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人脑肿瘤组织中SV40感染及其临床意义
目的探讨猴病毒40（SV40）与人脑肿瘤发病的关系。方法采用聚合酶链反应 (PCR) 和原位杂交(ISH)同时检测30例正常人脑组织和198例人脑肿瘤组织以及SHG44和BT325两株人脑胶质瘤细胞系中SV40 DNA序列；并对SV40 DNA阳性肿瘤组织采用免疫共沉淀和Western blot检测大T抗原 (Tag) 的表达及Tag-RB复合物的存在。结果人脑肿瘤组织PCR SV40 DNA阳性率为48.5%（96/198），其中胶质瘤47.2% (42/89)，脑膜瘤48.8% (21/43)，脑垂体腺瘤51.4%(18/35)，神经鞘瘤43.8% (7/16)，先天性肿瘤53.3% (8/15)，正常人脑组织PCR SV40 DNA阳性率为 6.7% (2/30)。SHG44及BT325两株细胞中也分别检测出SV40的DNA序列。人脑肿瘤组织SV40 DNA阳性率显著高于正常人脑组织(P<0.01)。经ISH，仅在96例PCR SV40 DNA阳性的人脑肿瘤组织中检出87例阳性，2例SV40 DNA阳性的正常人脑组织中1例ISH阳性，SHG44及BT325两株细胞ISH SV40 DNA均阳性。SV40 DNA定位于肿瘤细胞核，阳性细胞呈弥漫或片灶状分布。96例SV40 DNA阳性脑瘤组织Tag表达阳性75例，所有Tag表达阳性瘤组织均发现Tag与RB形成特异性复合物。结论人脑肿瘤组织中存在SV40感染，提示SV40感染与人脑肿瘤有关；在人脑肿瘤组织中Tag广泛表达，Tag可能是SV40在人脑肿瘤发生发展中起作用的重要因素；SV40 Tag与RB 形成特异性复合物Tag-RB，导致RB活性丧失，可能是SV40致人脑肿瘤发生的一个重要机理。
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转染人Rb反义寡脱氧核苷酸对骨肉瘤细胞生长的影响
目的从分子水平研究Rb基因对骨肉瘤生长的影响,为骨肉瘤的基因治疗提供依据.方法用脂质体将人工合成的Rb反义寡脱氧核苷酸转入有Rb表达的人成骨肉瘤细胞.免疫组化方法检测肿瘤中Rb蛋白表达,MTT法检测细胞转染前后的增殖情况.同时流式细胞术检测细胞周期.结果转染Rb反义寡核苷酸后肿瘤细胞的Rb蛋白表达明显下降,G1期细胞比例减少,细胞增殖增加.结论转染Rb反义寡核苷酸的细胞,Rb蛋白表达明显降低,并引起肿瘤细胞增殖增加.
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胃癌组织中cyclin D1 P16和Rb蛋白表达的意义
正常细胞周期中,cyclin D1(细胞周期蛋白D1)与CDK4(细胞周期蛋白激酶)结合形成复合物促进细胞分裂增殖,p16和Rb抑制细胞分裂,从而保证机体细胞的正常生长.当这一促增生系统成分过表达以及抑制增生系统成分缺失或失活都会导致细胞增殖失控而发生癌变.研究表明许多肿瘤中均有cyclinD1的过度表达及p16 Rb基因的缺失[1-5].我们用免疫组化方法检测了30例胃癌标本中cyclin D1,P16和Rb蛋白的表达,并与手术切缘正常粘膜组织进行比较,旨在探讨三者的相关性及其在胃癌形成中的作用.
