首页 > 文献资料
-
NF-κB p65在口服诱导免疫耐受防治主动性Heymann肾炎中的作用
目的探讨口服诱导免疫耐受对主动性Heymann肾炎(AHN)的防治作用及机制. 方法 6～8周龄Wistar雌性大鼠30只平均分3组,AHN模型组和口服诱导免疫耐受组大鼠分别予PBS、Fx1A灌胃,然后皮下免疫Fx1A/CFA,同时设正常对照组.观察大鼠迟发性超敏反应(DTH)、肾组织的病理变化、尿蛋白水平,并用Sandwich ELISA法和免疫组化染色分别观察大鼠脾淋巴组织和肾小球内核因子NF-κB p65的活化. 结果与正常对照组大鼠比较,AHN模型组和口服诱导免疫耐受组大鼠迟发性超敏反应均明显增强,肾小球基底膜(GBM)明显增厚、尿蛋白水平明显增多,肾小球内和脾淋巴组织NF-κB p65的活化明显增加,但与AHN模型组比较,口服诱导免疫耐受组DTH明显减低,尿蛋白水平减低,肾组织病变程度和NF-κB p65的活化程度有所减轻,差异有显著性(P<0.01);肾小球内NF-κB p65的阳性细胞数与脾淋巴组织NF-κB p65活性和肾小球基底膜厚度呈明显的直线正相关(P<0.05). 结论口服诱导免疫耐受减轻了AHN肾小球的病理损害,可能与口服诱导免疫耐受对脾淋巴细胞和肾小球内细胞NF-κB p65的活化的抑制作用有关.
关键词： 主动性Heymann肾炎 NF-κB 淋巴细胞 -
全反式视磺酸对树突状细胞分化及抗原提呈的抑制作用与NF-κB信号通路相关
目的 研究全反式视磺酸(atRA)对树突状细胞(DC)抗原提呈作用的影响是作用在骨髓细胞向DC的分化过程还是作用在已分化形成的DC,以及NF-κB信号通路是否参与到此调节过程.方法 以MOG35-55免疫C57BL/6J小鼠,给予或不予atRA干预.分离小鼠脾脏DC及CD4细胞进行交互培养,同时给予IL-12或IL-23干预CD4细胞的分化.测定CD4细胞向Th1及Th17细胞的分化情况及相应细胞因子的产生能力.分离小鼠骨髓细胞(BMC),IL-4及GM-CSF诱导其向DC分化,并在不同时间点给予RA干预.比较DC表面分子CD11c、MHCⅡ的表达情况及其提呈抗原对效应细胞的激活作用；Western blot检测DC中NF-κB p65的磷酸化及p65向胞核转位的情况.终比较RA对DC的影响是否可以被选择性RA受体(RAR)拮抗剂所拮抗.结果 RA体内干预显著降低脾脏DC的抗原提呈作用；在体外RA则可抑制BMC向DC分化过程,降低CD11c及MHCⅡ分子在细胞表面的含量,并抑制DC的抗原提呈功能；但是对已分化形成的DC却没有类似效应.RA可显著抑制DC中NF-κB p65的磷酸化及胞核中NF-κB p65的含量,并伴随着DC抗原提呈功能的减弱；其作用可被RARβγ拮抗剂所拮抗.结论 RA可抑制DC的提呈功能,其作用环节可能在于DC的分化过程并与NF-κB信号通路密切相关.
-
环氧化酶-2特异抑制剂SC236对NF-κB活性的阻断作用
目的探讨环氧化酶-2抑制剂的抗炎和抗肿瘤作用机理. 方法利用NF-κB报告基因暂时转染人胃上皮细胞,使用环氧化酶-2特异抑制剂SC236和PMA共同处理转染的细胞后,双重虫荧光素酶系统鉴定基因的活性.用免疫蛋白印迹法检测NF-κB亚单位IκB-α和p65的含量. 结果在人胃上皮细胞AGS和MKN28细胞内,SC236有效地抑制NF-κB介导的基因转录.SC236的作用比非特异性环氧化酶抑制剂阿斯匹林更强大.SC236与阿斯匹林的作用点不同,SC236对PMA引起的IκB-α的磷酸化或降解没有作用,SC236的作用点在于抑制p65亚单位的核易位. 结论环氧化酶-2特异抑制剂的抗炎和抗肿瘤作用可能部分地通过抑制NF-κB发挥作用.特异的COX-2抑制剂抑制NF-κB活性的作用点不同于非特异的环氧化酶抑制剂.
