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Triton X-100与SDS对SD大鼠皮下移植猪主动脉瓣巨噬细胞表型极化的作用比较
目的:比较非离子型去污剂聚乙二醇辛基苯基醚(Triton X-100)和离子型去污剂十二烷基硫酸钠(SDS)对SD大鼠皮下移植猪主动脉瓣巨噬细胞表型极化的作用. 方法:分别采用Triton X-100和SDS对猪主动脉瓣进行去细胞处理,将瓣膜分为Triton X-100处理组和SDS处理组,三羟甲基氨基甲烷(Tris)缓冲液处理组作为未处理组.将处理后的猪主动脉瓣埋入SD大鼠胸部左右两侧皮下,建立SD大鼠皮下移植猪主动脉瓣模型,分别在第3、14、28天时取出移植的猪主动脉瓣,免疫组织化学染色比较猪主动脉瓣中CCR7(M1型巨噬细胞标志物)和CD163 (M2型巨噬细胞标志物)的表达情况,计算M2型巨噬细胞与M1型巨噬细胞的比值(M2型/M1型巨噬细胞=CD163+细胞数/CCR7+细胞数). 结果:未处理组猪主动脉瓣皮下移植28 d时,M2型/M1型巨噬细胞比值<1,巨噬细胞向M1型巨噬细胞极化,发挥促炎作用;SDS处理组、Triton X-100处理组瓣膜在皮下移植14 d和28 d时,M2型/M1型巨噬细胞比值>1,巨噬细胞向M2型巨噬细胞极化,发挥促进组织修复的作用.瓣膜皮下包埋14 d时,SDS处理组猪主动脉瓣M2型/M1型巨噬细胞比值明显高于Triton X-100处理组和未处理组(P均<0.05). 结论:去细胞处理可促进移植瓣膜中巨噬细胞向M2型巨噬细胞极化,采用SDS进行去细胞处理对巨噬细胞极化的作用优于Triton X-100.
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十二烷基硫酸钠对血链菌生物膜的作用
目的:观察十二烷基硫酸钠(sodium doecyl sulfate,SDS)促进血链菌生物膜表面脱落的效果,并对其和氯己定、玉洁纯联合应用的效果进行比较.方法:在模拟人口腔环境的人工口腔内,形成4h血链菌生物膜,分别放入300mmol·L-1 SDS、300 mmol·L-1SDS+2%氯己定和300mmol·L-1SDS+0.3%玉洁纯中,作用时间为3、10、30min,然后应用激光共聚焦扫描显微镜和死菌/活菌荧光染色技术相结合,比较其促进血链菌生物膜表面脱落的作用,对所得数据进行方差分析.结果:300mmol·L-1SDS应用于4h血链菌生物膜,可以有效促进细菌脱落,300mmol·L-1SDS和2%氯己定联合应用的效果较差;300mmol·L-1SDS和0.3%玉洁纯联合应用于生物膜3min,细菌几乎全部脱落.结论:300mmol·L-1SDS和0.3%玉洁纯联合应用,对促进菌斑生物膜脱落的作用强.
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双波长紫外分光光度法测定苯扎溴铵酊的含量
苯扎溴铵酊的含量测定方法常用十二烷基硫酸钠或十二烷基磺酸钠滴定法[1,2],操作过程复杂、烦琐、误差较大。我院平时采用银量法直接滴定,但存在终点不明显、消耗标准溶液太少等缺点,对测定结果影响较大。我们应用双波长法测定苯扎溴铵酊的含量,操作简便、可靠。1 材料与方法1.1 仪器与试剂 UV2100紫外可见分光光度计(日本岛津);苯扎溴铵(上海第十七制药厂);曙红(水溶性);稀释液(无水乙醇∶水∶氨水∶溴液=40∶10∶1∶5,自制);苯扎溴铵酊(本院制剂室);其他所用试剂均为分析纯。
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N-硬脂酰酪氨酸盐的合成及其临界胶束浓度测定
目的 合成N-硬脂酰酪氨酸二钠盐(NST-2Na)和二钾盐(NST-2K),测定它们的临界胶束浓度(CMC).方法 以硬脂酸为原料经两步反应得到N-硬脂酰酪氨酸(NST),再经NaOH或KOH碱化得到目标化合物.以十二烷基硫酸钠(SDS)为标准品,N,N-二乙基苯胺(DEA)为探针,确定紫外分光光度法(UV法)测定CMC的可行性.运用UV法测定两种NST盐的CMC.结果 经高效液相色谱法(HPLC)法确定,NST-2Na纯度为98.35%,NST-2K纯度为92.65%.UV法测得SDS的CMC值与文献值一致,NST-2Na和NST-2K的CMC值分别为27.5 mg/100 mL和25.0 mg/100 mL.结论 UV法可作为测定NST盐CMC值简单、可靠的方法.