关键词： 胃肿瘤 免疫组织化学 cyclin D1基因 p16基因 RB基因 -
Survivin、P16及RB表达与原发性胆囊癌发生和发展的关系
目的:探索Survivin、P16、RB表达与原发性胆囊癌发生和发展的关系.方法:选用46例原发性胆囊癌,22例癌旁黏膜,19例胆囊良性病变组织,采用免疫组化SP法定位观察Survivin、P16、RB基因蛋白表达.结果:Survivin、P16、RB在原发性胆囊癌中表达阳性率分别为69.6%(32/46),47.8%(22/46),71.7%(33/46),与胆囊良性病变(0%,73.7%,94.7%)和癌旁黏膜(0%,95.4%,95.4%)相比有显著性差异(P＜0.05或P＜0.01).Survivin与P16表达呈显著的负相关(r=-0.691,P＜0.01).P16与RB表达也呈显著的负相关(r=-0.6556,P＜0.01).P16/RB失活组Survivin阳性率为93.8%,显著高于P16+/RB+组(χ2=9.228,P＜0.01).Survivin与胆囊癌的分化程度(P=0.003)、浸润(P=0.003)和转移(P=10-6)密切相关,P16表达缺失患者更易发生淋巴结转移和周围脏器的浸润(P=0.04或P=0.001).结论:Survivin高表达,P16、RB表达缺失在原发性胆囊癌发生中起重要的调节作用.P16/RB通路失活,结合Survivin高表达可能是胆囊细胞癌变的重要通路之一.Survivin高表达和P16表达缺失与胆囊癌的转移和浸润可能有密切关系.
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外源性P53和Rb基因对血管平滑肌细胞迁移的影响
为研究外源性P53和Rb基因对血管平滑肌细胞迁移的影响,体外培养人脐动脉平滑肌细胞,将P53基因和Rb基因重组腺病毒载体转染平滑肌细胞72h后,检测平滑肌细胞的迁移.结果显示,对照组平滑肌细胞的迁移距离为0.84±0.36 cm(±S),而P53基因转染组和Rb基因转染组的细胞迁移距离分别为0.53±0.45 cm和0.37±0.29 cm,显著低于对照组(P<0.05,P<0.001).提示外源性P53基因和Rb基因导入可显著抑制血管平滑肌细胞迁移.
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E2F-1和Rb基因表达与乳腺乳头状瘤病及导管内癌的相关性
目的研究细胞周期调控因子E2F-1和Rb与乳腺乳头状瘤病及导管内癌的相关性,探讨乳头状瘤病癌变的某些分子机制.方法采用原位杂交法和免疫组化法对40例乳腺轻度乳头状瘤病、40例重度乳头状瘤病和40例导管内癌进行了检测,观察E2F-1和Rb基因mRNA和蛋白的表达情况.结果 E2F-1 mRNA表达阳性率在乳腺轻度乳头状瘤病、重度乳头状瘤病和导管内癌中分别为17.5%、45.0%和80.0%;蛋白表达阳性率分别为20.0%、47.5%和77.5%.E2F-1 mRNA和蛋白表达三组间差异有显著性(P<0.01),组间两两比较,差异也有显著性(P<0.01).Rb基因mRNA表达阳性率在乳腺轻度乳头状瘤病、重度乳头状瘤病和导管内癌中分别为90.0%、50.0%和20.0%;蛋白表达阳性率分别为85.0%、52.5%和22.5%.Rb基因mRNA和蛋白表达三组间差异有显著性(P< 0.01),组间两两比较,差异也有显著性(P<0.01).随着乳腺乳头状瘤病程度的加重终进展为癌,E2F-1 mRNA和蛋白表达阳性率呈上升趋势;Rb mRNA和蛋白表达阳性率呈下降趋势.E2F-1和Rb mRNA表达均与蛋白表达呈正相关,但这两种调控因子的表达呈负相关.结论 E2F-1和Rb基因mRNA和蛋白表达可作为癌症早期较有价值的参考指标,有助于从乳腺乳头状瘤病中筛选出高危病例.并提示E2F-1和Rb可能为乳腺癌前病变基因治疗的新靶点.
