2,L 11.5.痰为黄色黏液,不易咯出.CT显示两肺纹理增粗,增多,紊乱,右肺上叶、中叶,左肺上叶见斑片影,其内可见条索状密度影,并见片状钙化灶.
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小鼠肺组织中肿瘤坏死因子α水平的变化 与真菌机会性感染的关系
目的 探讨小鼠肺组织中肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平的变化与肺组织真菌机会性感染的关系.方法 将70只小鼠按数字表法分为2组:A组25只和B组45只.B组小鼠腹腔注射环磷酰胺(Cyclophosphamide,CY) 80 mg· kg-1·d-1,A组小鼠腹腔注射等量的生理盐水.2组于8、24、48 h杀死小鼠,分离肺组织.Western Blot法检测2组小鼠肺组织胞浆中TNF-α的表达；比色法检测肺组织中髓过氧化物酶(Myeloperoxidase,MPO)的活性.A组小鼠注射无菌生理盐水24 h后、B组小鼠腹腔注射CY后8、24、48 h分别鼻吸入烟曲霉菌孢子,各组小鼠分别在感染24、96 h处死,匀浆肺组织培养,计数菌落数.结果B组CY处理后8、24、48 h肺组织TNF-α水平分别为0.152±0.011、0.314±0.029和0.631±0.035,显著低于A组小鼠肺组织中TNF-α水平(0.812±0.043)(P＜0.01).B组3个时间点的TNF-α水平比较差异有统计学意义(P＜0.01).B组小鼠8、24、48 h肺组织中MPO活性均显著低于A组[(0.028±0.007)、(0.075±0.004)、(0.125±0.009)U·g-1vs (0.218±0.015)、(0.208±0.036)、(0.211±0.012)U·g-1,均P＜0.01].A组烟曲霉菌菌落数在24、96 h时均显著低于B组(均P＜0.01).结论小鼠肺组织TNF-α表达下调,降低了肺组织MPO活性水平,导致抗感染天然免疫抑制,是机体发生机会性真菌感染的机制之一.
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NF-κB和TNF-α在烟曲霉菌感染小鼠肺组织中的表达
目的 探讨核因子-κB(NF-κB)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)在小鼠抗烟曲霉菌早期感染中的作用.方法 将小鼠分4组:正常组、免疫抑制组、正常+烟曲霉菌接种组和IPA模型组.小鼠鼻吸人烟曲霉菌48 h处死,取肺组织用western blot法检测胞核NF-κB p65蛋白和细胞中TNF-α的表达.结果 正常+烟曲霉菌接种组和IPA模型组小鼠肺组织细胞核NF-κB p65蛋白和细胞中TNF-α表达的量高于正常组和免疫抑制组;正常组小鼠中检出NF-κB p65蛋白和TNF-α表达的量高于免疫抑制组;免疫抑制组肺组织细胞核NF-κB p65蛋白量低,并且未检出TNF-α的表达.结论 烟曲霉菌早期感染可激活小鼠肺组织中NF-κB并上调TNF-α蛋白的表达.
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烟曲霉菌提取物对人支气管上皮细胞修复功能的影响
目的：探讨烟曲霉菌对呼吸道上皮细胞修复功能的影响及其可能机制。方法实验分为正常对照组、不同浓度（10、20、40 mg/L）AFE组、热处理AFE组。分别应用不同浓度和热处理的烟曲霉菌提取物（aspergillus fumig-atus extract，AFE）作用体外培养的人支气管上皮细胞16HBE不同的时间，以细胞体外损伤修复功能、细胞迁移能力、定量细胞黏附能力、细胞伸展面积为指标，观察AFE和热处理的AFE对上皮细胞修复能力的影响。结果20、40 mg/L AFE均明显抑制16HBE细胞的体外损伤修复功能、细胞迁移能力和细胞黏附能力（P＜0．05），并呈明显的时间和浓度依赖性。10 mg/L AFE与正常对照组差异无统计学意义（P＞0．05）。10、20、40 mg/L AFE均明显抑制细胞的伸展能力（P＜0．05），并呈明显浓度依赖性。另外，热处理AFE的蛋白酶完全灭活，对上述观察指标无明显影响（P＞0．05）。结论 AFE依赖其蛋白酶活性明显抑制细胞的修复功能，并呈明显的浓度和时间依赖性。
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烟曲霉菌与支气管哮喘关系的研究进展
支气管哮喘(简称哮喘)是一种对公众健康危害极大的慢性炎症性疾病,近年来全球的患病率总体呈上升趋势.烟曲霉菌的暴露、感染及定植与哮喘的发生、加重及慢性化有着十分重要的关系.烟曲霉菌致敏哮喘以及慢性烟曲霉菌暴露的哮喘与真菌感染直接相关,其对糖皮质激素的治疗效果欠佳.
