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哇巴因对大鼠离体心功能作用的量-效关系
目的：观察不同浓度哇巴因（ouabain，OUA）对大鼠离体心功能的影响。方法：SD雄性大鼠随机分成7组（n＝6）：正常组（ NC组），OUA 10－9 mol／L组，OUA 10－8 mol／L组，OUA 10－7 mol／L组，OUA 10－6 mol／L组，OUA 10－5 mol／L组，OUA 10－4 mol／L组。左心室插管检测各组大鼠离体心脏血流动力学指标：左室峰压（ LVSP）、心率（ HR）、左室内压大上升速率（＋dp／dtmax）；观察各组大鼠的心律失常发生情况并进行心律失常评分；检测各组相同时间点的冠脉流出液中乳酸脱氢酶（LDH）的活性，同时测定各组心肌组织中Na＋-K＋-ATP酶的活性，HE染色观察各组大鼠心肌形态学变化。结果：同NC组相比，OUA 10－9 mol／L组大鼠心脏LVSP ×HR和＋dp／dtmax无明显差异（P＞0．05），OUA 10－8 mol／L和10－7 mol／L组大鼠心脏LVSP ×HR和＋dp／dtmax呈剂量升高而增强（P＜0．05或P＜0．01）；OUA 10－9 mol／L、OUA 10－8 mol／L组的Na＋-K＋-ATP酶的活性明显升高（P＜0．05或P＜0．01）；同NC组相比，OUA浓度在（10－6～10－4）mol／L时，OUA对各组大鼠的心功能呈剂量依赖性抑制作用（P＜0．01）；各组大鼠的心律失常评分明显升高；各时间点心脏灌流液中LDH的活性亦明显升高，各组心肌组织Na＋-K＋-ATP酶活性均呈剂量依赖性降低（P＜0．05或P＜0．01）。结论：低浓度哇巴因[（10－9～10－7）mol／L]对大鼠离体心脏有强心作用，但随着哇巴因浓度的升高[（10－6～10－4） mol／L]，转为对心脏呈剂量依赖性抑制作用。
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快律宁对实验性心律失常的干预作用
目的:研究快律宁对药物诱发实验性心律失常的干预作用.方法:制备乌头碱、氯化钡诱发大鼠实验性心律失常模型和哇巴因诱发豚鼠实验性心律失常模型,记录给予氯化钡后大鼠心律失常出现时间和维持时间以及大鼠/豚鼠出现室早、室速及室颤时的乌头碱和哇巴因的用量,观察快律宁不同剂量对上述模型的保护作用.结果:快律宁可明显推迟氯化钡诱发大鼠心律失常出现时间,并缩短其维持时间;可提高大鼠出现室早、室速、室颤时的乌头碱用量,并提高豚鼠出现室颠时哇巴因用量.结论:快律宁对药物诱发的实验性心律失常有保护作用,其抗心律失常机制可能与影响心肌多离子通道有关.
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参松养心胶囊联合比索洛尔对心律失常保护作用的实验研究
目的 研究参松养心胶囊(SSYX)辅助富马酸比索洛尔(BIS)对乌头碱及哇巴因诱发的实验性心律失常的保护作用.方法 制备乌头碱及哇巴因诱导大鼠及豚鼠实验性心律失常模型,实验共分5组,即:对照组、SSYX (25、50、100 mg/kg)辅助BIS(0.5 mg/kg)组及单独应用BIS (0.5 mg/kg)组,预先灌胃给予相应药物3d,末次给药后,分别给予乌头碱和哇巴因,观察大鼠出现室性早搏(VP)、室性心动过速(VT)、心室颤动(VF)及心脏停搏(CA)的诱发时间以及豚鼠出现上述症状时哇巴因的用量.结果 与对照组比较,辅助应用SSYX 50、100 mg/kg组均能使给乌头碱后大鼠VP、VT、VF及CA的诱发时间明显延长(P＜0.05或P＜0.01),辅助应用SSYX 25 mg/kg仅可使给乌头碱后大鼠VT的诱发时间延长(P＜0.05);与对照组比较,辅助应用SSYX 50、100 mg/kg组均能使给哇巴因后豚鼠出现VP、VT、VF及CA时哇巴因的用量明显提高(P＜0.05或P＜0.01),辅助应用SSYX 25 mg/kg仅可使给哇巴因后豚鼠出现VT、VF时哇巴因的用量提高(P＜0.05).结论 SSYX辅助BIS对乌头碱及哇巴因诱发的实验性心律失常均具有明显的保护作用,且作用优于单独使用BIS,提示SSYX与BIS联合应用具有协同作用.
