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植物性雌激素genistein对哇巴因所致豚鼠乳头状肌迟后去极化及触发活动的效应
应用标准玻璃微电极技术, 研究了植物性雌激素genistein (GST) 对哇巴因所引起的豚鼠乳头状肌迟后去极化(DAD)及触发活动(TA)的效应.结果如下: (1)预先给予GST (10, 50, 100 μmol/L) 剂量依赖性地抑制哇巴因(1 μmol/L)所引起的豚鼠乳头状肌DAD及TA; (2)预先应用一氧化氮合酶抑制剂L-NAME (1 mmol/L), 不影响GST (50 μmol/L)对DAD及TA的效应; (3)单独应用17β-雌二醇(E2, 5 μmol/L)或GST (10 μmol/L)对DAD及TA无明显影响, 而联合应用相同剂量的GST和E2 则产生明显抑制效应.以上结果提示, GST 可能通过抑制钙离子内流从而具有抗心律失常作用, 这对于心血管系统的保护有一定意义.
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哇巴因与弱精子症关系的研究进展
弱精子症在男性不育因素中约占30％.目前临床上针对弱精子症尚缺乏特异性治疗药物.探讨弱精子症发病机制,对开发弱精子症特异性治疗药具有重要意义.成熟睾丸组织以及成熟精子尾部均特异性存在Na +/K+-ATP酶α4亚型(Na+/K+-ATPase α4 isoform,NKA4)的蛋白,该蛋白缺失或活性下降可使精子活力明显下降.哇巴因是NKA4的天然抑制剂,能特异性结合NKA4上的哇巴因位点来抑制NKA4的活性.人体下丘脑和肾上腺皮质均能分泌哇巴因样甾体激素,称为内源性哇巴因(EO).EO与弱精子症发病有一定联系,其机制可能是通过抑制精子NKA4的活性继发影响精子的Na +/H+交换、Na +/Ca2交换以及精子细胞膜电位,终使精子活动率下降.
关键词： 哇巴因 Na+/K+-ATP酶 弱精子症 Na+/H交换 Na +/Ca2+交换 -
分子动力学模拟哇巴因对钠钾ATP酶构象的影响
通过对钠钾ATP酶及其与哇巴因的复合物进行分子动力学模拟来研究哇巴因对该酶构象的影响,首先利用对接得到复合物,然后在相同环境中模拟酶单体及其复合物.结果显示,哇巴因的结合使酶αM1与αM2向小分子靠拢,酶的A区向P区发生轻微移动.酶活性腔中疏水残基Phe783,Thr797,Val322,Gly319,Ile320,Ile321,Leu125,Ile315,Ala112与哇巴因形成疏水作用,极性残基Asp121,Thr797,Gln111与哇巴因形成氢键.通过复合物与酶单体比较,在复合物中,A区的212TGES215基序loop区与侧翼残基的移动掩埋了磷酸化Asp369残基,使其不能自身水解,妨碍了酶执行其功能时E2与E1构象转变,从而抑制酶的活性,并且激发钙离子介导的信号传导通道.此方法不仅直观的展现出酶构象的变化并且很好的解释了哇巴因抑制该酶的机制,同时得到的数据结论对传统实验进一步研究该酶起到指导性作用.
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从噬茵体7肽库中筛选畦巴因特异性结合的短肽
以哇巴因为靶分子,从噬菌体7肽库中筛选与哇巴因特异性结合的短肽.经过3轮淘筛并通过ELISA法鉴定,获得14个阳性克隆,通过对噬菌体ssDNA电泳鉴定和序列分析筛选得到3种短肽:肽A、B和C的筛选一致率分别为64.3%(9/14),28.6%(4/14)和7.14%(1/14).Genbank中蛋白质同源性分析显示,肽A、B、C均不与钠泵蛋白同源.放射性配基受体结合法检测结果表明,合成的肽A能够与哇巴因结合.哇巴因特异性结合短肽的获得将为阻遏内源性哇巴因与钠泵的结合、防治高血压奠定基础.
