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PTEN、Akt和pAkt蛋白在肝细胞癌组织中的表达及其与预后的关系
目的:探讨人肝细胞癌组织中PTEN、Akt和pAkt蛋白的表达及其预后价值.方法:应用免疫组织化学方法检测78例肝细胞癌组织及21例正常肝组织中PTEN、Akt和pAkt蛋白的表达,分析其与肝细胞癌临床病理特征及预后的关系.结果:在肝细胞癌组织中,PTEN蛋白的表达率显著低于正常肝组织(42.3％ vs 90.5％,P＜0.05),Akt及pAkt蛋白的表达率显著高于正常肝组织(66.7％ vs 33.3％；43.6％ vs 9.5％,均P＜0.05).PTEN蛋白的表达水平与肿瘤直径、门静脉癌栓、侵及周围脏器或淋巴结转移及TNM分期有关(均P＜0.05)；Akt及pAkt蛋白的表达水平与肿瘤直径、侵及周围脏器或淋巴结转移及TNM分期有关(均P＜0.05).PTEN与Akt蛋白表达呈负相关(r=-0.385,P=0.000),与pAkt蛋白表达呈负相关(r=-0.334,P=0.003).PTEN蛋白高表达患者术后生存率明显高于低表达患者(P=0.000),Akt、pAkt蛋白高表达患者术后生存率明显低于低表达患者(P=0.000).COX模型多因素分析结果显示,TNM分期及pAkt蛋白的表达是影响肝细胞癌预后的独立因素.结论:肝细胞癌组织中PTEN、Akt及pAkt的表达失调与肝细胞癌的恶性生物学行为密切相关,pAkt可以作为评价患者预后的指标.
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乳腺癌组织中 PTEN、AKT 表达及与其临床病理及预后的相关性
目的：探讨乳腺癌组织中PTEN、AKT的表达及与其临床病理及预后的相关性。方法采用免疫组化法，检测84例乳腺癌组织及30例乳腺腺瘤组织中PTEN、AKT蛋白的表达水平，分析其与乳腺癌临床病理特征的关系。结果与乳腺腺瘤组织比较，乳腺癌组织中PTEN蛋白阳性表达率显著降低（41．7％vs 73．3％，P＜0．05）、AKT蛋白表达率显著升高（66．7％vs 20．0％，P＜0．05）。 PTEN阳性表达与乳腺癌肿瘤TNM临床分期、淋巴结转移相关。 AKT阳性表达与乳腺癌TNM临床分期、肿瘤直径、淋巴结转移相关（P＜0．05）。乳腺癌组织中PTEN表达与AKT蛋白表达呈线性负相关（γ＝-0．752，P＜0．05）。术后2年生存率PTEN蛋白阳性表达患者明显高于阴性表达患者，而AKT蛋白阳性表达患者明显低于阴性表达患者（P＜0．05）。结论乳腺癌患者PTEN的表达缺失导致AKT的过度表达，PTEN、AKT蛋白表达的检测可能有助于预测乳腺癌的预后。
关键词： 乳腺癌 第10号染色体缺失的磷酸酶张力蛋白同源物基因 蛋白激酶 临床病理 预后 -
第10号染色体缺失的磷酸酶张力蛋白同源物基因在恶性肿瘤中的作用
第10号染色体缺失的磷酸酶张力蛋白同源物基因(phosphatase and tensin hmmlogydeleted on ten,PTEN)是一种抑癌基因,对细胞生长具有调节作用.PTFN参与渊节细胞增殖和凋亡的多条通路,PTEN基因异常与恶性肿瘤发生发展相关,其异常表达可能是疗效和预后的预测指标.PTEN作为恶性肿瘤治疗中在的潜在靶点,为恶性肿瘤的治疗带来新的策略和前景.
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野生型PTEN过表达对体外活化肝星状细胞内钙离子浓度的影响
目的 探讨野生型第10号染色体缺失的磷酸酶张力蛋白同源物基因(PTEN)过表达对体外活化肝星状细胞(HSC)内钙离子浓度的影响.方法 体外培养活化大鼠肝星状细胞系(HSC-T6),利用腺病毒载体,将野生型PTEN基因转染活化HSC;Western blot及实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测HSC的PTEN蛋白及mRNA表达;采用钙离子荧光探针Rhod-2/AM,于激光扫描共聚焦显微镜下检测HSC内钙离子浓度变化.实验分组:①Control组:腺病毒转染时以DMEM代替病毒液;②Ad-GFP组:转染表达绿色荧光蛋白(GFP)的对照空病毒Ad-GFP;③Ad-PTEN组:转染携带野生型PTEN基因并表达GFP的重组腺病毒Ad-PTEN.结果 野生型PTEN在活化大鼠HSC大量表达,3组HSC内钙离子浓度比较,差异有统计学意义(P<0.05),Ad-PTEN组HSC内钙离子浓度(251.60±90.88)低于Control组(1953.95±132.99)及Ad-GFP组(1937.57±115.17),而Control组与Ad-GFP组之间HSC内钙离子浓度比较,差异无统计学意义(P>0.05).结论 野生型PTEN过表达可降低体外活化大鼠HSC内钙离子浓度.
