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三种用于蛋白类药物载体的可降解膜的比较研究
目的 制备3种用于蛋白类药物载体的可降解膜材料,并比较其降解性能和释药性能.方法 制备了3种不同的可降解缓控释放膜,即明胶膜、壳寡糖膜和交联壳寡糖膜.利用考马斯亮蓝测定蛋白释放量,确定膜的降解率和溶胀率.同时,采用噻唑蓝(MTT)法考察膜的生物相容性.结果 交联壳寡糖膜的释放时间(168h)大于壳寡糖膜,且不同介质中的释放时间不同,降解率和溶胀率分别为60％(360h)和110.45％,而壳寡糖膜的降解率和溶胀率分别为80％(360h)和113.03％.MTT结果表明,交联壳寡糖膜具有较好的生物相容性.结论 通过对比分析,终确定交联壳寡糖膜为佳蛋白类药物载体.
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模拟急性低氧大鼠血清T3，T4和下丘脑TRH含量变化
高原急性影响中，出现体重暂时性下降，食欲减退等现象。随习服的产生，代谢变化明 显减弱或消失。人类在5 000 m以上时代谢变化变得更为明显并不断发展则体脂和蛋白储备 明 显减少，血液中红细胞大量增加、血液粘稠度增大等。与此同时也产生一系列神经内分泌改 变。下丘脑-腺垂体-甲状腺轴是调节体内代谢的重要因素之一，因而HPT轴低氧应答的研 究对低氧习服和内环境的适应性反应有着重要价值。1 材料和方法 健康雄性Wistar大鼠体重(140±10)g，鼠源系中国科学院上海实验动物中心，在中科院 西北高原生物研究所动物饲养室繁殖多代。实验温度18℃。低氧模拟：使用减压舱模拟高原 高海拔低气乐低氧的方法，以实验地西宁海拔2 300 m为对照，观察两种高海拔即5 000 m(5 4．02 kPa)，7 000 m(41．04 kPa)对大鼠的影响。实验动物随机分组，放入减压舱，以140 m／min速度升至所需海拔高度：动物于舱内可自由取食和饮水。各低氧组大鼠在减压舱中 分别暴露在两种模拟海拔的持续时间分别为1 h、3 h、24 h。上午10时左右迅速断头取血， 分离下丘脑放入液氮。血清T3，T4 RIA测定使用中国原子能科学院北京同位素研究所 放免药盒。组织TRH RIA测定使用北京北方生物技术研究所放免药盒。组织TRH提取：参照Br ownstein等方法，0．01 mol/L磷酸缓冲液和0．15 mol/L NaCl中匀浆，95％甲醇提取，10 000 r／min低温离心30 min。上清液加温去甲醇，提取物放入0．25％牛血清白蛋白，0．01 mol/L磷酸缓冲液和0．15 mol/L NaCl中-40℃保存。下丘脑蛋白定量使用Lowry法。质控所 用TRH购自Sigma公司，其它试剂均采用国内产品。所有实验数据以均数±标准误( ±s)表示，采用t检验(t-test)检验差异显著性。
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牛奶蛋白与1型糖尿病
许多研究提示牛奶,尤其是牛奶中的牛血清白蛋白(BSA)可能是引起1型糖尿病的重要饮食因素,1型糖尿病易感者的发病和在婴儿期进食牛奶有关.对于1型糖尿病的动物模型BB大鼠和NOD小鼠,在断奶初期给与牛奶或BSA,可使糖尿病的发病率明显提高.在1型糖尿病患者血清中可以检测出BSA及其他牛奶蛋白抗体.和BSA抗体结合的自身抗原可能是胰岛B细胞中分子量为69 000的蛋白质.
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EGF偶联白蛋白靶向纳米载体在荷瘤裸鼠体内分布的研究
目的:本研究旨在探讨125I-EGF-BSA靶向纳米载体在荷人乳腺癌SK-BR3裸鼠体内的分布.方法:采用超声乳化-化学交联方法制备牛血清白蛋白纳米载体,经过羧和反应将与白蛋白纳米载体表面的活性氨基与EGF进行偶联反应,制备EGF偶联白蛋白纳米载体.在裸鼠体内进行荷人乳腺癌实验,将荷瘤裸鼠随机分为3个实验组,125I-BSA非纳米载体组(直接在BSA上标记125I),125I-EGF-BSA靶向纳米载体组和125I-BSA纳米载体组,检测不同时间点各组织的放射分布.结果:125I-EGF-BSA靶向纳米载体的瘤/血比值和瘤/肌肉比值明显高于其它两个给药组,差异有统计学意义(P＜0.05).125I-EGF-BSA靶向纳米载体在荷瘤裸鼠体内的放射性瘤/血比值和瘤/肌肉比值随时间逐渐升高,在2h达峰值,后略有下降.做方差分析,同一时间点125I-EGF-BSA靶向纳米载体的放射性瘤/血比值和瘤/肌肉比值均高于其他两个给药组,差异均具有统计学意义(P＜0.05).25I-EGF-BSA靶向纳米载体在肝、脾、肺等器官分布明显低于其它两组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:125I-EGF-BSA靶向纳米载体对裸鼠体内的人乳腺癌SK-BR3肿瘤具有明显的靶向性,而肝、脾、肺等器官的分布少.