-
乳杆菌细胞壁成分激活人阴道上皮细胞β-防御素-2表达机制研究
目的 探讨乳杆菌细胞肇成分(Lactobacillus cell wall extract,LCWE)对人阴道上皮细胞β-防御素-2的诱导作用及细胞内信号转导机制.方法 采用实时定量PCR和Western blot方法检测LCWE处理对人阴道上皮细胞(WZV-1)β-防御素-2表达的影响;Western blot方法检测LCWE处理后WZV-1细胞内NF-κB和p38MAPK信号通路活化情况;实时定量PCR和Western blot方法检测NF-κB抑制剂和p38MAPK抑制剂预处理WZV-1细胞对LCWE诱导β-防御素-2表达的影响.结果 LCWE可诱导WZV-1细胞β-防御素-2表达且存在着明显的时间效应和剂量依赖关系,50μg/mlLCWE处理细胞8 h对β-防御素-2的上调幅度大,刺激0.5 h后可引起细胞内p38MAPK蛋白的磷酸化显著增加,1 h达到顶峰;刺激0.5 h后可引起细胞核内NF-κB含量显著增加(P<0.05),2 h达到顶峰.NF-κB抑制剂PDTC、p38MAPK抑制剂SB20380预处理WZV-1细胞,可明显抑制LCWE诱导WZV-1细胞β-防御素-2的表达.结论 LCWE具有激活NF-κB和p38MAPK信号通路诱导阴道-上皮细胞β-防御素-2的作用.
-
TRAF2在活化B淋巴细胞NF-κB信号传导系统中的作用
目的 肿瘤坏死因子受体相关因子2(TNF receptor associated factor 2,TRAF2)是介导B淋巴细胞表面CD40信号传导的重要因子.目前对TRAF2如何介导CD40核转录因子(NF-κB)信号系统各环节下传还了解不多.本研究利用人B细胞株模型对这方面进行了初步探讨.方法 将人类B淋巴细胞株RAMOS细胞转染融合有黄色荧光素(YFP)的野生型(WT-TRAF2)或功能缺失型(DN-TRAF2)TRAF2质粒,过夜培养后用流式细胞仪分离YFP阳性细胞,然后通过激酶实验、Western blot以及ELISA等方法对NF-κB通路的活化进行包括IκB激酶、IκB磷酸化和降解以及NF-κB的细胞核内转录等多方面的研究.结果 过度表达WT-TRAF2可诱导IκB激酶(IKKα和IKKi/ε)对IκBα(Ser32,36)的磷酸化和降解以及对p65/RelA的磷酸化和p65、p50、c-Rel的核内转录.然而,过度表达DN-TRAF2只抑制p65的核内转录,而不抑制p50和c-Rel.TRAF2也可通过诱导RAMOS B细胞分泌IgM而影响其功能.结论 TRAF2可选择性地激活人B淋巴细胞CD40介导的NF-κB信号传导系统中的重要因子,在B细胞活化分化中起重要作用.