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早搏宁冲剂的抗实验性心律失常作用
目的:观察早搏宁冲剂对实验性心律失常的影响.方法:采用Wistar大鼠、豚鼠、家兔,观察早搏宁冲剂对乌头碱诱发大鼠心律失常和哇巴因诱发豚鼠心律失常的影响,以及早搏宁冲剂对电刺激家兔室颤阈及结扎大鼠冠状动脉诱发心律失常的影响. 结果:早搏宁冲剂可增加乌头碱及哇巴因诱发心律失常的用量,提高电刺激家兔室颤阈值,延迟结扎大鼠冠状动脉心律失常出现时间,减少早搏次数及室速持续时间.结论:早搏宁冲剂具有抗实验性心律失常作用,且有一定的量效关系.
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宁心律康颗粒调节Na+ -K+ -ATP酶抗心律失常的实验研究
目的:观察宁心律康颗粒对静脉注射哇巴因诱发心律失常模型豚鼠的的治疗作用,并探讨其对Na+-K+-ATP酶的影响.方法:采用静脉注射哇巴因法制备心律失常豚鼠模型,观察宁心律康颗粒用药后对模型豚鼠出现室性早搏、心室颤动和心脏停搏时哇巴因用量,及心肌组织Na+-K+-ATP酶的影响.结果:①宁心律康颗粒能够显著增加诱发豚鼠出现心律失常时哇巴因的剂量；②宁心律康颗粒能够显著提高模型豚鼠心肌组织Na+-K+-ATP酶活力.结论:宁心律康颗粒能够通过调节心肌细胞膜上的Na+-K+-ATP酶活力,达到抗心律失常的作用.
关键词： 宁心律康颗粒 哇巴因 心律失常 心肌细胞 Na+-K+-ATP酶 -
哇巴因诱导人足细胞凋亡的作用机制
目的 足细胞凋亡在狼疮肾炎(lupus nephritis,LN)发病过程中有重要作用.内源性哇巴因为强心甾类固醇中的一种,在慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)患者体内表达上调,在5/6肾切除所模拟的慢性肾衰竭大鼠模型体内可诱导肾间质细胞转分化.本研究主要探讨哇巴因在LN中诱导人足细胞(human podocytecell,HPC)凋亡的作用机制.方法 ①体内实验:选取肾脏肿瘤患者被切除的正常肾组织作为对照组,系统性红斑狼疮疾病活动指数(systemic lupus erythematosusdisease activity index,SLEDAI)评分大于5分的活动性LN患者的肾组织作为研究组,通过免疫组织化学检测肾活检组织中nephrin的表达改变.②体外实验:培养HPC,以不同浓度哇巴因(0 nmol/L,0.1 nmol/L,1 nmol/L,5 nmol/L,10 nmol/L,100 nmol/L)刺激HPC不同时间(24 h、48 h、72 h)后,用MTT法观察并测定哇巴因对HPC增殖凋亡的影响;以不同浓度哇巴因处理HPC 24 h后,采用Hoechst-33258染色检测细胞凋亡;收集各个浓度哇巴因处理的细胞,用蛋白免疫印迹法检测钠钾ATP酶α1(Na+-K+-ATPase α1,NKAα1)、p-Src、nephrin的表达情况.③HPC用Src激酶抑制剂PP2(1 μmol/L)提前1h预处理,随后加入不同浓度哇巴因孵育24 h,收集蛋白,行蛋白免疫印迹,检测p-Src、nephrin的表达.结果 ①哇巴因以剂量和时间依赖方式诱导HPC凋亡.②正常对照肾组织中nephrin的表达沿1肾小球基底膜外侧呈均匀、线状分布,且表达强;LN组肾组织中nephrin在肾小球的分布不均,且表达较正常肾组织明显减弱.③随着哇巴因浓度增加,HPC细胞中NKAα1、p-Src的表达先上调再下降,同时可检测到nephrin蛋白表达逐渐减少.④PP2预处理HPC,阻断哇巴因对Src的活化,使得p-Src表达下调,逆转上述效应,逐渐恢复nephrin的表达,使nephrin表达增加.结论 哇巴因通过NKAM/Src下调nephrin蛋白的表达参与HPC凋亡.
