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CYP3A4和CYP2B6药物诱导剂体外筛选体系的建立
目的 构建CYP酶药物诱导剂的体外筛选技术平台.方法 利用双荧光素酶报告基因系统,将包含hPXR蛋白识别和结合调控元件的CYP3A4和2B6启动子序列插入报告基因上游,将表达载体和报告载体共转染HepG2细胞,用含有利福平或DMSO培养基培养48 h后裂解进行双荧光素酶活性检测.结果 经利福平处理的细胞裂解物荧光素酶比活性值与阴性对照组和溶剂组差异显著.结论 本研究构建的CYP3A4和2B6体外筛选平台,可以有效地用于体外诱导剂的筛选.
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CYP 2B6基因多态性与艾滋病患者HAART中依非韦仑血浆浓度的关联研究
目的 研究依非韦仑(EFV)的血浆浓度与细胞色素P4502B6(CYP2B6)基因多态性的关系.方法 用高效液相色谱仪(HPLC系统)测定深圳市东湖医院艾滋病专科门诊68例患者,服用EFV后8-12小时的EFV血浆浓度,用逆转录-聚合酶链反应检测所有患者的CYP286 516位点的G>T基因频率.结果 CYP286 516位点的基因型39例是GG型,26例是GT型,3例是TT型.各组EFV的血浆浓度分别是(3.3±1.2)μg/ml、(4.7±2.3)μg/ml、(9.0±0.8)μg/ml,其差异有显著的统计学意义(P<0.01).结论 GT基因型频率在中国人相当常见,该基因型可出现较高的EFV血浆浓度;TT基因型虽然少见,但EFV血浆浓度异常升高.检测CYP2B6基因多态性可帮助临床个性化EFV用量.
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细胞色素P450重要成员——CYP2B6研究进展
CYP 2B6参与催化多种内源、外源化合物,特别是多种临床药物的生物转化.随着它的一系列特异性和灵敏度都很高的抗体被制造出来,以及大量底物的发现,人们逐渐认识到它在CYP家族中扮演了十分重要的角色.本文综述了CYP2B6的重要底物、诱导和抑制剂及基因多态性的研究进展.
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中国获得性免疫缺陷综合征患者依非韦伦减量应用的疗效及安全性
目的 考察中国获得性免疫缺陷综合征患者依非韦伦减量应用的疗效和安全性.方法 通过检测患者依非韦伦血药浓度、CYP2B6 516 G＞T基因型,筛选出血药浓度＞6.0 mg·L-1、基因型为516 GT或516'IT且同意进行减量的患者纳入本研究.患者入组后先将依非韦伦剂量减至400 mg,qd,若2周后血药浓度仍＞4.0 mg·L-1且患者本人仍同意减量,则将剂量减为200 mg,并测定2周后的血药浓度.记录患者减量前及48周时的实验室检查、CD4+计数(每12周常规检测一次)、HIV病毒载量数据,并通过问卷调查收集患者中枢神经系统相关不良反应的数据.结果 共入组31例获得性免疫缺陷综合征患者,516 GT和'IT基因型的比例分别为12.9％(4例)和87.1％(27例).减量前31例患者的血药浓度为(9.60±2.80)mg·L-1,剂量减为400 mg 2周后血药浓度为(5.78±2.08)mg·L-1,18例减为200 mg的患者减量后2周血药浓度为(4.04±1.02)mg·L-1.减量前31例患者的CD4+计数均值为(243.2±123.6)cells·μL-1,48周时为(323.4±120.8) cells·μL-1,P＜0.01.减量前HIV病毒载量均值为(42.5 ±5.7)copies·mL-1,48周时为(43.7±6.8) copies·mL-,P ＞0.05.减量前和48周时患者的血生化和血常规各项指标检查结果均无显著改变,P值均＞0.05.减量前部分患者存在乏力、眩晕、头疼、异梦、注意力不集中、失眠、焦虑以及健忘等不良反应症状,这些症状在48周时有明显改善,部分患者的不良反应症状消失.结论 参照CYP2B6 516 G＞T基因型,将中国获得性免疫缺陷综合征患者依非韦伦剂量由600 mg减至400 mg或200mg,48周后仍能获得理想的抗病毒疗效,且能改善患者存在的中枢神经系统不良反应症状.
