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miR-34a调控Kruppel样因子4参与脂多糖介导的脓毒症相关性肾损伤
目的 探讨微小RNA-34a (miR-34a)是否通过调控Kruppel样因子4(KLF4)参与脂多糖(LPS)介导的脓毒症相关性肾损伤.方法 30只健康雄性SD大鼠,体重180~200 g,按随机数字表法分为对照组和模型组,每组15只.模型组大鼠经尾静脉注射LPS 7.5 mg/kg诱导脓毒症相关性肾损伤模型;对照组大鼠则注射等量生理盐水.用多功能生化仪检测两组大鼠血肌酐(SCr)和尿素氮(BUN)含量;经苏木素-伊红(HE)染色后观察肾组织病理学改变;用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测血浆和肾组织miR-34a及KLF4的基因表达;用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测肾组织KLF4蛋白表达;用双荧光素酶报告基因分析法验证KLF4是否为miR-34a靶基因.结果 与对照组比较,模型组肾组织炎性细胞浸润增加,血SCr和BUN显著升高〔SCr(μmol/L):142.5±10.6比46.4±5.6,BUN(mmol/L):31.6±6.2比8.5±1.2,均P<0.01〕, 血浆和肾组织miR-34a基因表达明显增加(2 -ΔΔCt:血浆为2.26±0.11比1.14±0.05, 肾组织为4.23±0.12比1.12±0.04,均P<0.01),肾组织KLF4基因和蛋白表达明显降低〔基因表达(2 -ΔΔCt): 0.52±0.03比1.21±0.06, 蛋白表达(A值):0.72±0.03比1.05±0.04,均P<0.01〕,说明大鼠发生了肾损伤.Pearson相关性分析显示,血浆miR-34a mRNA表达与SCr和BUN均呈正相关(r值分别为0.678、0.721,均P<0.01).双荧光素酶报告基因系统证实,KLF4是miR-34a的靶基因.结论 miR-34a通过调控KLF4参与了LPS介导的脓毒症相关性肾损伤.
关键词： 微小RNA-34a Krüppel样因子4 脓毒症相关性肾损伤 脂多糖 -
miRNA-34a及Notch1对浸润性膀胱尿路上皮癌细胞转移潜能的影响
目的 探讨微小RNA (miRNA)-34a(miR-34a)及Notch1对浸润性膀胱尿路上皮癌(invasive bladder urothelial carcinoma,IBUC)细胞株转移潜能的影响.方法 体外培养IBUC细胞系T24与5637细胞,分别以miR-34a表达质粒与其对照质粒及小干扰RNA (siRNA) Notch1表达质粒与其对照质粒转染IBUC细胞珠T24与5637细胞,以便经miRNA载体过表达miRNA-34a及RNA干扰技术沉默Notch1.通过细胞转染实验、细胞增殖实验、细胞迁移实验以及细胞侵袭实验研究抑癌因子miR-34a及沉默癌基因Notch1对IBUC细胞转移潜能的影响.结果 miR-34a表达质粒与siRNA Notch1表达质粒的转染结果:转染miR-34a后,T24细胞与5637细胞的miR-34a表达均显著增高,分别为转染对照质粒的T24细胞与5637细胞的10.69倍与14.27倍(P均＜0.01);转染si-Notch1后,Notch1 蛋白的表达水平下降;MTS法检测结果显示,转染miR-34a后及转染si-Notch1后,T24及5637细胞的增殖均受到明显抑制,增殖速率均减慢,(P均＜0.01);转染miR-34a的T24与5637细胞迁移细胞与侵袭细胞数量均减少,同株细胞的组间计数比较差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).结论 在IBUC的T24与5637细胞株中,过表达miR-34a与沉默Notch1均能抑制T24与5637两种细胞株的迁移、侵袭能力,依据我们前期实验的结果推测,在IBUC中,miR-34a可靶向调节Notch1继而对细胞的迁移、侵袭发挥抑制作用.miR-34a有望作为一个新的肿瘤抑制因子,为IBUC的早期诊疗及预后评价提供理论参考.