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哇巴因诱导白血病细胞凋亡的作用机制
目的:研究哇巴因对白血病细胞株Jurkat是否具有凋亡诱导作用,探索其可能的信号传导通路,阐明哇巴因诱导细胞凋亡的作用机制.方法:采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法观察哇巴因对白血病细胞生长的抑制程度;应用电镜及流式细胞术观测细胞凋亡;应用Western-blot检测细胞外信号调节蛋白激酶(extracelluar signal-regulated kinase1/2,简称ERK1/2)的表达.结果:哇巴因能诱导白血病细胞凋亡,细胞凋亡的数量与哇巴因的浓度呈正相关,Western-blot检测结果显示哇巴因作用后,磷酸化ERK1/2的表达减低.结论:细胞外信号调节蛋白激酶ERK通路可能参与了哇巴因引起的白血病细胞的凋亡过程.
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黄芩甙对大鼠心室肌细胞触发性心律失常的影响及其机制
目的 研究黄芩甙对触发性心律失常的影响,探讨黄芩甙抗心律失常的机制.方法 酶解法分离大鼠心室肌细胞,全细胞膜片钳技术记录黄芩甙作用前后的L型钙电流(ICa-L)的变化,外科手术得到心室乳头肌,标准玻璃微电极技术记录黄芩甙作用前后跨膜动作电位(TAP)的变化以及哇巴因诱发的延迟后除极(DAD)和触发活动(TA)的影响.结果 ①在电压钳制下,黄芩甙对ICa-L均有明显抑制作用,随浓度的增加,对ICa-L的抑制作用逐渐增强.10,20和40 μmol/L的黄芩甙对ICa-L的大电流密度抑制作用分别由15.8±1.2 pA/pF减小到11.3±0.9,8.2±0.8,4.9±0.6 pA/pF (P均<0.05).黄芩甙对ICa-L的抑制作用具有非常好的量效性,半效抑制浓度为27.7±1.9 μmol/L.显著上抬I-V曲线.②20 μmol/L黄芩甙明显缩短动作电位时程,抑制哇巴因诱导的DAD和TA.结论 黄芩甙能抑制触发性心律失常,这可能与黄芩甙抑制心肌细胞ICa-L内流,减少细胞内Ca2+超载有一定关系.
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哇巴因对乳鼠心室肌起搏电流的影响
目的 研究哇巴因对乳鼠心室肌起搏电流电生理特性的作用.方法 体外培养乳鼠心室肌细胞.一周之内,应用常规全细胞膜片钳技术检测1,20,40,80 μmol/L哇巴因对培养心室肌细胞起搏电流的电流密度、起搏阈值等的作用.结果 1 μmol/L的哇巴因即可明显增加起搏电流的电流密度(4.76±0.48 pA/pF vs 4.0±0.41 pA/pF,P＜0.01).随着哇巴因浓度进一步增加,起搏电流的电流密度逐渐增大,HCN通道的半大激活电位逐渐向去极化方向改变,电导曲线明显右移,活化速度也明显加快,尾电流被增强,但反转电位不受影响.结论 哇巴因对心室肌HCN通道可能有剂量依赖性的激活作用.
