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葡萄籽提取物对PC12神经元毒性的研究
目的:考察葡萄籽提取物(grape seed extract,GSE)在体外对高分化的PC12神经元增殖的影响及机制.方法:采用MTT法考察GSE对PC12神经元增殖的影响,Western blot法检测GSE对PC12神经元中与凋亡相关的蛋白Bcl-2、Bax表达量的影响.结果:实验结果表明,低浓度的GSE(2.5μg/mL,5μg/mL)长时间作用72 h可促进PC12细胞增殖,10μg/mL GSE对PC12细胞增殖无影响,20 μg/mL GSE作用48 h出现细胞毒性,30 μg/mL,50 μg/mL和100 μg/mL GSE作用24 h即可抑制细胞增殖.GSE显著抑制抗凋亡蛋白Bci-2的表达,对促凋亡蛋白Bax表达无影响.结论:20 μg/mL以上浓度的GSE作用于PC12神经元会显著抑制其增殖,作用机制为减少了细胞抗凋亡蛋白Bcl-2的表达.
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RP-HPLC法测定葡萄籽提取物中原花青素B1和B2的含量
目的 建立同时测定葡萄籽提取物中原花青素B1和B2含量的方法.方法 采用RP-HPLC法.色谱柱为Kromasil C18柱(250 mm ×4.6 mm,5μm),以甲醇-体积分数0.1％磷酸溶液为流动相,梯度洗脱,检测波长280nm.结果 原花青素B1和B2的质量浓度分别在23.0～230 mg·L-1(r=0.9991)和14.5～145 mg·L-1(r =0.999 4)内与峰面积呈良好的线性关系;平均回收率分别为96.3％和97.5％,RSD分别为1.4％和1.3％.结论 该方法简便、准确、重复性好,可用于测定葡萄籽提取物中原花青素B1和B2的含量.
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葡萄籽提取物对四氯化碳诱导大鼠脂质过氧化反应的影响
目的:研究葡萄籽提取物对四氯化碳(CCl4)引起的脂质过氧化反应和抗氧化能力的影响.方法:通过对大鼠的体内实验,测定大鼠肝和脑组织中由CCl4诱导产生的过氧化脂质生成物丙二醛(MDA)(TBA法)的含量、血清中的超氧化物歧化酶(SOD)(比色法)活性和血清中总抗氧化能力(T-AOC)(比色法).结果:葡萄籽提取物可明显降低大鼠肝和脑组织中MDA的生成量,明显升高血清中SOD活性和T-AOC.结论:葡萄籽提取物具有明显的抗氧化作用.
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复方降脂软胶囊质量标准初步研究
目的 制定复方降脂软胶囊(番茄红素、葡萄籽提取物、葵花籽油)的质量标准,并对制剂的稳定性进行初步研究.方法 高效液相色谱法测定软胶囊中番茄红素,色谱条件为Kromasil C18色谱柱(150 mm ×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-甲醇(50∶50),体积流量1 mL/min,检测波长为472 nm,柱温30℃.采用加速试验初步观察制剂稳定性.结果 高效液相色谱法测定番茄红素的线性范围为0.200 ～ 20.00 μg/mL,r=0.999 6;平均加样回收率为101.2％,标准偏差(RSD)为1.09％;贮存1、2、3、6个月后,软胶囊中番茄红素平均含有量分别为7.495 8、7.492 4、7.501 3、7.488 6 mg/粒,RSD为1.29％.结论 复方降脂软胶囊制剂性质稳定,功效成分番茄红素定量测定方法专属性强、简便、可靠、测定结果准确.
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HPLC测定葡萄籽提取物中原花青素B2的含量
目的:测定不同来源的葡萄籽提取物中原花青素B2的含量.方法:采用高效液相色谱法,ZORBAX SB-C18柱,流动相为乙腈-2%冰醋酸,梯度洗脱,检测波长280 nm.结果:原花青素B2在1～30μg/mL范围内,线性关系良好.平均加样回收率为99.29%(n=5),RSD=1.64%.结论:该方法简便、准备、重复性好,可用于测定原花青素B2的含量.
