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成釉细胞纤维瘤的临床特点和病理分析
成釉细胞纤维瘤由类似牙板和成釉器的牙源性上皮条索和类似牙乳头的牙源性外胚间充质组成,但没有成牙本质细胞,不含牙釉质和牙本质等牙齿硬组织,是一种真性、混合性牙源性良性肿瘤.
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免疫金银法在小鼠牙胚细胞外基质免疫组化研究中的应用
细胞与细胞间质之间相互作用在组织的发生、发育中的重要性已众所周知.胞外基质(ECM)在牙胚的形态发生和细胞分化方面起着重要作用.纤维粘连蛋白(Fibronectin,FN)是牙胚组织中的重要间质成分.为了观察FN在牙胚发育中的分布特征和变化,分析FN等间质与牙乳头细胞分化的关系,更好地进行胞外基质的观察,作者利用免疫组化技术,将免疫金银法(Immunogold silver staining,IGSS)和微波结合,用于小鼠牙胚FN的染色观察中,取得了较好的效果,现将方法介绍如下:
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转化生长因子β受体在体外培养的人牙乳头细胞中的表达
目的 探讨体外培养的人牙乳头细胞中转化生长因子β(transforming growth factor-β,TGF-β)受体的表达情况和外源性的TGF-β对人牙乳头细胞TGF-β受体的表达影响.方法 采用常规细胞培养、SP免疫组织化学及图像分析法,检测培养的人牙乳头细胞TGF-β受体的表达情况和外源性TGF-β对人牙乳头细胞TGF-β受体的表达影响.结果 TGF-βⅠ、Ⅱ型受体为强阳性表达,Ⅲ型受体为弱阳性表达.图像分析结果表明,各实验组与对照组灰度值经统计学分析差异无显著性(P＞0.05).结论 体外培养的人牙乳头细胞表达TGF-βⅠ、Ⅱ、Ⅲ型受体,外源性TGF-β不影响其受体表达水平.
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转化生长因子β1和骨形成蛋白2体外诱导成牙本质细胞分化
目的观察转化生长因子β1(transforming growth factor β1, TGF-β1)和骨形成蛋白2(bone morphogenetic protein 2,BMP2)对体外培养的鼠牙乳头成牙本质细胞分化的影响. 方法取17 d胎龄小鼠下颌第一磨牙牙胚,胰蛋白酶消化分离牙乳头,置半固态培养基培养6 d,半固态培养基中加入重组TGF-β1或BMP2与肝素, 组织学观察. 结果 TGF-β1或BMP2加肝素可诱导牙乳头周边细胞发生极化,并分泌胞外基质.TGF-β1或BMP2单独加入时未见细胞极化,但基质分泌增加. 结论 TGF-β1和BMP2均能诱导成牙本质细胞的细胞学分化和分泌功能 .
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脂多糖对人根尖牙乳头干细胞中基质细胞衍生因子1表达的影响
目的 明确人根尖牙乳头干细胞(stem cells from apical papilla,SCAP)中基质细胞衍生因子1(stromal cell-derived factor-1,SDF-1)的表达及脂多糖对其表达的影响.方法 分离培养18～24岁供者牙根未发育完全的人第三磨牙SCAP.实验分组:对照组加入细胞培养液,实验组加入含有大肠杆菌脂多糖的培养液,脂多糖终质量浓度分别为0.1、1.0及10.0 mg/L.采用细胞计数(cell counting kit-8,CCK-8)法检测脂多糖对SCAP增殖的影响,反转录PCR法检测SDF-1 mRNA在SCAP中的表达,实时PCR法检测24及48 h时脂多糖对SDF-1表达的影响.结果 脂多糖组细胞吸光度值(A值)与对照组在培养的前5天差异均无统计学意义,至第7天时脂多糖组细胞A值随脂多糖浓度增加显著降低;SCAP表达SDF-1 mRNA.在培养24 h时,0.1、1.0及10.0 mg/L脂多糖组SCAP中SDF-1mRNA的相对表达量分别为1.4±0.1、2.2±0.4及2.3±0.5,与未经脂多糖处理的对照组(设为1.0)相比差异均有统计学意义(F=12.102,P=0.002);48 h时0.1、1.0及10.0 mg/L脂多糖组SDF-1表达量(分别为2.1±0.4、3.4±0.3、3.8±0.5)随脂多糖浓度增加而升高的趋势愈加显著,与对照组相比差异均有统计学意义(F=39.054,P＜0.001).结论 SCAP具有趋化因子SDF-1的表达,脂多糖可在一定范围内刺激SDF-1的表达显著上调.
