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EZH2基因在子宫颈鳞状细胞癌中的表达及其意义
目的 探讨EZH2基因在子宫颈鳞状细胞癌(简称:鳞癌)组织中的表达及其临床意义.方法 采用反转录-聚合酶链反应( RT-PCR)方法检测21例正常子宫颈组织、27例子宫颈上皮内瘤变( CIN)及48例子宫颈鳞癌组织中EZH2 mRNA的表达,并分析EZH2与各临床病理参数之间的关系.结果 EZH2 mRNA在子宫颈鳞癌中的表达为(1.67±0.01),明显高于正常子宫颈组织(0)和CIN组织(0.36±0.02)(均P＜ 0.01);EZH2mRNA在子宫颈鳞癌中表达与患者年龄无明显相关性(P＞0.05),而与组织学分期、临床病理分期、浸润深度及淋巴结转移有显著相关性(均P＜ 0.01).结论 EZH2在子宫颈鳞癌中高表达,提示其在子宫颈鳞癌发生、发展过程中可能起重要作用,有可能成为子宫颈鳞癌一种新的肿瘤标志物.
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EZH2、Ki-67在成釉细胞瘤中的表达及其临床意义
目的 研究EZH2、Ki-67在成釉细胞瘤与正常口腔黏膜中的表达及两者之间的关系.方法 采用免疫组织化学SP法检测EZH2、Ki-67在50例成釉细胞瘤(30例原发、20例复发)和20例正常口腔黏膜中的表达.结果 EZH2在复发性成釉细胞瘤中蛋白阳性表达率为(36.25±7.24)％,高于原发性成釉细胞瘤的(25.26±4.28)％(P＜ 0.001).Ki-67在复发性成釉细胞瘤中蛋白阳性表达率为(34.96±5.28)％,高于原发性成釉细胞瘤的(29.68±3.27)％(P＜0.05).EZH2和Ki-67两者的表达呈正相关(P＜0.05),但EZH2和Ki-67的表达与肿瘤的大小及患者性别无关(P＞0.05).结论 成釉细胞瘤中存在EZH2和Ki-67的高表达,在成釉细胞瘤的发生、发展中起关键作用,与其复发有关,并可作为判定其预后的参考指标.联合检测EZH2和Ki-67蛋白的表达有助于为成釉细胞瘤的进程、复发的可能及其预后判断提供临床依据.
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EZH2和p53蛋白在前列腺癌中的表达及其临床意义
目的 探讨EZH2和p53蛋白在前列腺癌组织中的表达及其临床意义。方法通过组织芯片技术，应用EnVision免疫组织化学法检测48例术前无放化疗史的前列腺癌标本和15例良性前列腺增生组织中EZH2、p53蛋白的表达情况，并分析EZH2和p53蛋白在前列腺癌组织中的表达与临床病理特征关系以及两者间的相关性。结果前列腺癌组织中EZH2和p53蛋白的阳性表达率分别为87.50％(42/48)和33.33％(16/48)，明显高于良性前列腺增生组织13.33％(2/15)和0(0/15)(x2= 26.429、x2=5.058，均P＜ 0.05)；EZH2和p53蛋白在前列腺癌中的表达均与Gleason分级、TNM分期相关(P＜0.05)，与患者年龄、前列腺特异性抗原(PSA)水平无关(P＞0.05)。在Gleason分级中，Gleason＞6分组阳性表达率高于Gleason≤6分组；TNM分期中，T3-T4期阳性表达率高于T1-T2期。Spearman等级相关分析显示，前列腺癌组织中EZH2和p53蛋白的表达呈正相关性(r=0.294，P＜ 0.05)。结论EZH2和p53可能共同参与了前列腺癌的发生、发展过程，联合检测EZH2和p53蛋白有望成为预测前列腺癌恶性程度进展的参考指标。同时也可能为临床治疗前列腺癌提供新的理论依据。
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组蛋白甲基转移酶EZH2抑制p53活性
目的 探讨组蛋白甲基转移酶主要成员及新的癌基因EZH2与肿瘤发生的关键分子p53之间的相互作用关系.方法 利用肿瘤细胞系U2OS细胞,首先以免疫共沉淀方法进行了EZH2与p53的相互作用研究,进而采用蛋白质印迹及实时定量PCR方法对p53靶基因的表达进行了分析,后利用流式细胞术及细胞核染色法分析了EZH2对细胞周期的影响.结果 p53与EZH2具有相互作用,EZH2抑制p53下游靶基因p21、mdm2及puma的表达;流式细胞术提示EZH2抑制p53诱发的细胞周期阻滞,进而支持了EZH2能再抑制p53的活性.结论 本研究首次发现EZH2对p53转录活性及其生物学功能的抑制作用,丰富了p53调控网络,提出了EZH2参与肿瘤发生发展的新的分子机制,为肿瘤防治提供了新的研究线索.