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胶质瘤中miR-34a靶向作用于MAPK13mRNA并抑制其表达
目的 预测并验证miR-34a与促分裂原活化蛋白激酶13( MAPK13)的靶向作用关系,寻找胶质瘤基因治疗的新方法.方法 将miR-34a相似物转染入胶质瘤细胞A172中,实时定量PCR检测miR-34a在胶质瘤中的表达.目的基因的mRNA水平用实时定量PCR来评估,蛋白水平分别用荧光素酶试验和蛋白印迹来评估.miR-34a与目的基因3'非翻译区(3' UTR)的结合用MAPK13报告实验确认.结果 miR-34a相似物转染入胶质瘤细胞A172后在A172细胞中大量表达,实时定量PCR、蛋白印迹和免疫荧光证明miR-34a降低MAPK13的表达量,MAPK13荧光素酶报告实验显示,MAPK13荧光素酶活性被miR-34a降低.结论 miR-34a通过与MAPK13 3' UTR区的特异结合作用发挥对胶质瘤责任基因MAPK13的靶向沉默作用,可能成为未来胶质瘤基因治疗的新选择.
关键词： 微小RNA-34a 丝裂原活化蛋白激酶13 神经胶质瘤 基因治疗 -
MiR-34a对JAR细胞自噬影响的机制
目的 探讨miR-34a对人胎盘绒毛癌细胞JAR细胞自噬影响的机制.方法 选取JAR细胞,随机分为miR-34a模拟物组(转染miR-34a模拟物)、NC组(转染模拟物阴性对照)、miR-34a抑制物组(转染miR-34a抑制物)、INC组(转染抑制物阴性对照)、空白对照组(只加Lipofectamine 2000)、缺氧组(300 μmol/L氯化钻处理)和正常组(未经氯化钴处理).采用Real time PCR法检测各组miR-34a及HMGB1 mRNA表达,Western blotting法检测各组HMGB1和LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达,透射电镜检测各组细胞中自噬小体形成情况.结果 miR-34a模拟物组中HMGB1 mRNA和蛋白表达水平较NC组降低(P＜0.05),miR-34a抑制物组中HMGB1 mRNA和蛋白表达较INC组高(P＜0.05).缺氧组中HMGB1和LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达较正常组升高.缺氧处理后miR-34a模拟物组中HMGB1和LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白的相对表达量较INC组降低(P＜0.05),miR-34a抑制物组中HMGB1和LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白的相对表达量较INC组升高(P＜0.05).透射电镜结果显示,缺氧组自噬小体的数量较正常组明显增加(P＜0.05),缺氧处理后miR-34a模拟物组细胞中自噬小泡数量较NC组减少(P＜0.05),miR-34a抑制物组细胞中自噬小泡数量较INC组增加(P＜0.05).结论 miR-34a可能通过抑制HMGB1表达影响滋养细胞的自噬.
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miR-34a靶向调控Sirtuin 1表达对食管鳞癌细胞侵袭、转移的影响
目的 探讨miR-34a靶向调控去乙酰化酶1(Sirtuin 1)表达对食管鳞癌细胞侵袭、转移的影响.方法 采用miRNAs靶标预测软件、TargetScanHuman5.1生物在线工具预测Sirtuin 1可能是miR-34a的靶基因.将体外培养的人食管鳞癌细胞EC9706分别转染miR-34a mimic(EC9706/miR-34a组)、miR-34a scramble(EC9706/scramble组),转染48 h后收集细胞,采用Western blotting法检测 Sirtuin 1蛋白表达、Transwell 侵袭试验检测穿膜细胞数、细胞划痕实验检测细胞划痕愈合率.将裸鼠随机分为对照组和miR-34a组,分别经尾静脉注射转染miR-34a scramble和转染miR-34a agomir的EC9706细胞悬液,接种8周后处死裸鼠,取出双肺,计数肺转移瘤数量.结果 EC9706/miR-34a组及EC9706/scramble组细胞Sirtuin 1蛋白相对表达量分别为0.75±0.07、1.90±0.06,穿膜细胞数分别为(123.00±8.89)、(203.33±5.86)个,细胞划痕愈合率分别为(33.67±2.08)%、(64.00±2.65)%,两组比较P均<0.01.miR-34a组和对照组裸鼠形成肺转移瘤分别为(4.67±0.82)、(8.83±1.17)个,两组比较P<0.01.结论 Sirtuin 1是 miR-34a的靶基因.miR-34a通过靶向抑制Sirtuin 1蛋白表达抑制食管鳞癌EC970细胞的侵袭、转移.
