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丹酚酸B镁盐对缺氧复氧内皮细胞内钙和一氧化氮的影响
目的:研究丹酚酸B镁盐对缺氧复氧引起的内皮细胞内钙升高和一氧化氮释放增加的影响.方法:培养的人脐静脉内皮细胞(ECV304)暴露在95%N2+5%CO2条件下缺氧30分钟,后在含5%CO2的空气中复氧30分钟.内皮细胞的损伤用染料排除实验、SOD的活性和MDA的生成来评价.胞内游离钙浓度用钙荧光探针Fura 2-AM测定.一氧化氮含量用一氧化氮试剂盒测定.内皮型一氧化氮合酶(eNOS)mRNA和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA的表达用半定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测.结果:缺氧复氧引起内皮细胞的活力由正常条件下(93.1±1.2)%降至(88±3)%(P＜0.01),SOD的活性也由(0.24±0.07)kNU/L下降到(0.18±0.03)kNU/L(P＞0.05),但其使内皮细胞MDA的生成由(1.12±0.06)mmol/L增至(3.78±0.03)mmol/L(P＜0.01).丹酚酸B镁盐2.5,5,10 mg/L能明显降低缺氧复氧引起的内皮细胞MDA生成量的增加,并且显著提高细胞活力和SOD的活性.同时,缺氧复氧还增加内皮细胞的胞内游离钙浓度(F340/F380由1.65±0.16增至1.89±0.28)和一氧化氮释放[由(7.5±1.3)μmol/L增至(16±5)μmol/L],并上调其eNOS mRNA的表达,但降低iNOS mRNA的表达(P＜0.05).但在无钙的条件下,缺氧复氧对内皮细胞的胞内游离钙浓度、一氧化氮含量、eNOSmRNA和iNOS mRNA表达均没有影响.丹酚酸B镁盐能显著降低缺氧复氧引起的内皮细胞内钙升高和eNOS mRNA的表达,增加一氧化氮释放和iNOS mRNA的表达(P＜0.05).结论:丹酚酸B镁盐能改善缺氧复氧引起的内皮细胞损伤,增加内皮细胞一氧化氮的释放.丹酚酸B镁盐提高一氧化氮合成的这种机制可能与其改善内皮细胞缺氧复氧损伤有关.
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血管内皮生长因子165诱导人血管内皮细胞多药耐药表型
目的：研究血管内皮生长因子165(VEGF165)对血管内皮细胞药物敏感性的影响.方法：人真皮微血管内皮细胞(H-DMEC)与抗癌药物和VEGF165混合培养，MTT法分析药敏变化，琼脂糖电泳检测细胞凋亡，RT-PCR、免疫印迹法分析HDMEC产生多药耐药表型的机制.结果：VEGF165体外诱导 H-DMEC对多种抗癌药物耐药，如表柔比星、顺铂、足叶乙甙、丝裂霉素C、长春新碱、CP T-11、泰素等，其机制与VEGF 165诱导HDMEC上调表达多药耐药相关蛋白和肺耐药相关蛋以及下调表达Bax蛋白有关.结论：VEGF165诱导血管内皮细胞的多药耐药表型，提示化疗时抗癌药物的抗血管生成活性可能取决于肿瘤微环境.
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维拉帕米、噻庚啶和山莨菪碱拮抗TNFα诱导单个内皮细胞胞内游离Ca2+浓度的增高
目的：研究肿瘤坏死因子(TNFα)对单个内皮细胞胞内游离Ca2+浓度([Ca2+]i)的影响及维拉帕米(Ver)、噻庚啶(Cyp)和山莨菪碱(Ani)对TNFα诱导[Ca2+]i变化的影响，以探讨TNFα介导休克和Cyp、Ani的抗休克的机制. 方法：人脐静脉内皮细胞株(ECV304)接种于35 mm含有2 mL DMEM培养基的组织培养盘中培养.Fluo-3/AM负载细胞，激光扫描共聚焦显微技术测定单个内皮细胞[Ca2+]i.结果：TNFα使单个内皮细胞[Ca2+]i呈剂量依赖性升高，在60 s内达到峰值，然后下降并保持在基础水平之上.共聚焦扫描图像显示细胞核区[Ca2+]；升高比胞浆区明显，下降比胞浆区慢.维拉帕米1和2，噻庚啶30和60或山莨菪碱20和40 μmol/L均能显著抑制由TNFα 1.2 nmol/L诱导的单个内皮细胞[Ca2+]i升高. 结论：TNFα显著诱导内皮细胞[Ca2+]i升高，可能是TNFα介导休克的重要机制；维拉帕米、噻庚啶和山莨菪碱对TNFα诱导的[Ca2+]i升高有拮抗作用，可能是噻庚啶和山莨菪碱抗休克作用的机制之一.