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微创拔牙即刻种植的牙龈美学效果观察
目的 探讨微创拔牙即刻种植技术的临床特点及修复后的牙龈美学效果.方法 21例上前牙单个缺失病例,行不翻瓣微创拔牙同期23颗种植体即刻植入,并且同期安装愈合基台直接暴露于口腔,即非埋入式种植术式,种植体愈合6个月后进行永久修复.种植永久修复后观察时间平均27.6个月(13～51个月).根据Jemt牙龈乳头指数(papilla index score,PIS)观察种植体永久修复12个月后的近远中牙龈乳头状况,根据Fürhauser的改良红色美学指数观察种植体永久修复1年后与相邻天然牙唇侧龈缘位置的协调性;唇侧软组织与相邻天然牙唇侧牙龈色泽协调性.结果 23颗种植体均获得良好的骨结合;种植修复体近远中PIS均为Ⅱ级以上.种植修复体与相邻天然牙唇侧牙龈缘水平位置协调性一致的15颗,8颗不协调;唇侧软组织色泽与相邻天然牙协调一致的18个牙位,5个牙位有轻度差异.结论 微创拔牙即刻种植术是一项要求较高的技术,多因素影响软组织美学效果,严格掌控适应证,才能获得理想修复效果.
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三氧化矿物凝聚体对牙乳头细胞增殖和分化影响的实验研究
目的 研究不同质量浓度的三氧化矿物凝聚体(mineral trioxide aggregate,MTA)对大鼠牙乳头细胞(rat dental papilla cells,RDPC)增殖和分化能力的影响,探讨MTA在根尖诱导方面的作用.方法 组织块法原代培养RDPC并鉴定.制备不同质量浓度的MTA浸提液(0.002、0.02、0.2、2及20 g/L)并处理第3代RDPC 3 d,以普通培养液的RDPC作为空白对照组(每组6孔),用甲基噻唑基四唑(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)比色法检测细胞增殖能力,筛选适合细胞生长的质量浓度.用0.002 g/L MTA培养RDPC,以普通培养液的RDPC作为空白对照组,检测1、3、5、7 d RDPC的碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性和1、3、5 d RDPC的Ⅰ型胶原含量.用方差分析对不同浓度MTA干预后RDPC的增殖能力进行统计学分析,用t检验对0.002 g/L MTA干预后RDPC分泌的ALP活性和Ⅰ型胶原含量进行统计学分析.结果 MTT法检测不同质量浓度MTA对RDPC增殖能力影响中,培养3d后的A值20 g/L组(0.092±0.011)显著低于空白对照组(0.249±0.006),差异有统计学意义(P＜0.01)；0.02和0.002 g/L组的A值(分别为0.267±0.005、0.276±0.006)均显著高于空白对照组(0.249±0.006),差异均有统计学意义(P＜0.01).ALP活性检测结果显示,MTA组3、5、7d的A值[分别为(0.217 ±0.008)、(0.253±0.005)和(0.279±0.004)]均显著高于空白对照组相应时间点的A值[分别为(0.166±0.006)、(0.221±0.006)、(0.242±0.004)],差异均有统计学意义(P＜0.01).3、5d的Ⅰ型胶原含量MTA组[分别为(78.46±2.72)、(90.73±3.08) μg/L]均显著高于相应时间点的空白对照组[分别为(66.75±3.08)、(74.27±3.50) μg/L],差异均有统计学意义(P＜0.01).结论 高浓度的MTA抑制RDPC的生长,低浓度的MTA可以促进RDPC的增殖和分化.