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miR-34a/SIRT1在H2O2诱导人晶状体上皮细胞氧化应激中的表达
目的 观察微小RNA-34a(microRNA-34a,miR-34a)和沉默信息调节因子1(silent information regulator 1,SIRT1)在不同浓度H2O2诱导的人晶状体上皮细胞(SRA01/04细胞)氧化应激中的表达变化.方法 用不同浓度的H2O2(0μmol·L-1、100 μmol·L-1、200 μmol·L-1、300 μmol·L-1、400 μmol·L-1)处理细胞24 h后,用CCK-8检测细胞存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡率和RT-PCR检测miR-34a/SIRT1的表达.结果 CCK-8检测结果显示:100～400 μmol·L-1 H2O2对SRA01/04细胞有增殖抑制作用,且呈剂量依赖关系,与0μmol·L-1 H202组相比差异均有统计学意义(均为P＜0.01);流式细胞仪凋亡检测结果显示:0μmol·L-1 H2O2组细胞凋亡率为(6.1±1.2)％;100 μmol·L-1、200μmol·L-1、300 μmol·L-1 H2O2组细胞凋亡率分别为(26.3±1.8)％、(32.5±2.2)％、(64.7±5.3)％,各组与0μmol·L-1H2O2组比较,差异均有统计学意义(均为P＜0.01).RT-PCR检测结果显示:不同浓度H2 O2处理SRA01/04细胞后,细胞中的miR-34a表达水平呈剂量依赖性升高,而SIRT1表达水平呈相应下降,与0μmol·L-1 H2O2组相比差异均有统计学意义(均为P ＜0.001).结论 在一定浓度H2O2诱导的人晶状体上皮细胞氧化应激中,miR-34a表达水平显著增加,而SIRT1表达水平显著下降.下调miR-34a表达可增加氧化应激人晶状体上皮细胞存活率.
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微小RNA-34a在乳腺癌组织的表达及其对乳腺癌细胞的生物学影响
目的 观察微小RNA(miRNA,miR)-34a在乳腺癌中的表达以及对乳腺癌细胞生长、迁移和侵袭能力的影响.方法 采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测乳腺癌组织和正常乳腺组织中miR-34a的表达水平,分析miR-34a的表达与乳腺癌患者临床病理特征的相关性.在乳腺癌细胞MDA-MB-453中转染miR-34a模拟物和miR-34a抑制物,RT-PCR法检测转染后的乳腺癌细胞株中miR-34a表达水平,细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测乳腺癌细胞的生长活性,Transwell法和细胞划痕实验分别检测乳腺癌细胞的迁移和侵袭能力.结果 miR-34a在乳腺癌组织和正常组织中的相对表达水平为0.433±0.059和1.040 ±0.072,两者差异有统计学意义(P＜0.05),且miR-34a的表达水平与乳腺癌患者的临床分期和淋巴结转移有关.转染miR-34a模拟物后乳腺癌细胞MDA-MB-231的生长活性显著降低,MDA-MB-231和MCF-7细胞的迁移能力[(35.1±2.0)％、(28.7±1.8)％]和侵袭能力(41.6 ±3.9、39.4±4.3)显著降低,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 miR-34a在乳腺癌中表达显著下调,其表达水平与乳腺癌患者的临床分期和淋巴结转移有关,过表达miR-34a可抑制乳腺癌细胞的生长、迁移和侵袭能力.