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荧光光谱法研究卡铂与牛血清白蛋白的相互作用
目的 研究卡铂与牛血清白蛋白(BSA)在人体生理条件下的相互作用.方法 采用荧光光谱法研究卡铂与BSA的荧光猝灭机制、结合位点数、结合常数;利用热力学参数考察其作用力类型;采用同步荧光光谱法探讨卡铂对BSA构象的影响.结果 卡铂与BSA形成1:1的复合物引起BSA的荧光猝灭,其猝灭类型为静态猝灭.卡铂与BSA结合位点数为9.81×103 mol/L,两者以疏水作用为主.卡铂与BSA相互作用使色氨酸残基所处的微环境发生改变.结论 卡铂与BSA相互作用形成复合物,并改变BSA的构象.
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离子凝胶法制备壳聚糖载药微囊
目的:采用离子凝胶法,建立制备壳聚糖载药微囊的方法,探讨佳制备条件,考察药物电荷情况对微囊包封率的影响.方法:以三聚磷酸钠(TPP)为交联剂、牛血清白蛋白(BSA)为模型药物,以微囊包封率为优化指标,通过正交实验探索微囊佳制备工艺;再分别以BSA(带负电)和异烟肼(带正电)为模型药物按照佳工艺制备微囊,并比较两种微囊包封率.结果:佳制备条件为:壳聚糖/TPP(w/w)3.75:1、pH值5.0、TPP滴加速度20滴/min、搅拌速度200 r/mim.带有负电荷的药物(BSA)微囊包封率明显高于带有正电荷的药物(异烟肼)微囊(P＜0.001).结论:离子凝胶法制备微囊方法简单,条件温和,比较适合用于带有负电荷药物微囊的制备.
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奥扎格雷与牛血清白蛋白相互作用的 紫外吸收光谱法研究
目的:采用紫外吸收光谱法研究奥扎格雷与牛血清白蛋白(BSA)之间的相互作用.方法:将奥扎格雷与BSA溶液按一定比例混合,考察不同pH、温度、反应时间、药物用量对其相互作用的影响,得出佳实验条件.在此条件下,利用奥扎格雷和BSA的紫外吸收图谱和Lineweaver-Burk双倒数曲线模型得出两者的结合常数.结果:奥扎格雷与BSA的结合常数K=(6.6±0.6)×104 L·mol-1,体系的吸光度与浓度成正比,回归方程为A=0.301+3.72×104 c(r=0.9995),线性范围为1.98×10-6～3.05×10-5mol·L-1.使用本方法测得BSA制剂中BSA的平均百分质量分数为98％,平均回收率为(99.0±0.8)％,相对标准偏差为0.16％.结论:紫外吸收光谱法操作简便、灵敏度高、选择性好,可用于BSA制剂中BSA含量的测定.
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五味子甲素与BSA的相互作用
目的 在模拟人体生理条件下,研究金属离子对五味子甲素与牛血清白蛋白(BSA)之间结合作用的影响.方法 采用紫外吸收光谱法,通过紫外扫描得到五味子甲素与BSA的紫外吸收图谱,利用Lineweaver-Burk双倒数曲线图得出五味子甲素与BSA的结合常数;由摩尔比法确定Mg2+等7种金属离子与五味子甲素结合的摩尔比;分别测定五味子甲素-金属离子-BSA的结合常数.结果 五味子甲素与BSA的结合常数为1.141×104 L/mol,金属离子与五味子甲素结合的摩尔比为1∶1,在Fe3+、Zn2+、Al3+、Cu2+、Mg2+、Co2+、Ni2+存在下,五味子甲素与BSA的结合常数分别为3.041×104,1.617×104,1.819×104,1.781×104,1.277×103,7.107×103,6.238×103 L/mol.结论 Fe3+、Zn2+、Al3+、Cu2+参与加强了五味子甲素与BSA的结合作用,Mg2+、Co2+、Ni2+的存在使二者结合作用减弱.