-
9型重组腺相关病毒介导 R65核酶基因体外转染人血管不同细胞的对比研究
目的：研究9型重组腺相关病毒（recombinant adeno-associated virus 9，rAAV9）载体介导R65核酶基因及增强型绿色荧光蛋白（ enhanced green fluorescent protein ，EGFP）对体外培养人脐静脉内皮细胞（ human umbilical vein endothelial cells ， HUVECs ）、人主动脉平滑肌细胞（ human aortic smooth muscle cells ， HASMCs）的转染及病毒载体对两种不同细胞的增殖情况和对NF-κB通道P65表达的影响。方法 rAAV9-EGFP-R65按转染复数（multiplicity of infection，MOI）为1×105、1×106、1×107转染HUVECS、HASMCS细胞，倒置荧光显微镜下观察 HUVECs、HASMCs 细胞中EGFP 的表达，流式细胞仪检测rAAV9-EGFP-R65对HUVECs、HASMCs细胞的转染效率，Alamar Blue 检测rAAV9-EGFP-R65载体对HUVECS、HASMCs细胞增殖的影响。 Western blot法检测rAAV9-EGFP-R65对HUVECs和HASMCs两种细胞中NF-κB通道P65表达的影响。结果 rAAV9-EGFP-R65转染的荧光强度随着MOI的增加和转染时间的延长而增加。 HUVECs和HASMCs在rAAV9-EGFP-R65转染24 h后EGFP 开始表达。 HUVECs 在转染后第6天达到高峰，而HASMCs在转染后第5天达高峰。高峰表达时流式细胞术检测rAAV9-EGFP-R65对HUVECs的转染率分别为MOI＝1×105组：（1．40±1．20）％，MOI＝1×106组：（12．30±1．35）％，MOI＝1×107组：（52．80±2．05）％。rAAV9-EGFP-R65对HASMCs的转染率分别为MOI＝1×105组：（5．30±1．04）％，MOI＝1×106组：（18．30±2．24）％，MOI＝1×107组：（52．40±3．21）％。 rAAV9-EGFP-R65转染HUVECs和HASMCs细胞后，细胞生长及形态均正常，Alamar Blue法进一步检测表明HUVECs和HASMCs各细胞内转染组与未转染组之间A值差异均无统计学意义。 Western blot 法检测显示rAAV9-EGFP-R65转染HUVECs 和HASMCs 两种细胞后NF-κB通道P65的表达减弱。结论 rAAV9-EGFP-R65能够有效转染人脐静脉内皮细胞和人主动脉平滑肌细胞，对两种细胞增殖均无抑制作用，均能有效抑制两种细胞中NF-κB通道P65的表达。
-
诱导的与凝集素受体相似的c-rel基因的分子克隆和鉴定
目的进一步了解c-rel对免疫系统的调控功能特征.方法采用再现差异分析法(representative difference analysis,RDA)分析从野生型和c-rel敲除老鼠所获mRNA.结果发现一个新基因,其表达依赖于完整c-rel,命名为淋巴细胞衍生的C-型凝集素(LCL)-1.LCL-1属Ⅱ型跨膜蛋白,膜外区含一个糖基识别域.该糖基识别域与其他C-型凝集素受体(包括CD69)所携带的糖基识别域具有高度同源性.LCL-1基因位于小鼠6号染色体的NK细胞基因复合体内,编码至少4种可选择的拼接亚型.有趣的是,LCL-1除表达于B细胞,也在不成熟和成熟树突状细胞表达,尤以后者表达水平更高.结论发现一个NKC家族新成员,首次证明NKC家族的凝集素样受体是c-rel的下游基因.
-
CD154(CD40L)诱导人Ramos B淋巴细胞株中转录因子NF-κB活化研究
目的对CD40配体CD154(CD40L)在人B淋巴细胞中刺激转录因子NF-κB活化进行研究.方法应用重组CD154刺激EBV/LMP1阴性人Ramos B细胞,观察对NF-κB luciferase(萤光素酶)活化的作用,判断CD154刺激对NF-κB抑制蛋白IκB-α、-β及-ε磷酸化和降解的影响,并对CD154刺激诱导进入细胞核NF-κB亚单位进行分析. 结果 CD154刺激:(1) 导致NF-κB luciferase活性升高,且与CD154剂量正相关; (2) 引起细胞内IκB-α、-β及-ε蛋白总量减少,IκB-α、-β及-ε阳性细胞也明显减少; (3) 主要诱导p50、p65及c-Rel亚单位从细胞浆进入细胞核; (4) 诱导p65磷酸化. 结论在人Ramos B细胞中,CD154通过诱导IκB-α、-β及-ε降解释放p50、p65及c-Rel进入细胞核及p65磷酸化激活NF-κB.