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葡萄籽提取物促进早期牙本质龋损再矿化作用的体外研究
目的:评价葡萄籽提取物(GSE)对人工牙本质龋的再矿化作用和显微结构的影响.方法:制备60个人牙本质标本,采用化学法形成人工牙本质龋损,将样本随机分为4组,分别用10％GSE溶液、1 mg/L NaF溶液、10％GSE+1 mg/L NaF溶液和去离子水(DDW)处理,进行体外pH循环.采用显微硬度计测定处理前、后各样本的显微硬度值,扫描电镜观察pH循环后各组牙本质显微结构的变化,并用X线能谱仪分析牙本质元素百分含量.采用SPSS17.0软件包对数据进行统计学分析.结果:显微硬度结果显示,GSE组牙本质的显微硬度获得百分比(SMHR)为40.87±9.92,NaF组为44.60±12.48,GSE+NaF组为48.54±9.27,去离子水组为15.98±8.33.与去离子水组相比,3个实验组的SMHR值均显著提高(P＜0.05),但相互之间无显著差异.扫描电镜显示,GSE组、NaF组和GSE+NaF组牙本质小管大部分呈封闭状态,而去离子水组牙本质小管呈开放状态.元素分析结果显示,3个实验组的Ca、P百分含量均显著高于去离子水组(P＜0.05).结论:GSE能显著促进人工牙本质龋的再矿化作用,抑制牙本质龋的进展.
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葡萄籽提取物原花青素磷脂复合物抗氧化功能的实验研究
目的 探讨葡萄籽提取物原花青素磷脂复合物的抗氧化作用.方法 取大鼠80只,随机分为8组:空白对照组、模型组、原花青素组、大豆磷脂组、维生素C组、原花青素磷脂复合物低、中、高剂量组.每天灌胃1次,连续灌胃30 d.然后用50％乙醇给大鼠一次性灌胃,造成乙醇氧化损伤模型.通过测定大鼠体重,血清和肝组织中丙二醛含量、蛋白质羰基含量、超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶活性及还原性谷胱甘肽含量的变化,观察葡萄籽提取物原花青素磷脂复合物的抗氧化作用.结果 原花青素磷脂复合物各剂量组的大鼠体重与模型组及空白对照组比较,均无统计学差异(P＞0.05).原花青素磷脂复合物低剂量组大鼠血清和肝组织MDA含量明显低于模型组(P＜0.05),血清和肝组织GSH-PX活性明显高于模型组(P＜0.05).与模型组比较,原花青素磷脂复合物中剂量组和高剂量组大鼠血清和肝组织中SOD、GSH-PX活性及GSH含量较模型组显著升高(P＜0.05,P＜0.01),MDA和蛋白质羰基含量明显降低(P＜0.05,P＜0.01).结论 葡萄籽提取物原花青素磷脂复合物具有显著地抗氧化作用.
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葡萄籽提取物对前列腺癌PC-3细胞的生长抑制作用
目的:观察葡萄籽提取物(GSE)对前列腺癌PC-3细胞的生长抑制作用. 方法:经预试选用不同浓度(100、200、300μg/ml)的GSE分别作用PC-3细胞24、48、72 h,以原代培养的1～3日龄SD大鼠肾细胞作为正常对照;采用四唑氮蓝(MTT)显色法检测GSE对PC-3细胞和SD大鼠肾细胞的生长抑制作用. 结果:GSE以浓度和时间依赖性方式抑制PC-3细胞生长(P<0.01),对原代培养SD大鼠肾细胞生长仅有轻度抑制作用. 结论:GSE可抑制前列腺癌PC-3细胞生长,有可能成为治疗前列腺癌的一种新药物.
