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高效液相色谱法测定延胡索中延胡索乙素、延胡索丙素、小檗碱的含量及不同炮制品稳定性研究
目的：探讨高效液相色谱法（ HPLC）测定延胡索中有效成分延胡索乙素、延胡索丙素、小檗碱含量，分析传统炮制方式（醋制）对延胡索成分稳定性的影响。方法采用HPLC法，色谱柱Agilent TC-C18（250 mm ×4.6 mm，5.0μm），流动相：乙腈：0.1%醋酸水溶液（三乙胺溶液调节pH为6.4）梯度洗脱，检测波长：282 nm，流速：1.0 ml/min。以延胡索乙素含量为指标，采用均匀设计法，以温度、醋量为因素，对延胡索的传统炮制进行研究。结果①延胡索丙素在0.05~0.50μg/ml、延胡索乙素在0.20~2.00μg/ml、小檗碱在0.02~0.20μg/ml浓度范围内线性关系良好，平均加样回收率分别为96.54%、98.76%、99.48%；②延胡索生品经药典规定步骤处理后，生物碱含量降低一半左右，不同炮制过程对原药材中生物碱含量影响较少；③在炮制温度130℃，用醋量20%~50%条件下，醋制延胡索炮制品水煎液延胡索乙素的含量高，稳定性较好。结论 HPLC测定延胡索中三种成分的含量，方法操作简单，重复性好，为延胡索质量标准的制定提供了科学依据，同时不同炮制品对延胡索中生物碱的含量影响较小，传统的炮制（醋制）有可能提高延胡索中延胡索乙素的稳定性。
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盐酸小檗碱联合二甲双胍治疗2型糖尿病合并高脂血症的疗效探析
目的：探讨盐酸小檗碱联合二甲双胍治疗2型糖尿病合并高脂血症的临床效果。方法：选择2型糖尿病合并高脂血症患者53例，分为治疗组（27例）和对照组（26例），治疗组予盐酸小檗碱联合二甲双胍治疗，对照组单纯予二甲双胍治疗。2个月后对比两组患者血糖、血脂及体重指数的变化，以评价治疗效果。结果：治疗组患者血糖、血脂各项指标及体重指数均较对照组好转，差异均有统计学意义（ P＜0.05）。结论：盐酸小檗碱联合二甲双胍治疗2型糖尿病合并高脂血症，降糖效果确切，并可改善高脂血症并发症及降低患者体重指数。
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黄连总碱对大鼠结肠癌的化学预防作用
目的:观察黄连总碱对结肠癌的化学预防作用.方法:以二甲肼(1-2 dimethylhydrazine,DMH)40 mg·g(-1)sc+1%葡聚糖硫酸钠(dextran sodium sulfate,DSS)水溶液饮用诱导形成大鼠结肠癌模型.观察黄连总碱(120 mg·g(-1)·d(-1),1周5d)和小檗碱(100 mg·g(-1)·d(-1),1周5 d)ig,连续16周.观察对大鼠体重、异常隐窝灶(abrrant crypt foci,ACF)和结肠癌发生率的影响.结果:与模型组相比,黄连总碱明显改善DMH+DSS诱癌过程中大鼠的恶液质状态并阻遏体重减轻,显著减少大鼠结肠ACF数和明显降低结肠癌的发生率;其作用与小檗碱相似.结论:黄连总碱能抑制DMH和DSS联合使用诱导大鼠早期ACF的形成和结肠癌发生,该作用可能与其主要成分小檗碱有关.
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小檗碱对阿霉素诱导心肌细胞损伤的保护作用研究
目的:基于细胞水平研究小檗碱(berberine,Ber)对阿霉素(doxorubicin,DOX)所致心肌损伤的保护作用并探讨其抗氧化机制.方法:大鼠心肌细胞H9c2给药组分为:空白组,2μmol·L-DOX组,0.1μmol· L-1 Ber组,1μmol·L-1Ber组,10 μmol·L-1 Ber组,2μmol·L-1 DOX +0.1μmol·L-1Ber组,2μmol·L-1 DOX+1μmol·L-1 Ber组,2μmol·L-1 DOX+10 μmol·L-1Ber组.各组给药不同时间后测定细胞体积及蛋白含量,RT-PCR法测定细胞心钠素(ANP),脑钠素(BNP)表达水平.以半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)活性为指标评价心肌细胞凋亡水平.DCFH荧光探针法测定细胞ROS水平,同时测定细胞内丙二醛(MDA)生成量,评价心肌细胞氧化损伤水平.结果:与空白组比较,各给药组心肌细胞体积增大,细胞内蛋白含量增加,ANP,BNP的mRNA水平上调,细胞内Caspase-3活性增强,导致细胞凋亡,降低细胞内ROS水平,均具有明显的统计学差异(P＜0.01).结论:小檗碱通过抗氧化作用降低阿霉素诱导的心肌细胞损伤.小檗碱与阿霉素合用后,浓度依赖的抑制阿霉素诱导的心肌肥大,并有效降低细胞内ROS水平,清除脂质过氧化物,逆转阿霉素诱导的心肌细胞凋亡.
