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显齿蛇葡萄叶有效成分的提取工艺研究
显齿蛇葡萄为葡萄科蛇葡萄属的一种野生木质落叶藤本植物，又名白茶、藤茶、龙须茶、甘露茶等。2013年12月24日国家卫生计生委发布了《关于批准显齿蛇葡萄叶等3种新食品原料的公告》，确定了显齿蛇葡萄叶可以作为新资源食品来使用。显齿蛇葡萄叶中黄酮化合物含量高达43.4~45.5%，富含二氢杨梅素、槲皮素、显齿蛇葡萄素、山奈酚等成分。由于人体不能直接合成黄酮化合物，只能从食品中间接获得，因此研究植物中黄酮化合物的提取方法有重大意义。本试验采取超声波提取法，对显齿蛇葡萄黄酮化合物的提取工艺条件进行筛选，以期获得显齿蛇葡萄黄酮化合物超声提取的优化工艺条件，为显齿蛇葡萄食用及药用资源的合理开发提供一定的依据。
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HPLC法测定蜂蜜中槲皮素和山奈酚
目的 建立同时测定蜂蜜中槲皮素和山奈酚含量的方法.方法 以Hpersil BDS C18(250 mm×4.6 mm,5μm)为分析柱,流动相为甲醇+0.4%磷酸水溶液(45+55)并用三乙胺调节pH至4.2,流速为1.0 ml/min,检测波长为375 nm.结果 槲皮素的线性范围为0.045～2.25 μg,山奈酚的线性范围为0.052～2.600 μg,相关系数均为0.999 1;平均回收率分别为95.9%,97.6%.5种蜂蜜中均含微量槲皮素(18.62～189.26 μg/g)和山奈酚(5.97～22.54μg/g),其含量与蜜源有关,桉树蜜中槲皮素含量高(189.26 μg/g),红树林蜜中山奈酚含量大(22.54 μg/g).结论 该方法简便、准确,可以用于同时测定蜂蜜中槲皮素和山奈酚的含量.
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雪白睡莲花中黄酮类成分抗氧化及拟缺血对神经细胞作用的研究
在化学成分研究的基础上,对分离得到的10种黄酮单体进行了药理活性的研究,通过对其体外抗氧化、缺糖缺氧条件下对神经细胞的保护或损伤活性的研究,对其构效关系进行了初步探讨.结果表明:新化合物1同时具有在拟缺血条件下对神经瘤细胞PC12的杀伤和对大鼠皮层原代神经元的保护作用;黄酮类普遍具有较强的抗氧化活性,并提示山奈酚苷元存在特异性,其活性和槲皮素、杨梅素苷元存在显著差异;3,4,5-三羟基苯基为潜在的活性药效团.
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甘草次酸对大鼠山奈酚血浆浓度的影响
目的:探索甘草次酸对大鼠山奈酚血浆浓度的影响.方法:将78只SD大鼠,体重150 ～ 210 g,随机分成4组,雌雄各半,即实验高浓度组与低浓度组,及高浓度与低浓度对照组.每组中又包括3个小组(即1,2,3h).高浓度实验组灌胃50 mg· kg-1山柰酚+ 50 mg· kg-1甘草次酸,低浓度实验组灌胃25 mg· kg-1山奈酚+50 mg· kg-1甘草次酸.对照组只灌胃山奈酚,剂量与实验组相同.灌胃给药后分别于1,2,3h用摘眼球取血法取血.血浆在90℃水浴中,加盐酸水解120 min,然后以乙腈为萃取剂,超声波为辅助提取,利用高效液相色谱(HPLC)测定血浆中山奈酚的浓度.结果:大鼠口服山奈酚后在血浆未能检测到游离山奈酚.低浓度组合药和单药灌胃对山奈酚血浆浓度没有影响;高浓度的合药组中山奈酚浓度(水解后)明显高于单药组(P＜0.05).结论:在高浓度组中,甘草次酸能够提高山奈酚的血浆浓度.