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转换酶抑制剂培哚普利拉非激肽酶依赖性地加强由激肽引起的内皮依赖性血管松弛
AIM: The present study examined whether or not theresistance to degradation of bradykinin analogs affects thekinin-potentiating action of the inhibitor of convertingenzyme, perindoprilat. METHODS: Hydrolysis of[ Hyp3, Tyr( Me)8 ]-bradykinin by ACE present in isolatedcanine coronary arteries was assessed by determination ofpeptide metabolites using electrospray mass spectrometry,and compared to that of bradykinin. Contractions andrelaxations of isolated rings of coronary arteries, with andwithout endothelium, were recorded as changes inisometric force. RESULTS: After a 30 min incuba-tion, most of the bradykinin was degraded by thearteries, while less than 10 % of [ Hyp3, Tyr ( Me)8 ]-bradykinin was hydrolysed. In organ chambers, [ Hyp3,Tyr(Me)8 ]-bradykinin like bradykinin caused relaxationsof isolated canine coronary arteries with endothelium thatcould be attributed to both NO and endothelium-derivedhyperppoladzing factor (EDHF). Perindoprilat caused acomparable leftward shift in the concentration-relaxationcurves for bradykinin and [ Hyp3, Tyr(Me )8 ]-bradykinin.CONCLUSION: Impairment of the degradation ofbradykinin is not an essential mechanism by whichperindoprilat potentiates the actions of kinins.``
关键词： 缓激肽受体 一氧化氮 内皮 血管紧张素转换酶抑制药 肽基-二肽酶A -
内皮源性缩血管因子花生四烯酸代谢物的作用多样性
Vascular endothelium releases vasocontracting and/or vasorelaxing substances. Here, we report the diversity of endothelium-derived vasocontracting factors (EDCFs), arachidonic acid metabolites, and discuss the pathophysiological significance. In the canine basilar artery and the rabbit intrapulmonary artery, acetylcholine-induced contractions (Ach-induced EDC) are due to endothelial thromboxane A2 (TXA2) (TXA2-type). The Ach-induced EDC in the rabbit coronary artery is due to endothelial leukotrienes (LTs) (LTs-type). In addition, in the rat coronary artery, nicotine and noradrenaline (Nad)-induced EDCs are due to endothelial COX-metabolites (COX metabolite-type). These arachidonic acid metabolites derived from endothelium (activation by vasoactive substances including Ach, Nad and nicotine) cause a contraction of vascular smooth muscle cells and may disturb the local circulation. These EDCFs (TXA2, LTs and COX-metabolites) may be involved in the pathophysiology of cardiovascular immuno-inflammatory diseases.
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血管平滑肌内皮依赖性超极化:非一氧化氮合成酶产物的作用
The endothelium plays a fundamental role in the blood coagulation cascade and at the site of injury is important in the development, and sequela, of atheroma. It is also now firmly established that endothelial cells can produce both vasorelaxant and vasoconstrictor factors and thus directly influence vascular tone and blood flow.Prostacyclin[1] and NO[2,3] are both potent vasodilators,and endothelin is a highly potent 21 amino acid peptide vasoconstrictor[4], which have all been shown to be synthesized by endothelial cells. In some vessels, an arachidonic acid product, either cyclooxygenase or lipoxygenase derived, may also play a role in regulating vascular tone[5]. However, an increasing body of evidence indicates that another factor, or perhaps a family of factors,plays an important role as a vasodilator notably in resistanoe arteries where vascular relaxation is accompanied by hyperpolarization of the VSM[6,7].
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Syndecan-1检测对重症急性胰腺炎病人血管内皮细胞功能的评价
目的 研究syndecan-1检测对重症急性胰腺炎(SAP)血管内皮功能评价.方法 采集我院入院时SAP病人(SAP组,47例)、连续性肾脏替代治疗(CRRT)后SAP病人(CRRT组,13例)及健康对照者(对照组,9例)的血清,采用酶联免疫法检测血管内皮多糖蛋白复合物(syndecan-1)浓度,比较SAP组与对照组以及CRRT治疗前后浓度的变化.结果 SAP病人与对照组血清syndecan-1浓度分别为(295.28±126.53)、(13.00±3.06)mg/L,差异有统计学意义(t=10.953,P<0.001).CRRT治疗前后血清syndecan-1的浓度分别为(533.36±116.00)、(247.09±124.98)mg/L,差异有统计学意义(t=9.513,P<0.001).结论 血清syndecan-1可以作为一项检测和监测SAP病人体内血管内皮功能的指标,对预测病人的预后可能有意义.临床上使用CRRT治疗可以明显减轻SAP病人血管内皮细胞结构和功能的损害.
