首页 > 文献资料
-
鼠抗人血小板CD36分子单克隆抗体的制备及活性分析
本研究旨在制备具有功能活性的重组人血小板表面CD36抗原的鼠抗人单克隆抗体.提取人肝细胞总RNA,经RT-PCR扩增编码人血小板CD36抗原胞外区(Gly30-Asn439)氨基酸残基cDNA,构建于原核表达载体pMD18并转化大肠杆菌DH5α,筛选获得阳性重组子pMD18-CD36,提取质粒.经序列测定后,将该基因插入到真核细胞瞬时表达载体pTE2上,构建成为pTE2-s-CD36-10 His真核瞬时表达载体.采用lipofectamine 2000转染法,将重组质粒转染至HEK293细胞,表达产物经Ni2+2NTA柱层析纯化.以制备的重组CD36蛋白免疫BALB/c小鼠后,取脾与小鼠骨髓瘤细胞融合,筛选出阳性克隆,行Western blot检测抗体结合活性.结果显示:RT-PCR扩增获得了1.4 kb的片段.经测序,该序列分析结果与GenBank中的NM_001001547.2完全一致.SDS-PAGE证实转染的HEK293细胞表达了人CD36抗原胞外区蛋白片段.鼠单克隆抗体在Western blot中可以识别重组CD36蛋白,灵敏度达到8 ng.结论:成功制备了抗人血小板CD36单克隆抗体,为临床筛选CD36阴性患者及献血员、深入研究人血小板CD36表面抗原对血小板输注无效的影响提供了实验基础.
-
应用PCR-SBT方法检测CD36相关基因变异的研究
CD36为一种血小板上的特异性抗原，又称glycoprotein Ⅳ(GPⅣ)，是血小板反应(thrombospondin)受体[1]。CD36基因变异会导致CD36抗原的缺失，此类人群若有输血、怀孕、造血干细胞移植等免疫因素就可能产生anti-CD36抗体[2-3]，导致血小板输注无效，输血后紫斑，各种免疫性血小板减少等临床症状；另外也有研究指出CD36基因变异与高血脂症、感染疟疾及胰岛素耐受性有关联[4]；近来在CD36基因剔除的小鼠中研究发现，血小板可经由CD36接受微颗粒(microparticles)的刺激而活化，CD36缺乏血小板被微颗粒活化的能力会降低，因而使止血时间延长[5]。
-
2型糖尿病大鼠心肌脂肪酸转运体FAT/CD36的表达变化及其对脂肪酸代谢的影响
在心血管疾病的众多危险因素中,糖尿病日益受到人们的重视.糖尿病时高血糖、高胰岛素及血脂异常可加重冠状动脉硬化的程度,增高冠心病的发病率[1],同时糖尿病亦是非缺血性心力衰竭的重要病因[2].
-
舒洛地特对高糖环境中大鼠肾小球系膜细胞CD36抗原表达的抑制作用研究
目的:观察舒洛地特对高糖培养基中大鼠肾小球系膜细胞CD36抗原表达的抑制作用,探讨舒洛地特对肾脏的保护作用.方法:培养大鼠肾小球系膜细胞24 h后,将培养的细胞分为对照组(C组,普通培养基,含5.6 mmol·L-1葡萄糖),甘露醇组(M组,24.2 mmol·L-1甘露醇+C组),高糖组(H组,30 mmol·L-1高糖MEM培养基)、舒洛地特干预组(S组,H组+1.0 LRU·ml-1舒洛地特).培养24 h后,RT-PCR和Western blotting法检测各组CD36 mRNA及蛋白的表达.结果:对照组和甘露醇组CD36mRNA(0.24±0.07和0.21±0.06)及蛋白(0.26±0.08和0.22±0.07)的表达差异无统计学意义(P>0.05),高糖组CD36 mRNA(0.62±0.11和0.24±0.07)及蛋白(0.83±0.23和0.26±0.08)表达显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),舒洛地特干预组CD36 mRNA(0.36±0.13和0.62±0.11)及蛋白(0.42±0.15和0.83±0.23)表达显著低于高糖组,差异有统计学意义(P<0.05).结论:舒洛地特可抑制高糖环境中大鼠肾小球系膜细胞CD36抗原的表达,可能是舒洛地特发挥肾脏保护作用的机制之一.
-
抗磷脂抗体对巨噬细胞摄取氧化型低密度脂蛋白及CD36表达的影响
为了探讨抗磷脂抗体对巨噬细胞摄入氧化型低密度脂蛋白的影响及其主要清道夫受体CD36抗原表达的调节,将培养的U937细胞与氧化型低密度脂蛋白(80 mg/L)和抗磷脂抗体(100 mg/L)孵育,用酶荧光法观察人类单核细胞株U937内脂质的变化、逆转录-聚合酶链反应和流式细胞术观察CD36抗原mRNA和蛋白水平表达的改变.结果发现氧化型低密度脂蛋白存在时细胞内胆固醇和胆固醇酯含量分别为243±9 mg/g细胞和289±12 mg/g细胞,流式细胞仪测CD36抗原为25%,凝胶电泳分析CD36 mRNA /β-action mRNA为1.05;在加入抗磷脂抗体后,胞浆内胆固醇和胆固醇酯明显增加,分别为276±10 mg/g细胞和478±13 mg/g细胞,流式细胞仪测CD36抗原为37%,凝胶电泳分析CD36 mRNA /β-action mRNA为1.90;两组相比差异有显著性(P<0.05).以上提示抗磷脂抗体有促进U937细胞摄取氧化型低密度脂蛋白的作用,这一过程是通过在转录及蛋白水平上调CD36抗原表达而实现的.
