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阿昔洛韦与甘草酸苷体外抗HSV-1活性比较
目的:研究阿昔洛韦片剂(ACV)与复方甘草酸苷注射液(GLI)对HSV-1体外抗病毒活性.方法:通过观察病毒感染细胞病变效应(CPE),按照Reed-Muench法进行病毒的半数感染浓度TCID50的测定;采用噻唑蓝(MTT)比色法,分别测定ACV及GH对叙利亚仓鼠肾细胞(BHK-21)毒性,且考察不同浓度的阿昔洛韦片剂和复方甘草酸苷注射液对HSV-1不同作用阶段的抑制效果.结果:阿昔洛韦片剂和复方甘草酸苷注射液分别在11.72μM及0.375mM浓度以下,对BHK-21细胞无毒性作用.两种药物均对HSV-1四种作用模式的病毒抑制率成浓度及时间依赖性.ACV与GLI抗病毒机制不同.
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红树林淡紫拟青霉EPS提取物体外抗HSV-1机制研究
目的 探讨红树林淡紫拟青霉胞外多糖(extracellular polysaccharides,EPS)提取物体外抗单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)感染的机制. 方法 以Vero细胞为病毒感染靶细胞,以不同浓度EPS提取物作用于HSV-1感染过程的各个阶段,MTT法测定提取物对Vero细胞的毒性作用和对HSV-1的直接灭活作用及对病毒吸附和生物合成的影响;采用RT-PCR检测该提取物对病毒gD基因US6和DNA聚合酶基因UL30表达的影响. 结果 EPS提取物对Vero细胞无促进增殖作用,其对Vero细胞的半数有毒浓度(CC50)为1 300.17 μg/ml,浓度在800 μg/ml以下时细胞存活率达90％以上;在25～800 μg/ml浓度范围内该提取物可抑制HSV-1吸附和生物合成,并表现出一定量效关系;浓度为800μg/ml时抑制率高,分别为39.5％和59.7％,与病毒对照组相比差异有统计学意义(P＜0.01),但并不能达到完全抑制.未发现该提取物对HSV-1有直接灭活作用.RT-PCR显示该提取物可干扰病毒US6和UL30基因转录,灰度扫描分析US6 mRNA丰度与病毒对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05);UL30mRNA丰度与病毒对照组相比差异有统计学意义(P＜0.01). 结论 EPS提取物对Vero细胞毒性较小,使用安全.该提取物具有一定的抗病毒作用,可抑制HSV-1吸附和生物合成,还可抑制US6和UL30基因转录.
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黄柏提取物抑制Ⅰ型单纯疱疹病毒复制机制的初步研究
目的 研究黄柏对Ⅰ型单纯疱疹病毒(herpes simplex virus 1,HSV-1)功能蛋白和其对细胞因子的作用,探讨黄柏多渠道抑制HSV-1病毒的机制.方法 将病毒接种到药物处理后的HLLa 细胞上,荧光显微镜观察病毒增殖变化,qPCR检测病毒囊膜表面糖蛋白gD与功能蛋白US1的转录水平表达.药物孵育HeLa细胞24 h后,qPCR检测IP-10、IL-12、IFN-γ等固有免疫因子转录水平表达变化.免疫荧光检测NF-κB(P65)核定位的情况.结果 荧光显示病毒在8、40 n/ml药物浓度下增殖显著减少(P＜0.01);且病毒蛋白gD与US1转录水平下降(P＜0.05).药物孵育HeLa细胞24 h后,qPCR检测显示,细胞IP-10、IL-12、IFN-y等转录水平显著升高(P＜0.01).同时免疫荧光显示各组NF-κB(P65)入核率有所上升(P＜0.05).结论 黄柏提取物可通过抑制病毒功能蛋白转录及促进细胞免疫因子表达来抑制HSV-1.
关键词： 黄柏 HSV-1 病毒囊膜表面糖蛋白 免疫因子 NF-κB(P65) -
生殖器疱疹治疗体会
生殖器疱疹(GH)是由单纯疱疹病毒(包括HSV-1型和HSV-2型)感染生殖器及其附近皮肤黏膜引起的常见性传播性疾病(STD)[1].我院自2008年6月至2009年10月采用泛昔洛韦与重组白细胞介素-2(IL-2)联合应用的方法治疗GH 83例,取得较好疗效,现总结报告如下:
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TORCH宫内感染及其产前诊断
TORCH 是一类可以导致孕期感染并具有致畸作用的特殊病原体,1971 年由Andre Nahmias 提出.TO 代表刚地弓形体(Toxoplasma gondii),R代表风疹病毒(Rubella virus),C 代表巨细胞病毒(Cytomegalovirus,CMV),H 代表单纯疱疹病毒Ⅰ型和Ⅱ型(Herpes simplex virus-1,2,HSV-1,2).