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不同发育阶段诸氏鲻虾虎鱼对水污染物的敏感性比较
目的 筛选诸氏鲻虾虎鱼适宜急性毒性试验的发育阶段.方法 以十二烷基硫酸钠为参比毒物,比较研究诸氏鲻虾虎鱼胚胎、早期仔鱼、中期仔鱼、晚期仔鱼、稚鱼及幼鱼对毒物的敏感性.结果 不同发育阶段诸氏鲻虾虎鱼对SDS的敏感性依次为:早期仔鱼>胚胎>中期仔鱼>晚期仔鱼>稚鱼>幼鱼.结论 诸氏鲻虾虎鱼早期仔鱼在水污染物急性毒性评价方面具有显著的优势.
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肾小球疾病中尿蛋白电泳测定及其病理相关分析
蛋白尿是肾脏疾病常见表现和就诊原因,且尿液标本取材简便、无创伤,可连续追踪随访,是反映泌尿系统疾病性质的重要窗口。尿蛋白电泳通过分析尿蛋白组成成分,可帮助明确其来源,从而有助于病因诊断和预后判断[1-2]。国内多采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE),但操作较繁琐,需预浓缩尿液,且可能伴低分子蛋白丢失,多局限于科研。反之,十二烷基硫酸钠-琼脂糖凝胶电泳(SDS-AGE)操作简便,无须浓缩尿液,便于临床推广。本文试结合肾病理活检资料,就我科SDSAGE法尿蛋白检测结果分析如下。
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基于芯片电泳技术的低密度脂蛋白检测及应用研究
目的 建立芯片电泳分离血清低密度脂蛋白并探讨其临床应用价值.方法 采用自制的微流控石英芯片,以pH9.8、50 mmol/L的Tricine作为芯片电泳缓冲体系,选择十二烷基硫酸钠(SDS)作为添加剂,分离血清脂蛋白.结果 低密度的2个亚型,即大而轻低密度脂蛋白(lLDL)、小而密低密度脂蛋白(sdLDL)在3min内得到有效分离.与健康体检者相比,冠心病患者体内含有更高浓度的sdLDL.结论 芯片电泳能快速、简便、有效地分离出冠心病患者血清中低密度脂蛋白亚型,表明此法有望成为检测sdLDL的常规分析方法.
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尿蛋白SDS-琼脂糖凝胶电泳方法建立及临床应用
目的建立应用于临床的尿蛋白十二烷基硫酸钠(SDS)-琼脂糖凝胶(AGE)电泳方法.方法分别对Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型4种琼脂糖、不同的缓冲对、电压和电泳时间进行实验,确定佳的分离条件,建立测定方法.结果当Ⅳ型琼脂糖凝胶浓度为40 g/L,SDS含量为1 g/L,在pH 7.0的AMP-咪唑-HCl缓冲体系下进行电泳,可以有效地将尿蛋白按分子量大小进行分离.57份临床尿蛋白阳性标本电泳结果表明,生理性蛋白尿24例,中、高分子蛋白尿5例,小分子蛋白尿11例和混合型蛋白尿17例.结论本法具有分离效果好、操作简便、灵敏度高、成本低廉等优点,可以将尿蛋白按分子量大小分为小分子、中分子以及混合型,对肾脏疾病的受损部位和损伤程度的判断具有较高的价值,适于基层实验室的常规开展.
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提取结核分枝杆菌DNA 3种方法的比较
结核分枝杆菌DNA的制备是PCR扩增的关键.结核分枝杆菌的细胞壁坚韧,裂解困难,一般的裂解剂不易将结核分枝杆菌壁裂解.结核分枝杆菌DNA的制备方法有:经典的酚氯仿抽提法、Triton法、SDS法及胰酶法,应用较多的是后3种快速制备方法,但应用效果的报道不尽相同.为观察3种快速制备方法的敏感性和实用性,本文进行3种方法的应用比较.