-
IKKα、β、ε及TBK1在CD154诱导转录因子NF-κB活化中的作用
目的 研究IκB上游激酶IKK在CD40配体CD154诱导NF-iB活化中的作用机制以及与构架蛋白TRAF的相关性.方法 应用重组CD154刺激EBV/LMP1阴性Ramos B细胞,研究IKK质粒转染表达对NF-κB luciferase活化的影响,并通过IKK免疫复合物激酶试验测定IKK对GST-IκB-α磷酸化活性以及免疫共沉淀试验判断IKK与TRAF的相互关系.结果 IKKα/β、IKKε和TBK1活性在CD154刺激5～15 min内达到高峰;抗IKKα磁珠可以免疫共沉淀IKKβ,反之亦然.而抗IKKε或TBK1磁珠不能共沉淀其他3种IKK;CD154刺激诱导TRAF2与IKKε和TBK1,TRAF5与TBK1共沉淀增加,而TANK与TBK1共沉淀减少.IKKα或IKKβ并不与TANK或任何TRAF共沉淀.结论 CD154刺激诱导IKKα、β、ε及TBK1活化,并诱导TRAF2与IKKε和TBK1结合,TRAF5与TBK1结合,而TANK与TBK1逐渐解离.IKKα/β激酶复合物位于IKKε和TBK1的下游.
-
脂氧素A4抑制CTGF诱导的大鼠系膜细胞RANTES的产生
目的了解结缔组织生长因子(CTGF)是否诱导肾小球系膜细胞产生趋化因子RANTES,了解脂氧素A4(LXA4)是否影响CTGF对合成RANTES的诱导作用,并探讨其作用机制.方法应用CTGF刺激培养的大鼠肾小球系膜细胞,应用RT-PCR方法测定RANTES的mRNA表达,应用ELISA测定上清液中RANTES.应用趋化试验测定上清液对单核细胞(THP-1)的趋化作用.应用Western blot测定分裂原激活的蛋白激酶(p42/44 MAPK)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3-K)和蛋白激酶B(PKB)的表达.应用凝胶电泳迁移率试验测定核因子-κB(NF-κB)的表达.构建含脂氧素A4受体同源基因(LRHG)的真核表达载体pcDNA3.1/LRHG,并转染系膜细胞,观察LXA4对CTGF作用的调节是否依赖LRHG.结果 CTGF刺激使系膜细胞RANTES的mRNA表达与分泌量增加,增加磷酸化(P)-p42/44 MAPK、P-PI3-K、P-PKB及NF-κB表达.LXA4呈剂量依赖性地抑制CTGF所致的上述变化.P-p42/44 MAPK抑制剂PD98059抑制CTGF诱导的p42/44 MAPK磷酸化与RANTES分泌.PI3-K抑制剂LY294002抑制CTGF诱导的PI3-K、PKB、NF-κB活化与RANTES分泌.NF-κB抑制剂PDTC抑制CTGF诱导的NF-κB活化与RANTES分泌.pcDNA3.1/LRHG转染使LXA4对CTGF诱导的p42/44 MAPK磷酸化与RANTES的分泌的抑制作用增强.结论 LXA4可抑制CTGF引起的系膜细胞分泌RANTES,其机制依赖于抑制p42/44 MAPK、PI3-K/PKB的磷酸化与NF-κB活化.而LRHG转染细胞可增强LXA4的抑制作用,提示LRHG参与了LXA4的抑制作用.