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伏立康唑纳米银复合膜对烟曲霉菌性角膜炎的疗效及安全性
背景 伏立康唑具有良好的抗真菌活性,但目前临床上所用剂型的生物利用度并不理想.改良伏立康唑眼用剂型并提高药物的生物利用度对于改善真菌性角膜炎的预后,减少药物不良反应具有重要意义. 目的 研究伏立康唑纳米银/聚合物复合材料在治疗真菌性角膜炎过程中的缓释作用、药物疗效和安全性.方法 选择6～8周龄雌性SPF级C57BL/6小鼠210只,其中30只用于药物的生物相容性验证,180 只小鼠用于疗效观察,均以左眼作为实验眼.药物的生物相容性研究中将30只小鼠按照随机数字表法分为正常对照组、纳米银/羧基石墨烯/壳聚糖季铵盐复合物(CS-ETA/Ag/GO)组和包被伏立康唑的纳米银/羧基石墨烯/壳聚糖季铵盐复合物(CS-ETA/Ag/GO/Vor)组,分别将自行构建的CS-ETA/Ag/GO膜和CS-ETA/Ag/GO/Vor膜贴敷于小鼠左眼角膜,分别于贴敷后1d、7d行角膜组织的常规组织病理学检查.药物疗效观察实验中,应用随机数字表法将180只小鼠随机分为模型对照组、CS-ETA/Ag/GO组和CS-ETA/Ag/GO/Vor组.3个组小鼠均用33G注射器针头于左眼角膜基质内注射5×107 CFU/ml烟曲霉菌悬浮液2.0μl建立烟曲霉菌性角膜炎小鼠模型,CS-ETA/Ag/GO组和CS-ETA/Ag/GO/Vor组小鼠分别在模型眼角膜贴敷相应的药膜.分别于造模后第1、3、5、7天用裂隙灯显微镜对术眼角膜炎症进行评分及组织病理学检查,采用真菌平板并计算角膜载菌量;采用real-time PCR法检测角膜组织中炎性因子TNF-α mRNA和IL-1β mRNA的相对表达量.结果 CS-ETA/Ag/GO膜和CS-ETA/Ag/GO/Vor膜贴敷于正常小鼠角膜后1～7d,经组织病理学检查均未见异常.CS-ETA/Ag/GO/Vor组各时间点小鼠的角膜炎症评分明显低于模型对照组和CS-ETA/Ag/GO组,3个组间和不同时间点角膜炎症评分的总体差异均有统计学意义(F分组=237.29,P=0.00;F时间=260.33,P=0.00).角膜组织病理学检查显示,模型对照组小鼠角膜水肿,部分角膜基质溶解坏死,第7天部分小鼠角膜穿孔.CS-ETA/Ag/GO组于造模后角膜炎症表现轻于模型对照组,随造模后时间的延长,角膜炎症逐渐减轻,而各个时间点CS-ETA/Ag/GO/Vor组小鼠角膜炎症反应为轻微,造模后第7天角膜炎症接近痊愈.造模后CS-ETA/Ag/GO/Vor组小鼠角膜载菌量低,且随着时间延长,载菌量逐渐减少,各组不同时间点角膜载菌量的总体差异比较差异均有统计学意义(F分组=113.15,P=0.00;F时间=126.52,P=0.00).CS-ETA/Ag/GO/Vor组小鼠角膜中IL-1β mRNA和TNF-α mRNA相对表达量均明显低于模型对照组和CS-ETA/Ag/GO组,其相对表达量均于造模后第5天达峰,第7天明显下降.3个组间小鼠在造模后不同时间点角膜中相对表达量的差异均有统计学意义(IL-1β:F分组=189.90,P=0.00;F时间=108.56,P=0.00;TNF-α:F分组=82.55,P=0.00;F时间=44.36,P=0.00). 结论 CS-ETA/Ag/GO/Vor药物缓释膜通过伏立康唑和银离子的协同作用共同抑制真菌活性,减轻真菌诱导的角膜炎症反应.CS-ETA/Ag/GO/Vor药物缓释膜贴敷于角膜后生物相容性好,未发现角膜组织的毒性反应.