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二维凝胶电泳的新技术及其应用
1975年,O'Farrell以及Klose等人发明了双向凝胶电泳(two- dimensional gel electrophoresis, 2-DE),根据样品中蛋白质的两个重要理化特性:等电点(is-oelectric points, PI)和分子量( molecular weight, MW),将样品中的蛋白质进行分离.其原理是第一向基于蛋白质 PI不同用等电聚焦( isoelectric focusing, IEF)分离,第二向则按 MW的不同用聚丙烯酰胺十二烷基硫酸钠凝胶电泳( sodium dodecyl sulfate_polyacrylamide gel electrophoresis, SDS- PAGE)分离,把复杂蛋白混合物中的蛋白质在二维平面上分开.其后的 25年中, 2- DE经过了多方面的改进,而且相应蛋白鉴定技术也得到了发展,这使得 2- DE广泛应用于蛋白质组学( proteomics)领域,成为研究"结构蛋白质组"与"功能蛋白质组"的有使用价值的方法,在蛋白质组研究中有着不可或缺的地位.现对 2- DE近期的进展及其应用作一综述.
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011何种非创伤性方法更适合检测十二烷基硫酸钠引起的刺激性斑贴试验?
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青鹏软膏对小鼠实验性刺激性接触性皮炎的抑制作用及可能机制研究
目的 探讨外用青鹏软膏对实验性刺激性接触性皮炎( ICD)的抑制作用及可能机制.方法 用十二烷基硫酸钠在BALB/c小鼠背部皮肤建立实验性持续刺激性接触性皮炎模型.将小鼠分为6组:模型组(不治疗),治疗组(分别外用100%浓度青鹏软膏、75%及50%浓度青鹏软膏),基质对照组(外用青鹏软膏基质)和空白对照组.连续用药11d.分别在用药第8天及第12天测量小鼠背部皮损厚度及质量,并对皮损取材进行HE染色,计数炎症细胞,用ELISA方法测定血清及局部皮损组织匀浆中IL-2、TNF-α,IFN-γ的表达水平.结果 用药后100%青鹏软膏能明显减轻皮肤炎症和水肿,减少中性粒细胞浸润,第12天血清IL-2 、TNF-α,IFN-γ的表达水平分别为(5.55±0.33)、(70.88±1.55)、(76.99±1.85) pg/ml,与模型组(6.41±0.96)、(76.67±1.14)、(82.20±2.36) pg/ml和基质对照组(6.25±0.92)、(76.95±1.08)、(81.76±3.19) pg/ml相应的细胞因子水平比较,显著降低(P<0.05),100%青鹏软膏组皮损匀浆中IL-2、TNF-α,IFN-γ的表达水平分别为(17.75±0.97)、(66.95±3.58)、(46.85±2.43) pg/ml,与模型组(23.92±0.82)、(70.66±2.68)、(55.14±2.68) pg/ml和基质对照组(23.11±0.82)、(71.17±3.30)、(53.55±3.24)pg/ml相应的细胞因子水平比较,水平显著降低(P<0.05).结论 100%青鹏软膏能降低小鼠ICD模型的炎症反应,并能降低皮损和血清中TNF-α、IL-2及INF-γ的表达水平.
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高效液相色谱法测定人血浆中二甲双胍的含量
二甲双胍适用于2型糖尿病患者的治疗.文献报道常用的检测方法是高效液相色谱法(HPLC)[1,2],常用内标为阿替洛尔.流动相常加入的离子对试剂为十二烷基硫酸钠、庚烷磺酸钠和辛烷磺酸钠[1,3].本试验建立一种在流动相中加入十二烷基硫酸钠,采用高氯酸直接沉淀蛋白,测定人血浆中二甲双胍浓度的一种简易方法.
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GC测定非诺贝特制剂中十二烷基硫酸钠含量
目的 建立非诺贝特制剂中十二烷基硫酸钠的GC测定方法.方法 采用HP-5(30 m×0.53 mm,2.65 μm)毛细管柱,以氮气为载气,氢火焰离子化检测器,程序升温,直接进样,以十二烷醇为对照品外标法测定十二烷基硫酸钠的含量.结果 十二烷醇在0.165~1.32 mg·mL-1内具有良好的线性关系,相关系数为0.999 5.国内企业产品的十二烷基硫酸钠用量远低于安全用量,但部分国内企业可能存在过量添加和非法添加的问题.结论 本方法准确,专属性强,可作为非诺贝特制剂中十二烷基硫酸钠的检测方法.