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养心草中山奈酚成分的HPLC-MS/MS分析及含量测定
目的:首次发现养心草中含有黄酮类化合物山奈酚并测定其含量.方法:用Waters LC-MS/MS分析仪,XTerra.Ms C18(5μm,2.1×150mm)色谱柱,乙腈-水-甲酸(40:60:1)为流动相,发现养心草中的山奈酚;用岛津高效液相色谱仪,SHIM-PACK VP C18(250mm×4.6mm,10μm)色谱柱,流动相为甲醇-0.4%磷酸(59:41),流速为1.0ml/min,检测波长为370nm,测定养心草中山奈酚的含量.结果:出现m/z287.1[M+H]+峰为质谱的特征峰,与标准品具有高相似度,证明样品中含有山奈酚;山奈酚在2.0-8μg范围内呈良好的线性关系,回归方程为Y=40343X-11107(r=0.9998),平均回收率为102.53%,RSD为0.92%(n=6).结论:本方法简便准确,重现性好,可作为养心草药材中山奈酚的分析及含量测定方法.
关键词： 养心草 山奈酚 HPLC-MS/MS HPLC 含量测定 -
HPLC同时测定不同产地黄花菜中4种成分含量
目的:建立高效液相色谱(HPLC)法同时检测黄花菜中槲皮素、山奈酚、异鼠李素、β-谷甾醇4种成分,探索合理开发利用黄花菜的科学依据.方法:采用安捷伦C18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),乙腈-0.1％磷酸水作为流动相,梯度洗脱,流速:1mL/min,柱温:30℃,检测波长:210nm.运用SPSS软件对结果进行分析.结果:槲皮素、山奈酚、异鼠李素、β-谷甾醇分别在27.96-295.18、27.78-304.64、19.09-181.10、3.86-55.43μg与峰面积良好的线性关系(r＞0.9992);4种成分的平均回收率为99.25％、99.06％、98.80％、96.91％,RSD为2.83％、2.67％、1.90％、2.62％.不同产地4种成分的量存在显著性差异.通过聚类分析分为2类.结论:该方法简便、准确、分离效果好,所测为黄花菜中化学成分结果真实、可靠,可为其合理开发利用提供参考依据.
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薄层色谱法鉴别荭草中的黄酮类化学成分
目的:建立荭草中黄酮类化学成分的鉴别方法.方法:利用酸水解得到黄酮苷元的提取条件,以槲皮素和山奈酚为对照品,增加了荭草中黄酮类化学成分的薄层色谱鉴别.结果:在供试品色谱与两种对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的清晰荧光斑点,分离度高.结论:所建立的方法 能很好地对荭草中的黄酮类成分进行质量控制.
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青钱柳化学成分研究
目的:研究青钱柳叶中的化学成分.方法:溶剂萃取及各种色谱技术分离纯化,理化性质和光谱分析鉴定结构.结果:分离得到6个单体化合物,为山奈酚(I)、槲皮素(Ⅱ)、异槲皮苷(Ⅲ)、逆没食子酸(Ⅳ)、胡萝卜苷(V)和青钱柳酸B(V).结论:化合物I,Ⅱ,Ⅲ和Ⅵ为首次从该植物中分离得到.
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金银花中抗补体活性酚酸类成分的研究
目的:研究金银花Lonicera japonica中的抗补体活性酚酸类成分.方法:通过溶血试验方法进行抗补体活性成分的导向分离,对所得化合物进行抗补体活性测定,采用现代波谱技术ESI-MS,1 H-NMR,13 C-NMR进行结构鉴定.结果:从金银花乙酸乙酯部位分离得到了14个化合物,其中有8个酚酸类、3个环烯醚萜类和3个黄酮类成分,包括新绿原酸(1)、绿原酸(2)、隐绿原酸(3)、3,5-O-二咖啡酰奎宁酸(4)、4,5-O-二咖啡酰奎宁酸(5)、3,4-O-二咖啡酰奎宁酸(6)、咖啡酸(7)、咖啡酸甲酯(8)、裂环马钱苷(9)、獐芽菜苷(10)、断氧化马钱子苷(11)、木犀草素(12)、槲皮素(13)、山柰酚(14).抗补体实验表明化合物1～9,11～14对经典的补体激活具有不同程度的抑制作用,以3,5-O-二咖啡酰奎宁酸活性强.结论:化合物14首次从金银花中分离得到,酚酸类化合物是金银花中的主要抗补体活性成分,3,5-O-二咖啡酰奎宁酸活性强,值得深入研究.