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单纯疱疹病毒Ⅰ型在眼部发病途径的研究进展
综述近年来单纯疱疹病毒Ⅰ型(herpes simplex virus,HSV-Ⅰ)传播途径的研究进展(特别是HSV如何从前房、玻璃体到视网膜)和潜伏部位的研究进展(包括角膜、虹膜、睫状体、视网膜,睫状神经节),并对现在存在的问题提出一些思考.
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人胶质瘤自杀基因细胞系的建立及其在胶质瘤治疗研究中的应用
目的 构建CD基因工程化人脑胶质瘤细胞并在此基础上进行胶质瘤治疗研究.方法 通过In-fusion基因克隆的方法,构建携带CD基因慢病毒载体;通过293T细胞体外包装获得慢病毒,并测定病毒效价;通过慢病毒体外感染细胞获得CD基因工程化人脑胶质瘤细胞;通过流式分选获得基因稳定表达细胞;通过CCK-8评价加入5-FC前药和(或)HSV-1后细胞存活率.结果 成功构建pLVX-CD-IRES-ZsGreen1慢病毒载体并体外包装获得相应慢病毒;慢病毒感染人脑胶质瘤U87细胞后获得携带CD基因的阳性细胞,并通过体外培养30天后流式分选获得稳定阳性细胞;加入前药5-FC和(或)HSV-1后对携带CD基因的U87细胞杀伤作用明显(P＜0.01),其中5-FC联合HSV-1对胶质瘤细胞作用更加高效(P＜0.01).结论 成功获得携带CD基因的人脑胶质瘤细胞;前药5-FC联合HSV-1对胶质瘤细胞具有更加高效的杀伤疗效.
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猴B病毒抗体不同检测方法的比对
目的 猴B病毒(monkey B virus,BV),也称猴疱疹病毒I型(Cercopithecine herpesvirus 1),是重要的人兽共患病原.根据国家标准,猴B病毒作为抗原检测抗体,但由于生物安全问题,抗原制备受到很大限制,因此使用替代抗原进行抗体血清学检测并进行比对验证.方法 应用2种ELISA方法(抗原分别为BV和HVP2)和1种免疫酶法EIA方法(抗原为HSV-1)对本实验室135份送检恒河猴血液样品进行筛查,对阳性及可疑样品再以免疫荧光法IFA和Western blot方法(抗原为HSV-1)以及以HSV-1 gC1纯化糖蛋白为抗原的免疫印迹方法验证.结果 HVP2-ELISA、BV-ELISA和HSV-1-EIA阳性检出率分别为32.6%、37.8%和34.8%;3种方法检测结果一致的样品占91.1%(123/135),阳性结果可被IFA和WB确证;可疑样品12份,33.3%(4/12)的样品经验证检验为阳性.结论 与BV抗原相比,替代抗原HSV-1的敏感性和特异性较HVP2更为接近;阳性样品及可疑样品的确证检验应使用多种方法,避免漏检.
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运用SELDI蛋白质芯片技术检测Vero细胞感染HSV-1后蛋白质的差异表达
目的 运用SELDI(Surface Enhanced Laser Desorption/Ionization)蛋白质芯片技术检测Vero细胞感染HSV-1后蛋白质的差异表达,从而为从蛋白质水平研究HSV-1感染的致病机制奠定基础.方法 常规培养Vero细胞,感染HSV-1,孵育12 h、24 h、48 h后用细胞裂解液裂解细胞.裂解上清经蛋白定量后应用IMAC3(固定金属亲和)和WCX2(弱阳离子交换)芯片,SELDI-TOF-MS技术检测细胞感染HSV-1前后蛋白质表达的差异.结果 感染24 h细胞出现明显细胞病变效应(CPE),感染12 h质谱分析即可见蛋白的差异表达.共19个蛋白表达水平发生变化,其中IMAC3芯片发现差异峰9个, WCX2芯片发现差异峰10个.结论 SELDI蛋白质芯片技术检测Vero细胞感染HSV-1后蛋白质的差异表达方法简便,敏感性高,从而为从蛋白质水平研究HSV-1感染的致病机制,HSV-1与宿主细胞的相互作用,及抗感染治疗靶位的寻找奠定了一定的基础.
关键词： SELDI蛋白质芯片 Vero细胞 HSV-1 蛋白表达 -
疱疹病毒感染的诊断与处理
陈志海:随着社会发展,器官移植、肿瘤、艾滋病及应用糖皮质激素后免疫功能下降等情况导致疱疹病毒感染增多,受到大家重视.疱疹病毒是一类病毒,共8型,本次讨论前3型,即单纯疱疹病毒Ⅰ型( HSV-1)、单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)、水痘-带状疱疹病毒(VSV),后5型是EB病毒、巨细胞病毒(CMV)、人疱疹病毒6～8型.EB病毒与伯基特淋巴瘤和鼻烟癌有关.
