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C-MET、Golph2、EZH2及DKK1蛋白在肝细胞肝癌中的表达及相关性
目的 探讨肝细胞生长因子受体(C-MET)、高尔基磷酸化蛋白2(Golph2)、组蛋白甲基转移酶(EZH2)及Dickkopf-1蛋白(DKK1)在原发性肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)及癌旁组织中的表达,进一步明确其在肿瘤诊断与进展中的作用.方法 采用免疫组化EnVision两步法对75例HCC及癌旁组织的组织芯片分别进行C-MET、Golph2、EZH2及DKK1检测,进一步分析其表达特点及与肿瘤分期、分级之间的相关性.结果 C-MET、Golph2、EZH2和DKK1在HCC组织中的阳性率分别为90.67％ (68/75)、93.33％ (70/75)、42.67％(32/75)和84.00％(63/75);在癌旁组织中的阳性率分别为88.00％(66/75)、89.33％ (67/75)、6.67％ (5/75)和68.00％(51/75).EZH2蛋白对HCC的诊断特异性达93.33％.C-MET、Golph2、EZH2、DKK1蛋白表达与HCC患者年龄、性别、肿瘤大径、结节数量及脉管侵犯均无明显相关性(P＞0.05).在不同分级HCC组织中C-MET、Golph2、EZH2表达差异具有统计学意义(P＜0.05);在不同分期HCC组织中C-MET、Golph2、EZH2、DKK1表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论 EZH2在HCC中的表达具有较高特异性,其可作为诊断HCC的辅助标记,但其敏感性略低.C-MET、Golph2、EZH2、DKK1表达与肿瘤分级具有一定的相关性,其表达与肿瘤进展无显著相关性.C-MET、Gol-ph2、DKK1三者之间具有相关性,共同促进HCC的进展.
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EZH2基因单核苷酸多态性对中国汉族人群散发性胃癌易感性的影响
目的 研究EZH2基因单核苷酸多态性与汉族人群散发性胃癌易感性关系以及胃癌临床病理特征与EZH2蛋白表达的关系.方法 采用基因测序仪对安徽地区311例胃癌患者及425例正常对照组血样EZH2 rs734004、rs734005、rs2072407、rs6464926和rs12670401多态性测序,用组织芯片技术和免疫组化检测238例同一来源胃癌组织和30例正常胃黏膜EZH2蛋白表达.结果 EZH2 rs12670401基因型CC以及rs6464926基因型TT在胃癌患者中比例较高,可增加胃癌发生风险(P=0.007,aOR=1.786,95% CI=1.172～2.723;P=0.013,aOR=1.721,95% CI=1.123～2.638).胃癌患者中EZH2杂合基因型rs2072407TC、rs734005TC、rs734004CG比例低于对照组,可降低胃癌发生风险.(P=0.034,aOR=0.712,95% CI=0.520～0.975;P=0.033,aOR=0.709,95% CI=0.518～0.972;P=0.035,aOR=0.711,95% CI=0.518～0.976).连锁不平衡分析LD进一步证实上述观察.胃癌不同组织学类型间以及不同临床参数间EZH2免疫组化染色强度差异无显著性.结论 EZH2基因单核苷酸多态性与中国汉民族人群散发性胃癌易感性相关.
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胃癌组织中EZH2和p53蛋白的表达及临床意义
目的 探讨EZH2和p53蛋白在胃癌组织中的表达,及其在胃癌发生、发展过程中的作用和临床病理学意义.方法 采用免疫组化EnVision法检测EZH2和p53蛋白在199例胃癌、25例高级别上皮内瘤变、24例低级别上皮内瘤变、46例肠上皮化生、17例慢性萎缩性胃炎和23例正常胃黏膜组织中的表达情况.结果 在胃癌和上皮内瘤变组织中EZH2蛋白表达明显高于肠上皮化生、慢性萎缩性胃炎和正常胃黏膜组织.胃癌组织中EZH2蛋白的表达在进展期胃癌高于早期胃癌,差异有统计学意义.EZH2蛋白在胃癌组织中的表达与肿瘤的大小、淋巴结转移、组织学分期和临床分期均有关;但与患者的性别、年龄、肿瘤的部位、肿瘤的类型和分化以及患者的病死率均无关.p53蛋白在胃癌组织中表达高,几乎不表达于其他病变和正常胃黏膜组织.p53表达水平与患者的年龄、性别、肿瘤大小、淋巴结转移、肿瘤分化、胃癌的类型和患者的生存情况相关.EZH2蛋白表达与p53蛋白表达之间呈正相关.结论 EZH2在胃癌中的表达增加与p53相关,提示胃癌中EZH2与p53可能相互协调,促进胃癌的发生、发展.