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肿瘤抑制基因PTEN对体外活化肝星状细胞骨架蛋白vinculin的影响
目的 探讨第10号染色体缺失的磷酸酶张力蛋白同源物基因(PTEN)表达变化对体外活化肝星状细胞(HSC)纽蛋白(vinculin)的影响.方法 分别将含有野生型PTEN基因及含有靶向PTEN的RNA干扰序列短发夹RNA(shRNA)的重组腺病毒转染体外培养的活化大鼠肝星状细胞系HSC-T6,构建体外活化大鼠肝星状细胞PTEN过表达及低表达模型;应用免疫荧光法并结合激光扫描共聚焦显微镜技术检测活化HSC的vinculin分布及表达.实验分组:(1)Control组:以无血清无抗生素的DMEM培养液代替腺病毒液转染体外活化HSC;(2)Ad-GFP组:以仅带有绿色荧光蛋白(GFP)基因的载体空病毒Ad-GFP转染体外活化HSC;(3)Ad-PTEN组:以带有GFP基因并携带野生型PTEN基因的重组腺病毒Ad-PTEN转染体外活化HSC;(4)Ad-shRNA/PTEN组:以带有GFP基因并携带靶向PTEN的shRNA的重组腺病毒Ad-shRNA/PTEN转染体外活化HSC.结果 外源性野生型PTEN基因及靶向PTEN的shRNA成功转染体外活化HSC,并成功构建体外活化肝星状细胞PTEN过表达及低表达模型.HSC的vinculin蛋白主要表达于胞浆,4组HSC的vinculin亚细胞分布未发生明显变化.Ad-PTEN组HSC的vinculin蛋白荧光强度(251.78±12.68)明显低于Control组(381.13±9.12)及Ad-GFP组(383.87±12.15),P<0.05;而Ad-shRNA/PTEN组HSC的vinculin蛋白荧光强度(770.77±20.12)显著高于Control组及Ad-GFP组(P<0.05);但Control组与Ad-GFP组之间HSC的vinculin蛋白荧光强度差异无统计学意义(P>0.05).结论 PTEN表达变化对体外活化肝星状细胞骨架蛋白vinculin的亚细胞分布无明显影响,但PTEN过表达可下调体外活化肝星状细胞骨架蛋白vinculin的表达,而PTEN低表达则可上调体外活化肝星状细胞骨架蛋白vinculin的表达.
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磷酸酶张力蛋白同源物基因/磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B信号通路在肝纤维化发生及治疗中的作用研究进展
肝纤维化是常见的肝脏病理变化,是慢性肝损伤发展为肝硬化或肝癌的重要过渡阶段,有效控制肝纤维化是防治晚期肝病的主要途径.第10号染色体缺失的磷酸酶张力蛋白同源物基因/磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B(PTEN/PI3K/AKT)信号通路能够有效调控肝纤维化进程,是肝纤维化发生的重要分子机制,也是防治肝纤维化的重要调控靶点.本文对PTEN/PI3K/AKT信号通路在肝纤维化中的作用机制及以该通路为靶点的抗肝纤维化药物研究进行综述.
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体外RNA干扰下调PTEN表达对肝星状细胞系HSC-T6迁移的影响
肝纤维化是各种慢性肝病进展为肝硬化的病理过程,而肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSC)则是参与此过程的重要细胞[1-2].第10号染色体缺失的磷酸酶张力蛋白同源物基因(phosphatase and tensin homology deleted on chromosome ten,PTEN)是一个具有磷酸酶活性的肿瘤抑制基因,可通过负性调控信号转导抑制肿瘤细胞的增殖、黏附、迁移及扩散[3-4].