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大鼠烟曲霉菌性角膜炎初期核苷酸结合寡聚域样受体在角膜中的表达及其免疫防御作用
背景 核苷酸结合寡聚域(NOD)样受体(NLRs)在天然免疫过程中发挥重要作用,但其在真菌性角膜炎发生和发展过程中的作用研究少见. 目的 研究NOD2在大鼠烟曲霉菌性角膜炎(AFK)角膜组织中的表达及作用.方法 72只成年清洁级Wistar大鼠按照随机数字表法随机分为正常对照组、单纯角膜上皮损伤组和AFK模型组,均以右眼作为实验眼.正常对照组12只大鼠中选取6只仅刮取角膜上皮用于逆转录PCR(RT-PCR)实验,另6只大鼠制备角膜标本用于组织病理学检查、免疫组织化学和免疫荧光染色实验.单纯角膜上皮损伤组共30只大鼠,仅刮除中央角膜上皮,AFK模型组大鼠共30只,刮除角膜上皮后接种烟曲霉菌标准株.分别于实验后4、8、16、24 h选取各组6只大鼠刮取角膜上皮,采用RT-PCR法检测角膜中NOD2mRNA的表达,其他6只于实验后24 h制备角膜标本,采用免疫组织化学法和免疫荧光染色法检测角膜中NOD2蛋白的表达,并将各组检测结果进行比较.实验后4、8、16、24 h分别摘除各组大鼠右眼眼球,制作角膜标本进行常规组织病理学检查.结果 裂隙灯显微镜下观察各组大鼠各时间点的角膜情况,均造模成功.RT-PCR结果显示,正常对照组角膜仅有微量NOD2 mRNA的表达,单纯角膜上皮损伤组和AFK模型组大鼠角膜中NOD2 mRNA的相对表达量明显增加,且在实验4、8、16、24 h,AFK模型组大鼠角膜中NOD2 mRNA的相对表达量均明显高于单纯角膜上皮损伤组,差异均有统计学意义(t=-0.409、-0.439、-0.534、-0.618,均P=0.000).大鼠角膜组织病理学检查显示,正常对照组大鼠角膜结构完整;单纯角膜上皮损伤组可见到少部分角膜上皮缺损、前弹力层皱褶及角膜轻度水肿,有少量中性粒细胞浸润;AFK模型组大鼠可见角膜溃疡,角膜水肿增厚,浅基质层可见大量中性粒细胞浸润.免疫组织化学染色和免疫荧光染色结果均显示,正常对照组大鼠角膜上皮和内皮层仅有微弱NOD2蛋白的表达,单纯角膜上皮损伤组大鼠NOD2蛋白表达稍增强,AFK模型组大鼠NOD2蛋白表达明显增强.3个组大鼠角膜中NOD2蛋白表达量(A值)分别为0.045±0.005、0.050±0.005和0.092±0.006,其中AFK模型组大鼠NOD2蛋白表达量明显高于单纯角膜上皮损伤组,差异有统计学意义(t=0.042,P=0.000). 结论 NOD2参与了大鼠AFK的早期病变过程,可能在角膜抗真菌感染的天然免疫阶段中发挥一定的作用.