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山奈酚干预对D-氨基半乳糖/脂多糖诱导小鼠急性肝衰竭的保护作用
目的 探讨山奈酚对D-氨基半乳糖(D-GaIN)/脂多糖(LPS)诱导小鼠急性肝衰竭(acute hepatic failure,AHF)的干预作用.方法 37只C57B L/6小鼠按完全随机分组法分为正常对照组(10只)、AHF模型组(13只)、山奈酚干预组(14只).AHF模型组小鼠腹腔注射D-GaIN(700 mg/kg)/LPS(10 μg/kg),作用6h,建立AHF模型;山奈酚干预组小鼠于建模前2h尾静脉注射5 mg/kg的山奈酚,后腹腔注射D-GaIN (700 mg/kg)/LPS(10 μg/kg),作用6h,建立AHF模型.正常对照组腹腔注射等量生理盐水.检测血清ALT、AST水平,观察肝脏组织病理学变化,检测肝脏组织中炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6mRNA表达,检测NF-κB通路相关分子表达及肝细胞凋亡情况.结果 与AHF模型组比较,山奈酚干预组小鼠的生存率提高(P＜0.05).与正常对照组比较,AHF模型组血清ALT和AST水平升高(P＜0.05),炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA表达升高(P＜0.05),肝脏组织中NF-κB信号通路相关分子IκB-α表达降低(P＜0.05),p-N F-κB p65表达升高(P＜0.05),肝脏病理损伤严重,细胞凋亡增多;与AHF模型组比较,山奈酚干预组血清ALT和AST水平降低(P＜0.05),炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-6 mRNA表达降低(P＜0.05),肝脏组织中NF-κB信号通路相关分子IκB-α升高(P＜0.05),p-NF-κBp65表达降低(P＜0.05),肝脏病理损伤减轻,细胞凋亡减少.结论 山奈酚干预通过抑制炎症反应对D-GaIN糖/LPS诱导的小鼠AHF发挥保护作用.
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山奈酚抑制顺铂诱导的大鼠心肌损伤
目的 山奈酚是一种有抗炎、抗氧化作用的黄酮类化合物.前期研究发现,该化合物在体外水平可抑制膀胱癌化疗药顺铂诱导的心肌细胞凋亡.本研究主要在体内条件下探讨山奈酚对顺铂心脏毒性的抑制作用.方法 实验分为对照组、顺铂组、顺铂+山奈酚(50 mg/kg)组和顺铂+山奈酚(150 mg/kg)组,每组5只大鼠,采用腹腔给药处理14天.之后,分别检测心肌损伤指标LDH、CK-MB、cTnI及cTnT的变化,氧化应激指标MDA、GSH和SOD的表达变化通过ELISA检测炎症因子TNF-α的表达水平.结果 在相应处理后14灭,发现顺铂处理组血清LDH、CK-MB、cTnI及cTnT,心脏氧化应激标志物MDA、GSH和SOD以及炎症因子TNF-α的表达水平较对照组均显著升高.而同时给予山奈酚处理的大鼠上述指标均较单纯顺铜处理组下调,且较高剂量山奈酚(150 mg/kg)组抑制作用更明显.结论 山奈酚可在体内水平抑制顺铂诱导的心肌损伤.
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山奈酚抑制顺铂诱导的心肌细胞凋亡
目的 顺铂是膀胱癌化疗的一线药物,但部分患者在使用后可发生心脏毒性.该作用多由顺铂引起的细胞凋亡、氧化应激、内质网应激等引起.山奈酚是一种常见的黄酮类化合物,该药具有抗氧化、抗心脏缺血-再灌注损伤的作用.本研究主要探讨山奈酚对顺铂引起心脏毒性的保护作用.方法与结果 采用顺铂联合山奈酚处理H9c2心肌细胞系及原代乳大鼠心肌细胞,发现山奈酚可显著抑制顺铂引起的细胞活力下降.TUNEL结果显示,顺铂联合山奈酚处理组TUNEL阳性细胞比例较单纯顺铂处理组显著降低.山奈酚还可显著抑制顺铂诱导的心肌细胞Caspase3剪切体表达水平.然而,在膀胱癌T24细胞中,山奈酚可显著增强顺铂对该细胞的杀伤作用.结论 山奈酚对顺铂诱导的心肌细胞凋亡有抑制作用.因此,山奈酚很可能是一种新的膀胱癌顺铂治疗辅助药物.