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关键词：
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沉默EZH2诱导舌癌Tca-8113细胞凋亡及其对放射敏感性的影响
目的 探讨zeste基因增强子同源物2(enhancer of zeste homolog 2,EZH2)对舌鳞癌细胞凋亡及放射敏感性的影响.方法 以舌鳞癌Tca-8113细胞为研究对象,细胞转染EZH2小干扰RNA(EZH2 siRNA1、EZH2 siRNA2)及小干扰RNA阴性对照(siRNA-NC),RT-PCR和Western blot检测EZH2表达水平,筛选干扰效果较好的EZH2 siRNA2继续研究.将转染EZH2 siRNA2后的Tca-8113记为EZH2 siRNA2组,同时以不做处理的细胞为对照组,用8 Gy剂量照射转染siRNA对照组和EZH2 siRNA2细胞,并依次命名为照射组和联合组,四甲基偶氮唑盐(MTT)检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测信号转导与转录因子3(STAT3)、磷酸化的STAT3(p-STAT3)、活性Caspase-3(Cleaved Caspase-3)表达.siRNA-NC组和EZH2 siRNA2组细胞用0、2、4、6、8 Gy剂量照射处理后,细胞克隆实验检测放射敏感性.结果 EZH2 siRNA1、EZH2 siRNA2均能够干扰舌鳞癌细胞中EZH2的表达,且EZH2 siRNA2干扰效果好(tmRNA=8.660,PmRNA ＜0.01;t蛋白 =2.883,P蛋白＜0.05).下调EZH2 siRNA2组细胞凋亡率为(29.90 ±1.64)％,联合组凋亡率为(38.17±1.59)％,二者比较,差异有统计学意义(t=4.742,P＜0.05),同时下调EZH2还可以降低p-STAT3水平,促进Cleaved Caspase-3蛋白表达.干扰EZH2表达后Tca-8113细胞辐射增敏比为1.668.结论 干扰EZH2表达能够协同放疗促进舌鳞癌细胞凋亡,抑制舌鳞癌细胞增殖,增加舌鳞癌细胞放射敏感性.
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EZH2基因与慢性髓细胞白血病的相关性分析
目的 探讨EZH2基因与慢性髓细胞白血病(CML)的关系.方法 收集慢性髓细胞白血病(CML)40例;以非恶性血液病患者20例(ctrl组)作为对照.收集患者外周血标本,分离单个核细胞,提取RNA,采用实时荧光定量PCR(Real-Time PCR)分别检测慢性髓细胞白血病(CML)组和对照组EZH2基因表达情况.同样分离单个核细胞,分别裂解,提取蛋白,利用蛋白质印迹法(Western Blot)检测EZH2蛋白在各组中的表达,并与疾病的临床特征进行相关性分析.结果 与对照组相比,白血病组的EZH2基因表达水平明显上调(P＜0.05),且EZH2蛋白水平也明显升高.结论 EZH2基因与慢性髓细胞白血病(CML)的发生发展有密切关系.