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LIM矿化蛋白1在人牙髓及根尖牙乳头中的表达
目的 比较人年轻恒牙牙髓、根尖牙乳头及成熟恒牙牙髓组织中LIM矿化蛋白1(LIMmineralization protein-1,LMP-1)的表达,探寻LMP-1在牙髓牙本质复合体发育和成熟中的作用.方法 收集48颗因正畸拔除的健康前磨牙,其中年轻和成熟恒牙各24颗,样本来源对象的年龄分别为11 ～14岁和18 ～30岁.拔除后即刻分离获得年轻恒牙的牙髓和根尖牙乳头组织(各24个样本)以及成熟恒牙的牙髓组织(24个样本).实验分组如下:第1组为牙根形成2/3的年轻恒牙的根尖牙乳头组织；第2组为牙根形成2/3的年轻恒牙的牙髓组织；第3组为成熟恒牙的牙髓组织.每组12个样本用于反转录PCR(reverse transcription-PCR,RT-PCR)检测,另12个样本用于蛋白质印迹法检测,以β-肌动蛋白做内参.图像分析软件(Meta Morph 6.2.6)对阳性条带进行灰度值测定,目的条带与内参的灰度值比值为LMP-1的表达强度.应用SPSS13.0对数据进行统计学分析,LMP-1在年轻恒牙根尖牙乳头与牙髓组织之间的表达强度的两两比较采用两配对样本的t检验,年轻恒牙牙髓与成熟恒牙牙髓组织之间的表达强度的两两比较采用两独立样本的t检验,以双侧P＜0.05为差异有统计学意义.结果 LMP-1 mRNA在年轻恒牙的根尖牙乳头、牙髓和成熟恒牙的牙髓组织中的表达强度分别为0.25±0.09、0.46±0.24和0.31 ±0.10,经两样本t检验分析,LMP-1的基因表达在第2组年轻恒牙牙髓组织明显高于其在第1组年轻恒牙根尖牙乳头组织(t=2.92)以及第3组成熟恒牙牙髓组织的表达强度(t=2.31,P＜0.05).LMP-1蛋白在3组中的表达强度分别为0.33 ±0.08、0.82±0.10和0.52 ±0.19,LMP-1的蛋白表达在第2组显著高于第1组(t=3.33)及第3组中的表达强度(t =3.11,P＜0.05).结论 无论是在mRNA水平还是在蛋白水平,LMP-1在人年轻恒牙牙髓、根尖牙乳头以及成熟恒牙牙髓组织中均有不同程度的表达,提示LMP-1在牙髓牙本质复合体发育和成熟过程中可能发挥重要作用.