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长春西汀与牛血清白蛋白结合作用的研究
应用荧光、紫外光谱法研究在模拟人体生理条件下长春西汀与牛血清白蛋白(BSA)之间的相互作用,求得长春西汀与BSA的结合常数K=3.09×103和结合位点数n=0.933.根据热力学参数确定长春西汀与BSA之间的作用力类型,根据Fǒster偶极-偶极非辐射能量转移原理,计算长春西汀与BSA相互结合时其受体-受体间的距离r=2.59 nm.
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灯盏乙素与牛血清白蛋白相互作用的研究
目的 采用荧光、紫外光谱法研究在模拟人体生理条件下灯盏乙素与牛血清白蛋白(BSA)之间的相互作用.方法 将灯盏乙素对牛血清白蛋白进行荧光淬灭滴定,利用Scatchard模型和F(o)rster非辐射能量转移理论得出灯盏乙素和牛血清白蛋白的结合参数.结果 灯盏乙素与BSA的结合常数K=1.240×106,结合距离r=2.94 nm,相互作用力主要为疏水作用力.结论 阐明了灯盏乙素和牛血清白蛋白相互作用的机制,建立了灯盏乙素和牛血清白蛋白的结合模型.
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抗结核药PAS新衍生物的化学表征及其与牛血清蛋白的相互作用
目的 研究抗结核药对氨基水杨酸的希夫碱(PAS-Schiff)的化学表征及其与牛血清蛋白(BSA)的作用.方法 以水杨醛和PAS为原料合成了水杨醛缩对氨基水杨酸Schiff碱,通过元素分析、IR、1H-NMR等手段对其结构进行了表征.采用荧光光谱法研究了水杨醛缩对氨基水杨酸Schiff碱与BSA的相互作用.结果 得到抗结核药PAS-Schiff碱,该化合物与牛血清蛋白的结合使蛋白的荧光被猝灭,得出15 ℃、25 ℃和35 ℃的两者结合常数为2.72×105,2.08×105,7.55×104 L/mol,且结合位点数均为1.通过计算其与牛血清蛋白的热力学参数得出两者间相互作用为典型的疏水作用过程.结论 化学表征表明得到新型PAS-Schiff碱化合物,并得出其与牛血清蛋白是通过疏水作用相结合,由此可建立其与BSA的结合模型.
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对苯二酚与牛血清白蛋白相互作用研究
目的 探讨对苯二酚与血清白蛋白的相互作用.方法 在0.05 mol/L Na2HPO4-0.05 mol/L NaH2PO4 -0.10mol/L NaCl缓冲溶液中(pH=7.30),观察对苯二酚及牛血清白蛋白与对苯二酚结合后在L-半胱氨酸修饰金电极上的电化学行为.结果 牛血清白蛋白与对苯二酚结合后可使对苯二酚的氧化峰峰电位正移,还原峰电位负移,且使苯二醌还原峰电流减小,根据对苯二酚、对苯二醌和血清白蛋白结合的饱和度,计算苯二酚、对苯二醌和血清白蛋白结合比分别为48:1和16:1.结论 牛血清白蛋白与对苯二酚结合以较强的氢键结合,对苯二醌与血清白蛋白结合力较大.
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免疫PCR检测沙门菌方法的建立及其应用
1992年Sano等人[1]首次报告用免疫PCR方法检测微量的牛血清白蛋白.该方法将PCR技术的高敏感性与抗原抗体反应的持异性结合起来,具有极高的敏感性和特异性,更使PCR技术应用于对蛋白等非核酸类物质的检测.髓后的报道大都用于检测HBsAg[2]、TNF[3]等可溶性蛋白.本文利用链亲和索和生物素之间的高度亲和力,采用生物素化羊抗鼠IgG作二抗,将单抗与DNA相连接,建立免疫PCR检测方法,用以检测颗粒性抗原细菌,并与ELISA方法进行了比较.
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考马斯亮蓝法蛋白定量标准曲线稳定性观察
蛋白定量结果是生物医学研究中的基础数据,其准确与否关系到研究结果的可靠程度.样品总蛋白定量技术方法[1,2]由于限制条件较多,操作复杂,适用面较窄,其中凯氏定氮法是目前常用的标准参照蛋白自身定量技术 .本文选择冻干的牛血清白蛋白,将其溶解后,在4 ℃条件下50 d内作为定量用标准参照蛋白,观察不同存放时间内标准参照蛋白含量变化和标准曲线的兼容性和稳定性[3].结果报告如下.