关键词： 葡萄籽提取物 前列腺肿瘤 前列腺癌PC-3细胞 原代培养肾细胞 大鼠 -
葡萄籽提取物对前列腺癌PC-3细胞形态结构的影响
目的:观察葡萄籽提取物(GSE)对前列腺癌PC-3细胞形态结构的影响. 方法:采用相差显微镜、HE染色和透射电镜观察不同浓度(100、200、300μg/ml)GSE与PC-3细胞作用24、48和72 h后细胞形态结构的改变.结果:对照组PC-3细胞在相差显微镜下可观察到细胞呈不规则梭形爬壁生长,贴壁牢固,折光性强;HE染色后光镜下观察显示细胞呈梭形,核规整,染成均一蓝色;透射电镜观察结果显示对照组PC-3细胞有丰富的微绒毛,细胞质内线粒体完整,线粒体嵴清晰,内质网无明显扩张,胞质、胞核无水肿,核膜、质膜完整.采用不同浓度的GSE作用24～72 h后,相差显微镜下可见PC-3细胞变圆、变小,细胞膜透亮,高浓度组(300μg/ml GSE作用72 h)出现悬浮细胞,表明细胞分裂减少,生长受到抑制;光镜下见PC-3细胞核质比增大,呈多核、巨核,异染色质增多,细胞轮廓模糊.电镜显示GSE作用后PC-3细胞微绒毛结构多数消失,细胞萎缩,胞内出现大量的空泡、染色质凝集、核膜皱缩和核下出现微小空泡等坏死和凋亡的形态特征. 结论:GSE可造成PC-3细胞形态结构改变,并诱导PC-3细胞凋亡与坏死,其具体作用机制有待进一步研究.
关键词： 葡萄籽提取物 前列腺癌PC-3细胞 相差显微镜 HE染色 透射电镜 -
高效液相色谱法同时测定葡萄籽提取物中儿茶素、原花青素B1和原花青素B2的含量﹡
目的：建立高效液相色谱法同时测定葡萄籽提取物中儿茶素、原花青素B1和原花青素B2的含量。方法色谱柱为Zorbax SB C18，流动相为乙腈－0．5％冰醋酸溶液（梯度洗脱），检测波长为278 nm，柱温为35℃，流速为1．0 ml／min。结果儿茶素、原花青素B1和原花青素B2的质量浓度分别在0．99～66．0（r＝0．9999）、0．774～51．6（r＝0．9998）、1．44～96．0（r＝0．9999）mg／L范围内呈良好的线性关系，精密度试验及重复性、稳定性试验的相对标准偏差（RSD）均小于3％，平均加样回收率分别为99．48％、95．95％、99．14％，RSD 分别为0．90％、0．91％、2．72％（n＝6）。结论本方法经验证，可用于葡萄籽提取物中儿茶素、原花青素B1和原花青素B2含量的测定。
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葡萄籽提取物通过抑制Survivin的表达而抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖
目的 观察GSE对乳腺癌细胞增殖的影响及其作用的分子信号途径,为寻找新的乳腺癌临床治疗药物奠定一定的理论基础.方法 倒置显微镜观察不同浓度GSE作用后MCF-7细胞生长的形态学变化;PI单染后流式细胞仪检测MCF-7细胞的周期改变;半定量RT-PCR观察Survivin mRNA的表达;Western blot检测Survivin和Caspase-3的蛋白表达变化;荧光素酶试剂盒检测Survivin核心启动子的活性;半定量RT-PCR观察与Survivin核心启动子活性相关的转录因子Sp1、E2F-1和HIF-1α的表达变化.结果 经GSE作用24 h后,MCF-7细胞形态发生改变,细胞变圆、脱壁,并聚集成团;细胞生长周期发生改变,细胞阻滞于S期,G2/M期细胞明显减少;Survivin mRNA表达降低,Survivin蛋白表达减少;Caspase-3蛋白有活性片段产生;Survivin核心启动子活性明显降低,与其活性相关的转录因子Sp1、HIF-1α mRNA表达降低,E2F-1 mRNA表达升高.结论 GSE通过调节Survivin核心启动子活性相关转录因子的表达而抑制Survivin核心启动子的活性,下调Survivin基因的表达同时激活Caspase-3蛋白的活性,抑制了乳腺癌MCF-7细胞的生长,同时可能还诱导了肿瘤细胞的凋亡.