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牙髓血运重建术治疗年轻恒牙根尖周病的研究进展
根管内血运重建术是Iwaya在2001年首次提出的一种牙髓再生方法，主要通过彻底有效的根管消毒，为牙髓干细胞、牙乳头间充质干细胞等增殖和分化提供良好的环境，从而促使牙根继续发育，多用于治疗年轻恒牙根尖周炎。至今，已有多位学者报道采用该方法取得了令人满意的结果，即患牙的根尖周损害影像消失、牙根继续发育。本文将从根管内血运重建术的发生原理、组织学来源、抗菌剂的应用及组织支架等方面的研究进展做一述评。
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脱细胞真皮基质对年轻恒牙牙乳头干细胞分化的作用
目的:获取年轻恒牙牙乳头组织,进行细胞培养以及与脱细胞真皮基质(acellular dermal matrix,ADM)的复合培养,了解ADM在干细胞成骨、成脂转化中的作用.方法:利用口腔外科手段获取年轻恒牙牙乳头组织,分离培养细胞,对其进行流式细胞分析,细胞分为两组,并通过染色进行观察,利用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time polymerase chain reaction,real-time PCR)对特定蛋白的RNA水平进行分析.将牙乳头细胞复合ADM培养,实验组对培养细胞进行成骨与成脂诱导分化,对照组不进行诱导,同样进行染色与real-time PCR分析.结果:牙乳头细胞生长活跃,利用流式细胞分析发现70.3%细胞的间充质干细胞表面标志物Stro-1表达呈阳性,有96%细胞CD105表达呈阳性,经过诱导后,实验组细胞与成骨相关的骨钙素(osteocalcin,OCN)和骨涎蛋白(bone sialoprotein,BSP)的RNA水平,与成脂相关的肝X-受体α(liver X-recepter α,LXRα)、脂蛋白脂酶(lipoprotein lipase,LPL)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator activated receptor γ,PPAR-γ)和B类清道夫受体1(scavenger receptor class B type 1,SR-B1)的RNA水平均高于未经诱导的对照组细胞.牙乳头细胞复合ADM培养后细胞仍然生长活跃,两者紧密贴附,经诱导分化,实验组OCN与BSP的RNA水平高于对照组(P>0.05),实验组LPL的RNA水平高于对照组(P<0.05).结论:通过口腔外科获得的年轻恒牙牙乳头组织含有大量具有成骨能力的干细胞,将其与具有胶原支架结构的ADM复合培养,发现ADM可以作为干细胞生长的支架结构,并对干细胞的成骨诱导起到一定作用.
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牙乳头细胞多向分化的观察
目的:探讨牙乳头细胞中存在的前体细胞类型及其分化特性.方法:分离培养出生后4 d的SD大鼠下颌第一磨牙牙乳头细胞,检测骨钙蛋白(osteocalcin,OCN)、牙本质涎蛋白(dentin sialoprotein,DSP)的表达.观察出生后1 d的SD仔鼠下颌第一磨牙牙胚、胚胎11 d的下颌突在肾被膜下生长2周后的情况.确定肾被膜下可作为移植区后,将牙乳头细胞团及与成釉器的复合体移植到肾被膜下,24 d后观察所形成的组织结构.结果:体外培养的牙乳头细胞可表达OCN和DSP.出生后1 d的SD仔鼠下颌第一磨牙牙胚、胚胎11 d的下颌突在肾被膜下可继续发育生长.经肾被膜下移植培养后,牙乳头细胞团可生成牙本质样结构和骨样结构,而与成釉器复合后只观察到紧邻支架的牙本质样结构.结论:牙乳头细胞中包含不同类型的前体细胞,其分化方向与所处微环境密切相关.
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应用无创瓷贴面技术改善种植区域美学效果的临床研究
目的:探讨评估应用无创瓷贴面技术改变种植区域天然邻牙外形,减小或关闭种植修复体与邻牙间的黑三角,改善种植区域美学修复的临床效果.方法:2007年5月至2009年8月在北京大学口腔医院种植中心接受上颌前牙种植修复的患者10人(男4人,女6人,平均年龄41.5岁)共14个牙位,种植体骨结合完成后采用种植体支持的暂时冠对牙龈成型3～6个月.开始永久修复时,对相邻的天然牙冠缺隙侧的邻面以无创瓷贴面改善牙型,加宽邻牙缺隙侧邻面颈部至外形高点之间的近远中宽度,改善美学修复效果.观察指标:(1)评价标准:在模型上测量修复前、后种植体与邻牙之间黑三角的水平向和垂直向数值变化,水平测量龈缘水平(黑三角底边)的近远中距离(A-B),垂直测量龈缘中点(黑三角底边中点)至牙冠接触点之间距离(C-D);(2)瓷贴面的检查:有无脱落或缺损;(3)牙龈健康状况:牙龈出血指数.结果:10位患者共14个种植体邻牙接受邻而无创瓷贴面修复,修复后追踪观察6～27个月,平均10.4个月.修复前黑三角的水平向距离平均为(3.1±0.8)mm,修复后平均(1.1±0.5)mm,修复前黑三角的垂直向距离平均(5.3±1.1)mm,修复后平均(2.9±0.7)mm,至后一次复查均未见瓷贴面脱落或破损,牙龈出血指数为0～1.结论:无创瓷贴面技术改善牙周病患者种植区域邻牙外形,减小或关闭黑三角,改善美学效果的方法易行,近期效果好,患者满意度高,远期效果需要进一步观察.