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小檗碱吴茱萸碱联用对AGS细胞TNF-α和IL-8含量的影响
目的:观察小檗碱吴茱萸碱对胃癌细胞株(AGS)细胞增殖及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素(IL-8)含量的影响.方法:采用MTT(四甲基偶氮唑盐)法测定小檗碱、吴茱萸碱及两药联用对AGS细胞生长的影响；流式细胞技术检测小檗碱、吴茱萸碱及两药联用对AGS细胞细胞周期的影响；ELISA法测定小檗碱、吴茱萸碱及两药联用对AGS细胞TNF-α和IL-8含量的影响.结果:小檗碱15 μmol·L-1和吴茱萸碱45 μmol·L-1联用时对AGS细胞增殖的抑制作用弱于吴茱萸碱单用；小檗碱83 μmol· L-和吴茱萸碱14 μmol·L-1联用时对AGS细胞增殖的抑制作用稍优于两药单用,两药联用阻滞细胞周期于G2/M期的作用较两药单用无显著差异.进一步研究发现,小檗碱83μmol· L-1和吴茱萸碱1.4 μmol· L-1联用增加AGS细胞培养上清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量的作用优于两药单用.小檗碱具有降低AGS细胞培养上清IL-8含量的趋势,而吴茱萸碱能够显著增强AGS细胞培养上清IL-8的含量(P＜0.01),两药联用能够显著降低AGS缅胞培养上清中IL-8的含量(P＜0.01).结论:不同剂量的小檗碱吴茱萸碱联用对AGS细胞增殖的影响不同.小檗碱能够抑制吴茱萸碱诱导的AGS细胞IL-8的表达上调.
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左金方及其主要成分小檗碱对人胃癌细胞SGC7901上皮间质转化的影响
目的:研究左金方及其主要成分小檗碱对人胃癌细胞SGC7901上皮间质转化的影响.方法:制备左金方冻干粉,采用高效液相色谱法(HPLC),对比小檗碱对照品,明确左金方冻干粉的纯度和小檗碱含量;采用噻唑蓝(MTT)比色法检测左金方及小檗碱对SGC7901细胞生长影响,并确定后续实验给药浓度;划痕实验检测左金方及小檗碱对SGC7901细胞迁移能力的影响;细胞侵袭实验(transwell小室)检测左金方及小檗碱对SGC7901细胞侵袭能力的影响;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测左金方及小檗碱作用SGC7901细胞24 h后对上皮间质转化(EMT)标志性蛋白上皮型钙黏蛋白(E-cadherin),神经型钙黏蛋白(N-cadherin)蛋白表达的影响.结果:制备的左金方冻干粉含9.85％的小檗碱;左金方、小檗碱对 SGC7901细胞作用24 h的半数抑制浓度(IC50)分别为165,51.8 mg·L-1,选用165 mg·L -1左金方(含小檗碱16.3 mg·L-1)与16.3 mg·L-1小檗碱进行后续实验;左金方及小檗碱均能抑制SGC7901细胞划痕愈合及侵袭能力;Western blot结果显示,与空白组比较,左金方及小檗碱能明显上调E-cadherin表达,下调N-cadherin表达(P＜0.05).结论:左金方及其主要成分小檗碱能抑制人胃癌细胞SGC7901的生长、侵袭及迁移,能抑制SGC7901细胞上皮间质转化,且小檗碱在复方中为其主要药效成分.