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EZH2 shRNA对肾癌ACHN细胞增殖、凋亡及mTOR信号通路的影响
目的 探讨干扰沉默EZH2基因对肾癌ACHN细胞细胞株的增殖、凋亡及mTOR信号通路的影响.方法 设计针对EZH2基因干扰RNA(shRNA),经脂质体将转染EZH2 shRNA入肾癌ACHN细胞,应用RQ-PCR及Western blot鉴定其干扰效果,MTT法绘制细胞生长曲线,TUNEL检测细胞凋亡的变化,Western blot检测组蛋白H3K27三甲基化水平(H3K27me3),凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Procaspase-3及mTOR信号通路蛋白mTOR、 磷酸化mTOR蛋白(p-mTOR)、 磷酸化P70核糖体蛋白S6激酶(phosphorylation P70 ribosomal protein S6 kinase,p-P70S6K)的变化.结果 EZH2 shRNA转染ACHN细胞48 h后,EZH2的mRNA和蛋白表达均明显下降,差异有统计学意义(P<0.05),EZH2 shRNA组细胞增殖率明显低于Neg shRNA组和Control组(P<0.05),EZH2 shRNA组细胞的凋亡率为(45.57±5.26)％,而Neg shRNA组和Control组分别为(3.24±1.37)％、(1.65±0.94)％,差异有统计学意义(F=48.62,P<0.05).促进凋亡蛋白Bax表达增强,凋亡抑制蛋白Bcl-2表达减弱,凋亡执行蛋白前体Procaspase3减少.H3K27me3水平较Control组明显下降,而检测mTOR通路蛋白发现mTOR总蛋白未见明显下降,但是活性形式的磷酸化p-mTOR、p-P70S6K表达下降.结论 干扰沉默EZH2基因可抑制肾癌ACHN细胞增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能是调节组蛋白H3K27me3水平变化,特异性抑制mTOR信号通路的活性.
关键词： EZH2 H3K27me3 肾癌 RNA干扰mTOR信号通路 -
DNA甲基转移酶DNMT1与EZH2在急性髓系白血病中的表达及相关性研究
目的 探讨DNA甲基转移酶DNMT1与EZH2在急性髓系白血病(AML)中的表达及其相关性.方法 采用荧光定量PCR技术检测50例AML患者骨髓细胞中DNMT1与EZH2 mRNA的表达水平,分析DNMT1表达水平与临床特征和预后的关系以及与EZH2的相关性.结果 50例AML患者骨髓细胞中DNMT1 mRNA的表达显著高于30例正常供者的(2.72 ±0.73vs 0.89 ±0.27,P＜0.01);EZH2的表达水平也显著高于正常供者的(4.39±1.06,1.87±0.33,P＜0.01);EZH2与DNMT1的表达水平呈显著正相关(r=0.51,P=0.002);DNMT1表达水平与外周血幼稚细胞比例≥60％(P＜0.05)、WBC≥50×109/L(P＜0.05)显著相关;DNMT1高表达组患者中位生存时间15个月(95％ CI:9 ～ 19个月),显著低于DNMT1低表达组患者的32个月(95％CI:27 ～40个月)(P=0.006).结论 DNMT1和EZH2在AML患者中均高表达,两者表达水平呈正相关,DNMT1与AML患者预后不良相关.
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Ezrin和EZH2与肿瘤关系的研究进展
近年来随着分子生物学的高速发展以及对于肿瘤方面的不断深入研究，越来越多的与肿瘤相关联的蛋白和基因被人们所发现，并受到广泛的重视，而且也将这些蛋白基因高度应用于医学研究中。在目前众多的研究结果中Ezrin和EZH2是两个被深入研究的基因，但是目前对于Ezrin和EZH2的研究结论并不十分全面和具体，还存在一些其他因素。因此对于Ezrin和EZH2更为深入的研究是十分必要的，本文就Ezrin和EZH2的结构、功能与肿瘤的相关性做一简要综述便于日后进一步研究。
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Ezh2在全反式维甲酸诱导的P19神经细胞分化过程中的作用
目的 探讨组蛋白甲基转移酶Ezh2在P19神经细胞分化中的作用.方法 通过Western印迹检测全反式维甲酸 (RA)诱导TuJ1蛋白的表达;通过染色质免疫沉淀技术检测Ngn1基因启动子区Ezh2的结合与H3K27三甲基化的变化;通过实时定量RT-PCR检测RA诱导P19细胞分化后 Ezh 2 mRNA表达.结果 在RA诱导P19细胞中,Ezh2与H3K27me3在Ngn1启动子区的结合逐渐升高,并在诱导后第2天达到高峰,然后迅速降低,随后出现神经分化特异标志.结论 Ezh2在RA诱导的P19细胞早期产生一种抑制性的组蛋白修饰标志H3K27me3,通过避免Ngn1的过早表达,确保P19细胞的正常分化.