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心肌内双层多孔生物可降解性药物缓释支架的制备
目的:制备心肌内双层多孔生物可降解性药物缓释支架,评估其对透室壁性心肌血管重建术后心肌孔道的作用效果.方法:以聚己内酯为材料,以牛血清白蛋白为模型药物,以聚乳酸-聚乙醇酸共聚物为药物载体,制备成生物可降解性药物缓释支架.采用考马斯亮蓝试剂法对支架上牛血清白蛋白含量及体外释放量进行测定,万能材料测定仪测定支架的力学性能.制备猪慢性心肌局部缺血模型,体内评估该支架在透室壁性心肌血管重建术后对心肌孔道的作用效果.结果:该支架牛血清白蚩白携带量为每支架10 mg,30 d后牛血清白蛋白释放量达80%,支架压缩80%时承受的应力为1.2 MPa,在透室壁性心肌血管重建后可保挣心肌孔道通畅.结论:成功制各心肌内双层多孔生物可降解性药物缓释支架,能承受心肌压力并达到缓慢控制释放药物的效果,可维持透室壁性心肌血管重建后的心肌孔道通畅.
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海藻酸钙凝胶微球的制备和pH敏感释放
背景:大多数蛋白质和多肽药物存在稳定性差、生物利用度低等缺点,为提高其生物利用度,目前常用将蛋白类药物包裹在高分子材料中,制成缓释控释体系.由于蛋白质外层的载体材料能起到一定保护作用,因此可增加此类药物的稳定性.目的:以含水率为指标,通过正交实验设计,找出制备海藻酸钙微球的佳条件.并以牛血清白蛋白为模型药物,考察微球载药性能及DH环境下的释放规律.设计、时间及地点:对比观察实验,于2007-10/2009-05在四川大学高分子科学与工程实验楼完成.材料:海藻酸钠、无水氯化钙由成都科龙试剂公司提供,牛血清白蛋白由上海伯奥生物科技有限公司提供.方法:采用滴制法制备了海藻酸钙微球,考察了海藻酸钠质量分数、氯化钙质量分数、交联时间对微球含水率的影响.采用牛血清白蛋白作为模型药物,对优化条件下海藻酸钠凝胶微球进行载药量和释放行为的考察.主要观察指标:微球中牛血清白蛋白包封率及在不同pH介质中白蛋白的释放行为.结果:当海藻酸钠质量分数、氯化钙质量分数均为2.0%,交联时间为6 h,所得微球含水率高能达到70%.pH溶胀实验显示,微球在盐酸溶液,氯化钠溶液中不溶胀,而在磷酸盐缓冲液中溶胀体现一定的pH敏感性.微球载药量约为5%,包封率为70%左右.对药物释放曲线几种模型方程进行拟合,发现释放曲线不符合Higuchi释放模型.结论:滴制法制备海藻酸钠微球条件温和,不接触有机溶剂.微球含水率高具有pH敏感性且能有效载药,适合作为蛋白质和多肽药物包裹材料.
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表皮生长因子受体靶向纳米载体荷载c-erbB2反义寡脱氧核苷酸对人乳腺癌SK-BR3细胞的摄取与滞留
背景:结合肿瘤的分子靶向技术和纳米技术,制备出一种新的具有靶向作用的纳米载体,以达到对肿瘤更好靶向作用的目的.目的:制备表皮生长因了偶联牛血清白蛋白纳米载体,联合核素标记的c-erbB2反义寡脱氧核苷酸,体外观察人乳腺癌SK-BR3细胞对其摄取情况.设计、时间及地点:对比观察实验,于2006-09/2008-03在重庆医科大学生物化学和分子生物学教研窀,重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心,重庆医科大学放射医学教研室完成.材料:生血清白蛋白(生物技术级)由美围Amresco公司提供,表皮生长因子由英国PeproTech EC LTD提供,125Ⅰ由成都中核高通同位素股份有限公司提供.寡脱氧核苷酸由上海生工生物工程技术服务有限公司提供.方法:采用超声乳化-化学交联及羧和反应制备表皮生长因子偶联白蛋白靶向纳米载体,通过核素标记示踪技术检测表皮生长因子偶联白蛋白靶向纳米载体的相关性质.主要观察指标:测量表皮生长因子靶向纳米载体荷载c-erbB2反义寡脱氧核苷酸的载药量、包封率及释药率,人乳腺癌SK-BR3细胞对表皮生长因子靶向纳米载体的摄取率及滞留率.结果:表皮生长因子靶向纳米载体包载125Ⅰ标记的反义寡脱氧核苷酸组的摄取率及滞留率高于正义寡脱氧核苷酸组和无义寡脱氧核昔酸组.同时c-erbB2寡脱氧核苷酸使用纳米载体荷载组的摄取率及滞留率均高于未使用纳米载体组,差异有显著性意义(P<0.05).结论:125Ⅰ标记的表皮生长因子靶向纳米载体能够提高乳腺癌SK-BR3细胞对o-erbB2反义寡脱氧核苷酸的摄取和滞留,能达到更好的靶向作用.