关键词： 左金方 小檗碱 胃癌SGC7901 上皮间质转化(EMT) 转移 -
黄连和小檗碱对大鼠红细胞氧化性溶血及其抗氧化系统的影响
目的:观察黄连和小檗碱对大鼠红细胞氧化性溶血及其抗氧化系统的影响.方法:采用乙酰苯肼(APH)诱导大鼠红细胞氧化性溶血模型,以伯氨喹啉为对照药,观察不同浓度的黄连和小檗碱对血浆游离血红蛋白、血清间接胆红素、全血网织红细胞以及红细胞内抗氧化系统相关酶和蛋白的影响.结果:150 mg·kg-1 APH能引起正常大鼠血浆游离血红蛋白和血清间接胆红素含量及外周血网织红细胞数量显著升高,红细胞6-磷酸葡萄糖脱氢酶(G6PD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)和超氧化物歧化酶(SOD)和还原型谷胱甘肽(GSH)含量明显降低;15 mg·kg-1伯氨喹啉能明显加重APH所引起的红细胞氧化性溶血;67～600 mg·kg-1黄连和10.8～97.5 mg·kg-1小檗碱对APH所引起的红细胞氧化性溶血没有明显影响,但600 mg·kg-1黄连和97.5 mg·kg-1小檗碱均能显著增强溶血大鼠红细胞G6PD活力并提高GSH含量,前者尚能增强GSH-Px活力.结论:黄连和小檗碱对APH诱导的大鼠红细胞氧化性溶血没有明显影响.稍高剂量的黄连和小檗碱能通过阻碍APH对G6PD的干扰、维护GSH-Px正常活力和增加GSH含量而发挥一定的红细胞抗氧化保护作用.
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小檗碱对体外HepG2细胞IR模型抗IR的效应及机制
目的:探讨小檗碱对HepG2细胞胰岛素抵抗(IR)模型的改善作用及机制.方法:HepG2细胞采用高糖(25 mmol·L-1)和高胰岛素(1×10-6mol·L-1)联合诱导24 h,建立体外IR模型.模型培养液中分别加入1×10-5,1×10-6 mol· L-1小檗碱,设1×10-3 mol· L-1二甲双胍作为阳性药,孵育24 h.葡萄糖氧化酶法检测培养液葡萄糖含量,计算细胞葡萄糖消耗量,细胞增殖活性检测(CCK-8)测定细胞增殖活性;生化法检测细胞丙酮酸激酶(PK)活性,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞葡萄糖激酶(GCK)和葡萄糖转运蛋白2(GLUT2)的活性;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测细胞胰岛素受体(InsR),磷脂酰肌醇-3激酶(PPI3K),丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶B(Akt)和GLUT2mRNA表达水平,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组细胞胰岛素受体底物-1(IRS-1),磷酸化的磷脂酰肌醇-3激酶(p-PI3K)和磷酸化的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶B(p-Akt)的表达水平.结果:与正常组比较,模型组细胞葡萄糖消耗量显著降低(P＜0.01),PK,GCK,GLUT2蛋白活性显著降低(P＜0.01),InsR,PDK,Akt,GLUT2 mRNA表达水平显著降低(P＜0.01),IRS-1,p-PI3K,p-Akt蛋白表达水平显著降低(P＜0.01).与模型组比较,小檗碱组和二甲双胍组的细胞葡萄糖消耗量明显增加(P＜0.01),PK,GCK,GLUT2蛋白活性显著升高(P＜0.01),InsR,PI3K,Akt,GLUT2 mRNA和IRS-1,p-PI3K,p-Akt1蛋白表达水平均明显升高(P ＜0.05,P＜0.01).结论:小檗碱体外对HepG2细胞IR模型有显著的改善作用,其机制可能通过调节IRS-1/PI3 K/Akt信号通路促进肝脏葡萄糖转运和改善葡萄糖代谢.
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HPLC同时测定黄柏中6种化学成分含量
目的:建立川黄柏、关黄柏中6种有效成分含量的同时测定方法.方法:以HPLC采用Diamonsil C18色谱柱(4.6mm×250 mm,5μm),乙腈-水(1‰乙酸,2mmol醋酸铵)为流动相梯度洗脱,检测波长280nm,柱温25℃,流速1mL·min-1.结果:绿原酸、黄柏碱、木兰花碱、药根碱、巴马汀和小檗碱分别在20.00～320.00,18.75～130.00,25.00 ～ 200.00,5.00～100.00,20.00～ 200.00,0.09～1.80mg·L-1峰面积和质量浓度线性关系良好(r≥0.9990),平均加样回收率分别为98.1％,99.4％,97.5％,97.3％,104.0％,98.5％,RSD分别为0.5％,0.6％,0.8％,1.0％,1.4％,0.9％.结论:含量测定方法简便、稳定、重复性好,为黄柏药材质量控制和评价提供了依据.