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CYP2B6基因多态性与异维A酸人体代谢动力学差异关联性研究
目的 探讨细胞色素P450(CYP2B6)基因多态性与异维A酸人体代谢动力学的关系.方法 21例健康受试者单次口服40mg异维A酸胶丸(商品名泰尔丝),提取外周血基因组DNA进行PCR及限制性核酸内切酶片段分析方法(RFLP)分析CYP2B6第四外显子exon4及第五外显子exon5基因分型.高效液相色谱-质谱法(LC/MS)分析受试者异维A酸血药浓度并计算相关药动学参数.结果 21例健康受试者CYP2B6 exon4及exon5存在明显的连锁不平衡性.等位基因CYP2B6*4野生型*1/*1为12例(57.14%),杂合型*1/*4为6例(28.57%),突变型*4/*4为3例(14.29%);等位基因CYP2B6*6野生型*1/*1为13例(61.90%),杂合型*1/*6为5例(23.81%),变异型*6/*6为3例(14.29%).等位基因CYP2B6*4野生型体内消除参数t1/2及MRT高于突变型(P值均＜0.05),吸收参数Cmax、Tmax及AUC等两组差异无统计学意义.等位基因为CYP2B6*6的野生型与突变型各项药动学参数差异均未见有统计学意义(P＞0.05).结论 代谢酶CYP2B6等位基因*4突变与异维A酸体内代谢相关.CYP2B6*4突变型可能为异维A酸快代谢型人群.
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CYP286基因多态性及其功能意义的研究进展
CYP2B6是一个在药理和毒理学上均占有重要地位的代谢酶,参与药7%临床上常用药物代谢,其中包括一些治疗窗较窄的药物.CYP2B6具有高度基因多态性,在基因编码区和非编码存在许多单碱基突变.到目前为止,已发现并被命名的等位基因有CYP2B6*1～*29.本文主要对CYP2B6的基因多态性、种族差异及其在药物代谢上的功能意义等方面的研究进展进行综述.
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间尼索地平对人孕烷X受体介导的CYP450酶的转录调节作用
间尼索地平(m-nisoldipine,MNS)[化学名称:1,4-二氢-2,6-二甲基-4-(3-硝基苯基)-3,5-吡啶二羧酸甲酯异丁酯]是由河北医科大学药学院首次合成的一类新型二氢吡啶类药物,存在一个手性中心,可拆分为两个光学对映体(R,S-m-nisoldipine)[1].二氢吡啶类药物为钙通道拮抗剂,特异性高,在临床上广泛用于治疗高血压.
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恩诺沙星对小鼠肝微粒体细胞色素P450影响的研究
恩诺沙星(errofloxacin,EF)是动物专用药,有抗菌谱广、杀菌力强、速效等特点,广泛应用于兽医临床[1].细胞色素 P450(P450)是重要的肝微粒体混合功能氧化酶,对阐明药物代谢及相互作用和指导临床用药有重要意义.已有大量研究报道,EF 可抑制鸡、猪、鱼等 P450 [2-3],而对小鼠 P450 研究较少,且 EF 对其 CYP2B6、2C9 的影响尚未见报道.本文以小鼠为研究对象,观察 EF 对小鼠 CYP2B6、2C9 等 P450 酶系的影响,从而揭示药物与机体的相互作用,同时也为临床合理用药提供理论参考.
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人肝微粒体中CYP2B6对氯胺酮代谢的催化作用
氯胺酮是临床常用静脉麻醉药,特别是广泛用于小儿短小手术的麻醉和术前基础麻醉.已知氯胺酮进入体内之后,大部分经肝脏细胞色素P450代谢,形成去甲氯胺酮.有必要进一步研究氯胺酮的代谢机制和影响其代谢的遗传机制.
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硝苯地平对人孕烷X受体介导的CYP286和CYP2C9的转录调节作用
目的 建立hPxR介导的CYP286、CYP2C9药物诱导剂的体外筛选体系,分析硝苯地平诱导CYP286、CYP2C9的分子机制.方法 利用双荧光素酶报告基因系统,将包含hPXR蛋白识别和结合调控元件的CYP286和2C9启动子序列插入报告基因上游,将表达载体和报告载体共转染HepG2细胞,以10μM利福平为阳性对照,用1、5或10μM硝苯地平处理48h后裂解细胞进行双荧光素酶活性检测;或用10μM硝苯地平分别处理细胞12、24和48h后进行双荧光素酶活性检测.结果 硝苯地平激活hPXR的起始浓度为1～5μm,在5μm浓度下,硝苯地平诱导CYP286和2C9表达增加3.93和3.59倍,与DMSO溶媒组差异存在显著性(P<0.001),在10μm硝苯地平作用下,CYP286和2C9表达分别增加6.23和5.24倍,与溶媒对照组和5IXm浓度组差异都存在显著性(P<0.001).10μm硝苯地平处理12 h后即能显著地诱导CYP286和CYP2C9表达增强,但其诱导倍数与24和48 h组差异存在显著性(P<0.001).结论 该研究成功构建了hPXR介导的CYP286和CYP2C9药物诱导剂的体外筛选体系;硝苯地平通过激活hPXR介导了CYP286和2C9的表达上调,并表现出明确的剂量-效应关系.