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免疫刺激剂CpG ODN防治烟曲霉菌引起的变态反应性结膜炎的实验研究
背景研究证实免疫调节剂CpG ODN对蛋白类过敏原引起的变态反应性结膜炎有防治作用,但其对真菌引发的变态反应性结膜炎是否有类似作用尚不清楚.目的研究局部应用CpG ODN是否能够预防或减轻烟曲霉菌引发的变态反应性结膜炎.方法建立烟曲霉菌变态反应性结膜炎小鼠模型,用CpGODN或对照ODN(GpC ODN)对其进行干预,PBS干预作为阴性对照.实验分为预防实验(模型动物在变态反应原再次激发前给药)和治疗实验(激发后给药),对小鼠眼部临床症状进行评分.取小鼠结膜组织进行组织病理学检查,并计数标本中的炎性细胞.应用实时定量聚合酶链反应(real-time PCR)法动态观察小鼠结膜组织中TLR4 mRNA的变化;将烟曲霉菌免疫原与眼部回流淋巴结和脾脏的细胞进行共培养,流式细胞分析培养细胞中调节性T淋巴细胞的比例和活化状态.结果预防实验中,结膜下注射CpG ODN组与GpC ODN对照组、PBS对照组比较,小鼠眼部过敏症状评分差异均无统计学意义(P＞0.05);CpG ODN组与GpCODN对照组、PBS对照组比较结膜组织中性粒细胞数降低,差异均有统计学意义(21.25±11.59 vs 30.75 ±11.44,21.25±11.59 vs 69.00±9.90;t=5.140,t=3.210,P＜0.01);TLR4 mRNA表达上调.在治疗实验中,CpG ODN组与GpC ODN对照组、模型对照组比较,眼部过敏症状评分降低(t=4.000,t=2.750,P＜0.05);中性粒细胞数显著减少(t=4.870,t=3.829,P＜0.01).CpG ODN治疗组小鼠眼部回流淋巴结CD4+ CD25+细胞以及CD4+ CD25+ CD69+ 细胞所占的比例均显著高于GpC ODN组和PBS对照组(P＜0.05).结论 CpG ODN通过上调结膜TLR4的表达、活化Treg细胞来预防和治疗烟曲霉菌引起的变态反应性结膜炎,预先结膜下注射和点眼均可减轻小鼠眼部过敏症状和晚期结膜炎性细胞的聚集.
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仿LASEK法建立烟曲霉菌角膜炎动物模型的研究
目的 探讨建立真菌性角膜炎动物模型的新方法.方法 38只新西兰大耳白兔随机分为3组,右眼为实验眼.A组15只兔,采用准分子激光角膜上皮磨镶术(LASEK)制作直径7.0 mm、厚度50μm的角膜上皮瓣,瓣下接种25μL标准烟曲霉菌株(105孢子);B组15只兔,接种前7 d 0.1%地塞米松滴眼液点眼,每日4次,其余步骤同A组;对照组8只兔,以25μL生理盐水代替真菌菌液进行接种.术后采用裂隙灯显微镜、病理组织学检查、角膜真菌培养等方法观察评价角膜真菌感染情况.结果 A、B两组均见典型的真菌性角膜溃疡发生,经真菌培养鉴定为烟曲霉菌.对照组未见有角膜感染.A、B两组接种成功率分别为93.33%和100%,差异无统计学意义(χ2=1.345,P>0.05);B组角膜炎症较A组重、病程长,两组间临床评分差异有统计学意义(接种后3、7、15 d P<0.05,接种后30 d P<0.01).结论 采用LASEK制作角膜上皮瓣能够较理想地建立真菌性角膜炎动物模型.