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HPLC测定关黄柏中生物碱的含量
目的:采用HPLC同时测定黑龙江省10个不同产地关黄柏中小檗碱、药根碱、巴马汀的含量.方法:HPLC色谱条件,Kromasil C18色谱柱(4.6 mm×250mm,5μm),流动相乙腈-0.1％磷酸溶液(25∶75,每100 mL加0.10g十二烷基硫酸钠),流速1 mL· min-1,检测波长345 nm,柱温30℃.结果:盐酸小檗碱、盐酸药根碱、盐酸巴马汀分别在12.08 ～ 144.96 mg·L-1(r =0.9993),1.60 ～25.60 mg·L-1(r =0.9993),7.26 ～87.12 mg·L-1(r =0.9993)线性关系良好,3种生物碱的平均回收率(n＝9)分别为102.51％,103.47％,102.89％.结论:方法简便准确,重复性好,适用于黄柏类药材小檗碱、药根碱、巴马汀的含量测定;不同产地关黄柏中生物碱含量差异较大.
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HPLC同时测定黄连阿胶汤合煎液中芍药苷黄芩苷小檗碱的含量
目的:建立高效液相色谱法同时测定黄连阿胶汤中芍药苷、黄芩苷、小檗碱3种成分的含量.方法:采用Agilent TC-C18色谱柱(4.6 mm ×250 mm),流动相乙腈-0.1％磷酸溶液梯度洗脱,流速1.0 mL· min-1,检测波长240nm,柱温25℃.结果:黄连阿胶汤中芍药苷、黄芩苷、小檗碱平均质量分数分别为1.64％,7.51％,3.30％.结论:该法操作简便、准确且精密度和重复性良好,可用于黄连阿胶汤的质量控制.
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湖北利川黄连不同生长龄期主要生物碱的分布及变化
目的:研究湖北利川黄连不同生长龄期主要生物碱的累积变化过程,为标准化种植提供科学依据.方法:采用紫外分光光度法和HPLC测定黄连有效成分.结果:随着生长龄期的增长,黄连叶片数、根茎干重都在不断的增加；黄连不同部位中总生物碱含量的由大到小的顺序依次是根茎＞须根＞叶片；在黄连2～3龄阶段为黄连生长旺盛的时期,酪氨酸、总生物碱、小檗碱、黄连碱、巴马汀和小檗碱的含量增长速度快；在5龄阶段,这4种生物碱含量的大小顺序依次是小檗碱、黄连碱、表小檗碱、巴马汀,且这4种生物碱含量之和占总生物碱含量的比例在不断增加.结论:为黄连的种植管理提供了参考.
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三重四级杆串联质谱(LC-MS/MS)法同时测定复方广痛消水提物中5种有效成分的含量
目的:建立同时测定广痛消水提物中延胡索乙素、芍药苷、小檗碱、厚朴酚、和厚朴酚含量的方法.方法:采用LC-MS/MS联用方法.结果:芍药苷、延胡索乙素、小檗碱、厚朴酚、和厚朴酚线性范围分别为0.882 8 ～ 113(r=0.999 8),1.5438～49.4(r =0.999 5),0.904 7～115.8(r=0.9997),0.8813～112.8 (r=0.9994),0.1656～21.2mg.L-1(r=0.9999).加样回收率分别为1.998％,1.14％,3.117％,1.828％,1.596％.结论:该法专属性强、快速灵敏,可用于广痛消水提物中延胡索乙素、芍药苷、小檗碱、厚朴酚、和厚朴酚的含量测定.
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HPLC 同时测定“三热论”方各纯化部位中药根碱、表小檗碱、黄连碱、巴马汀和小檗碱的含量
目的:测定“三热论”方各纯化部位中药根碱、表小檗碱、黄连碱、巴马汀和小檗碱的含量.方法:“三热论”复方经HPD 400大孔树脂,分别用10％,30％,60％,90％的乙醇洗脱后,采用HPLC测定4个洗脱部位中5种生物碱的含量.结果:HPD 400大孔树脂纯化后,30％乙醇洗脱部位生物碱含量高.结论:大孔树脂纯化法简单易行,30％纯化部位经HPLC检测,其中生物碱含量高,为有效部位筛选奠定了基础.