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肺癌p16、Rb基因mRNA和蛋白水平表达的定位观察
为研究p16和Rb基因在蛋白水平和mRNA水平的表达及其与肺癌发生发展的关系，采用免疫组化和原位杂交的方法，对89例肺癌手术标本进行了p16和Rb基因表达的定位观察。发现p16基因蛋白的丢失主要发生于非小细胞肺癌，Rb基因蛋白的丢失主要发生于小细胞肺癌。两种基因各自在蛋白水平和mRNA水平的表达基本相符。提示p16和Rb基因的表达与肺癌的组织学类型密切相关，有可能作为非小细胞肺癌与小细胞肺癌基因分型诊断的分子生物学指标之一；在翻译水平上也存在着引起基因失活的可能机制。
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树舌多糖对小鼠HepA瘤细胞P16、Rb基因表达的影响
本文通过树舌多糖对P16基因、Rb基因表达影响的研究,进一步阐明树舌多糖抗肿瘤作用的机理.研究结果表明,树舌多糖作用后,小鼠HepA瘤细胞P16基因表达显著增强(P＜0.01),Rb基因表达增强(P＜0.05),树舌多糖对小鼠HepA瘤细胞P16、Rb基因有激活作用.
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半枝莲多糖对HepA荷瘤小鼠抑癌基因表达的影响
目的:探明半枝莲多糖对HepA瘤组织Rb、P16基因表达的影响.方法:运用SP免疫组化染色技术及多媒体彩色病理图文分析系统测定HepA瘤细胞中Rb、P16基因蛋白的表达量.结果:半枝莲多糖组、猪苓多糖组中Rb、P16基因蛋白的表达量均显著高于荷瘤组(P<0.01),半枝莲多糖组与猪苓多糖组无显著性差异.结论:半枝莲多糖可通过升高抑癌基因Rb、P16的蛋白表达,而抑制HepA瘤细胞的增殖.
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Rb基因在染料木黄酮抑制人乳腺癌细胞生长中的作用
目的:研究Rb基因在染料木黄酮(genistein,Gen)抑制人乳腺癌细胞McF-7细胞增殖中的作用.方法:采用MTT实验和集落形成实验观察Gen对人乳腺癌细胞增殖影响,Western blotting检测Rb基因、细胞周期素cyclin E蛋白表达情况,RT-PCR检测Rb基因mRNA的表达.结果:Gen显著抑制MCF-7细胞生长,促进细胞Rb基因在蛋白及mRNA水平的表达,抑制cyclin E蛋白的表达.结论:Gen抑制人乳腺癌细胞增殖,其机制可能通过上调Rb基因表达,下调cyclin E蛋白表达.
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二十碳五烯酸联合视黄酸对HL-60细胞增殖与分化的影响及其机制
目的探讨二十碳五烯酸(EPA)联合视黄酸(RA)对HL-60细胞的增殖与分化功能的影响及其机制.方法 MTT比色法测定细胞增殖功能;硝基四氮唑蓝(NBT)还原试验鉴定细胞分化;RT-PCR半定量分析视网膜母细胞瘤(RB) mRNA表达;Western blot法检测RB基因的蛋白质(PRB)表达.结果 EPA单独用药组细胞增殖抑制率为24.38%,RA单独用药组为35.74%,EPA+RA组为42.75%;EPA+RA组细胞分化能力约为对照组的5.9倍,而RA组为2.6倍,EPA组仅为1.3倍;EPA组RB基因表达与对照组比较,差异无显著性,RA组RB基因表达降低,EPA与RA联合应用组则低,且各实验组PRB去磷酸化水平均增加.结论 EPA和RA联合应用对HL-60细胞中RB基因表达及PRB磷酸化的改变,可能是EPA协同RA抑制HL-60细胞增殖和诱导分化的重要分子机制.
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Rb基因与神经胶质瘤
本文对Rb基因结构、Rb基因的功能及其作用机制及其在神经胶质瘤中的异常情况进行了回顾.