-
脂多糖通过NF-κB途径上调大鼠腹膜间皮细胞表达CD40和ICAM-1
目的 观察脂多糖(LPS)作用下大鼠腹膜间皮细胞NF-κB活性及其对CD40和细胞间黏附分子1(ICAM-1)表达的影响.方法 分离及培养大鼠腹膜间皮细胞.LPS不同浓度作用12 h 及LPS (5 μg/ml)作用不同时间点收集细胞;LPS(5 μg/ml)或BAY11-7085(一种IκBα的磷酸化抑制剂)不同浓度(1 μmol/L和5 μmol/L)预处理3 h加LPS,作用3 h后收集细胞;采用RT-PCR方法检测CD40和ICAM-1 mRNA表达.采用蛋白印迹检测NF-κB和磷酸化NF-κB(p-NF-κB)蛋白表达.结果 与常规培养基对照组相比,5 μg/ml LPS组CD40和ICAM-1 mRNA表达显著升高(P<0.05),10 μg/ml LPS组显著高于5 μg/ml LPS作用组(P<0.05).5 μg/ml LPS 作用下,ICAM-1 mRNA表达从1 h开始升高,3 h达到高峰,之后逐渐降低.CD40 mRNA表达在1 h无显著变化,3 h时迅速达到高峰,之后逐渐降低.常规培养的大鼠腹膜间皮细胞结构性表达p-NF-κB蛋白;加入LPS后,p-NF-κB蛋白表达显著增加,其中30 min～1 h表达强,之后逐渐降低,至2 h仍显著高于常规培养组(P<0.05).加入5 μmol/L BAY11-7085后,LPS诱导的CD40和ICAM-1 mRNA表达显著降低(P<0.05),与正常对照组相比差异无统计学意义. 结论 LPS以时间依赖和浓度依赖模式上调CD40和ICAM-1的表达.NF-κB信号途径参与调节LPS诱导的大鼠腹膜间皮细胞CD40和ICAM-1的表达.
-
幽门螺杆菌过氧化氢酶对SW480细胞中NF-κB和ERK通路的影响
目的 观察重组幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)过氧化氢酶(catalase,CAT)对SW480细胞内核转录因子(nuclear factor,NF)κB和细胞外信号调节激酶(extrocellular-signal regulated protein kinase,ERK)通路的影响.方法 用脂多糖(LPS)刺激SW480细胞,再用CAT预孵育和处理;采用免疫组织化学方法检测细胞内NF-κKB的表达水平,应用Western blot方法检测细胞质内IκB的蛋白表达量,电泳迁移率改变分析(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)观察NFκB的激活;应用激光共聚焦显微镜和Western blot方法观察ERK的核内外易位及磷酸化.结果 重组Hp CAT与商品化CAT的作用相同,预孵后,NF-κB的表达和激活较LPS组和处理组明显减少,ERK核内易位和磷酸化亦明显减少,但较正常对照组仍明显增加.结论 Hp CAT能够抑制NF-κB和ERK通路.
-
水痘-带状疱疹病毒基因启动子分析
目的 从水痘-带状疱疹病毒(VZV)主要基因的启动子中找到容易被VZV感染激活的启动子及其短有效序列以构建VZV报告细胞系.方法 构建18个VZV开放读码框架(ORF)启动子的重组报告质粒,用基因转染瞬时表达分析法比较各启动子在VZV感染早期启动报告基因产物表达的活性;将容易被激活的启动子从5'和3'端截短后构建截短启动子的重组报告质粒,比较各截短启动子的活性以找到启动子的短有效序列;应用点定向突变技术将短有效序列中细胞转录因子的结合序列进行碱基置换突变后比较突变启动子的启动活性.结果 VZV感染早期ORF9、ORF61和ORF66的启动子容易被激活;ORF9启动子的短有效序列位于-127～-34(93 bp),其上游刺激因子(USF)结合序列的碱基置换突变后启动子活性降低50%;ORF61启动子的短有效序列位于-227～-52(165 bp),其Pbx-1结合序列的碱基置换突变后启动子活性增强一倍,但NF-κB结合序列的突变对启动子活性无影响.结论 ORF9启动子的短有效序列适合用来构建VZV报告细胞系.