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哇巴因多克隆抗体F(ab)2片段的制备及其分子量测定
目的 制备哇巴因多克隆抗体F(ab)2片段，并 对其进行分子量的测定。方法 免疫家兔制备哇巴因多克隆抗 体，在适宜 的条件下，用胃蛋白酶酶解哇巴因多克隆抗体，制备F(ab)2片段。酶解产物经HPSEC分析 、纯化，ELISA法检测其免疫学活性。并在适宜的色谱条件下，分别测定三种标准蛋白的洗 脱体积，绘制标准曲线，测定其分子量。结果 100 mg哇巴 因多克 隆抗体在2 mg胃蛋白酶消化18 h，反应体系pH 3.0的条件下消化，制备出了活性的F(ab)2 片段，其相对分子质量为107 kD。结论 用胃蛋白酶消化哇巴 因多克 隆抗体，可制备出活性的F(ab)2片段，同时其相对分子质量的测定为其进一步研究提供了 依据。
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大花红景天对室性心律失常防治的初步研究
目的:探讨大花红景天对实验性快速室性心律失常的防治作用.方法:采用氯化钙、乌头碱致大鼠,哇巴因致豚鼠及肾上腺素致大白兔心律失常模型.观察大花红景天对上述模型的影响.结果:口服红景天水提液后,显著减少氯化钙致大鼠室速、室颤的发生率及死亡率,并显著提高氯化钙致大鼠室性心律失常的阈剂量;显著提高乌头碱致大鼠室速、室颤的阈剂量;显著推迟肾上腺素致大白兔室性心律失常开始发作的时间、缩短发作持续时间及窦性心律恢复时间;未能显著减少哇巴因致豚鼠室速、室颤的发生率,未能显著提高哇巴因致豚鼠室性心律失常的阈剂量.结论:大花红景天水提液对多种实验性快速室性心律失常有良好的防治作用.
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哇巴因诱导Jurkat细胞凋亡对白细胞介素2受体α亚基的影响
目的 探讨哇巴因诱导Jurkat细胞凋亡与白细胞介素2受体α亚基(IL-2Rα)的关联.方法 MTT法检测哇巴因对Jurkat细胞生长的影响；Western blot法检测IL-2Rα的表达；ELISA法检测细胞培养液中可溶性IL-2Rα(sIL-2Rα)的改变.结果 低浓度(30、50 nM)哇巴因能够诱导Jurkat细胞凋亡,下调Jurkat细胞表面的IL-2Rα及sIL-2Rα表达.结论 IL-2Rα参与了哇巴因诱导Jurkat细胞凋亡的调节.
关键词： 白细胞介素2受体α亚基 哇巴因 Jurkat细胞 -
哇巴因对T淋巴细胞白血病Jurkat细胞株的作用及机制的初步探讨
目的：哇巴因是强心甾体类药物的一种，可诱导众多肿瘤细胞凋亡。观察哇巴因对T淋巴细胞白血病Jurkat细胞株凋亡、hTERT、c-myc mRNA及蛋白表达的影响，探讨哇巴因抗肿瘤的作用机制。方法采用不同浓度和时间的哇巴因处理Jurkat细胞株，以加入等体积的1×PBS组作为对照组，分组为：对照组、哇巴因50 nmol/L 24 h组、100 nmol/L 24 h组及50 nmol/L 48 h组、100 nmol/L 48 h组，以流式细胞术检测凋亡率；RT-PCR法检测hTERT、c-myc mRNA水平；Western blot检测hTERT、c-myc蛋白的表达。结果药物作用于Jurkat细胞株24、48 h后，对照组、50 nmol/L 24 h组、100 nmol/L 24 h组及50 nmol/L 48 h组、100 nmol/L 48 h组的细胞凋亡率分别为（4．23±1．01）％、（5．67±3．71）％、（9．