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动脉球囊损伤后主动脉组织中Atox1和Lox表达及缬沙坦对其影响
目的 研究血管内皮球囊损伤后铜伴侣蛋白-1(Atox1)、赖氨酸氧化酶(Lox)的表达及缬沙坦对其影响,探讨Atox1、Lox及缬沙坦在血管再狭窄中的作用.方法 W istar大鼠36只,随机分为对照组 、手术组和药物组,各12只.制备大鼠主动脉球囊损伤后再狭窄动物模型,药物组给予缬沙坦灌胃,对照组 、手术组给予生理盐水灌胃,各组分别于术后14、28 d取6只大鼠腹主动脉,检测主动脉内膜 、中膜厚度,A tox1、Lox mRNA及蛋白表达.结果 与对照组比较,手术组术后14、28 d主动脉内膜 、中膜增厚,A tox1、Lox mRNA及蛋白表达明显上升;与手术组比较,药物组术后14、28 d主动脉内膜 、中膜增生减轻,A tox1、Lox mRNA及蛋白表达下降,差异有显著性(F=25.73~34.16,P<0.05).结论 Atox1、Lox参与大鼠主动脉球囊损伤后内膜增生过程;缬沙坦可抑制内膜增生,其作用与下调Atox1、Lox的表达有关.
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DHF对高钾预收缩去内皮血管的舒张作用及机制
目的 探讨7,8-二羟基黄酮(DHF)对高钾预收缩的去内皮血管的舒张作用及其机制.方法 制备大鼠离体胸主动脉并去除内皮,以高钾溶液(60 mmol/L的KCl)诱导血管收缩,平台期后以累积给药法加入终浓度1～300 μmol/L的DHF,观察其舒张作用.在无钙-复钙实验中,观察100 μmol/L的DHF预处理对高钾诱导的大张力的影响.高钾预收缩前加入1.0 μmol/L硝苯地平(Nif)孵育10 min,观察Nif对DHF(300 μmol/L)舒张作用的影响.结果 DHF在1～300 μmol/L浓度范围内剂量依赖性抑制高钾诱导的血管收缩(F=119.7,P＜0.05).复钙过程中,DHF预处理明显减少了高钾诱导的张力变化(t=4.395,P＜0.01).高钾预收缩前加入Nif则显著抑制了DHF的舒张效应(t=2.308,P＜0.01).结论 DHF对高钾预收缩的去内皮血管具有明显的舒张效应,该作用与其阻断细胞膜上电压依赖性钙通道有关.
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齐墩果酸对oxLDL诱导人脐静脉内皮细胞氧化损伤的保护作用
目的 探讨齐墩果酸对氧化性低密度脂蛋白(oxLDL)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤的保护作用.方法 体外培养HUVEC,以维生素E(200 μmol/L)或齐墩果酸(5～40 μmol/L)预处理细胞24 h,再加入200 mg/LoxLDL继续培养24 h造成细胞损伤.采用MTT法检测各组细胞存活率,同时检测细胞丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性、还原型谷胱甘肽(GSH)含量,采用DCFH-DA探针法检测细胞内活性氧(ROS)含量.结果 与正常组比较,200 mg/L oxLDL组细胞存活率、SOD活性、GSH含量明显降低,MDA、ROS含量明显增加,差异均有统计学意义(F=67.72～173.25,q=11.46～30.86,P＜0.01);与200 mg/L oxLDL组比较,齐墩果酸在5～20 μmol/L浓度范围内,可剂量依赖性提高细胞存活率、减少MDA含量及ROS形成、增加GSH含量及SOD活性(q=4.26～22.35,P＜0.05).结论 齐墩果酸能抑制ox-LDL诱导的HUVEC氧化损伤,其机制可能与维持SOD活性,减少ROS释放、MDA生成及GSH消耗有关.