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烟曲霉菌性角膜炎大鼠角膜IL-6和IL-10的表达
目的 探讨大鼠角膜真菌感染后角膜局部细胞因子的表达.方法 在24只大鼠左眼角膜上制作烟曲霉菌性角膜炎(AFK)模型为实验组,右眼为对照组.在感染后早、中、晚期取下角膜组织,采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR),检测白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)在不同病程角膜组织中的表达.结果 在实验组角膜中,IL-6早期即大量表达,中期炎症反应高峰时达高峰,以后逐渐下降;IL-10在早期表达高以后逐渐下降.结论 IL-6在AFK病程中是一个敏感的炎性因子,与局部的炎症反应程度一致.IL-10在AFK病程中呈逐渐下降趋势.
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主要致病真菌在角膜内生长方式的研究
目的 研究白色念珠菌、茄病镰刀菌、烟曲霉菌在角膜内的生长方式.方法 应用表层角膜植片术,在植床与植片间注射真菌菌液,建立浅层真菌性角膜感染的兔模型.28只健康成年家兔,分为白色念珠菌感染组、茄病镰刀菌感染组、烟曲霉菌感染组,每组随机取8只兔,并设立4只兔为对照组.进行组织病理学及透射电镜观察.结果 大体观察发现3种真菌感染的临床表现各有特点.组织病理学及透射电镜检测可见白色念珠菌垂直生长,茄病镰刀菌平行于角膜板层生长,烟曲霉菌斜行生长.结论 3种不同真菌在角膜内生长方式不同,可能存在不同的致病机制.
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四君子汤对烟曲霉菌毒性代谢产物的抑制作用
目的 探讨中药方剂四君子汤对烟曲霉菌合成毒性代谢产物的抑制作用.方法 不同剂量四君子汤处理的5×106烟曲霉菌孢子用DMEM液培养48 h,收集不同组的培养液滤液,计算其不同组培养液滤液作用的HeLa细胞和红细胞生存率;比较抑制50%细胞生长的不同组培养液滤液的稀释度;观察100 μl 0.3%H2O2在沙氏固体培养板上对一定剂量四君子汤处理的烟曲霉菌孢子的抑菌圈大小.结果 四君子汤处理的烟曲霉菌孢子培养液滤液作用的HeLa细胞和红细胞生存率显著高于无药物处理组(P<0.05),抑制50%细胞的药物组孢子培养液滤液的稀释度低于无药物组,结果均呈现剂量-效应关系;100μ10.3%H2O2在沙氏固体培养板上作用一定剂量四君子汤处理的烟曲霉菌孢子所产生抑菌圈直径显著大于无药物处理组(P<0.05),结果呈现剂量一效应关系.结论 中药方剂四君子汤可以抑制烟曲霉菌培养时毒性代谢产物的产生,治疗烟曲霉菌所致的肺部感染具有潜在的应用价值.
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重视免疫抑制性肺真菌病的影像诊断
1.提高免疫抑制性肺真菌病诊断意识随着AIDS的流行、癌症治疗的改进、器官移植及免疫抑制治疗的开展,免疫抑制患者明显增多,这些人群更易受到真菌等多种病原体的感染,导致相当高的发病率和病死率.了解免疫缺陷的类型和严重程度有助于预测可能引起感染的病原体.轻度免疫抑制者,如年老、嗜烟、酗酒、支气管扩张、慢性阻塞性肺病和肺结核患者,半侵袭性曲霉菌是主要的感染病原体之一[1-5].严重免疫抑制主要为造血干细胞、器官移植及AIDS患者[1-4].在造血干细胞抑制的初期(术后30天内),中性粒细胞计数<500/mm3,真菌是主要的致病菌,其中耶氏肺孢子菌、烟曲霉菌和白色念珠菌常见,新型隐球菌、毛霉菌和地方性真菌较少见.中性粒细胞持续减少两周以上,曲霉菌、念珠菌等机遇性致病菌可引发致命性感染[6-7],这一时期细菌也可是发病的致病菌.CD4<200/mm3的AIDS患者真菌感染概率明显增加,CD4细胞数越低,感染发生率越高.因此,在日常临床工作中,应强化肺真菌是免疫抑制患者常见病原体这一概念.