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中药矮地茶不同提取方法提取物体外抗病毒研究
目的:为建立矮地茶抗病毒谱-效相关评价系统,对矮地茶不同提取方法提取物体外抗病毒活性进行筛选.方法:采用细胞体外抗病毒实验法,结合CPE法及CCK-8试剂盒,以TI值(治疗指数)为研究指标,以利巴韦林、阿昔洛韦为阳性对照药,研究矮地茶不同提取方法提取物对呼吸道合胞病毒(RSV)、单纯疱疹病毒(HSV-1)、柯萨奇病毒(COX-B5)、手足口病病-毒-(EV71)的抑制作用.结果:矮地茶对RSV、HSV-1、COX-B5均有直接杀灭作用,水提液对COX-B5的直接杀灭效果较好,TI值为16.282,大抑制率分别为87％,较阳性对照药利巴韦林相差不大(TI值为17.482,大抑制率为85％).结论:矮地荼提取物具有体外抗RSV、HSV-1、COX-B5的活性.
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鸡骨草不同洗脱部位体外抗病毒实验研究
目的:研究中药鸡骨草的抗病毒活性及有效部位.方法:采用细胞体外抗病毒实验法,结合CPE法及MTT法,以TI值(治疗指数)为研究指标,以利巴韦林、阿昔洛韦为阳性对照药,研究鸡骨草及其不同萃取部位对呼吸道合胞病毒(RSV)、单纯疱疹病毒(HSV-1)、柯萨奇病毒(COX-B5)的抑制作用.结果:鸡骨草对RSV、HSV-1有较好的效果,TI值分别为15.56和13.55;30％乙醇部位对COX-B5效果较好,其TI值为16.11;50％乙醇部位对RSV效果较好,其TI值为27.86;70％乙醇部位对HSV-1效果较好,其TI值为14.93.结论:鸡骨草提取物具有体外抗RSV、HSV-1、COX-B5的活性.
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单纯疱疹病毒性角膜炎的病原学检测技术进展
单纯疱疹病毒性角膜炎(herpes simplex keratitis,HSK)主要由I型单纯疱疹病毒(herpes simplex virus,HSV-1)引起,发病率及致盲率均占角膜病的首位.目前HSK的诊断主要依据病史、典型症状和角膜病变形态,但该病临床表现复杂多样,常不典型,与腺病毒、棘阿米巴原虫等引起的角膜炎不易鉴别[1-2],造成误诊或漏诊,报道误诊率高达79.3%[3].因此,HSK病原学诊断成为临床确诊的重要依据.病毒培养是HSV-1感染诊断的金标准,但费时费力、技术要求高,难以推广.本文对目前各种检测HSV-1的病原学诊断技术的新进展综述如下.
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HSV-1致Hela细胞凋亡的扫描电镜及透射电镜观察
目的探讨HSV-1感染Hela细胞时,是否发生凋亡.方法用扫描电镜及透射电镜观察感染72h的Hela细胞的形态变化.结果正常的Hela细胞表面有丰富的微绒毛.细胞间隔清晰,可见幼稚连接,连接不紧密.胞浆内线粒体嵴结构完整,并可见大量的粗面内质网及游离核糖体,极少的脂滴.细胞核内多为常染色体,核仁清晰,核浆比约1:1.凋亡细胞中核内异染色质增多,染色质浓缩成块状,边集于核膜.线粒体轻度肿胀,溶酶体代偿性增多.核膜、胞膜、各细胞器膜均完整.坏死细胞的染色质呈不规则的团块状,但不象凋亡细胞那样集中于核周边.细胞膜、核膜和细胞器的结构破坏,线粒体空泡变,细胞崩解,胞浆及其内容物外泄.HSV-1感染的Hela细胞体积明显缩小,核浆比例明显增加.细胞表面的微绒毛断裂、减少,细胞膜球状突起.核膜完整,核致密,呈块状分布,边集于核膜.细胞膜、细胞器结构完整.可见出泡现象和凋亡小体形成现象.在胞核内可见病毒体.结论 ①HSV-1感染He1a细胞时,造成细胞死亡形式是核死亡形式即凋亡;②HSV-1感染Hela细胞时,细胞凋亡占绝对优势,同时伴有细胞坏死.