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糖尿病视网膜病变病人血浆VEGF和VWF水平的变化及其临床意义
目的 探讨糖尿病视网膜病变(DR)病人血浆血管内皮细胞生长因子(VEGF)和血管性血友病因子(VWF)水平的变化及其临床意义.方法 采用ELISA法检测58例DR病人血浆VEGF和VWF的变化,其中,非增生性DR (NPDR)28例,增生性DR (PDR)30例.并与54例非糖尿病视网膜病变(NDR)病人进行比较,同时以49例健康者作为对照.结果 糖尿病病人血浆VEGF和VWF明显高于对照组,差异有显著性(t=27.09、28.85,P＜0.001);DR病人血浆VEGF和VWF明显高于NDR病人,差异有显著性(t=10.35、16.02,P＜0.001);PDR病人VEGF和VWF明显高于NPDR病人,差异有显著性(t=6.74、7.01,P＜0.001).NPDR和PDR病人血浆VEGF与VWF呈明显的正相关(r=0.569、0.629,P＜0.001).结论 血浆VEGF和VWF水平变化参与了DR的发生与发展,且与病变程度有关.
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急性期脑梗死病人外周血中性粒细胞与低氧-复氧内皮细胞的黏附性
①目的探讨急性期脑梗死病人外周血中性粒细胞(PMN)与低氧-复氧(H/R)血管内皮细胞黏附性,以及抗ICAM-1单抗对其的影响.②方法培养的人类脐静脉内皮细胞株ECV-304经(或不经)H/R和抗ICAM-1单抗处理后,分别加入脑梗死病人外周血PMN并检测黏附率.③结果ECV-304经H/R处理后与脑梗死病人外周血PMN黏附率明显增高;抗ICAM-1单抗可显著抑制脑梗死病人外周血PMN与H/R ECV-304黏附.④结论脑梗死病人外周血PMN活化,H/R使血管内皮细胞与PMN黏附性进一步增强;ICAM-1参与介导脑梗死后PMN与血管内皮细胞黏附,抗ICAM-1单抗可起部分阻断作用.
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甘糖酯对急性脑梗死病人中性粒细胞与内皮细胞黏附的影响
①目的观察甘糖酯(PGMS)对急性脑梗死病人中性粒细胞(PMN)与内皮细胞黏附的影响.②方法选择急性脑梗死病人和健康人各20例,采血制备PMN悬液,将VEC-304内皮细胞株培养后,观察脑梗死组与对照组PMN与内皮细胞的黏附率;并将PGMS(50、100 mg/L)与内皮细胞培养后,观察内皮细胞与脑梗死病人PMN的黏附率.③结果脑梗死组与对照组相比PMN与内皮细胞的黏附率明显增高(t=6.377,P<0.05);PGMS 100 mg/L组与PGMS 50 mg/L组和脑梗死组相比PMN与内皮细胞的黏附率降低(F=13.49,q=12.57、8.52,P<0.05).④结论急性脑梗死后PMN与内皮细胞的黏附性明显增高,甘糖酯可以减少内皮细胞与PMN的黏附.
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大鼠脑缺血再灌注后血管内皮细胞Bcl-2和P53蛋白的表达
①目的探讨了大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后血管内皮细胞Bcl-2和P53蛋白表达的变化规律。②方法将40只Wistar大鼠随机分为10组，采用免疫组织化学法检测假手术组和脑缺血再灌注后2h,6h,12h,1d,2d,3d,7d,14d和21d组血管内皮细胞Bcl-2和P53蛋白的表达。③结果脑缺血再灌注后2h缺血周围区内皮细胞Bcl-2蛋白开始表达，12h～1d达高峰，之后逐渐下降，至14d接近假手术组水平。脑缺血再灌注后6h缺血周围区P53蛋白开始表达，1～2d达高峰，之后逐渐下降，至7d与假手术组已无显著性差异。④结论 Bcl-2和P53蛋白参与缺血再灌注后血管内皮细胞凋亡的调节。
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氯沙坦对大鼠主动脉内皮损伤后内膜厚度影响
①目的观察球囊损伤大鼠主动脉内皮后内膜增厚的过程及氯沙坦对其影响.②方法建立大鼠主动脉内皮剥脱模型,并将其随机分为对照组、手术组和氯沙坦治疗组,分别于术后第3,7,14和28天取主动脉组织,经苏木精-伊红染色及图像分析仪观察内膜增厚的情况及氯沙坦对其影响.③结果主动脉内皮剥脱后第3天已有血管平滑肌细胞(VSMC)的移行、增殖,损伤后第7天内膜已开始增厚,损伤后第14天VSMC的增殖更为明显,损伤后第28天VSMC的增殖明显减弱,细胞外基质增加,内膜继续增厚.使用氯沙坦后VSMC的移行、增殖及内膜增厚明显减轻.④结论氯沙坦能抑制血管内皮损伤后VSMC的移行、增殖,减轻内膜增厚的程度.