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烟曲霉菌致脑肺多发性脓肿抢救成功1例
2002-01～2002-11我院成功抢救一例因酒精性肝病合并毛细胆管炎并发烟曲霉菌性脑肺多发性脓肿病人.报告如下:
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12例肺部真菌感染临床分析
目的:探讨肺部真菌感染的临床易感因素、临床表现、诊断及治疗措施.方法:回顾性分析2009年7月～2010年5月收治的12例肺部真菌感染患者,其临床表现、影像学表现、实验室检查、治疗及转归.结果:12例肺部真菌感染病例中,病原菌以烟曲霉菌多见,其次为白色念珠菌.12例确诊前有用广谱抗菌素史、糖皮质激素史和免疫抑制剂史.所有病例均有不同程度发热、咳嗽、咳痰、咯血、呼吸困难等症状.给予伏立康唑治疗7例,氟康唑5例,治愈9例( 75.0%),好转2例(16.7%),死亡1例(8.3%).结论:随着近年来实验室检测手段的不断提高,使得痰培养阳性率与临床表现更接近一致,而在临床诊治过程中应将COPD病人应列为高危险性患者,其病原谱本组患者以烟曲霉菌多见,且应用对菌群敏感的抗菌药物伏立康唑治疗后预后较好.
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抗真菌药物单独与联合应用对烟曲霉菌的体外抗菌活性研究
目的 了解常用抗丝状真菌药物对烟曲霉菌的体外抗菌活性,指导临床对侵袭性曲霉病的合理用药.方法 药敏试验方法采用美国临床实验室标准化研究所(CLSI)制定的用于产丝孢状真菌的体外药敏方案(M38-A),按规定的标准进行.结果 4种抗丝状真菌药物卡泊芬净(CBF)、伏立康唑(VRC)、两性霉素B(AMB)、伊曲康唑(ICZ)对32株烟曲霉菌的MIC90分别为2.0 mg/L、8.0 mg/L、4.0 mg/L、4.0 mg/L,联合药物AMB+VRC、AMB+ICZ、VRC+ICZ的部分抑菌浓度(FIC)指数＜1,分别为50.0%、43.75%、18.75%.结论 烟曲霉菌对AMB和ICZ的耐药性不断升高.对于预防和治疗烟曲霉菌的轻、中度感染,VRC和ICZ可作为经验用药或初始治疗的首选药物;对中、重度的烟曲霉菌感染,应首选卡泊芬净治疗,并根据患者个体和病情发展情况合理调整抗真菌药物.
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烟曲霉菌致脑肺多发性脓肿1例
2002年11月我院成功抢救1例因酒精性肝病合并毛细胆管炎并发烟曲霉菌性脑肺多发性脓肿病人,现报告如下.
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1例罕见烟曲霉菌多发性感染抢救成功的体会--求实和负责是关键
1 病例简介与救治进程患者男性,1月2日因抽搐入院.有多年饮酒史(0.5～1 kg/d),查体:皮肤黄染,总胆红素、结合胆红素显著升高,谷氨酰转移酶1000 u/L,硷性磷酸酶288 u/L,白细胞30×109/L,持续发烧,腹部及双下肢水肿明显,B超:全肝浊肿,CT:明显脑萎缩.初诊:癫痫,酒精性肝病并肝毛细胆管炎,酒精性脑损害.予以多种抗菌素(包括三代头胞和泰能)消炎,护肝利胆消肿,大量激素治疗,水肿消失,但出现严重的真菌感染.
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烟曲霉菌致脑肺多发性脓肿1例报告
报道1例有长期饮酒史,肝肾功能严重损害,在应用泰能在内的广谱抗生素和激素后并发烟曲霉菌感染性脑、肺脓肿的病人.经二性霉素B药物治疗和脑、肺脓肿及时手术引流治疗,感染控制,肝肾功能恢复正常.