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正交试验法优选黄连浸膏的喷雾干燥工艺
目的:优选黄连浸膏的喷雾干燥工艺.方法:采用L9(34)正交设计法,以喷干粉出粉量、小檗碱含量和含水量为指标,考察进风口温度、出风口温度、浸膏比重对黄连浸膏喷雾干燥工艺的影响.结果:优选的喷雾干燥工艺为进风口温度180℃,出风口温度80℃,浸膏比重1.15.结论:该优选工艺合理、稳定,可为黄连的工业化生产提供实验依据.
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星点设计-效应面法优化小檗碱β-环糊精包合物制备工艺
目的:优化小檗碱-β-环糊精包合物的制备工艺.方法:以小檗碱-β-环糊精包合物的包合率和收率为考察指标,采用星点设计考察包合温度、包合时间以及主客分子投料比对包合工艺的影响,对结果进行多元线性回归、二次多项式和三次多项式拟合,并根据佳数学模型进行预测.结果:多元线性回归方程的复相关系数较低,三次多项式拟合结果优于二次多项式拟合结果,小檗碱-β-环糊精包合物的优包合工艺为β-环糊精与小檗碱的投料质量比3.65,包合时间4.5h,包合温度64℃,包合率和收率预测值与理论值偏差分别为3.28％,2.63％.结论:星点设计-效应面法优化小檗碱β-环糊精包合物制备工艺具有很好的预测性.
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盐析法制备小檗碱壳聚糖纳米载药微球
目的:探索制备小檗碱壳聚糖载药纳米微球颗粒的新方法及关键技术.方法:采用盐析法,通过三聚磷酸钠交联制备小檗碱壳聚糖纳米载药微球,测定载药微球的包封率,观察其扫描电镜图及红外光谱.结果:小檗碱颗粒粒径分布于400～500 nm,经壳聚糖包裹的小檗碱纳米颗粒形状规则,具有核-壳结构,平均粒径约500 nm,包封率约70％.结论:壳聚糖包裹的小檗碱颗粒具有均一的纳米粒径和良好的包封率,为小檗碱缓释用药和靶向给药设计提供参考.
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星点设计-效应面法优化黄连提取工艺
目的:优选黄连提取工艺.方法:以乙醇体积分数、溶剂用量、提取时间为自变量,以总评“归一值”(包括浸膏得率,小檗碱、黄连碱、黄连总碱的质量分数)为因变量,对自变量各水平进行多元线性回归及二项式拟合；采用效应面法优选提取工艺,并对结果进行预测分析.结果:优选的提取工艺为10倍量50％乙醇提取3次,每次50 min.提取率实测值与预测值偏差为-2.27％,二项式拟合r=0.9362.结论:优选的黄连提取工艺简便,预测性良好.
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栝蒌根丸水提取工艺正交优选
目的:优选括蒌根丸水提取的佳工艺.方法:采用4因素3水平正交设计,高效液相色谱法测定小檗碱含量,以提取物中小檗碱含量为检测指标.筛选出括蒌根丸的优化提取条件.结果:括篓根丸的佳水提取工艺为加10倍量水煎煮2.0 h,提取2次.结论:括蒌根丸水提取工艺工艺简单、易于操作、不使用有机溶剂、成本低廉.
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黄连饮片标准汤剂的制备及质量标准分析
目的:制备黄连饮片标准汤剂并建立其质量标准,为黄连配方颗粒的制备及其质量标准的建立提供参考.方法:根据中药饮片标准汤剂制备原则制备黄连饮片标准汤剂,计算表小檗碱、盐酸黄连碱、盐酸巴马汀和盐酸小檗碱的转移率和饮片出膏率,建立黄连饮片标准汤剂的质量标准.流动相乙腈-0.05 mol·L-磷酸二氢钾溶液(50:50)(每100 mL中加十二烷基硫酸钠0.4g,以磷酸调节pH 3.0),柱温30℃,流速1 mL· min-,检测波长225 nm.结果:黄连饮片中表小檗碱、盐酸黄连碱、盐酸巴马汀和盐酸小檗碱的转移率范围分别为79.3％～111.9％,54.6％ ～76.2％,45.7％ ～70.7％和43.5％ ～64.4％,出膏率范围17.1％ ～22.3％,14批黄连饮片标准汤剂特征图谱中有7个共有峰,其相似度均＞0.999.结论:该研究建立的质量评价方法精密度和重复性良好,指纹图谱相似度高,适用于黄连饮片标准汤剂的质量评价.