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PTEN过表达及其突变对活化肝星状细胞纤维状肌动蛋白的影响
目的 探讨过表达野生型第10号染色体缺失的磷酸酶张力蛋白同源物基因(PTEN)及其突变体G129E(仅保留蛋白磷酸酶活性而丧失脂质磷酸酶活性)对体外培养的活化肝星状细胞(HSC)纤维状肌动蛋白(F-actin)的影响. 方法 体外培养活化大鼠肝星状细胞(HSC-T6),用瞬时转染技术,将携带野生型PTEN基因及G129E基因的腺病毒转染活化HSC.实验分组如下:对照组:腺病毒转染时以DMEM培养基代替病毒液;Ad-GFP组:转染表达绿色荧光蛋白(GFP)的载体空病毒Ad-GFP;Ad-PTEN组:转染携带野生型PTEN基因并表达GFP的重组腺病毒Ad-PTEN;Ad-G129E组:转染携带G129E基因并表达GFP的重组腺病毒Ad-G129E.应用Western blot及实时荧光定量PCR技术检测活化HSC的PTEN蛋白及mRNA表达;借助激光扫描共聚焦显微镜(LSCM),应用荧光素四甲基异硫氰酸罗丹明(TRITC)标记的鬼笔环肽检测HSC形态、F-actin的分布及荧光强度、伪足以及应力纤维的变化,并采用钙荧光探针Rhod-2/AM负载检测HSC内钙离子(Ca2+)浓度的变化.多组间比较采用单因素方差分析,组间比较采用LSD检验. 结果 野生型PTEN基因及G129E基因在活化大鼠HSC大量表达;对照组与Ad-GFP组HSC多呈星形或多边体形,F-actin重构形成大量粗大的应力纤维,横跨于整个细胞内,细胞周围可见层状伪足;Ad-PTEN组及Ad-G 129E组HSC多为梭形,F-actin主要分布于细胞周边,细胞内可见少量纤细的应力纤维,细胞周边层状伪足消失.F-actin的荧光强度:Ad-PTEN组(357.67±13.39)及Ad-G129E组(377.25±14.55)较对照组(961.87±27.33)及Ad-GFP组(954.68±20.71)明显降低(F=1 783.486,P＜0.05);而Ad-PTEN组与Ad-G129E组、对照组与Ad-GFP组间的差异均无统计学意义(P＞ 0.05).HSC内Ca2+相对浓度:Ad-PTEN组(251.60±90.88)及Ad-G129E组(352.18±146.01)较对照组(1 953.95±132.99)及Ad-GFP组(1 937.57±115.17)明显降低(F=834.988,P＜0.05);而Ad-PTEN组与Ad-G129E组、对照组与Ad-GFP组间的差异均无统计学意义(P＞0.05). 结论 过表达的野生型PTEN及其突变体G129E可显著抑制体外活化肝星状细胞骨架蛋白F-actin的形成及细胞骨架的重构、降低了HSC内Ca2+浓度;并且,野生型PTEN的作用与其突变体G129E无明显差异.
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抑制PTEN对小鼠肝缺血再灌注损伤的保护作用及其机制
目的 证实抑制第10号染色体缺失的磷酸酶张力蛋白同源物基因(PTEN)对小鼠肝缺血再灌注损伤的保护作用,并分析其作用机制.方法 夹闭C57BL/6J小鼠的左/中肝叶90min,然后恢复血供6h以建立部分暖缺血再灌注损伤模型.动物实验分组:假手术组、缺血再灌注损伤模型组、PTEN抑制剂bpv (HOpic)干预组(bpv+ IR,bpv溶于等渗盐水中,腹腔注射,缺血前2h给药).通过比较bpv (HOpic)干预前后血清ALT、肝组织病理学改变(HE染色)、肝组织中炎性因子(定量PCR法)以及促生存信号蛋白[Western blot法检测磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)和磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)]的表达水平来评估抑制PTEN对小鼠缺血再灌注损伤的影响.对多组样本均数的比较,方差齐者采用单因素方差分析;方差不齐者采用Kruskal-Wallis非参数检验.结果 抑制PTEN可使缺血再灌注损伤小鼠的ALT水平显著降低[IR组与bpv+IR组:(11460.0±1783.0) U/L与(3 075.0±807.4)U/L,P＜0.01],肝组织病理学得到明显改善,并显著抑制了肝脏的炎症反应(白细胞介素12相对表达水平,IR组与bpv+IR组:1.12±0.11与0.55±0.13,P＜ 0.01;肿瘤坏死因子α相对表达水平,IR组与bpv+IR组:1.62±0.20与0.35±0.07,P＜0.01).Western blot结果显示抑制PTEN可明显上调p AKT及p-ERK促生存信号蛋白的表达.结论 抑制PTEN可能通过上调p-AKT、p-ERK介导的生存信号以及抑制炎症反应而减轻肝缺血再灌注损伤.PTEN可作为肝缺血再灌注损伤的一个新的治疗靶点.
关键词： 肝 缺血 再灌注损伤 炎症 第10号染色体缺失的磷酸酶张力蛋白同源物基因 -
野生型PTEN过表达对体外活化大鼠肝星状细胞ERK信号转导的影响
目的 探讨野生型第10号染色体缺失的磷酸酶张力蛋白同源物基因(PTEN)过表达对体外活化大鼠肝星状细胞(HSC)的细胞外信号调节激酶(ERK)信号转导的影响.方法 利用瞬时转染技术,以腺病毒为载体,将野生型P TEN基因转染体外培养的活化大鼠HSC;采用Western blot及实时荧光定量PCR技术检测HSC的PTEN、ERK1蛋白及mRNA表达;并应用Western blot技术检测HSC的磷酸化ERK(p-ERK)表达.结果 外源性野生型PTEN基因在活化HSC大量表达,并显著下调HSC的p-ERK表达(P＜0.05),而对HSC的ERK1蛋白及mRNA表达均无影响(P＞0.50).结论 野生型PTEN过表达通过抑制ERK的磷酸化负性调控体外活化大鼠HSC的ERK信号转导.