关键词： 电生理学 哇巴因 起搏电流 膜片钳全细胞记录技术 心室肌细胞 -
低剂量哇巴因对螺旋神经节细胞损伤的保护作用
目的:探讨低剂哇巴因对B27剥夺诱发的螺旋神经节细胞损伤的保护作用,并初步探讨其保护机制.方法:螺旋神经节细胞培养第7天开始分组实验,设B27剥夺损伤组(损伤组)、B27剥夺加10 nmol/L哇巴因保护组(保护组)和正常培养对照组(对照组).各组继续培养48 h后用FITC标记的Annexin-V和碘化丙啶双染试剂盒染色,用流式细胞仪检测各组螺旋神经节细胞损伤情况.各组螺旋神经节细胞分别于加药后6、12 h两个时间点用免疫细胞化学方法检测细胞内Bel-2表达水平.另外,应用螺旋神经节组织块分组培养48h后光学显微镜下观察轴(树)突生长情况.结果:流式细胞仪检测结果显示,保护组螺旋神经节细胞损伤率为(9.0±1.3)%,显著低于损伤组(32.8±2.4)%,与对照组(6.3±0.3)%相比无明显差异;免疫细胞化学结果显示,保护组螺旋神经节细胞6h点Bcl-2水平较损伤组和对照组增加.螺旋神经节组织块培养显示,保护组轴(树)突生长明显优于损伤组.结论:低浓度哇巴因对B27剥夺诱发的螺旋神经节细胞损伤具有保护作用.此作用可能通过上调螺旋神经节细胞内Bcl-2表达水平来实现.
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哇巴因对小鼠内耳神经胶质细胞的影响
目的 研究哇巴因对小鼠内耳神经胶质细胞的影响,为干细胞移植治疗感音神经性聋的研究奠定基础.方法 成年雌性SPF级CBA/J小鼠60只,随机分为实验组和对照组,每组30只;实验组动物接受哇巴因(3 mM)经圆窗渗透给药,对照组给予等量生理盐水,于给药后7、14和30天用免疫组织荧光染色法观察位于耳蜗螺旋神经节内的内耳神经胶质细胞(inner ear glial cells,IEGs)的变化.结果 给药后7、14、30天实验组耳蜗各回螺旋神经节内可见内耳神经胶质细胞存活,但数量减少,排列紊乱;与对照组相比,哇巴因给药后7天实验组耳蜗各回神经胶质细胞的数量及密度即显著减少,给药后14天及30天后胶质细胞数量进一步减少;给药后30天各回螺旋神经节内内耳神经胶质细胞数降至低,与实验组给药后7天、14天及与同时间点对照组比较显著减少,差异有统计学意义(P<0.05).结论 哇巴因经圆窗渗透给药可直接造成CBA/J小鼠内耳螺旋神经节内神经胶质细胞的急性进行性损伤.