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口腔癌及癌前病变中C-myc癌基因与Rb抗癌基因表达的意义
目的研究C-myc癌基因与Rb抗癌基因在口腔癌的发生及癌前病变恶变过程中的意义.方法采用流式免疫荧光技术对40例口腔鳞状细胞癌,10例口腔白斑和14例口腔扁平苔藓中C-myc和Rb基因蛋白的表达量进行定量研究.结果 C-myc癌基因在口腔癌、白斑、扁平苔藓中表达的阳性率分别为65%、30%和21%.在C-myc癌基因的平均表达量中,口腔癌明显高于白斑和扁平苔藓,差异均有显著性(P＜0.05和P＜0.005).Rb抗癌基因在口腔癌、白斑、扁平苔藓中表达的阳性率分别为30%、0和7%.其中口腔癌,白斑,扁平苔藓中的平均表达量均低于正常口腔粘膜,但差异无显著性(P＞0.05).口腔癌不同组织学类型之间Rb蛋白的阳性检出率无明显差异(P＞0.05).结论①C-myc癌基因在口腔癌前病变发展为口腔癌过程中具有重要意义.②Rb基因的表达与口腔癌组织学分级之间无明显关系.③Rb基因表达失活可能成为口腔癌前病变癌变的一种潜在危险.
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piggyBac转座子调节pPiggyBac-Rb质粒的构建
背景:外源性Rb基因的导入是抑制视网膜母细胞瘤细胞增殖的有效途径,piggyBac转座子介导的外源基因表达载体高效安全,在基因治疗方面具有广阔的应用前景.目的:探讨piggyBac转座子介导的外源性Rb基因的转染效率及其对视网膜母细胞瘤细胞的抑制作用.方法:采用RT-PCR技术扩增Rb基因编码区Rb cDNA,定向插入到载体pPiggyBac,获得PiggyBac调节的Rb表达质粒pPiggyBac-Rb;通过单独转染或合并pPiggyBac-helper转染人视网膜母细胞瘤细胞SO-RB50.结果与结论:考马斯亮蓝染色证明piggyBac转座子系统的转染效率高,荧光定量PCR以及免疫荧光实验证明其介导的目的基因Rb与宿主SO-RB50细胞基因组整合效率高且可在细胞中长期稳定表达,MTT实验证明经其所介导的外源性Rb基因表达对细胞活性影响为显著.结果提示piggyBac转座子有可能成为视网膜母细胞瘤基因治疗的安全有效载体.
关键词： PiggyBac转座子 SO-RB50细胞 转染 RB基因 基因治疗 -
外源性Rb基因对神经细胞衰老的影响
目的观察外源性Rb基因对神经细胞衰老的影响,并探讨Rb基因对神经细胞P21基因表达的调控.方法用外源性Rb基因重组腺病毒载体感染体外培养的胚胎大鼠神经细胞,以β-半乳糖苷酶染色观察神经细胞的衰老变化,用免疫组化法测定P21蛋白表达水平.结果外源性Rb基因导入神经细胞后,P21蛋白水平显著增高,与衰老相关的β-半乳糖苷酶表达也增加.结论Rb基因可能通过上调P21基因表达促进神经细胞衰老.
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喉鳞癌组织中Rb基因突变的分析
目的:检测喉鳞状细胞癌组织中Rb基因突变的具体位置和内容,分析其在喉癌发生发展中的意义,为基因诊断和基因治疗提供依据.方法:应用PCR-SSCP-DNA测序技术,选择Rb基因第20外显子的引物,对50例喉鳞状细胞癌组织及12例正常对照进行突变的检测.结果:50例喉癌患者的喉癌组织中Rb基因的突变率为12%,突变以点突变为主,突变均引起氨基酸的改变.Rb基因的突变与临床分期、病理分化程度及淋巴结转移间无相关性(P>0.05).结论:Rb基因突变导致的喉癌细胞不能产生有功能的Rb蛋白可能是喉癌发生的原因之一,但Rb基因的突变并不是喉鳞癌的常发事件.