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EZH2基因在膀胱移行细胞癌组织的表达及其临床意义
目的 探讨EZH2基因在膀胱癌组织中的表达意义及其与临床病理的关系.方法 半定量PCR法检测EZH2 mRNA表达,免疫组化SP法检测EZH2蛋白表达,分析其与临床病理特征的关系.结果 肿瘤组织中EZH2 mRNA和EZH2蛋白的表达水平均明显高于正常移行上皮组织,并与临床分期、病理学分级有关:低分化肿瘤组织中EZH2表达高于高分化肿瘤组织(P＜0.05),浸润肿瘤EZH2的表达高于浅表肿瘤(P＜0.05).结论 膀胱癌组织EZH2基因表迭增加与膀胱移行上皮细胞恶性生长及不良预后有关.
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EZH2组蛋白甲基转移酶在肿瘤发生发展中的作用
PcG (Polycomb group)蛋白家族是一组在胚胎发育中起作用的基因调控因子,根据其功能不同分为两种蛋白质复合物,即PRC1和PRC2.PRC2是一个作用于组蛋白H3赖氨酸位点K27的高度保守的组蛋白甲基转移酶,EZH2是构成PRC2蛋白复合物的一个催化亚基.大部分肿瘤研究表明,EZH2过表达于多种癌组织,如前列腺癌和乳腺癌.虽然目前关于EZH2在肿瘤发展中的作用机制还不明确,但是EZH2介导的组蛋白甲基化与DNA甲基化间的功能联系提示两者所致的基因沉默机制在肿瘤抑制因子的缺失中起作用.阐述EZH2的基本分子生物功能及其与多种不同肿瘤组织之间的密切关系,讨论EZH2与其他表观遗传修饰酶间的关系以及EZH2过表达的结果及其在肿瘤形成中的作用.
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EZH2和p53在乳腺癌中的表达及相关性探讨
目的:研究乳腺癌中EZH2和p53表达及其相关性.方法:用免疫组织化学方法检测54例乳腺癌组织中EZH2和p53的表达情况,分析与临床病理特征之间的关系并探讨二者的相关性.结果:乳腺癌中EZH2表达阳性率48%(26/54),EZH2表达与肿瘤大小、淋巴结转移、病理分级、ER受体相关,而与年龄、临床分期、PR受体不相关.在p53阳性的25例乳腺癌患者中,16例EZH2表达阳性,表达率64%(16/25),p53阴性表达的29例中,9例EZH2表达阳性,表达率31%(9/29),两者比较有相关性(P=0.03).结论:EZH2在乳腺癌中表达增加且与p53相关,提示乳腺癌中EZH2与p53可能相互协调,促进乳腺肿瘤的发生发展.