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葡萄籽提取物抑制乳腺癌细胞生长的实验研究
目的:探讨葡萄籽提取物(grape seed extact,GSE)抑制乳腺癌细胞生长的分子机制.方法:利用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测GSE对乳腺癌细胞的抑制作用,并筛选合适的GSE实验浓度;流式细胞术检测GSE对乳腺癌细胞内活性氧(ROS)产生的影响;半定量RT-PCR法检测肿瘤细胞中肿瘤相关基因Bcl-2和Bax表达的水平.结果:GSE抑制乳腺癌细胞的生长,作用具有剂量依赖性(P<0.01),IC50为100 μg/ml;GSE降低肿瘤细胞内ROS的产生;GSE能减少乳腺癌细胞中Bcl-2基因的表达,对Bax基因无影响,其Bcl-2/Bax值显著降低(P<0.01).结论:GSE抑制乳腺癌细胞生长,可能是通过降低ROS的产生,减少相关基因Bcl-2的表达水平,进而降低Bcl-2/Bax值而实现的.
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不同剂量葡萄籽提取物抗氧化能力的人群试验
目的 研究不同剂量的葡萄籽提取物软胶囊对人体抗氧化能力的影响.方法 选择60～65岁的健康志愿者28人,随机分为对照组和低、中、高3个剂量组,每组7人,对照组采用空白对照.3个剂量组受试者每天口服相当于原花青素50,100,150mg的葡萄籽提取物软胶囊,连续服用1个月.试验前后各测1次血清超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)活性和丙二醛(maleic dialdehyde,MDA)含量.结果 高剂量组SOD活性较试验前升高(P＜0.05)；中、高剂量组GSH-Px活性均高于试验前(P＜0.05,P＜0.01),高剂量组高于对照组(P＜0.05);中、高剂量组MDA含量均低于试验前(P＜0.05,P＜0.01),且低于对照组(P＜0.05,P＜0.01).结论 服用葡萄籽提取物软胶囊1个月后,中、高剂量组( 100,150 mg)具有显著的抗氧化作用.
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葡萄籽提取物抗氧化功能的实验研究
目的 研究葡萄籽提取物的抗氧化功能.方法 以SPF级雄性昆明种小鼠为实验动物,根据小鼠体重随机分为5组,每组10只,分别是空白组、模型组和低、中、高3个剂量组,空白组和模型组每天经口给予溶剂植物油,剂量组每天经口给予葡萄籽提取物,连续灌胃30 d,取血测抗氧化酶活性.此后除空白对照外,各组射线全身一次性照射5～8 Gy 60Coγ,照射后第4天处死动物,取肝组织测过氧脂质含量和抗氧化酶活性,比较各剂量组与模型组的差别.结果 经口给予小鼠葡萄籽提取物30 d,高、中剂量组小鼠血中超氧化物歧化酶(SOD)活性,以及高剂量组小鼠血中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和肝组织中GSH-Px、SOD活性均明显高于模型组,各剂量组小鼠肝中丙二醛(MDA)水平均明显低于模型组.结论 葡萄籽提取物有降脂质过氧化的作用,有抗氧化功能.
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葡萄籽提取物的化学成分及药理活性研究概况
葡萄是常见的水果和酿酒原料,中医认为其果、根和藤均可入药.葡萄籽提取物(grape seed extract,EGS)中含有大量多酚类、脂质类和矿物类等有益于人体的化学成分,对多种疾病有预防和治疗作用.现对葡萄籽提取物的化学成分及药理作用作一介绍.
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葡萄籽提取物的神奇功效
葡萄籽中含有一种非凡的生物类黄酮聚合物,在结构上属于原花色素类,称为复合型原花色素低聚物(oligomeric procyanidolic complex,OPC).它具有超强的抗氧化能力,其效力是维生素C的20倍,维生素E的50倍.