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微小RNA-34a靶向B细胞淋巴瘤/白血病-2促进高血压诱导血管损伤
目的 观察微小RNA(miRNA,miR)-34a在高血压患者血清中的表达及靶向B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)增殖凋亡的影响,探讨高血压诱导血管损伤的潜在机制.方法 收集2015年7月至2017年2月在山东大学附属省立医院治疗的98例高血压患者及65例健康者血清.实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测miR-34a在高血压患者及健康者血清中的表达;TargetScan预测miR-34a潜在靶基因;双荧光素酶报告实验检测miR-34a与bcl-2相互作用关系;Western blot和qPCR检测miR-34a对HUVECs细胞中bcl-2蛋白和mRNA表达影响;噻唑蓝(MTT)法和流式细胞仪检测miR-34a对HUVECs细胞增殖和凋亡影响.结果 与65例健康人(0.996±0.112)比较,98例高血压患者血清中miR-34a表达(2.432±0.201)显著增加(P＜0.05).TargetScan预测发现bcl-2是miR-34a潜在靶基因;与miR-NC比较(0.995±0.087),转染miR-34a后pmirGLO-bcl-2-WT荧光素酶活性(0.297 ±0.032)显著降低(P＜0.05);而pmirGLO-bcl-2-Mut荧光素酶活性(1.014±0.125)较miR-NC组(0.936±0.132)差异无统计学意义(P＞0.05).过表达miR-34a后HUVECs中bcl-2蛋白和mRNA表达(0.403 ±0.041、0.206±0.018)较空白(Blank)组(1.000±0.098、1.000±0.067)和miR-NC组(0.996±0.087、1.012±0.049)显著降低(P＜0.05);细胞增殖(48 h:0.269±0.021、72 h:0.324±0.028)较Blank组(48 h:0.324±0.025、72 h:0.458±0.044)和miR-NC组(48 h:0.335±0.028、72 h:0.469±0.051)显著降低(P＜0.05),细胞凋亡(23.54±2.65)较Blank组(6.45±0.42)和miR-NC组(7.32±0.54)显著增加(P＜0.05).结论 高血压患者血清中miR-34a普遍高表达,过表达miR-34a可通过靶向bcl-2抑制HUVECs细胞增殖,并促进细胞凋亡,可能是高血压患者血管损伤的潜在机制之一.
关键词： 微小RNA-34a B细胞淋巴瘤/白血病-2 高血压 血管损伤 -
微小RNA-34a在肝癌组织的表达及其临床意义
目的 探讨微小RNA(miRNA,miR)-34a在肝癌组织中表达及其与临床病理特征的关系.方法 应用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)技术检测59例肝癌及其癌旁组织中miR-34a的表达量,并分析miR-34a在不同组织中的表达差异及其与肝癌临床病理特征间的关系,探讨miR-34a在肝癌发生与进展中的重要作用.结果 肝癌组织中miR-34a的相对表达量(0.52±0.21)明显低于正常肝组织(5.57±1.48,P＜0.05),病理分级Ⅲ～Ⅳ级(0.32±0.12)和TNM分期Ⅲ～Ⅳ期(0.35±0.13)的肝癌患者组织中miR-34a的表达水平明显低于Ⅰ～Ⅱ级(0.69 ±0.22,0.72 ±0.19;P＜0.01).结论 miR-34a表达水平与肝癌发生发展及恶性程度密切相关.
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微小RNA-34a在结直肠癌患者血清及组织中的表达及其与E盒结合锌指蛋白2表达的相关性
目的 探讨微小RNA(miRNA,miR)-34a在结直肠癌患者血清及肿瘤组织中的表达及其与E盒结合锌指蛋白2(ZEB2)表达的相关性.方法 选取住院行手术治疗的结直肠癌患者50例,同时选取100例健康体检者作为对照组,利用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测结直肠癌患者和对照组血清中miR-34a表达,并检测肿瘤组织中miR-34a及ZEB2表达,利用Westernblot检测ZEB2蛋白在肿瘤组织中的表达.结果 miR-34a在结直肠癌患者血清中相对表达量为0.94±0.13,远低于对照组血清中相对表达量(1.48±0.52),差异有统计学意义(P＜0.05);miR-34a在结直肠癌组织中的相对表达量低于癌旁组织和正常结直肠组织,差异均有统计学意义(P＜0.05);miR-34a在结直肠癌患者血清和结直肠癌组织中的表达量均与淋巴结转移和远处转移有关(P＜0.05);ZEB2 mRNA和蛋白在结直肠癌组织中相对表达量均高于癌旁组织和正常结直肠组织,差异均有统计学意义(P＜0.05);Pearson相关分析显示,结直肠癌患者组织中miR-34a表达量与ZEB2蛋白表达量呈负相关(r=-0.301,P＜0.05).结论 miR-34a在结直肠癌患者血清及肿瘤组织中均呈低表达,可能通过负向调控ZEB2而实现对肿瘤细胞转移和侵袭的影响.