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银杏叶提取物临床药理学研究概述
银杏是一种有多重药理作用的中药，其由黄酮类(24%)、萜类(6％)、酚类、氨基酸类等多种化学成分组成。银杏叶提取物(Egb761)是一种天然的自由基清除剂，是一种标准制剂，其是对银杏的有效成分加以分离、富集后制成的[1-2]。标准制剂Ebg761中的黄酮类有效成分24%的黄酮甙，主要是山奈酚和榭皮素的葡萄糖鼠李糖。萜内脂化合物是银杏叶这一物种所特有的有效成份，可再分为银杏内酯和白果内酯，前者可再分为A、B、C、D4种亚型。本文拟就银杏叶提取物在预防各类疾病中的作用及其可能机制作一综述。
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杜仲黄酮类3种药物成分治疗大鼠骨质疏松的比较研究
目的 研究杜仲黄酮类3种药物成分治疗大鼠骨质疏松的疗效.方法 将51只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、雌激素组、槲皮素组、山奈酚组和芦丁组.假手术组与模型组给予羧甲基纤维素钠,雌激素组与3个药物组分别给予雌激素及对应药物. 12 w后测定大鼠体重及子宫重量,并测定骨形成及代谢相关血液学、尿液指标,Micro-CT分析骨相关参数及骨小梁形态.结果 相同药物浓度下,山奈酚、芦丁、槲皮素3种药物成分均可降低尿液中钙、磷的丢失,同时增强碱性磷酸酶的活性,其中山奈酚的作用优于芦丁和槲皮素.山奈酚、芦丁和槲皮素均可改善绝经后骨质疏松的骨微结构,增加骨密度,尤其是山奈酚,但均不能使骨小梁结构完全恢复.结论 杜仲黄酮类3种药物成分中,山奈酚治疗大鼠骨质疏松的疗效佳,芦丁次之,槲皮素弱.
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高效液相色谱法同时测定杜仲叶中4种有效成分的含量
目的：测定杜仲叶中4种有效成分的含量。方法采用HPLC测定绿原酸、槲皮素、山奈酚、芦丁的含量，色谱柱为WondaSil C18 Superb色谱柱（4.6 mm ×250 mm，5μm），流动相：0.4%磷酸溶液（A）-甲醇（B）进行梯度洗脱，流速1 ml/min，进样量10μl，检测波长262 nm。结果绿原酸的质量在0.825~4.123μg（R2=0.9999）范围内呈良好线性关系，平均回收率为101.89%，RSD为0.49%；槲皮素的质量在0.165~0.824μg（R2=0.9998）范围内呈良好线性关系，平均回收率为99.88%，RSD为2.64%；山奈酚的质量在0.021~0.104μg（R2=0.9999）范围内呈良好线性关系，平均回收率为100.0%，RSD为0.89%；芦丁的质量在0.002~0.012μg（R2=0.9991）范围内呈良好线性关系，平均回收率为100.0%，RSD为0%。结论本方法简便、快速、准确、重复性好，适用于杜仲叶中各成分的含量测定。
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HPLC 测定瘤果黑种草籽中山奈酚含量
目的 建立瘤果黑种草籽中山奈酚的HPLC含量测定方法.方法 色谱柱为Diamonsil C18色谱柱(4.6mm×150mm,5μm),流动相为甲醇-0.4%磷酸(52∶ 48,V/V),检测波长:370nm.结果 山奈酚在0.03～0.18μg的范围内呈良好线性关系(r=0.999 9),平均回收率为95.23%,RSD为4.56%(n=6).结论 本方法简便、准确、重复性好,可用于瘤果黑种草籽中山奈酚的含量测定.