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EZH2在急性髓系白血病病程中的表达和对预后判断的意义研究
目的：探讨DNA甲基转移酶（DNA methyltransferase，DNMT1）与EZH2在急性髓系白血病（acute myeloid leukemia，AML）中的表达及其相关性。方法：采用荧光定量PCR（fluorescence quantitative PCR，FQ-PCR）检测大连医科大学附属第二医院2014年1月至2015年1月50例初治AML患者骨髓细胞中DNMT1与EZH2 mRNA的表达水平，分析DNMT1表达水平与临床特征和预后的关系以及与EZH2的相关性。结果：50例AML患者骨髓细胞中DNMT1 mRNA的表达显著高于30例正常供者（2.72±0.73 vs.0.89±0.27，P<0.01）；EZH2的表达水平也显著高于正常供者（4.39±1.06 vs.1.87±0.33，P<0.01）；EZH2与DNMT1的表达水平呈显著正相关（r=0.51，P=0.002）；DNMT1表达水平与外周血幼稚细胞比例≥60%（P<0.05）、WBC≥50×109/L（P<0.05）呈显著相关；DNMT1高表达组患者中位生存时间15个月（95%CI为9～19个月），显著低于DNMT1低表达组患者的32个月（95%CI为27～40个月，P=0.006）。结论：DNMT1和EZH2在AML患者中均高表达，两者表达水平呈正相关，DNMT1与AML患者预后不良相关。
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敲低EZH2表达抑制人舌鳞状细胞癌侵袭迁移能力的研究
目的:探究Zeste同源增强子(enhancer of zeste homolog 2,EZH2)能否调控miR-200b/a/429的表达,进而影响人舌鳞状细胞癌的侵袭和转移.方法:利用小干扰RNA(siRNAs)敲低舌鳞状细胞癌SCC15和UM-1细胞系中EZH2的表达.Western blot法检测EZH2和上皮-间质转化(EMT)相关蛋白的表达水平.q-PCR检测敲低EZH2后miR-200b/a/429的表达水平.Transwell实验和划痕实验检测舌鳞癌细胞的侵袭和迁移能力.后通过免疫荧光实验观测细胞骨架的改变.免疫组织化学法和q-PCR检测人舌鳞状细胞癌标本中EZH2的表达.结果:siRNAs能够显著地敲低EZH2表达,进而使miR-200b/a/429表达水平升高;E-cadherin表达水平升高,而N-cadherin、Vimentin、MMP-2、MMP-9蛋白表达水平下降;si-EZH2组肿瘤细胞的侵袭和迁移能力明显降低.淋巴结转移阳性的人舌鳞状细胞癌标本中EZH2表达水平高于淋巴结转移阴性(P<0.01).结论:EZH2通过抑制miR-200b/a/429的表达水平,进而促进了人舌鳞状细胞癌的侵袭和迁移.
关键词： 人舌鳞状细胞癌 侵袭 转移 EZH2 miR-200b/a/429 -
EZH2抑制剂DZNEP影响人头颈部鳞癌增殖与凋亡的体内外研究
目的：探讨Zeste同源序列2的增强子（EZH2）的小分子抑制剂DZNEP抑制人头颈部鳞状细胞癌细胞Tb3.1增殖、诱导凋亡的效果与机制。方法：甲基噻唑基四唑（MTT）法测细胞对DZNEP的半数致死量（IC50）、细胞的增殖能力；流式细胞术检测细胞凋亡；平板克隆法检测细胞形成克隆能力；JC-1荧光探针染色法检测细胞线粒体膜电位；蛋白质印迹法（WB）检测EZH2、细胞增殖核抗原（Ki－67）、B细胞淋巴瘤2（Bcl－2、BAX）、活化型含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（CCASP－3）的表达。体内实验裸鼠皮下荷瘤模型，通过免疫组织化学染色及原位末端标记（TUNEL）法检测DZNEP对细胞增殖、凋亡的作用。结果：经DZNEP处理后，EZH2蛋白表达降低；MTT法检测DZNEP明显抑制鳞癌细胞Tb3．1的增殖，且具有浓度和时间依赖性；流式细胞术显示DZNEP可诱导细胞凋亡；平板克隆实验表明DZNEP能够明显抑制克隆形成能力，抑制细胞增殖；JC－1荧光探针染色法显示DZNEP可以改变细胞的线粒体膜电位；WB显示，DZNEP可增加促凋亡基因（CCASP－3、BAX）的表达，抑制Ki－67、Bcl－2的表达水平。体内实验观察结束时，DZNEP处理组肿瘤体积较对照组明显减小。免疫组织化学染色结果示，DZNEP组中BAX、CCASP－3表达增加，Ki－67、Bcl－2表达减少；TUNEL结果显示，DZNEP组比DMSO组肿瘤细胞凋亡指数上升。结论：DZNEP通过抑制EZH2表达在体外抑制Tb3.1细胞增殖并诱导凋亡；为进一步探讨EZH2参与人头颈部鳞状细胞癌发生发展的分子机制提供科学实验依据。