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汉族青年上中切牙牙冠外形分类与龈乳头充满的相关性研究
目的：在获取汉族青年上中切牙临床牙冠标准化图片的基础上，对牙冠外形进行更为科学客观的分类，并分析牙冠外形分类与龈乳头充满的关系。方法：纳入180名牙周健康汉族青年（男75人，女105人），平均年龄（24．3±4．5）岁（20～30岁），获取上前牙区标准化图片共360幅，请13名修复科医生对牙冠外形分类，对每名医生的分类结果进行汇总，得到牙冠外形客观分类结果（尖圆形、卵圆形、方圆形），分析不同牙冠外形对龈乳头充满的影响。结果：上中切牙中，尖圆形、卵圆形、方圆形牙冠分别占31．4％（113／360）、37．2％（134／360）、31．4％（113／360），且牙冠外形分布在不同性别之间差异无统计学意义。一致性分析显示评价者间κ值平均为0．381。采用多人评估取终分类的方法后，平均κ值上升为0．563。排除24颗无接触的上中切牙后，尖圆形、卵圆形、方圆形牙冠对应的牙龈乳头充满率分别为56．4％（62／110）、69．6％（87／125）、76．2％（77／101），方圆形牙冠对应的龈乳头更易充满（P ＝0．007）。结论：获取汉族青年中不同外形上中切牙牙冠的比例，方圆形牙冠更有利于龈乳头充满，需要建立一种更为客观、科学的牙冠外形分类方法。
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神经嵴细胞的特性和培养
在胚胎的发育中,神经嵴细胞是一组特殊的细胞群,可以分化为神经元、神经胶质细胞及多种非神经细胞,是机体内具多能性的结构之一.在口腔颌面部的发育中,大部分组织如牙乳头、牙囊、牙周膜、骨组织、肌肉中所包含的细胞几乎无一例外地均来源于神经嵴细胞[1].因此,神经嵴细胞,尤其是颅神经嵴细胞的发生、发育和分化是口腔组织发生和发育的一个重要组成部分.本文从神经嵴细胞的来源、分类、迁移和分化培养方法等方面加以阐述.
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年轻恒牙根尖诱导成形术58例治疗体会
年轻恒牙由于牙根发育尚未完成,当发生牙髓感染、坏死或是根尖周病变时,将导致牙乳头受损,使牙根发育停滞.自2005年1月来,我科对58例67颗年轻恒牙行根尖诱导成形术,经6个月～24个月随诊,效果满意,现报告如下.
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转录因子MSX-1对人牙乳头间充质细胞增殖在牙胚发育中的意义
目的观察体外培养的人牙乳头间充质细胞经转化生长因子β1(TGF-β1)作用下,肌节同源盒基因1(MSX-1)的表达变化,探讨MSX-1基因在牙胚发育中的意义.方法第5代体外培养的人牙乳头间充质细胞经50 μg/L的TGF-β1刺激后,MTT方法及流式细胞仪分析观察对照组、TGF-β1处理组细胞的增殖变化,原位杂交检测两组细胞中MSX基因扩增水平的变化.结果实验组细胞培养3 d细胞增殖为0.44±0.03,培养5 d为0.53±0.05,培养7 d为0.83±0.07,与对照组比较差异具有显著性意义(P＜0.01,t=6.603,6.562,6.052).对照组G1期细胞为94.7%,S期细胞为4.0%,G2M期细胞为1.3%,实验组细胞中的G1期降低(83.8%),S期升高(7.8%),G2M期细胞升高(9.3%)(t= 5.327,P＜0.01),反映细胞增殖活力的增殖指数PrI值(S+G2M)对照组为5.3,实验组为17.1两者相比有显著差异(t=7.327,P＜0.01).结论MSX基因有可能在TGF-β1的调控下表达,对人牙乳头间充质细胞的增殖分化可能具有重要的调节作用.