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红花黄酮成分抑制血小板激活因子介导的血小板活化作用
目的观察红花黄酮成分杨梅素(Myr)和山奈酚(Kae)对血小板激活因子(PAF)诱导的兔洗涤血小板聚集、5-HT释放及血小板内游离钙离子浓度升高的影响.方法以比浊法测定家兔洗涤血小板(WRP)聚集,邻苯二甲醛(OPT)荧光法测定5-HT浓度,Fura-2 荧光探针测定血小板内游离钙离子浓度.结果 Myr和Kae体外呈浓度依赖性地抑制PAF诱发的WRP聚集及5-HT释放.Myr抑制WRP聚集的IC 50为17.5 μmol·L-1;抑制5-HT释放的IC50为64.1 μmol·L -1.Kae抑制聚集、释放作用的IC50分别为73.7 μmol·L-1和128 μmol·L-1;同时Myr和Kae均能明显抑制PAF引起的血小板内游离钙增高.结论 Myr和Kae可抑制PAF诱导的血小板活化作用.
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中药金沙藤的质量标准研究
目的 研究中药金沙藤的质量标准,建立金沙藤的显微鉴定和槲皮素、山奈酚的高效液相含量测定.方法 采用中药材粉末显微鉴定,寻找金沙藤显微镜下的常见的特征性细胞;用高效液相法测定金沙藤中槲皮素和山奈酚的总含量.结果 显微鉴定:特征性强;含量测定方法:操作简单,准确,槲皮素在3.1212～249.7 μg之间呈良好的线性关系,山奈酚在3.0328～194.1 μg之间呈良好的线性关系,槲皮素的回收率为 98.31%,山奈酚的回收率为 98.42%.结论 定性、定量方法准确、简便,可用于中药金沙藤的质量.
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山奈酚治疗去卵巢大鼠骨质疏松的实验研究
目的:考察山奈酚对去卵巢大鼠骨质疏松的防治作用,通过对骨形成和骨吸收指标的测定探讨山奈酚抗骨疏松可能的作用机制.方法:40只3月龄雌性大鼠随机分为5组:空白对照组、去卵巢模型组、戊酸雌二醇阳性药组(1 mg·kg-1)、山奈酚高剂量组(40 mg· kg-1)和低剂量组(10 mg·kg-1);除空白对照组大鼠剖开腹腔后直接缝合外,其它各组大鼠均去除双侧卵巢;术后1周开始灌胃给药,连续12周后测定大鼠血清和尿液中钙、磷和肌肝含量,ELISA法测定血清碱性磷酸酶、耐酒石酸酸性磷酸酶含量,显微CT分析骨小梁形态及相关参数.结果:山奈酚对去卵巢大鼠骨密度有显著提高,明显抑制大鼠尿液中骨钙和磷的流失,能够显著抑制去卵巢大鼠血清中酒石酸酸性磷酸酶和组织蛋白酶K的活性,显微CT结果显示山奈酚能明显改善骨质疏松大鼠骨小梁形态结构.结论:山奈酚对去卵巢致大鼠骨质疏松有明显的治疗作用,其作用机制可能与抑制骨吸收有关.
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银杏黄酮山奈酚的体外葡醛酸结合反应
目的旨在了解银杏黄酮山奈酚代谢的有关酶系及酶动力学参数.方法采用苯巴比妥(PB)、地塞米松(DEX)、β-萘黄酮(BNF)和地非三唑(DIPH)诱导SD大鼠,与未诱导大鼠分别作为体外代谢的5种不同酶源.取山奈酚和鼠肝微粒体25℃下共孵育,HPLC法测定孵育液中剩余底物浓度.比较不同诱导剂处理的鼠肝微粒体对山奈酚代谢的催化活性,以未作任何处理的鼠肝微粒体为空白对照.结果山奈酚在BNF和DIPH诱导的鼠肝微粒体中有较强的代谢作用,而在PB, DEX诱导的鼠肝微粒体和空白组微粒体中的代谢较弱.在0.2 g*L-1的微粒体蛋白质浓度的孵育液中,山奈酚(40 mg*L-1)经45 min孵育后,分别有62.9%(DIPH),40.1%(BNF),21.1%(PB),23.7%(DEX)和18.0%(空白组)的量被代谢.测得山奈酚在空白对照组、BNF和DIPH诱导的微粒体中的Km值分别为(1.85±1.05),(9.41±2.45)和(72.4±3.08)μmol*L-1;Vmax值分别为(2.45±0.63),(7.55±1.40)和(25.2±1.08)μmol*g-1*min-1.结论山奈酚在各种微粒体中被广泛代谢;BNF和DIPH葡醛酸转移酶的强诱导剂可使山奈酚Ⅱ相葡萄糖醛酸苷结合反应增强.