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涎腺黏液表皮样癌中Cox-2、EZH2的表达及意义
[目的]研究Cox-2和EZH2在涎腺黏液表皮样癌(MEC)中的表达和意义.[方法]应用免疫组化PV-6001二步法检测34例MEC、11例正常涎腺组织(NSG)中Cox-2、EZH2的表达,采用SPSS16.0软件进行统计学分析.[结果] Cox-2与EZH2在MEC中的表达明显高于NSG,差异有统计学意义(P＜0.01)；Cox-2在MEC高、中、低分化、复发及转移中的表达差异有统计学意义(P＜ 0.05,P＜ 0.01)；EZH2在MEC高、中与低分化、部位、复发、转移中的表达差异亦有统计学意义(P＜ 0.01,P＜0.05)；两者在MEC中的表达呈正相关(rs=0.680,P＜0.01).[结论]Cox-2、EZH2在MEC中高表达,且与MEC病理分型及复发、转移密切相关；EZH2的表达还与MEC的发生部位有关；联合检测Cox-2和EZH2有助于MEC的诊断、治疗及预后评估.
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食管鳞状细胞癌中Apaf-1基因启动子区甲基化状态及其与EZH2蛋白表达的关系
目的 探讨食管鳞状细胞癌(ESCC)中凋亡蛋白酶活化因子-1(Apaf-1)启动子区的甲基化状态及其与EZH2蛋白表达之间的相关性.方法 应用甲基化特异性PCR(MSP)方法检测128例食管鳞癌患者癌灶组织及相应癌旁组织的Apaf-1基因甲基化情况,应用免疫组织化学方法检测Apaf-1和EZH2的蛋白表达情况.结果 Apaf-1基因在食管鳞癌组织中的甲基化率为52.3％,显著高于癌旁正常组织的4.7％(P＜0.01),不同肿瘤TNM分期患者的Apaf-1基因甲基化率差异有统计学意义(P＜0.01).食管鳞癌组织Apaf-1蛋白表达阳性率为41.4％,显著低于相应癌旁正常组织的94.5％(P＜ 0.01).食管鳞癌组织EZH2蛋白表达阳性率为72.7％,显著高于相应癌旁正常组织的12.5％(P＜ 0.01),不同肿瘤TNM分期和组织分化程度患者的Apaf-1和EZH2蛋白阳性表达率差异有统计学意义(P＜0.01).食管鳞癌中Apaf-1基因甲基化与其蛋白阳性表达率呈负相关(r=-0.722),Apaf-1与EZH2的蛋白表达呈明显的负相关(r=-0.232).结论 Apaf-1和EZH2可能共同参与了食管鳞癌的发生发展,Apsf-1基因启动子区的异常高甲基化可能是食管鳞癌中此基因失活的重要原因之一.
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EZH2与VEGF-C在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义
目的 探讨宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)及宫颈癌组织中EZH2与VEGF-C的表送情况、临床意义及其相关性.方法 选取65例宫颈癌石蜡标本及90例CIN标本(其中CIN Ⅰ、CINⅡ、CINⅢ各30例)为观察组,同时随机选取30例正常宫颈组织为对照组.应用免疫组化SP法对宫颈癌、CIN组织和正常吉颈组织中的EZH2与VEGF-C的表达进行测定.结果 观察组EZH2、VEGF-C的表达阳性率高于对照组,差异有统计学意义;三者组间比较差异有统计学意义(P＜0.05).EZH2与VEGF-C的阳性表达均与CIN组织病理学分级显著相关,而与宫颈癌临床分期无显著相关性.相关性分析显示,EZH2与VEGF-C在宫颈癌中的表达呈正相关(P＜0.05).结论 EZH2与VEGF-C的异常表达与宫颈癌发生和进展密切相关,其机制可能与二者协同促进肿瘤脉管生成有关.
