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姜黄素衍生物抗大鼠肝纤维化的作用及其机制
目的 观察姜黄素衍生物(Curc-OEG)抗肝纤维化作用及其机制.方法 将雄性SD大鼠共分成4组:正常组、模型组、姜黄素衍生物组和姜黄素组.用四氯化碳诱导大鼠形成肝纤维化模型,2个治疗组分别尾静脉注射100 mg·kg-1Curc -OEG和灌胃400 mg·kg-1姜黄素.10周后,测肝功及肝纤维化指标、肝组织羟脯氨酸(Hpy)水平；HE、天狼星红染色,免疫组化法观察TGF-β1及α -SMA表达；RT - PCR法测TGF -β1 mRNA水平；Western blot测TGF-β1及α-SMA蛋白表达.结果与模型组比较,Curc-OEG能改善肝功及降低肝纤维化指标,降低Hpy含量及肝纤维化程度,抑制TGF - β1及α- SMA的表达.结论Curc-OEG具有明显的抗肝纤维化作用.
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利用多位点Gateway技术构建小鼠平滑肌肌动蛋白α基因启动子慢病毒载体
背景:平滑肌肌动蛋白α基因是相对局限于在血管平滑肌细胞中表达的少数几个基因之一,公认是血管平滑肌细胞表型转化的标志.目的:利用多位点Gateway技术构建慢病毒载体pLVpuro/平滑肌肌动蛋白α控制绿色荧光蛋白基因的表达.方法:设计合成含有attB位点的小鼠平滑肌肌动蛋白α基因启动子引物,构建pUp-平滑肌肌动蛋白α;通过LR反应将pUp-平滑肌肌动蛋白α和pDown-绿色荧光蛋白(含att位点的绿色荧光蛋白入门克隆)连接到目的载体pDEST-puromycin,得到pLVpuro/平滑肌肌动蛋白α-绿色荧光蛋白表达载体;经PCR和测序鉴定,将载体质粒瞬时转染C2C12细胞系,并且用免疫荧光染色检测基因的表达.结果与结论:成功构建pLVpuro/平滑肌肌动蛋白α-绿色荧光蛋白报告基因载体,测序结果表明启动子序列正确;细胞转染实验以及免疫荧光检测证实构建的报告基因载体可以反映平滑肌肌动蛋白α基因的表达情况.
关键词： 平滑肌肌动蛋白α 多位点Gateway技术 慢病毒 绿色荧光蛋白 干细胞 -
转化生长因子β1刺激改良培养小鼠原代肝星状细胞的活化
背景:肝星状细胞是肝内分泌细胞外基质的关键细胞类型,因此在肝纤维化研究中很重要.目的:实验改良了肝星状细胞原代培养方法,获得充足的细胞量,用转化生长因子β1刺激活化,研究致纤维化的相关因子表达情况.方法:氯胺酮麻醉小鼠后采用门静脉穿刺原位灌注肝脏的方法分离肝脏,采用密度梯度离心获得肝星状细胞,利用形态学、免疫荧光染色等方法对原代肝星状细胞进行鉴定;将培养24 h肝星状细胞用质量浓度10 μg/L转化生长因子β1刺激48 h,同时设PBS组进行对比.结果与结论:通过原位灌注肝脏并且酶消化的方法可以成功获得小鼠原代肝星状细胞,并且锥虫蓝染色活率为(97.2±0.8)％,免疫荧光染色纯度为(90.4±1.2)％,细胞计数总量约2.5×106/只.实时荧光定量聚合酶链式反应检测显示,与PBS组比较,转化生长因子β1刺激组的肝星状细胞平滑肌肌动蛋白α、Ⅰ型胶原蛋白、转化生长因子β受体1、转化生长因子β受体2 mRNA表达水平明显升高(P＜0.05).结果证实,实验采用的改良的培养方法可更高效高质量的获得原代肝星状细胞,转化生长因子β1刺激可导致肝星状细胞活化,分泌致纤维化因子.
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α-SMA在口腔粘膜下纤维性变成纤维细胞中的表达
目的:探讨肌成纤维细胞在口腔粘膜下纤维性变(OSF)发病机制中的作用.方法:免疫组化法检测组织中和体外培养成纤维细胞中平滑肌肌动蛋白α (α-SMA)的表达;免疫组化法和RT-PCR法检测槟榔碱对OSF及正常成纤维细胞产生α-SMA和其mRNA表达情况.结果:正常口腔粘膜组织中除血管壁外无阳性染色,而OSF组织中在粘膜下层有大量梭形细胞胞浆被染成棕黄色;体外培养的正常组织来源成纤维细胞中有很少量的α-SMA蛋白表达,OSF来源的成纤维细胞中早期有大多数细胞(85.80%±3.56%)表达α-SMA;槟榔碱干预成纤维细胞后不能增加平滑肌肌动蛋白α蛋白和mRNA的表达.结论:肌成纤维细胞可能在OSF的发病机制中起重要作用,OSF组织中的肌成纤维细胞可能不是槟榔成分直接作用于成纤维细胞转化而来的.
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α-SMA与ALDH1在乳腺癌中的表达及临床意义
目的 平滑肌肌动蛋白α(α-SMA)和乙醛脱氢酶1(ALDH1)分别为乳腺癌间质成纤维细胞及乳腺癌干细胞的特征性标志物.本研究通过检测α-SMA、ALDH1在乳腺癌中的表达,探讨其与乳腺癌临床预后的关系.方法 免疫组化检测182例乳腺癌患者及36例正常乳腺或良性疾病患者α-SMA、ALDH1的表达,分析二者之间的相关性及其与乳腺癌临床疾病特征及生存预后的关系.结果 α-SMA在正常乳腺组织及乳腺良性病变组织的间质成纤维细胞中无表达(0%),182例乳腺癌中有117例(67.6%)α-SMA阳性;ALDH1在36例正常或良性乳腺疾病和182例乳腺癌中的阳性率分别为16.7%(6/36)和37.9%(69/182).α-SMA与ALDH1的表达呈正相关(P<0.05).α-SMA的表达与肿瘤大小相关(P<0.05),肿瘤直径大于2cm者α-SMA的阳性率较高;ALDH1的表达与组织分化程度、脉管浸润与否及远处转移与否相关(P<0.05),分化程度差、有脉管癌栓及远处转移的患者ALDH1阳性率较高.182例乳腺癌患者中α-SMA阳性表达组5年生存率较阴性组无明显降低(P>0.05);ALDH1阳性表达组5年生存率较阴性组低,与预后呈负相关(P<0.05).α-SMA和ALDH1的表达情况以及孕激素受体情况、是否接受术前化疗、有无复发、远处转移等6个因素与总生存期有关(P<0.05),均为乳腺癌的独立预后因素.结论 α-SMA、ALDH1均可能与乳腺癌的发生及发展有关.二者之间的表达正相关,提示肿瘤相关成纤维细胞(TAFs)可能与乳腺癌的干性有关.联合检测α-SMA、和ALDH1有助于判断疾病的恶性程度、浸润能力及转移潜能,可作为预测乳腺癌预后的新指标.