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微小RNA-34a基因沉默对软骨细胞凋亡的影响
目的 观察早期骨关节炎(OA)软骨细胞中微小RNA(miRNA)-34a以及凋亡细胞的变化,并应用miRNA-34a的抑制剂锁核苷酸(LNA-miRNA-34a)观察miRNA-34a沉默对软骨细胞miRNA-34a的表达和凋亡的影响.方法 建立6周兔早期OA模型,并分别获得正常(A组)、3周(B组)和6周(C组)软骨细胞,应用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)和免疫细胞化学等技术分析软骨细胞中miRNA-34a以及Ⅱ型胶原(Col2a1)、诱导型—氧化氮合酶(iNOS)的表达及其规律,同时采用原位末端转移酶标记染色法(TUNEL)观察细胞凋亡.转染LNA-miRNA-34a后再用同样方法获得上述各项结果并进行比较分析.结果 B组和C组软骨细胞中miRNA-34a的表达水平分别是A组的2.70倍和3.05倍;在转染LNA-miRNA-34a后,B组和C组miRNA-34a的表达降低了2.07倍和3.03倍.转染前,B组和C组iNOS的表达与A组比较分别增加了13.50倍和16.70倍,转染后B组和C组中iNOS表达与转染前比较分别降低了41.00％和37.00％;转染前B组和C组Col2a1的表达水平和A组比较,分别降低了46.80％和30.00％;转染后,Col2a1的表达和转染前比较,B组增加了2.00倍,而C组增加2.95倍;免疫组织化学染色结果显示,转染后B组和C组Col2a1阳性细胞增多,阳性染色增强,甲苯胺蓝和TUNEL染色显示凋亡细胞数显著减少.结论 早期OA软骨细胞miRNA-34a表达增加,LNA-miRNA-34a沉默miRNA-34a基因可以显著减少早期OA软骨细胞的凋亡.
关键词： 微小RNA-34a LNA-miRNA-34a 骨关节炎 凋亡 -
MiR-34a在牙周膜细胞成骨向分化中的作用
目的:探讨微小RNA-34a在牙周膜细胞成骨向分化中的作用.方法:体外分离培养人牙周膜细胞(hP-DLCs),取第3～6代用于实验.首先,对hPDLCs进行成骨诱导液处理,在3、7、14 d后利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-34a基因的表达变化.然后,构建慢病毒载体pCDH-pre-miR-34a和pCDH,将慢病毒载体感染hPDLCs,构建pre-miR-34a过表达细胞模型(hPDLCs/34a)和空载体对照细胞模型(hPDLCs/pC-DH),并诱导hPDLCs成骨分化3、7、14和21 d.分析成骨标志基因碱性磷酸酶(ALP)、Runt相关转录因子2(Runx2)、骨钙素(OCN)及骨涎蛋白(BSP)表达变化,ALP活性及钙化结节形成的茜素红染色情况.结果:hPDLCs经成骨分化诱导后,miR-34a基因表达在第3天开始明显升高,并呈逐渐增高趋势,差异均有统计学意义(P＜0.001).与hPDLCs/pCDH组相比,hPDLCs/34a组的ALP活性和茜素红染色均有明显减弱.qRT-PCR结果显示:hPDLCs/34a组的ALP表达量在成骨诱导7d时较hPDLCs/pCDH组降低(P＜0.05);Runx2、OCN及BSP表达量的差异在各时间点基本无统计学意义.结论:在体外条件下,miR-34a抑制人牙周膜细胞成骨向分化.
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低氧抑制miR-34a诱导的头颈鳞癌细胞的衰老
目的:探讨低氧下过表达miR-34a(microRNA-34a)对头颈鳞状细胞癌(HNSCC)细胞衰老的影响.方法:qRT-PCR检测39例HNSCC及对应的癌旁正常上皮中HIF-1α mRNA和miR-34a的表达.低氧培养UM-SCC-23、Fadu和Cal-27细胞0,6,12,18和24 h,qRT-PCR检测miR-34a的表达.构建稳定的miR-34a过表达细胞UM-SCC-23-pCDH-miR-34a(S-34a)和Fadu-pCDH-miR 34a(F34a)以及对照细胞UM SCC-23-pCDH-control(S-con)和Fadu-pCDH-control(F-con),MTT法检测其增殖.低氧下,β-gal染色法检测各时间点S-con、S-34a、F-con及F-34a的衰老.GraphPad Prism5软件进行统计分析.结果:在HIF-1α表达升高的组织样本中,80.0％的肿瘤组织miR-34a表达显著下降.在UM-SCC-23、Fadu、Cal-27细胞中,低氧显著抑制miR-34a的表达(P＜0.05),且具有时间依赖性.常氧下过表达miR-34a可明显抑制HNSCC的增殖并促进衰老(P＜0.05);低氧下miR-34a过表达细胞的衰老率随时间延长而降低(P＜0.05).结论:低氧可通过抑制miR-34a的表达,进而抑制miR-34a诱导的HNSCC细胞衰老.