-
一氧化氮对哮喘气道细胞因子表达的调控作用
目的探讨内源性一氧化氮(NO)对支气管哮喘肺组织核因子-κB(NF-κB)活性的调节作用及NO对哮喘关键性炎症介质--白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-5(IL-5)、gamma干扰素(IFN-γ)的调控作用是否通过NF-κB介导. 方法采用病理学观察、免疫组织化学技术、原位组织杂交、电泳迁移率改变试验(EMSA)、NO代谢产物测定等方法,应用NO供体左旋精氨酸(L-Arg)、一氧化氮合酶抑制剂硝基左旋精氨酸甲酯(L-NAME)、NF-κB抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)作为工具药,从哮喘动物模型的整体水平上观察内源性NO对支气管哮喘肺组织NF-κB蛋白表达和活性的影响及其对IL-4、IL-5、IFN-γ mRNA表达的影响. 结果整体应用大剂量的L-Arg能使哮喘气道增多的炎性细胞减少(P＜0.05),NAME能拮抗这一作用(P＜0.05),PDTC亦能使哮喘气道增多的炎性细胞减少(P＜0.05);L-Arg能使哮喘气道P65表达及NF-κB的活性降低(P＜0.05),NAME能拮抗这一作用(P＜0.05),PDTC亦能使哮喘气道P65表达及NF-κB的活性降低(P＜0.05);大剂量的L-Arg还能使哮喘气道表达增高的IL-4、IL-5 mRNA的表达降低(P＜0.05),而对IFN-γ无影响(P＞0.05),PDTC亦能使哮喘IL-5 的表达降低(P＜0.05),而对IL-4、IFN-γ无影响(P＞0.05);哮喘肺组织p65核阳性染色平均吸光度(A)值、肺组织EMSA DNA结合条带灰度值与肺组织均浆NO代谢产物NO-2含量呈显著负相关(r分别为-0.89、-0.84,P＜0.05).哮喘组肺组织核蛋白NF-κB结合活性与IL-4 mRNA的表达量无明显相关关系(r=0.38,P＞0.05);与IL-5 mRNA的表达呈显著正相关(r＝0.90, P＜0.05,);与IFN-γ mRNA的表达无明显相关(r＝-0.24,P＞0.05);哮喘NO工具药组肺组织NO-2含量与IL-4 mRNA的表达呈显著负相关(r＝-0.94,P＜0.05,);与IL-5 mRNA表达呈显著负相关(r=-0.89,P＜0.05);与IFN-γ mRNA表达的相关性不明显(r＝0.19,P＞0.05). 结论高浓度的内源性NO能对哮喘气道炎症反应发挥反馈性抑炎效应;NO能通过抑制NK-κB而负调节IL-5基因的表达,NO的抑炎效应可能与此有关;NO对IL-4基因的表达亦有负调控作用,但不是由NF-κB介导的.
-
87位氨基酸在TM-TNF-α诱导靶细胞凋亡中的作用
目的研究TM-TNF-α分子结构与功能的关系,阐明其诱导靶细胞凋亡的分子机制. 方法构建定点突变的87/Phe TM-TNF-pcDNA3.0,并瞬时转染Cos-7细胞,利用MTT法,annexin Ⅴ,Western blot检测TM-TNF-α突变体的胞毒效应,对靶细胞死亡方式及对核转录因子NF-κB转位的影响. 结果 87位氨基酸置换后,TM-TNF-α对靶细胞的杀伤率无明显改变,但TM-TNF-α突变体通过促进NF-κB核转位,诱导靶细胞死亡的方式由凋亡转为坏死. 结论 87位氨基酸是TM-TNF-α诱导靶细胞凋亡的关键氨基酸残基,其所在的结构域可能是诱导凋亡的功能域.