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CYP2B6基因表达质粒的构建及在大肠杆菌中的表达
目的:构建CYP2B6基因原核表达质粒,在大肠杆菌[Rosetta2(DE3)pLysS]中高效表达重组蛋白.方法:以质粒为模板,用PCR技术扩增出CYP2B6基因,并将其分别插入pET-22b( + )、pET-28b( + )和pET-32a( + )质粒中,经PCR、测序鉴定后,转化Rosetta2(DE3)pLysS,并用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达.结果:经PCR、测序鉴定,构建了CYP2B6基因表达质粒;采用考马斯亮蓝染色法检测重组蛋白表达,pET-22b( + )-CYP2B6未见目的蛋白表达;pET-28b( + )-CYP2B6有目的蛋白表达,约占蛋白总量的5%;而pET-32a( + )-CYP2B6可以高效地表达CYP2B6,在低浓度(50 μmol/L)IPTG诱导3 h后,所表达的CYP2B6蛋白约占细菌总蛋白的30%;质谱分析结果进一步证实所表达的蛋白为CYP2B6.结论:成功地使CYP2B6基因在原核系统中高效表达.
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CYP2B6基因多态性与抗结核药物性肝损伤的关系
目的 探讨CYP2B6基因多态性与抗结核药物性肝损伤(ADIH)的关系.方法 选取在2013年1月至2013年12月唐山市结核病医院确诊并接受规范抗结核治疗的结核病患者中发生肝损伤的175例结核病患者为病例组,未发生肝损伤的185例患者为对照组,对其进行流行病学调查,同时提取外周血DNA并鉴定CYP2B6-785MG位点的基因型,后对实验结果进行统计学分析以判断其与ADIH的关系.结果 CYP2B6-785A/G位点多态性AA、AG、GG基因型在病例组(33.1％、52.6％、14.3％)和对照组(35.7％、50.8％、13.5％)中的分布比较,差异无统计学意义(P＞0.05),等位基因A、G在病例组和对照组中分别占59.4％、40.6％和61.1％、38.9％,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 CYP2B6-785A/G位点基因多态性可能与抗结核药物性肝损伤的发生无相关性.
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补骨脂素、异补骨脂素、补骨脂二氢黄酮与异补骨脂查尔酮对CYP2B6诱导作用研究
目的:研究补骨脂中4种单体成分补骨脂素、异补骨脂素、补骨脂二氢黄酮与异补骨脂查尔酮对细胞色素P450 2B6在mRNA和蛋白的影响,并初步探讨该影响的作用机制.方法:利用前期实验室构建的表达质粒pcDNA3.1-hCAR、报告基因质粒pGL4.17-CYP2B6与内参质粒pRL-TK共同转染HepG2细胞,检测补骨脂素、异补骨脂素、异补骨脂查尔酮和补骨脂二氢黄酮对组成型雄甾烷受体(constitutive androstane receptor,CAR)的转录激活效应;并利用Real time PCR及Western Blot技术对补骨脂素、异补骨脂素、补骨脂二氢黄酮和异补骨脂查尔酮的不同浓度处理组进行mRNA水平表达及蛋白水平表达的检测.结果:双荧光素酶报告基因检测结果显示,补骨脂素、异补骨脂素、补骨脂二氢黄酮和异补骨脂查尔酮(5、10、20、50 μmol/L)对CAR具有转录活化作用,其中补骨脂素与异补骨脂素对CAR转录活化效应明显;同时补骨脂素、异补骨脂素、补骨脂二氢黄酮和异补骨脂查尔酮(5、10、20、50 μmol/L)均能上调CYP2B6 mRNA水平与蛋白表达水平.结论:补骨脂素、异补骨脂素、补骨脂二氢黄酮和异补骨脂查尔酮可以诱导CYP2B6 mRNA与蛋白质水平的表达,这种诱导作用可能是单体成分通过激活CAR信号通路实现.
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注射用益气复脉(冻干)对CYP450药物代谢酶1A2、2B6和3A4诱导作用的体外研究
目的 评价注射用益气复脉(冻干,YQFM)对人原代肝细胞中的药物代谢酶CYP1A2、2B6和3A4是否具有诱导作用.方法 采用3个单供体的人原代肝细胞分别与不同质量浓度(0.026、0.260和2.600 mg/mL)的YQFM或特异性诱导剂(CYP1A2诱导剂:50 μmol/L奥美拉唑;CYP2B6诱导剂:1 000 μmol/L苯巴比妥;CYP3A4诱导剂:25 μmol/L利福平)于37℃、5％ CO2条件下共孵育3d,液质联用技术(LC-MS/MS)检测酶活性,实时荧光定量PCR技术检测CYP1A2、2B6和3A4 mRNA表达量.结果 YQFM在测试浓度条件下对人原代肝细胞的CYP1A2、CYP2B6和CYP3A4的酶活性和mRNA的表达均无诱导作用.结论 YQFM不具有显著的基于药物代谢酶诱导的中药和化学药的相互作用.