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白藜芦醇调控miR-34a表达对骨肉瘤MG-63细胞 生长、侵袭和自噬的影响
目的:探讨白藜芦醇通过调控微小RNA-34a(miR-34a)表达对骨肉瘤MG-63细胞生长、侵袭和自噬的影响.方法:将骨肉瘤MG-63细胞分为对照组及10、20、40、60和80μmol/L白藜芦醇处理组.采用MTT法、Transwell小室和Western blot实验检测各组骨肉瘤细胞的活力、侵袭能力及自噬蛋白表达;RT-qPCR检测各组骨肉瘤细胞中miR-34a的表达.转染miR-34a模拟物(miR-34a mimic)及阴性对照(miR-34a NC)至骨肉瘤细胞,检测miR-34a mimic和miR-34a NC在白藜芦醇处理后对骨肉瘤细胞活力和侵袭能力的影响,Western blot检测自噬标志蛋白LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ和beclin-1的蛋白表达.结果:与对照组相比,不同浓度的白藜芦醇可抑制肿瘤细胞的活力和侵袭能力,促进自噬(P<0.05).白藜芦醇可上调肿瘤细胞中miR-34a的表达,并具有剂量依赖性(P<0.05),同时促使LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值升高,beclin-1蛋白表达量上调(P<0.05).miR-34a mimic可增加白藜芦醇对骨肉瘤细胞活力和侵袭能力的抑制,并进一步促进自噬.结论:白藜芦醇可能通过上调miR-34a表达抑制骨肉瘤MG-63细胞生长并促进其自噬.
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miR-34a对脂肪干细胞移植治疗跟腱炎的影响
目的:探讨微小RNA-34a(miR-34a)的表达对人脂肪干细胞(hADSCs)移植治疗大鼠跟腱炎的影响.方法:CCK-8法检测hADSCs被分别转染miR-34a mimic和miR-34a inhibitor 24 h、48 h、72 h和96 h后的细胞活力情况.注射胶原蛋白酶构建跟腱炎大鼠模型,建模后将大鼠随机分为5组:PBS注射对照组(PBS组)、hADSCs治疗组(hADSCs组)、转染阴性对照(NC)的hADSCs治疗组(hADSCs+NC组)、转染miR-34a mimics的hADSCs治疗组(hADSCs+miR-34a组)和转染anti-sense miR-34a的hADSCs治疗组(hADSCs+anti-miR-34a组).分离跟腱组织,检测跟腱组织的硬度、压力和大负荷拉力等生物力学指标;利用RT-qPCR检测miR-34a及I型胶原蛋白(col-lagen I)、scleraxis(Scx)和生腱蛋白C(tenascin C,TNC)mRNA的表达水平;Western blot测定collagen I、Scx和TNC蛋白表达水平.结果:在体外过表达和敲减miR-34a可分别抑制和促进hADSCs的活力;5组大鼠跟腱组织生物力学测定结果显示,与PBS组相比,hADSCs组大鼠跟腱组织硬度、压力和大负荷拉力显著提高;与hADSCs+NC组相比,hADSCs+miR-34a组和hADSCs+anti-miR-34a组分别显著降低和提高了上述生物力学指标.与PBS组相比,hADSCs组大鼠collagen I、Scx和TNC的mRNA和蛋白表达水平上调;与hADSCs+NC组相比,hADSCs+miR-34a组miR-34a的表达水平升高,collagen I、Scx和TNC的mRNA和蛋白表达水平降低,而hADSCs+anti-miR-34a逆转了上述趋势.结论:miR-34a通过调控脂肪干细胞活力和分化,影响跟腱炎的治疗效果.