63±4．83）％、（19．67±4．55）％、（37．60±11．89）％，哇巴因50 nmol/L 48 h 组、100 nmol/L 48 h 组的凋亡率与对照组相比差异有统计学意义（P﹤0．05）；Jurkat细胞的hTERT 、c-myc的mRNA水平较对照组显著下降了200％，其 hTERT蛋白表达也较对照组下降了224％，c-myc蛋白表达较对照组下降400％（P﹤0．05），且hTERT与c-myc mRNA及蛋白表达的降低呈正相关（P﹤0．05）。结论哇巴因可诱导T淋巴细胞白血病Jurkat细胞株凋亡。哇巴因也可引起hTERT、c-myc mRNA及蛋白表达的下调，这可能是哇巴因可诱导Jurkat细胞株凋亡的机理之一。
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高血压对大鼠脑基底动脉收缩和钠泵活性的影响
目的：探讨高血压对大鼠脑血管收缩性的影响及其与钠泵活性的关系。方法取♂ Wistar大鼠（WR）和自发性高血压大鼠（SHR）基底动脉环，通过Multi Myograph张力换能系统记录血管张力变化，比较两种大鼠离体脑动脉对KCl和5-羟色胺（5-HT）的收缩反应，分析高血压病变对脑血管收缩性和钠泵活性的影响。结果与 WR基底动脉相比， SHR基底动脉的KCl和5-HT量效曲线明显右移，再复K＋所致血管舒张作用减弱，提示高血压病变可明显降低脑血管钠泵活性及 KCl 和5-HT 的收缩反应；哇巴因（Ouabain， OUA）浓度依赖性收缩SHR脑血管，其量效关系曲线可经两点结合模型进行佳拟合，Kd分别为：1.7×10－8 mol·L－1和1.6×10－5 mol·L－1，表明SHR脑基底动脉上存在高、低亲和力两种不同功能的钠泵。用5×10－7 mol·L－1和10－4 mol·L－1的OUA分别抑制高、低亲和力钠泵，仅能在 SHR而非WR脑血管明显左移KCl和5-HT量效曲线，表明OUA可明显增强KCl和5-HT对脑血管的收缩作用，且OUA增强5-HT收缩SHR 脑血管的作用呈明显的浓度依赖性（r ＝0.9393，P＜0.05）；在SHR脑血管，这两个浓度OUA对KCl量效曲线的左移幅度无明显差别，而对5-HT收缩量效曲线的左移幅度却有明显不同，提示仅高亲和力钠泵介导了SHR脑血管对KCl的收缩反应，而SHR脑血管对5-HT的收缩反应则由高、低亲和力两种钠泵共同参与。结论高血压病变可明显降低脑血管对血管收缩剂的反应性，其机制可能与高血压所致钠泵活性降低或钠泵对OUA敏感性增加有关。
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Na+/K+泵参与缺氧诱发的大鼠脑血管收缩的体外研究
目的 探讨Na+/K+泵是否参与缺氧诱发的脑血管收缩.方法 以PSS、K-PSS、oua-PSS、oua-K-PSS或K-free-PSS液灌流大鼠离体基底动脉后5、10、15、30和 60 min时,以压力肌动描记系统记录缺氧前后血管直径的变化.结果 缺氧、K+和哇巴因灌流均可使大鼠基底动脉产生明显收缩,缺氧可增强K+、10-8和10-7 mol·L-1哇巴因对正常基底动脉的收缩(P<0.01),但对K+与10-8或10-7 mol·L-1哇巴因共同预收缩的基底动脉以及5×10-7 mol·L-1哇巴因收缩的基底动脉并无影响.而且用可取消Na+/K+泵活性的无K+-PSS液,不管在正常或缺氧情况下,均能使基底动脉在5 min内达到大收缩.结论 Na+/K+泵可能参与了缺氧诱发的脑血管收缩,其机制可能与缺氧抑制Na+/K+泵有关.