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BMS-Hc与Sysmes XE-2100血红蛋白测定仪的对比研究
目的 探讨BMS-HC血红蛋白测定仪应用于血站采血前快速测定血红蛋白的可行性研究.方法 应用全自动血细胞分析仪和BMS-HC血红蛋白测定仪分别测定80份本院住院患者血样本的血红蛋白浓度.结果 本法测定结果的线性范围为(36~199)g/L;低、中、高3份样本重复测定20次,批内变异CV值分别为2.25%、0.86%和1.17%,批间变异CV值分别为2.20%、1.60%和2.30%;本仪器与全自动血细胞分析仪(SLS-HGB法)测定结果相比,差异无显著性;两者显著相关(r=0.999).结论 依据血红蛋白测定仪结果的准确性、重复性和操作的便捷程度综合分析,BMS-HC血红蛋白测定仪可替代血站系统目前采用的硫酸铜比重法.
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弓形虫RH株膜表面抗原2全长基因的高效表达与抗原性分析
构建原核重组表达质粒pET23a-SAG2,并在大肠埃希菌中实现高效表达,以及检测表达产物的抗原性.PCR扩增SAG2编码基因目的片段,琼脂糖凝胶电泳回收纯化,克隆至pMD18-T载体,转化大肠埃希菌DH5α.测序后亚克隆至表达质粒载体pET23a,构建重组表达质粒pET23a-SAG2,转化大肠埃希菌DH5α.筛选阳性克隆,经限制性酶切分析鉴定后,转化大肠埃希菌BL21(DE3),以异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达.十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)与免疫印迹分析表达产物.PCR扩增出约500bp的SAG2编码基因目的片段,与预期片段大小相符,经测序鉴定无基因突变;所构建的pET23a-SAG2重组表达质粒阳性克隆经PCR与双酶切鉴定,与预期结果一致;含有pET 23a-SAG2重组质粒的大肠埃希菌BL21(DE3)诱导后得到了高效表达,SDS-PAGE显示表达产物约Mr 19 000;免疫印迹结果表明表达产物具有良好的抗原性.成功构建了pET 23a-SAG2表达质粒,实现了全长成熟SAG2蛋白在大肠埃希菌中的高效表达;表达产物具有良好的抗原性.
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羧甲司坦片制剂工艺的研究
目的 研究羧甲司坦片中粘合剂聚维酮30佳使用浓度;辐料羧甲基淀粉钠、十二烷基硫酸钠佳使用量.方法 以羧甲司坦片溶出度为考察指标,采用正交实验法,以羧甲基淀粉钠使用量(A)、十二烷基硫酸钠使用量(B)、聚堆嗣30浓度(C)3个因素,每个因素选取3个水平进行实验,所制定的因素水平选用L9(34)正交表来安排试验,后确定制剂工艺.结果 各因素对羧甲司坦溶出度的影响大小分别B>C>A.结论 佳工艺条件应为A2B3C2,即羧甲基淀粉钠(CMS-Na)使用量6%,十二烷基硫酸钠使用量0.15%.聚维酮30浓度7.5%.
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粒度与制法对阿司匹林片溶出度的影响
目的考查全粉末直接压片和湿法制粒压片对阿司匹林片溶出度的影响,并比较全粉末直接压片的主药粒度对溶出度的影响.方法阿司匹林片采用0.5%十二烷基硫酸钠作表面活性型崩解剂、原料粉碎过100目筛、湿法制粒压片.结果溶出度分别为:97.05、98.42、97.05、79.55、102.0、100.3.结论能显著提高溶出度.
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溶胶凝胶法制备纳米二氧化钛
用溶胶凝胶法制备二氧化钛胶体,发现十二烷基硫酸钠(SDS)和聚乙二醇(PEG)两种表面活性剂可以改变纳米二氧化钛的终形貌.用X射线、SEM表征分析了两种表面活性剂对TO2晶型、粒径、形貌的影响.
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十二烷基硫酸钠抗HSV-2效应的研究
目的:证实十二烷基硫酸钠(SDS)抗HSV-2的效应,初步确定其有效浓度与安全性.方法:用体外细胞培养法观察不同浓度SDS对HSV-2的抑制作用,同步进行阿昔洛韦(ACV)对照观察.结果:SDS对HSV-2的低有效抑制浓度为0.015625 mg/mL,抑制作用与0.1 mg/mL阿昔洛韦组无明显差异(P>0.05);且低有效抑制浓度的SDS对培养细胞的影响甚微,较此高8倍浓度的SDS仍然安全.结论:SDS在体外对HSV-2有明显抑制作用,对培养细胞的安全性好.