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表没食子儿茶素没食子酸酯通过调控P53／miR－34a 抑制鼻咽癌细胞的增殖
目的：观察表没食子儿茶素没食子酸酯（ EGCG ）对鼻咽癌细胞增殖的影响，并以微小RNA－34 a （miR－34a）为靶点探讨其作用机制。方法：不同浓度的EGCG处理CNE－2Z细胞，CCK－8法、EdU染色法和平板克隆形成实验检测细胞增殖能力的改变；流式细胞术检测细胞周期分布的改变；Western blot 检测P53和Notch1蛋白水平的变化；real－time PCR检测miR－34a和Notch1 mRNA的表达。结果：EGCG处理后，CNE－2Z细胞的增殖受到明显抑制，克隆形成能力降低，细胞周期阻滞于G0／G1期，呈剂量依赖关系；随着EGCG浓度增高，P53和miR－34a的表达水平明显上调，而其下游Notch1 mRNA和蛋白的表达水平则明显下降。结论：EGCG可能通过调控P53／miR－34a／Notch1通路诱导细胞周期阻滞，抑制鼻咽癌细胞增殖。
关键词： 表没食子儿茶素没食子酸酯 鼻咽癌 P53 微小RNA-34a Notch1 -
微小RNA-34a通过靶向CD44调节膀胱癌细胞J82周期
目的：观察微小RNA-34a（miR-34a）对膀胱癌细胞J82周期的影响，并探索其中的机制。方法于J82中转染miR-34a前体或miR-34a抑制物并验证转染效率，结合此前研究报道和生物信息学预测miR-34a的靶点，后通过荧光素酶报告实验验证miR-34a靶标基因CD44，通过Western blot和实时定量PCR方法检测CD44及其周期相关蛋白及信使RNA表达水平的变化，利用流式细胞仪检测膀胱癌细胞J82周期的变化。结果 miR-34a在膀胱癌细胞J82和组织中表达下调，转染miR-34a前体和抑制物后，获得满意的转染效果；双荧光素酶报告实验证实miR-34a对CD44的3'UTR活性显著调节，并伴随相关周期相关因子表达水平变化，同时观测到其对膀胱癌细胞J82周期的影响。miR-34a mimics明显降低膀胱癌细胞J82中CD44的表达，miR-34a inhibitor明显上调膀胱癌细胞J82中CD44的表达；CD44可以部分回复mir-34a对膀胱癌细胞J82周期的影响。结论微小RNA-34a通过直接靶向CD44调节膀胱癌细胞J82周期的变化。
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microRN A-34a在大鼠膝骨关节炎模型中的功能研究
目的：探讨微小RNA‐34a（miR‐34a）在碘乙酸钠所致大鼠膝骨关节炎模型中的表达变化，并初步明确其功能。方法选取30只雄性Wistar大鼠，左侧膝盖不注射碘乙酸钠作为对照组，右侧膝盖注射碘乙酸钠作为模型组；造模完成后检测两组大鼠关节液内miR‐34a表达水平的变化；分离两组大鼠的膝关节软骨细胞并进行原代培养，敲低miR‐34a后，使用流式细胞仪测定细胞凋亡情况。结果模型组M akin评分为（5．09±1．35）分，对照组为（1．27±0．64）分，差异有统计学意义（ P＜0．05）。与对照组比较，模型组中miR‐34a在关节液和关节软骨细胞内的表达均升高，差异均有统计学意义（P＜0．05）。将miR‐34a用它的反义互补片段敲低后，模型组大鼠关节软骨细胞的凋亡受到明显抑制（P＜0．05）。结论 miR‐34a在碘乙酸钠所致大鼠膝骨关节炎的关节液中表达升高，并且抑制miR‐34a的表达会降低关节炎大鼠的关节软骨细胞凋亡率。
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微小RNA-34a对沉默信息调节因子1的调节作用及该因子对严重烧伤大鼠早期心肌损伤的影响
目的 探讨微小RNA-34a对沉默信息调节因子1(SIRT1)的调节作用及SIRT1对严重烧伤大鼠早期心肌损伤的影响. 方法 (1)将24只SD大鼠按照随机数字表法(分组方法下同)分为假伤组、单纯烧伤组和SIRT1激动剂组,每组8只.单纯烧伤组、SIRT1激动剂组大鼠背部造成30％体表总面积Ⅲ度烫伤(以下称烧伤),假伤组大鼠背部致假伤.伤后即刻,假伤组、单纯烧伤组大鼠腹腔注射生理盐水50 mL/kg,SIRT1激动剂组大鼠腹腔注射生理盐水50 mL/kg+1 mg/mL白藜芦醇(50 mg/kg).伤后6h,抽取腹主动脉血制备血清,取心肌组织.(2)取12只SD大鼠乳鼠心肌细胞,分为微小RNA-34a模拟物对照组、微小RNA-34a模拟物组、微小RNA-34a抑制物对照组及微小RNA-34a抑制物组,分别用微小RNA-34a的模拟物对照、模拟物、抑制物对照、抑制物序列进行转染.