-
CD36表达在冠心病、高血脂及糖尿病中的变化
目的 研究外周血单核细胞清道夫受体CD36的表达在冠心病及高血脂、糖尿病中的意义.方法 流式细胞术测定健康对照组、冠心病组、高血脂组、糖尿病组外周血单核细胞CD36表达水平,生化分析仪测定血糖、血脂(包括总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白胆固醇及低密度脂蛋白胆固醇),并作比较分析.结果 冠心病组、高血脂组、糖尿病组的CD36表达水平均高于健康对照组(P＜0.01),其中冠心病组高于高血脂组与糖尿病组(P＜0.05),高血脂组与糖尿病组间差异无统计学意义(P＞0.05).冠心病组、糖尿病组的血糖高于健康对照组及高血脂组(P＜0.01).高血脂组的TG、TC、LDL-C高于健康对照组、冠心病组及糖尿病组(P＜0.01).冠心病组、糖尿病组及高血脂组HDL-C低于健康对照组(P＜0.05).结论 高血糖及高血脂均可使CD36表达上调,CD36表达上调可能是冠状动脉粥样硬化性心脏病发生、发展的一个重要因素.
-
重组人血小板CD36基因真核表达载体的构建及蛋白表达
目的 制备具有功能活性的重组人血小板表面CD36抗原的纯化表达蛋白胞外区30 ～439氨基酸残基段.方法 提取人肝细胞组织总RNA,经RT-PCR扩增编码人血小板CD36抗原胞外区(Gly30～Asn439)氨基酸残基cDNA,构建于原核表达载体pMD18并转化大肠杆菌DH5α,筛选获得阳性重组子pMD18-CD36,提取质粒.经序列测定后,将该基因插入到真核细胞瞬时表达载体pTE2上,构建成为pTE2-s-CD36-10 his真核瞬时表达载体.采用lipofectamine 2000 (invitrogen)转染法,将重组质粒转染HEK-293细胞,表达产物经Ni2+ 2NTA柱层析纯化.结果 RT-PCR扩增获得了1.4kb的片段.invitrogen测序,该序列分析结果与Genebank中的NM_001001547.2完全一致.SDS-PAGE证实转染的HEK-293细胞表达了人CD36抗原胞外区蛋白片段.结论 利用构建的真核载体pTE2-s-CD36转染人胚肾细胞(HEK293)可高效表达CD36 Gly30～Asn439,得到纯化蛋白,为人血小板CD36表面抗原对血小板输注无效影响的深入研究奠定基础.
-
江苏地区汉族人群血小板CD36抗原表达差异的研究
目的 了解江苏地区汉族人群血小板上CD36抗原表达的差异.方法 应用流式细胞技术检测江苏地区140位汉族献血者血小板上CD36抗原的表达,并分析其表达量.结果 本组江苏汉族献血者中,血小板上CD36抗原表达缺失型占比2.86％(4/140);非缺失型占比97.14％(136/140),其中低表达29例、中表达93例,高表达14例,三者的平均荧光强度(MFI)分别为1 821.4±21.8 vs 3 920.4±10.0 vs 8 787.4±63.7(P ＜0.05).在CD36抗原表达的非缺失型中,男性127例、女性9例,其血小板上CD36抗原的MFI分别为3 678.36±13.5 vs5 296.0±314.4.结论 江苏地区汉族人群血小板CD36抗原表达具有多样性.
-
氧化型低密度脂蛋白抗体对单个核细胞CD36 mRNA表达的影响
目的:通过观察氧化型低密度脂蛋白(OX-LDL)抗体对单个核细胞CD36 mRNA表达的影响,探讨OX-LDL抗体影响泡沫细胞形成的可能机制.方法:U937细胞和新西兰兔外周血单个核细胞分别被分成4组:空白对照组(普通培养基孵育)、OX-LDL刺激组(培养基中添加50μg/L的兔抗人OX-LDL多克隆抗体)、抗体干预组(培养基中添加50 μg/L的兔抗人OX-LDL多克隆抗体及100 μg/L的纯化人OX-LDL)及单纯抗体组(培养基中添加100 μg/L的纯化人OX-LDL),经培养24 h后,利用半定量RT-PCR技术分析CD36的mRNA表达水平.结果:无论在U937细胞或兔单个核细胞中,OX-LDL刺激组及抗体干预组CD36 mRNA的表达量均显著高于对照组,而经抗体干预后,CD36 mRNA表达量在U937细胞和在兔单个核细胞分别降低了约64.80％和35.18％,种属间差异有统计学意义.结论:抗OX-LDL抗体可以抑制单个核细胞CD36抗原的表达,从而抑制泡沫细胞形成过程中OX-LDL向细胞内的聚集.