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葡萄籽提取物对人体抗氧化能力的影响
目的 研究葡萄籽提取物对人体抗氧化能力的影响.方法 选年龄在45～65岁的健康志愿者100人,根据血清超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)活性和丙二醛(maleic dialdehyde,MDA)含量,随机分为试食组和对照组,每组50人,试食组受试者每天口服葡萄籽提取物软胶囊1g,连续用3个月,对照组不服药.试验前后每人测一次血清中SOD、GSH-Px、MDA三项指标. 结果 试验后试食组血清SOD、GSH-PX显著高于对照组(P均《0.05),试食组血清MDA含量显著低于对照组(P《0.01);且试食组试验前后自身比较三项指标亦有统计学差异(P 均《0.01).结论 葡萄籽提取物具有明显的体内抗氧化活性.
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顶空气相色谱法测定葡萄籽提取物中9种残留溶剂
目的：建立顶空气相色谱法测定葡萄籽提取物中9种残留溶剂。方法采用 DB-WAX 毛细管色谱柱(30 m×0.45 mm，0.85μm)；柱温采用程序升温；柱头压为27.58 kPa；进样口温度220℃；检测器(FID)温度250℃；顶空进样，平衡温度80℃，平衡时间30 min；以 N，N-二甲基甲酰胺(DMF)为溶剂。结果9种残留溶剂间均能有效分离，苯、乙醇分别在0.04~0.3，100~750μg?mL－1浓度范围内线性关系良好，己烷、邻二甲苯、间二甲苯、对二甲苯、苯乙烯、甲苯、1，2-二乙基苯在0.4~3.0μg?mL－1浓度范围内线性关系良好(r≥0.9958)；平均回收率(n ＝3)分别为96.35％，97.08％，97.31％，89.93％，92.35％，90.65％，88.56％，93.84％，86.51％；RSD 分别为4.38％，2.16％，3.49％，4.19％，4.80％，4.83％，4.70％，5.00％，4.39％。结论葡萄籽提取物中均检测到了苯、苯乙烯和乙醇，含量符合《中华人民共和国药典》规定。该方法简便、快速、准确，可用于检测葡萄籽提取物中残留溶剂，为其质量控制提供科学依据。
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葡萄籽霜剂的制备
目的:葡萄籽提取物制成霜剂,进行处方筛选.方法:选取性质不同的的霜剂基质,进行霜剂制备,并检测霜剂的润滑度、细腻度以及稳定性等,考察霜剂质量.结果:以硬脂酸甘油酯2.5 g、硬脂酸4 g、白凡士林2.5 g、液体石蜡8 g为油相,十二烷基硫酸钠0.1 g、甘油5 g、三乙醇胺0.1 mL、纯化水55 mL为水相,月桂氮革酮作为透皮吸收促进剂制成的葡萄籽霜剂细腻度高、润滑度较好,显微镜检测其粒径分布在1.8 μm左右,颗粒形状规则、圆整、排列均匀.结论:佳处方制成的的葡萄籽霜剂稳定性好,吸收速度快.
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葡萄籽提取物对人骨肉瘤U2OS细胞抑制作用及机制的研究
目的：探讨葡萄籽提取物（GSE）对人骨肉瘤U2OS细胞的抑制作用及其作用机制。方法选用不同浓度的GSE作用于骨肉瘤U2OS细胞，MTT法检测其生长抑制作用；流式细胞仪检测细胞凋亡率；Transwell迁移实验检测细胞迁移能力；实时RT-PCR和Westernblot检测CDC20mRNA和蛋白的表达水平。结果MTT结果显示GSE对人骨肉瘤U2OS细胞的生长抑制作用呈浓度依赖性；流式细胞术显示GSE具有诱导U2OS细胞凋亡的作用；Transwell实验显示GSE可以抑制U2OS细胞的迁移作用；RT-PCR和Westernblot结果显示GSE可以下调CDC20mRNA和蛋白的表达水平。结论GSE具有抑制骨肉瘤U2OS细胞生长及迁移、诱导细胞凋亡的作用。GSE对骨肉瘤细胞的抑制作用可能与下调CDC20表达有关。
关键词： 葡萄籽提取物 人骨肉瘤U2OS细胞 Cdc20