实时荧光定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测心肌细胞微小RNA-34a表达,蛋白质印迹法检测心肌细胞SIRT1的蛋白表达.另取心肌细胞,分为微小RNA-34a抑制物对照+烧伤血清组、微小RNA-34a抑制物+烧伤血清组及微小RNA-34a抑制物+烧伤血清+EX527组.微小RNA-34a抑制物对照+烧伤血清组心肌细胞转染微小RNA-34a抑制物的对照序列,后2组心肌细胞转染微小RNA-34a抑制物序列.转染48 h,微小RNA-34a抑制物+烧伤血清+EX527组心肌细胞用含体积分数10％的单纯烧伤组大鼠血清+终物质的量浓度为1 mol/L EX527的DMEM培养液培养6h,其余2组心肌细胞用含体积分数10％的单纯烧伤组大鼠血清的DMEM培养液培养.蛋白质印迹法检测心肌细胞SIRT1及剪切型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3、Bax的蛋白表达.(3)取来自(1)的心肌组织,实时荧光定量RT-PCR法检测假伤组和单纯烧伤组大鼠心肌组织中微小RNA-34a及SIRT1的mRNA表达;生物图像导航仪下观察假伤组、单纯烧伤组和SIRT1激动剂组大鼠心肌组织形态;实时荧光定量RT-PCR法检测假伤组、单纯烧伤组和SIRT1激动剂组大鼠心肌组织中白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的mRNA表达;蛋白质印迹法检测假伤组、单纯烧伤组和SIRT1激动剂组大鼠心肌组织剪切型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3和Bax的蛋白表达.对数据行单因素方差分析及LSD检验. 结果 (1)转染48 h后,微小RNA-34a模拟物组心肌细胞微小RNA-34a的表达量为4.67±0.92,显著高于微小RNA-34a模拟物对照组的1.03 ±0.04(P＜0.01);微小RNA-34a模拟物组心肌细胞SIRT1的蛋白表达量为0.35 ±0.06,显著低于微小RNA-34a模拟物对照组的1.12±0.11(P＜0.01).转染48 h后,微小RNA-34a抑制物组心肌细胞微小RNA-34a表达量为0.26 ±0.07,低于微小RNA-34a抑制物对照组的1.33±0.07(P＜0.01);微小RNA-34a抑制物对照组心肌细胞SIRT1的蛋白表达量为1.12 ±0.16,显著低于微小RNA-34a抑制物组的1.74±0.34(P＜0.01).培养6h后,与微小RNA-34a抑制物对照+烧伤血清组比较,微小RNA-34a抑制物+烧伤血清组心肌细胞SIRT1蛋白表达水平显著升高(P＜0.05),剪切型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3、Bax蛋白表达水平显著降低(P＜0.05).与微小RNA-34a抑制物+烧伤血清组比较,微小RNA-34a抑制物+烧伤血清+EX527组心肌细胞SIRT1的蛋白表达水平差异无统计学意义(P＞0.05);剪切型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3、Bax蛋白表达水平显著升高(P＜0.05).(2)伤后6h,与假伤组比较,单纯烧伤组大鼠心肌组织微小RNA-34a表达显著升高(P＜0.01);SIRT1的mRNA表达量明显降低(P＜0.01).伤后6h,假伤组大鼠心肌细胞排列整齐,细胞核形态正常,未见炎性细胞浸润;单纯烧伤组大鼠心肌细胞排列紊乱,细胞核消失或形态异常,炎性细胞浸润明显;SIRT1激动剂组大鼠心肌细胞排列整齐,细胞核形态正常,少量炎性细胞浸润.伤后6h,与单纯烧伤组比较,假伤组、SIRT1激动剂组大鼠心肌组织IL-1β、TNF-α的mRNA表达量及剪切型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3和Bax蛋白水平显著降低(P＜0.01). 结论 严重烧伤大鼠早期心肌组织微小RNA-34a表达升高,导致SIRT1表达降低,IL-1β、TNF-α及剪切型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3、Bax表达升高,心肌损伤明显.SIRT1活化后,可通过降低IL-1β、TNF-α及剪切型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3、Bax的表达,减轻大鼠严重烧伤早期诱发的心肌损伤.