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哇巴因抑制乳腺癌细胞增殖与雌激素受体亚型介导的信号通路有关
目的 在确定哇巴因是否经雌激素受体(estrogen receptor,ER)途径发挥抗乳腺癌细胞增殖作用的基础上,进一步探讨ER亚型在哇巴因介导的增殖抑制中的作用.方法 选择兼有两种ER亚型表达的人乳腺癌细胞株MCF-7为研究对象,采用MTT法、RNA干扰技术及蛋白印迹检测技术,观察ER亚型对哇巴因介导的细胞增殖抑制作用的影响.结果 在0.1～1 000 nmol·L-1浓度范围内,哇巴因以剂量依赖性方式明显抑制MCF-7细胞的增殖活性,该抑制作用可被ER阻断剂ICI 182,780部分阻断.应用RNA干扰技术沉默ERα或ERβ基因表达,进一步证实哇巴因对MCF-7细胞的增殖抑制作用主要由ERα介导.结论 哇巴因可通过ERα信号通路对乳腺癌发挥抗肿瘤效应.NKA结合ER可能是未来开发抗乳癌药物的潜在重要靶点.
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哇巴因对心肌细胞钙瞬变及收缩力的作用
目的 检测哇巴因对正常大鼠和阿霉素所致心衰大鼠左心室肌细胞的收缩力、钙瞬变和舒张期钙影响.方法 腹腔注射阿霉素制备大鼠心衰模型,以改良的Langendorff装置分离心肌细胞,负载Fluo-4钙荧光染料后采用IonOptix可视化细胞动缘探测系统检测哇巴因对大鼠心肌细胞收缩功能、舒张期钙及钙瞬变的变化.结果 哇巴因可浓度依赖性增加正常大鼠心肌细胞收缩力和钙瞬变,3×10-7 mol·L-1哇巴因即明显增加收缩力和钙瞬变,但对心衰大鼠心肌细胞,1×10-5 mol·L-1哇巴因才明显增加心肌细胞收缩力和钙瞬变;哇巴因也可增加正常大鼠和心衰大鼠心肌细胞舒张期钙.结论 哇巴因能够增加心肌细胞收缩力、钙瞬变和舒张期钙,阿霉素所致心衰大鼠心肌细胞较正常细胞不敏感.
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钠钾泵抑制剂通过调节细胞周期相关蛋白的生成介导肝癌HepG2细胞周期S期阻滞与凋亡
目的 研究钠泵抑制剂哇巴因(ouabain)和华蟾毒配基(cinobufogenin)对人肝癌HepG2细胞增殖的抑制作用及细胞周期的改变,初步分析其机制.方法 以人肝癌细胞HepG2为靶细胞,MTT比色法检测哇巴因和华蟾毒配基对HepG2细胞增殖的影响;Hoechst 33342荧光染色检测细胞形态学变化;流式细胞术检测细胞周期;实时定量PCR和Western blot检测CyclinA1、CDK2、PCNA和p21~(CIP1)表达的变化.结果 哇巴因和华蟾毒配基可明显抑制HepG2细胞增殖,抑制作用呈时间-浓度依赖性.荧光染色显示药物处理24 h后,细胞呈现典型的凋亡形态特征;细胞周期分析显示,实验组S期细胞比例升高,实时定量PCR和Western blot结果显示:哇巴因和华蟾毒配基可下调CyclinA1、CDK2和PCNA的表达(P<0.05),上调p21~(CIP1)的表达(P<0.05).结论 钠泵抑制剂可抑制肝癌HepG2细胞的增殖,引起细胞周期S期阻滞,诱导细胞凋亡,这与其调节细胞周期相关蛋白的生成关系密切.
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哇巴因抑制钠泵阻β1亚单位和VE-cadherin减弱血管内皮细胞连接功能
目的 探讨钠泵抑制剂哇巴因对血管内皮细胞连接的影响及机制.方法 以人脐静脉内皮细胞(HUVECs)为靶细胞,Hoechst33342/PI双荧光染色法观察哇巴因作用后细胞凋亡或坏死特征,透射电镜和光镜观察细胞形态结构变化.应用半定量聚合酶链反应检测钠泵α1亚单位、β1亚单位、VE-cadherin和Snail mRNA的表达.结果 0.1μmol·L-1哇巴因作用HuVECs 24～48 h,细胞死亡以凋亡为主,10μmol·L-1哇巴因作用24 h,引起细胞坏死;对照组细胞间的细胞连接数量多,结构清晰,而经哇巴因作用后,细胞连接丧失,细胞脱落.哇巴因作用HuVEcs后,钠泵α1亚单位和Snail表达上调,β1亚单位和VE-cadherin表达下降,其改变均呈剂量和时间依赖性.结论 哇巴因通过下调血管内皮细胞钠泵β1亚单位和VE-cadherin的表达使细胞连接功能减弱.