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黄芩提取物体外抗病毒药效学研究
目的 研究黄芩提取物对肠道病毒71型(EV71)、柯萨奇病毒B5 (COXB5)、呼吸道合胞病毒(RSV)、柯萨奇病毒B3 (COXB3)、单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)的体外抑制作用.方法 采用细胞体外抗病毒实验,通过CPE法结合MTT法得出半数中毒浓度(TC5o)、半数有效浓度(EC5o),并且以治疗指数(TI)作为评价指标,以利巴韦林和阿昔洛韦为阳性药,观察黄芩提取物对几种常见病毒的抑制作用.结果 黄芩提取物对COXB5、EV71、COXB3、HSV-1、RSV的治疗指数分别为5.46、22.16、4.32、6.10、5.94.结论 黄芩提取物对COXB5、EV71、COXB3、HSV-1、RSV都有抗病毒活性,为临床应用提供理论依据.
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Ⅰ型单纯疱疹病毒在潜伏期表达微RNA以调控病毒自身mRNA的表达
Ⅰ型单纯疱疹病毒(HSV-1)全长10.8 kb,其在潜伏期中,不表达任何病毒源性的蛋白产物,仅表达潜伏相关转录本(LAT).论文作者将8.3Kb的LAT构建入PCDNA3.1载体中并将其转入293T细胞,随后从其总RNA中分离小片段RNA并进行454测序,共测得225 439个小片段RNA序列,其中144 955个序列为细胞内微RNA,有651个微RNA读数可能来源于HSV-1.根据HSV-1茎环结构前体序列预测,这些读数来源于HSV-1的4个茎环结构前体,为6个HSV-1表达的微RNA.其中,读数多的为miR-H2-3p(265)和miR-H4-3p(266).
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HSV-1重组蛋白GST-G1为抗原的IgM捕获法ELISA的研究
目的 研究单纯疱疹病毒1型(HSV-1)近期感染的IgM酶免疫诊断技术.方法 用捕获法ELISA(G-ELISA)和HerpeSelectELISA(H-ELISA)平行检测1296份孕妇血清HSV-1-IgM.结果 G-ELISA检出阳性血清12份,H-ELISA检出阳性血清11份.G-ELISA多捡出的1份阳性,并经其他试验证实为真阳性.乳胶凝集试验诊断为类风湿因子(RF)阳性的6份血清,经H-ELISA检出阳性血清2份,但经G-ELISA试剂盒检测全为阴性.结论 在检测孕妇HSV-1-IgM方面,G-ELISA比H-ELISA 可能敏感性更强,特异性更高.G-ELISA是诊断HSV-1近期感染的有效方法.
关键词： HSV-1 重组蛋白GST-G1 捕获法ELISA IgM -
生殖器疱疹的危害与处理
生殖器疱疹是由人类单纯疱疹病毒(HSV)感染泌尿生殖器及肛门部位皮肤黏膜而引起的性传播疾病.单纯疱疹病毒可分为1、2型,大多数生殖器疱疹由HSV-2引起,也可由HSV-1或两型混合感染所致,主要传染源是生殖器疱疹患者和无症状病毒携带者.近年来我国生殖器疱疹发病人数明显增多,是临床常见的性传播疾病之一[1-2],已引起大家的高度重视.由于对该病危害性的认识及处理还比较模糊,现就生殖器疱疹的传播途径、诊断与治疗等问题作如下概述.
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生殖器疱疹临床诊疗指南(2009)
一、定义生殖器疱疹是由单纯疱疹病毒(herpes simplex virus,HSV)感染泌尿生殖器及肛门部位皮肤黏膜而引起的性传播疾病.HSV可分为1型(HSV-1)和2型(HSV-2),生殖器疱疹主要由HSV-2引起,也可由HSV-1或两型混合感染所致.
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HSV-1作用于KSHV ORF50启动子区中特异性应答位点序列的初寻
目的:构建卡波济肉瘤相关疱疹病毒(Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus,KSHV)ORF50启动子系列截短序列克隆,初步寻找HSV-1作用于KSHV ORF50启动子区中特异性应答位点序列.方法:以KSHV基因组为模板,PCR扩增KSHVORF50启动子系列截短序列,克隆至含有虫荧光素酶(Luciferase)报告基因的基本载体pGL-3中,构建含ORF50启动子系列截短序列的重组Lueiferase报告质粒.系列重组报告质粒经酶切鉴定和序列测定分析后,分别转染单纯疱疹病毒1型(HSV-1)感染后的非洲绿猴肾细胞(Vero细胞),进行Luciferase活性检测,计算并比较相对Lueiferase活性单位(Relative lueiferase activity unit,RLU).结果:成功分离、克隆KSHV ORF50启动子系列截短序列;HSV-1感染随后转染重组质粒p50-95,p50-46和p50-17与转染p50-1500、p50-750、p50-375及p50-185相比,Vero细胞中Lueiferase活性显著下降.结论:成功构建了含KSHV ORF50启动子系列截短序列的重组Lueiferase报告质粒;HSV-1所对应的、能够主导ORF50启动子活性的小顺式调控区位于-185 bp和-95 bp之间.