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壳聚糖/聚己内酯共混膜的制备及性能
背景:壳聚糖/聚己内酯共混材料在生物材料领域具有广泛的应用前景,但与蛋白、细胞反应机制尚不明确.目的:观察壳聚糖/聚己内酯共混膜表面蛋白黏附和细胞活性.方法:将不同配比的壳聚糖/聚己内酯混合溶液旋转涂膜法成膜.分别通过原子力显微镜、滴形分析仪、石英晶体天平和MTT比色法测量膜的表面形貌、亲疏水性、蛋白吸附和细胞增殖活性.结果与结论:膜的表面形貌、亲疏水性、蛋白吸附和细胞增殖活性在很大程度上取决于壳聚糖和聚己内酯的质量配比.细胞在壳聚糖膜上具有较好的伸展形态,在聚己内酯膜上具有较高的增殖活性.
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表皮生长因子偶联牛血清白蛋白纳米粒荷载紫杉醇的制备及鉴定
背景：紫杉醇是临床常用的广谱抗肿瘤植物药，但其不良反应较多，因此迫切需要合适的载体以减小紫杉醇本身的毒性，同时达到更好的靶向性。
目的：研究表皮生长因子偶联牛血清白蛋白纳米粒荷载紫杉醇的制备及其理化性质的鉴定。
方法：采用超声乳化和溶剂挥发技术制备白蛋白纳米粒，通过化学交联试剂将表皮生长因子与白蛋白纳米粒偶联，制得表皮生长因子偶联白蛋白纳米粒，使用表皮生长因子偶联白蛋白纳米粒荷载125I 标记紫杉醇，作为实验样品。在白蛋白纳米粒与表皮生长因子偶联白蛋白纳米粒中分别加入100，200，400，800 mg/L的125I标记紫杉醇，进行包封率和载药量检测；检测实验样品、荷载125I标记紫杉醇白蛋白纳米粒的药物释放率；检测实验样品、荷载125I标记紫杉醇白蛋白纳米粒与125I标记紫杉醇的室温稳定性及血清稳定性。
结果与结论：荷载125I标记紫杉醇的白蛋白纳米粒组和实验样品组的包封率和载药量随着紫杉醇药量的增加，包封率呈现下降趋势，载药量呈现上升趋势。实验样品、荷载125I标记紫杉醇白蛋白纳米粒释药趋势基本相同，表现为包载药物缓慢释放。实验样品、荷载125I标记紫杉醇白蛋白纳米粒的室温稳定性与血清稳定性均高于125I标记紫杉醇(P<0.05)。表明表皮生长因子偶联白蛋白纳米粒荷载紫杉醇具有良好的载药率、释药率和稳定性。 -
介孔二氧化硅载体对蛋白药物载药释药及提高酶降解稳定性的初步研究
目的 根据模型蛋白的空间尺寸设计介孔二氧化硅载体,初步探索不同孔径载体对蛋白药物载药、释药及稳定性的保护作用.方法 以表面活性剂P123为胶束模板,以正硅酸乙酯为硅源,制备介孔二氧化硅,利用透射电镜、氮气吸附-脱附等手段表征载体;以溶菌酶(lysozyme,LYS)和牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)为模型蛋白,采用SDS-PAGE电泳分析测定不同孔径载体对LYS和BSA酶降解的保护程度.结果 制备出三种孔径(7、17、22 nm)介孔二氧化硅载体,三种载体对LYS和BSA的载药量均为40％左右,LYS和BSA在三种载体中的总释放度均随孔径的减小而减小,7nm和17 nm载体分别对LYS和BSA的保护作用强.结论 介孔二氧化硅可用于高效装载蛋白药物并提高其稳定性,载体孔径尺寸越接近蛋白药物的大小,对其保护作用越强.