-
T细胞白血病病毒1型Tax蛋白阳性细胞中早期生长反应基因-1对NF-κB活性的影响
目的 观察人T细胞白血病病毒1型(HTLV-1)的Tax蛋白阳性细胞中早期生长反应基因-1(EGR-1)与NF-κB的关系.方法 RT-PCR扩增MT2细胞中EGR-1的cDNA全长,连接于真核表达载体pcDNA3.0;用脂质体介导的方法将pcDNA3.0-EGR-1转染TaxP/TaxN细胞,48 h后PCR检测EGR-1和p65 mRNA的表达,Western blot检测EGR-1及p65蛋白的表达;将pcDNA3.0-EGR-1和NF-κB报告基因共转染TaxP及TaxN细胞48 h后检测荧光素酶活性.结果 成功构建了重组表达质粒pcDNA3.0-EGR-1,Tax可以促进EGR-1 mRNA和蛋白的表达;EGR-1可以促进TaxP细胞p65 mRNA和蛋白的表达,上调NF-κB活性.结论 EGR-1可能通过促进NF-κB活化参与成人T淋巴细胞白血病(adult T-cell leukemia,ATL)的发病.
-
黄芪多糖调节创伤应激小鼠免疫功能的研究
目的采用小鼠截肢应激模型,探讨创伤应激状态下小鼠免疫功能变化及黄芪多糖对应激状态下机体免疫功能影响. 方法将50只BALB/c小鼠随机分为5组:正常对照组(A),每天腹腔注射生理盐水0.5ml/只;应激对照组(B),截肢后每天腹腔注射生理盐水0.5ml/只;应激+APS高(C)、中(D)、低(E)剂量组,截肢后分别给予APS 1000mg/kg、500mg/kg、250mg/kg,生理盐水稀释至0.5ml腹腔注射,每天1次.连续注射3 d后,采用免疫组织化学技术检测CD4+、CD8+、c-fos蛋白表达,原位杂交检测NF-κB mRNA、IL-10 mRNA表达,计算机图像分析系统定量. 结果与A组比较,创伤后72 h B组小鼠胸腺、脾脏组织中NF-κB mRNA、IL-10 mRNA表达水平均明显升高(P<0.01);CD4+、CD4+/CD8+比值显著减少(P<0.01);c-fos抗原表达明显多于正常(P<0.01).与B组比较,C、D、E组小鼠胸腺、脾脏组织中NF-κB mRNA、IL-10 mRNA的表达受抑(P<0.01);胸腺、脾脏组织中CD4+抗原水平、CD4+/CD8+比值升高(P<0.01);胸腺、脾脏组织中c-fos抗原水平降低(P<0.01).与A组比较,C组胸腺、脾脏组织中NF-κB mRNA、IL-10 mRNA的表达,CD4+抗原、CD8+抗原、c-fos抗原分布差异无显著性(P＞0.05). 结论创伤后小鼠细胞免疫功能明显紊乱;而黄芪多糖体内应用可有效恢复其免疫功能.
-
氢饱和生理盐水对重症急性胰腺炎大鼠肺损伤的保护作用及对P38MAPK和NF-κB表达的影响
目的 探讨氢饱和生理盐水对重症急性胰腺炎大鼠肺损伤的保护作用及其对P38MAPK和NF-κB表达的影响.方法 雄性Wistar大鼠54只,随机数字法分为假手术组(SO组)、重症急性胰腺炎组(SAP组)和氢饱和生理盐水处理组(HRS组),每组大鼠18只.胆胰管逆行注射5％牛磺胆酸钠制备重症急性胰腺炎模型.HRS组在造模成功后5 min尾静脉注射HRS(6 mL/kg),并皮下HRS补液(20 mL/kg).SO组、SAP组则在模型成功后5 min经尾静脉注射生理盐水(6 mL/kg),并皮下生理盐水补液(20 mL/kg).术后3、12、24 h分批剖杀大鼠,每个时间点6只.分别检测各组大鼠血清淀粉酶(AMY)、脂肪酶(LIP)水平.取新鲜肺组织检测其湿/干比(W/D).取肺组织病理切片行光镜观察及病理评分.采用免疫组化法检测P38MAPK、p-P38MAPK及NF-κB的表达.结果 HRS组各时间点血清AMY [12 h(5306.7 ±909)vs.(5 435.0 ±441.2)]、LIP [12 h(1 897.8±149.4)vs.(1917.9±106.8)]水平较SAP组相应时间点,差异无统计学意义(P＞0.05),肺组织W/D [12h (3.12±0.58)vs.(1.87±0.25)]及病理评分[12h (2.14±0.38)vs(3.58±0.32)]较SAP组相应时间点显著降低(P＜0.05).肺组织12 h时间点P38MAPK的表达在各组间差异无统计学意义;SAP组p-P38MAPK及NF-κB的表达较SO组显著升高,HRS组p-P38MAPK及NF-κB的表达较SAP组显著降低.结论 氢饱和生理盐水对重症急性胰腺炎肺损伤具有保护作用,其机制可能与抗氧化作用以及抑制P38MAPK、NF-κB激活有关.