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灌注液对角膜内皮及视网膜的影响
在玻璃体切割和白内障等内眼手术中,离体眼组织浸泡在灌注液中,角膜内皮细胞和视网膜是手术中接触灌注液的主要眼组织,两者正常结构和功能的维持与术后视力的恢复密切相关,本文就灌注液对角膜内皮细胞和视网膜的影响作一综述.
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全反式维甲酸对兔颈动脉粥样硬化模型内膜增殖的影响
①目的观察全反式维甲酸(ATRA)对兔颈动脉粥样硬化模型内膜增殖的影响.②方法36只新西兰大白兔随机分为假手术组、对照组和ATRA治疗组;假手术组给予高脂饮食但手术不损伤颈动脉内膜,余操作同对照组;对照组给予高脂饮食加空气干燥损伤颈动脉内膜;ATRA治疗组在高脂饮食加空气干燥损伤颈动脉内膜的同时给予ATRA治疗,内膜损伤后1周和4周观察平滑肌细胞中增殖细胞核抗原(PCNA)和细胞周期素E(cyclin E)的表达及兔颈动脉内膜增殖的情况.③结果ATRA治疗组平滑肌细胞中的PCNA和cyclin E的表达较对照组明显减弱(F＝7.65～8.89,q＝4.27～10.33,P＜0.05、0.01);颈总动脉病变也较对照组轻微(t＝4.330～5.042,P＜0.01).④结论ATRA能抑制兔颈动脉内膜损伤后内膜增殖,其机制可能为通过抑制cyclin E的表达而抑制平滑肌细胞的增殖.
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高尿酸血症对血管内皮细胞功能障碍的影响
①目的观察高尿酸血症病人血浆纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)与内皮素(ET)水平变化,探讨高尿酸血症对血管内皮细胞功能的影响.②方法选择年龄>35岁的男性高尿酸血症病人138例为高尿酸血症组(HUA组),其中单纯高尿酸血症病人42例为HUA-1组,高尿酸并高脂血症或糖耐量异常病人96例为HUA-2组,选择年龄、地域相匹配的健康体检者40例为正常对照组.测定各组血浆PAI-1与ET水平及血清尿酸(UA)、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、空腹血糖(FPG)及餐后2 h血糖(2 hPG)、空腹胰岛素(FINS)、尿素氮(BUN)及肌酐(Cr)含量.③结果 HUA、HUA-1、HUA-2组血浆PAI-1与ET水平明显高于正常对照组(t=14.71～33.85,P<0.01),HUA-2组的PAI-1、ET水平明显高于HUA-1组(t=2.41、2.17,P<0.05).在以UA为因变量的多元逐步回归分析中,TG、LDL-C、BUN、Cr、PAI-1、ET进入方程(R2=0.43,P<0.001).④结论高尿酸血症与血管内皮细胞损伤关系密切,并发糖脂代谢紊乱时会加重血管内皮细胞损害.
关键词： 高尿酸血症 纤溶酶原激活物抑制剂-1 内皮缩血管肽类 内皮 血管 -
多发性骨髓瘤高凝状态的研究现状
多发性骨髓瘤(MM)存在高凝状态,而且静脉血栓事件(VTE)的发生率很高.其发生机制包括凝血成分异常、纤维蛋白溶解功能异常、血小板质或量改变、血流及血液黏滞度的改变等.MM患者血清中血管内皮生长因子( VEGF)和血管性血友病因子(vWF)水平升高、炎性细胞因子产生增多、环氧合酶-2( COX-2)表达升高等可能也与MM患者的高凝状态有关.另外,MM的治疗也会导致治疗相关的高凝状态.
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激光显微切割技术分离淋巴结血管内皮细胞
目的 探讨淋巴瘤发生的分子机制及有关的基因改变,研究分离、分析淋巴结中血管内皮细胞基因表达差异的方法.方法 将淋巴瘤淋巴结标本液氮速冻,冷冻切片,快速免疫组化标记血管内皮细胞,使用激光显微切割技术分离血管淋巴细胞,提取血管内皮细胞中的mRNA,使用RT-PCR检测所得RNA的质量.结果 成功地实现了血管内皮细胞的分离,并保持了血管内皮细胞中RNA的完整性.结论 确立了一个适于分离淋巴瘤血管内皮细胞的激光显微切割方法.