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特异性损伤内耳螺旋神经元小鼠模型的建立
目的：建立小鼠内耳螺旋神经元损伤的耳聋模型，为研究干细胞移植治疗感音神经性聋奠定基础。方法成年雌性SPF级CBA／J小鼠60只，随机分为实验组和生理盐水组，每组30只，实验组动物经圆窗渗透给予10μl哇巴因（ouabain），生理盐水组同法给予等量生理盐水。每组于给药前及给药后7、14及30天分别检测小鼠听性脑干反应（ABR）和畸变产物耳声发射（DPOAE），并用免疫组织荧光技术和基底膜铺片技术分别观察耳蜗螺旋神经元（spiral ganglion neurons ，SGNs）细胞及内耳毛细胞（hair cells ，HCs）的变化。结果①与生理盐水组比较，实验组给药后各时间点 ABR反应阈均明显升高，波Ⅰ潜伏期延长，振幅明显降低，差异有统计学意义（ P＜0．05）。②实验组及生理盐水组小鼠DPOAE均可正常引出。③与生理盐水组相比，实验组耳蜗各回螺旋神经元的数量及密度显著降低，差异有统计学意义（P＜0．05）。④实验组在给药后不同时间点，耳蜗各回内、外毛细胞均排列整齐、形态完整、未见明显损伤或丢失。结论哇巴因经圆窗渗透给药可特异性损伤CBA／J小鼠内耳螺旋神经元及其功能，而不损伤内、外毛细胞，是一种理想的研究干细胞移植治疗感音神经性聋的动物模型。
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TJ0711对自发性高血压和哇巴因-高血压麻醉大鼠的急性降压
目的:观察新型肾上腺素α,β受体双重阻断剂TJ0711静脉注射对自发性高血压大鼠(SHR)和哇巴因-高血压大鼠(OHR)2种模型的急性降压作用.方法:制备OHR模型:SD大鼠连续8周腹腔注射30 μg·kg-1·d-1哇巴因,将收缩压＞21.3 kPa(1 kPa≈7.5 mmHg)者随机分为生理盐水(N.S)组、TJ07110.3,0.9,2.7 mg·kg-1剂量组、阳性对照卡维地洛1 mg·kg-1组(n=12);购得的SHR分组方法同OHR.用10％乌拉坦(1.3g·kg-1,i.p)麻醉,仰位固定,分离一侧颈总动脉插管连接多通道生理记录仪测血压和心率,颈外静脉插管给药.观察给药前后大鼠收缩压、舒张压、心率的变化,分析TJ0711静注降压作用规律.结果:T J0711静注给药后2～15 min即达到大降压水平,降压作用维持25～75 min.对SHR和OHR两种高血压模型收缩压与舒张压下降趋势一致,但对SHR收缩压、舒张压大降压幅度高于OHR.结论:TJ0711静脉注射能快速、短效降低SHR和OHR两高血压模型大鼠的血压同时使心率适当减慢,具有良好的急性降压特点.
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律复康胶囊对哇巴因致豚鼠心律失常模型作用的实验研究
目的:通过观察律复康胶囊对哇巴因致豚鼠心律失常模型的对抗作用,为临床用药提供依据.方法:取实验豚鼠50只,均分为模型对照组(等容量纯化水)、阳性对照组(4.185 g·kg~(-1))、律复康胶囊小剂量(1.539 g生药/kg)、中剂量(3.078 g生药/kg)、大剂量(6.156 g生药/kg)组,各组豚鼠按剂量连续给药3 d,末次药后30 min,用哇巴因致豚鼠心律失常模型,用Medlab生物信号采集处理系统记录豚鼠插肢体电极检测标准Ⅱ导心电图,分别记录出现室性早搏、心室颤动和心脏停搏时哇巴因用量.结果:律复康胶囊各剂量组豚鼠出现旱搏、室颤和停博时所需哇巴因的剂量显著提高,与模型组比有显著性差异(P＜0.01或P＜0.05).结论:律复康胶囊能够显著增加诱发豚鼠出现心律失常时哇巴因的剂量,说明律复康胶囊对哇巴因诱发的心律失常有一定对抗作用.
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二乙酰基莲心碱抗实验性心律失常的作用
目的:研究二乙酰基莲心碱抗心律失常的药理作用.方法:采用乌头碱、哇巴因、氯化钙3种抗心律失常模型.结果:二乙酰基莲心碱5 mg*kg-1 iv可明显提高乌头碱致大鼠、哇巴因致豚鼠发生室性早搏、室性心动过速、室颤及心脏停搏用量;延长氯化钙诱发大鼠心律失常的出现时间,减少早搏、室颤的发生率及死亡率.结论:二乙酰基莲心碱具有广泛的抗心律失常作用.