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树舌多糖GF对肝癌细胞的增殖抑制作用及对RB基因mRNA表达的影响
目的:研究树舌多糖GF对肝癌细胞的增殖抑制作用以及对RB基因mRNA表达的影响.方法:利用CCK-8法观察树舌多糖GF对肝癌细胞增殖抑制作用,并筛选出有效剂量；以SMMC7721为研究对象,在mRNA水平探究其对RB基因表达的影响.结果:CCK-8法表明,树舌多糖GF各剂量组和对照组比较,OD490nm均明显降低,有显著性差异(P＜0.01),其中树舌多糖GF2.5 μg/mL、5μg/mL、10μg/mL剂量组对SMMC7721细胞增殖的抑制效果强,抑制率分别是20.01％、20.47％、24.44％.结论:树舌多糖GF可明显上调RB基因的mRNA表达水平,从而实现对肝癌细胞的增殖抑制作用.
关键词： 树舌多糖GF SMMC7721细胞株 抑瘤率 RB基因 -
氢醌对TK6细胞周期的影响及其相关的调控机制探讨
[目的]探讨氢醌(hydroquinone,HQ)对细胞周期的影响及其相关的调控机制.[方法]磷酸盐缓冲液(PBS)处理人类淋巴母细胞(TK6细胞)为对照组,20.0 unol/L HQ为处理组,48h后通过碘化丙啶(PI)标记的流式细胞术检测细胞周期分布情况,用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测PTEN(抑癌基因)、p53基因mRNA表达的改变,流式细胞荧光标记法检测Rb蛋白的表达. [结果]与对照组比较,处理组G1期细胞比例明显增加,S期细胞比例明显减少,差异均有统计学意义(P＜0.05); HQ作用于TK6细胞后上调了Rb的表达,下调了p53的表达,其差异均有统计学意义(P＜0.05),而对PTEN的表达没有明显影响. [结论]HQ可能通过上调Rb的表达使细胞阻滞于G1期.
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siRNA封闭BRCAA1基因对乳腺癌细胞MCF-7增殖和Rb基因表达的影响
目的:研究siRNA封闭乳腺癌抗原相关基因1(BRCAA1)对乳腺癌细胞MCF-7增殖和Rb基因表达的影响.方法:采用RNAi技术对乳腺癌细胞MCF-7细胞BRCAA1基因进行特异性抑制,用阳离子脂质体与化学合成的Pre-designed anti-BRCAA1 siRNA构建转染复合体,反转染MCF-7细胞株48h后提取总RNA,分为未处理(NT)组、阴性对照组、阳性对照组和BRCAA1组,经反转录荧光实时PCR检测BRCAA1和Rb基因mRNA表达情况;检测细胞增殖抑制率.结果:与阴性对照组相比,siRNA转染MCF-7细胞后实验组BRCAA1基因mRNA水平降低了42.3%;Rb基因表达较之阴性对照组上升了11.1%;实验组MCF-7细胞增殖抑制率为(81.9±6.1)%,抑制作用明显强于对照组(P＜0.05).结论:BRCAA1基因的封闭明显抑制了MCF-7细胞的增殖,BRCAA1基因与Rb基因可能存在有某种相互拮抗的作用.
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Rb基因与细胞衰老的研究进展
在多种衰老细胞系中,抑癌基因Rb的活性增加,其编码的Rb蛋白参与细胞周期的调控,调节细胞增值,在细胞衰老信号传递中扮演重要角色,其中Rb蛋白的磷酸化状态与细胞增值分裂密切相关.本文就细胞老化与细胞周期停滞、Rb基因概况、影响pRb磷酸化状态因素(包括一些细胞因子对其的影响以及Rb蛋白自身状态的改变)及其与调控细胞周期、影响细胞衰老关系作一综述,并进行简要展望.