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根尖乳头干细胞与牙周膜干细胞的生物学行为比较
背景：根尖乳头干细胞是一种新发现的间充质干细胞，其能否应用于牙根再生是目前研究的关键。目的：体外培养鼠根尖乳头干细胞与牙周膜干细胞，研究比较两者生物学行为，为根尖乳头干细胞用于牙根再生的可能性提供实验依据。方法：取幼鼠根尖尚未发育完全的健康下颌牙，用酶消化法获得根尖乳头干细胞和牙周膜干细胞，免疫荧光法鉴定干细胞表面标志物，MTT法测定细胞生长曲线，茜素红染色观察细胞矿化结节形成情况。结果与结论：①鼠根尖乳头干细胞和牙周膜干细胞均呈STRO-1强阳性表达，根尖乳头干细胞呈CD90强阳性表达而CD146阳性表达稍弱，牙周膜干细胞呈CD146强阳性表达而CD90阳性表达稍弱。②根尖乳头干细胞和牙周膜干细胞吸光度值随着时间的递增呈现出增高的状态，第8天起趋于平稳。自第4天起根尖乳头干细胞的增殖活力明显强于牙周膜干细胞，差异有显著性意义(P <0.05)。③与牙周膜干细胞相比，根尖乳头干细胞染色明显较深，可推测矿化结节形成数量较多。④结果表明与牙周膜干细胞相比，根尖乳头干细胞具有较强的增殖活性和矿化能力。
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78例畸形中央尖患牙的临床观察
畸形中央尖多见于双尖牙的发育畸形.以常见.一般多对称性发生(也有单个或四个双尖牙畸形),其特点是在双尖牙的牙合面中央窝处发生2～3 mm的圆锥形突起,有时甚为一完整的中央尖.一般认为此畸形原因是由于发育时期受外伤、挤压等影响牙乳头组织向造釉器突起,在此基础上形成牙釉质与牙本质,结果形成一中央尖.
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高钙拮抗氟对人牙乳头间充质细胞毒性的体外试验研究
目的观察高浓度钙对氟细胞毒性的影响.方法体外培养的人牙乳头间充质细胞给予不同浓度氟10～2 630 μmol/L处理,将有明显氟细胞毒性的实验组同时予高浓度钙(4.1,10 mmol/L)处理,用S四唑盐(MTT)比色法和透射电镜观察细胞活性和超微结构.结果 263,1 315,2 630×10-6mol/L氟对人牙乳头间充质细胞毒性明显,10×10-3mol/L和4.1×10-3mol/L钙对1 315×10-6mol/L浓度以下氟毒性有明显拮抗作用,对2 630×10-6mol/L氟毒性作用不确定.结论氟细胞毒性在一定范围内可被高钙拮抗.
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MTA对人根尖牙乳头干细胞体外增殖的影响
目的 探讨MTA对人根尖牙乳头干细胞(stem cells from the apical papilla,SCAP)体外增殖活性的影响.方法 SCAP分别在含不同浓度的MTA培养基中培养,通过检测MTT,BrdU和细胞周期变化分析其对SCAP增殖作用的影响.结果 与对照组相比,MTA可促进SCAP的MTT及BrdU值增加；并增加S期细胞比例及增殖指数.结论 MTA可显著促进人SCAP的体外增殖,在SCAP的自我更新中起重要作用.