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钠钾ATP酶在蒲黄抑制人血管平滑肌细胞钙化中的作用
目的:寻找改善慢性肾脏病患者及血液透析患者血管钙化的原因,从而有效延缓血管钙化,保护透析患者生命通道.方法:以人血管平滑肌细胞(hVSMC)作为研究对象,观察用不同浓度哇巴因(0,1,10,100,1,10μmol/L)刺激hVSMC不同时间后细胞的生长凋亡情况,并采用MTT法检测细胞存活能力;以蒲黄灌胃小鼠所获得血清作为药物干预,将细胞分为:对照组、哇巴因刺激组、哇巴因+蒲黄干预组;选取适合的哇巴因浓度和时间点,采用免疫印迹法检测钠钾ATP酶(NKA)a1亚基及骨桥蛋白的表达;采用Von kossa法检测钙结晶的形成及阳性细胞百分比;统计学方法采用两样本t检验,多组间两两比较用方差分析(one-way ANOVA)中SNK检验.结果:哇巴因可以诱导血管平滑肌细胞发生钙化;NKAα1亚基参与血管平滑肌钙化形成;蒲黄通过抑制NKAα1亚基活化阻止血管平滑肌钙化.结论:哇巴因参与血管钙化机制中,蒲黄通过抑制钠钾NKAα1亚基,阻断了哇巴因/NKAα1/骨桥蛋白信号通路,从而抑制了血管平滑肌钙化的进展.
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Caspase3在哇巴因诱导Jurkat细胞凋亡中的作用
目的探讨哇巴因诱导Jurkat细胞凋亡的机制.方法四甲基偶氮唑盐(MTT)法观察哇巴因对Jurkat细胞生长的抑制作用;应用DNA片段分析、流式细胞术观察细胞凋亡;半定量逆转录PCR(RT-PCR)检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase3)基因表达水平;应用Western blot测定Caspase3的活性亚单位;比色法检测Caspase3活性.结果哇巴因能诱导Jurkat细胞凋亡,在细胞凋亡过程中,Caspase3活性明显升高.结论 Caspase3活化参与了哇巴因诱导Jurkat细胞的凋亡过程.
关键词： 哇巴因 细胞凋亡 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶 -
阿米洛利与哇巴因合用对心脏电生理的影响及机制
采用标准微电极技术记录豚鼠乳头状肌和家兔窦房结细胞动作电位;采用膜片钳技术记录电压依赖性的钠、钙电流、内向整流钾电流.研究阿米洛利(Amiloride)与哇巴因(Ouabain)合用对心脏电生理的影响及机制.结果发现:在体实验中,静脉给予Amiloride能提高Ouabain致心律失常的阈剂量;离体实验中,如先加入10 μmol/L Amiloride后累积给予Ouabain至100 μgmol/L时,豚鼠乳头状肌和家兔窦房结标本搏动节律仍规则.预先分别加入不同浓度的Amiloride,Ouabain增加钠、钙电流及内向整流钾电流的作用不出现.提示Amiloride能对抗Ouabain的心脏毒性作用.
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黄芩甙抗实验性心律失常的作用
目的研究黄芩甙(Bai)对实验性心律失常的影响.方法通过静脉注射乌头碱、哇巴因、氯化钡或结扎大鼠左冠脉前降支复制各种动物心律失常模型,在预先静脉注射Bai的基础上,观察药物对各种实验性心律失常的预防作用.结果 Bai可增加乌头碱或哇巴因诱发大鼠或豚鼠所致室性心律失常所需剂量,推迟氯化钡致心律失常的出现时间和持续时间,推迟缺血再灌注诱发大鼠心律失常的发生时间并缩短室速和室颤的持续时间,降低室颤的发生率.结论 Bai具有一定的抗实验性心律失常的作用.
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倒卵叶五加总皂甙抗心律失常作用的实验研究
目的:探讨倒卵叶五加总皂甙(SAOH)对实验性心律失常的影响.方法:采用经动物颈静脉恒速注射的模型,监测哇巴因诱发豚鼠和乌头碱诱发大鼠首次出现室性早搏、室速、室颤、心脏停搏所用时间并换算成哇巴因和乌头碱的剂量.统计上采用组间t检验.结果:SAOH组与对照组相比,哇巴因诱发豚鼠和乌头碱诱发大鼠出现心律失常的剂量明显增加.结论:SAOH有一定的抗心律失常的作用.