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4-[对-(1-苯丙三氮唑)甲基]苯丙烯酸钠抗实验性心律失常的作用
目的研究4-[对-(1-苯丙三氮唑)甲基]苯丙烯酸钠的抗实验性心律失常作用.方法采用多种心律失常动物模型观察药物对实验性心律失常的作用.结果 4-[对-(1-苯丙三氮唑)甲基]苯丙烯酸钠25,12.5 mg·kg-1 iv可明显提高乌头碱诱发大鼠、哇巴因诱发豚鼠室性早博、室性心动过速、室颤及心脏停搏的用量;延缓氯化钡诱发大鼠心律失常的出现时间,缩短持续时间,减少出现双相性心律失常出现的动物数.结论 4-[对-(1-苯丙三氮唑)甲基]苯丙烯酸钠具有明显的抗心律失常作用.
关键词： 4-[对-(1-苯丙三氮唑)甲基]苯丙烯酸钠 心律失常 乌头碱 哇巴因 氯化钡 -
二对氯苯甲酰莲心碱对实验性心律失常的影响
目的研究二对氯苯甲酰莲心碱抗心律失常的药理作用.方法采用乌头碱、哇巴因、氯化钙3种抗心律失常模型.结果二对氯苯甲酰莲心碱5 mg*kg-1 iv可明显提高乌头碱致大鼠、哇巴因致豚鼠发生室性早搏、室性心动过速、室颤及心脏停搏用量;延长氯化钙诱发大鼠心律失常的出现时间,减少早搏、室颤的发生率及死亡率.结论二对氯苯甲酰莲心碱具有广泛的抗心律失常作用.
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阿魏酸钠抗实验性心律失常的作用
目的探讨阿魏酸钠抗实验性心律失常的机制.方法应用各种心律失常动物模型观察药物对实验性心律失常的作用.结果阿魏酸钠0.6 g*kg-1 iv可对抗哇巴因、肾上腺素诱发的室性心律失常(P<0.01),亦可对抗心肌缺血诱发的心律失常(P<0.05),但不能拮抗乌头碱所诱发的心律失常(P>0.05).结论阿魏酸钠具有抗多种实验性心律失常的作用,其机制可能与钾离子通道及β受体的阻断作用有关.
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哇巴因信号的传递及其对细胞生长和死亡的影响
哇巴因(ouabain)是能抑制 Na+,K+-ATPase活性的强心甾类物质,在Na+,K+-ATPase α亚单位位于细胞膜外侧有1个ouabain特异性结合位点,ouabain结合时,活化胞浆中具酪氨酸蛋白激酶活性的Src,形成Na+,K+-ATPase-Src复合物,作为一个活化的"二元"受体,介导信号传递.ouabain 对细胞生长和死亡起重要调节作用.ouabain介导细胞发生杂合性死亡,即同一细胞兼具细胞肿胀、细胞器溶解等坏死特征和核凝集、DNA裂解、caspase级联反应等凋亡特征,对于细胞死亡的认识具有重要意义.
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IQ23抗实验性心律失常作用及其机制
IQ23为双苄基异喹啉类化合物,本实验观察IQ23对哇巴因所致豚鼠心律失常及离体心房的收缩性、自律性及功能性不应期(FRP)的作用,初步探讨IQ23抗实验性心律失常的机制.
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白藜芦醇抗心律失常和抗心肌缺血作用研究
白藜芦醇(Resveratrol,RVL)为多酚类物质,是广泛存在于水果、中药和葡萄酒中的一种植物抗毒素.随着对RVL研究的深入,人们发现它具有多种药理学活性,其中RVL的心血管保护作用逐渐成为研究热点,但其有关抗心律失常及抗心肌缺血作用鲜见报道.本文就RVL对实验性心律失常和急性心肌缺血的保护作用进行研究.