-
异丙酚对急性肺损伤大鼠肺组织凋亡及NF-κB p65的影响
目的 探讨不同剂量异丙酚对脂多糖诱导大鼠急性肺损伤(acute lung injury,ALI)凋亡及NF-KB p65的影响.方法 60只SD大鼠随机(随机数字法)分为5组:空白对照(NS)组,模型(All)组和不同剂量丙泊酚干预(P1,P2,P3)组.HE染色和血气分析评估模型制备成功与否,流式细胞术及蛋白免疫印迹法通过单因素方差分析,检测肺组织凋亡和NF-KB活化情况.结果 模型组肺部损伤达到Au标准,模型制备成功;丙泊酚干预组肺损伤较模型组明显减轻,且呈剂量依赖性;与对照组比较,模型组肺组织细胞凋亡率显著增加,NF-κB P65核转位显著增加,核浆比显著高于对照组(P<0.05);与模型组比较,异丙酚干预组肺组织凋亡率显著减少,核转位显著减少,P1,P2,P3组核浆比显著低于模型组,(P<0.05).结论 异丙酚对脂多糖诱导大鼠急性肺损伤具有保护作用;异丙酚能显著抑制肺组织细胞凋亡和NF-κB核转位;异丙酚对脂多糖诱导大鼠ALI的拮抗作用可能与抑制肺组织凋亡和抑制NF-κB P65核转位有关.
-
Protectin DX对小鼠急性肝损伤的作用及相关机制
目的 探讨炎症消退介质保护素DX(protectin DX,PDX)对脓毒症小鼠急性肝损伤的保护作用.方法 雄性C57BL/6小鼠30只,6～8周龄,体质量20～25 g,采用随机数字表法分为三组(均n=10):假手术组(Sham组)、脓毒症组(CLP组)和脓毒症+PDX干预组(CLP+PDX组).采用盲肠结扎穿孔(CLP)法制备脓毒症模型.于CLP后1 h时,CLP+PDX组腹腔注射PDX 1μg,Sham组和CLP组均腹腔注射等容量生理盐水.三组均在CLP后24 h时收集血清、肝组织,采用苏木精-伊红(HE)染色观察肝组织病理变化;采用全自动生化分析仪检测血清中谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)水平;ELISA检测血清中的TNF-α、IL-6、IFN-γ 和IL-10水平;Western blot检测肝组织中NF-κB活性;比色法检测肝组织中髓过氧化物酶(MPO)活性.应用SPSS 18.0软件,采用双侧t检验的统计学方法,对结果进行统计学分析.结果 与Sham组相比,CLP组HE染色显示:肝索排列紊乱,肝细胞肿胀坏死,炎性细胞浸润,可见淤血及出血,肝损伤评分显著增加;血清中的ALT、AST、TNF-α、IL-6、IFN-γ 和IL-10水平均明显升高(均P<0.05);肝组织中NF-κB、MPO活性显著增强(均P<0.05).CLP+PDX组与CLP组相比,肝组织结构形态损伤明显较轻;血清中的ALT、AST、TNF-α、IL-6和IFN-γ 水平均降低,抗炎因子IL-10水平升高,肝组织NF-κB、MPO活性明显被抑制(均P<0.05).结论 PDX可通过抑制NF-κB活性,进而减轻小鼠脓毒症导致的急性肝损伤.