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前列腺癌中EZH2 mRNA及蛋白表达与细胞增殖的关系
目的 探讨EZH2 mRNA和蛋白在前列腺癌中的表达及其与肿瘤细胞增殖的关系.方法 通过组织芯片技术,应用原位杂交和免疫组化方法检测48例前列腺癌中EZH2 mRNA和蛋白的表达以及Ki-67增殖指数,同时检测15例良性前列腺增生组织(BPH)和12例高级别上皮内瘤变(HGPIN)中EZH2 mRNA和蛋白的表达.结果 前列腺癌组织中EZH2蛋白和mRNA阳性率分别为87.50%和81.25%,均高于BPH和HGPIN,差异有显著性(P<0.05).EZH2蛋白与mRNA表达之间差异无统计学意义(P>0.05).EZH2蛋白的表达与Gleason分级、TNM分期相关(P<0.05),与患者年龄和术前血清前列腺特异抗原(PSA)水平无关(P>0.05).EZH2 mRNA的表达与TNM分期相关(P<0.05),与患者年龄、术前PSA水平及Gleason分级无关(P>0.05).EZH2蛋白表达程度与Ki-67细胞增殖指数呈明显正相关(r=0.746,P<0.05).结论 EZH2 mRNA及其蛋白在前列腺癌中表达上调,通过促进肿瘤细胞增殖使得肿瘤发生、发展,有望成为预测前列腺癌恶性程度进程的参考指标.
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胃癌中HIF-1α、EZH2的表达及意义
目的 观察缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、EZH2在胃癌及癌旁组织中的表达及意义,分析二者的相关性及与胃癌临床病理参数的关系,明确其在判断胃癌患者预后中的意义.方法 采用免疫组化EnVision两步法检测150例手术切除胃癌及癌旁组织标本中HIF-1α、EZH2的表达.结果胃癌中HIF-1α、EZH2的阳性率分别为72.00%、63.30%,癌旁组织中的阳性率分别为26.00%和37.30%,胃癌组织中的表达显著高于癌旁组织(P<0.05).HIF-1α表达与胃癌淋巴结转移及TNM分期相关(P<0.05),与患者性别、年龄、肿块大小无明显相关;EZH2表达与肿瘤大小、肿瘤淋巴结转移、浸润深度及TNM分期密切相关(P<0.05);EZH2与HIF-1α表达呈正相关(rs=0.265,P=0.01).结论 胃癌组织中HIF-1α、EZH2表达与肿瘤的生物学特征均有一定关系,HIF-1α的激活可能会增强EZH2表达,联合检测二者的表达对预测肿瘤侵袭转移、判断预后具有一定价值.
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Bmi-1和EZH2在肝癌中的表达及其临床意义
多梳基因(polycomb group genes,PcG)家族是果蝇发育时维持同源异形基因稳定表现的重要因子,在胚胎发育、肿瘤发生和转移以及干细胞的维持中有着重要的作用[1].因此,PcG基因如Bmil、Pc2、Cbx7、EZH2的失调与癌细胞的异常增殖密切相关.本研究旨在用免疫组化的方法来检测Bmi-1和EZH2蛋白在原发性肝细胞性肝癌中的表达情况,并探讨其临床意义.
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沉默EZH2表达逆转人非小细胞肺癌顺铂耐药性
目的探讨沉默EZH2表达逆转人肺癌顺铂耐药性的作用及机制。方法以实时荧光定量 PCR 和 Western blot法检测人非小细胞肺癌A549及其顺铂耐药株A549/DDP细胞中EZH2的表达；以siRNA沉默EZH2的表达, MTT法检测细胞增殖力；流式细胞术检测细胞周期分布与凋亡；?-半乳糖苷酶染色法检测细胞的衰老； Western blot法检测细胞衰老通路 P14ARF、P16INK4a、P53、P21、CDK1、CDK2、Rb、E2F1和H3K27me3的表达。结果 A549/DDP细胞的EZH2在mRNA和蛋白质水平上的表达均明显高于A549细胞。沉默EZH2的表达并未引起细胞发生明显的凋亡现象,但G0/G1期比值明显升高(从0.53±0.08升到0.84±0.09, P <0.01),明显增加耐药株对顺铂的敏感性[IC50从(41.2±4.3)μmol·L-1降低到(19.4±3.3)μmol·L-1,P<0.01]。细胞呈衰老特征,细胞衰老通路的 P14ARF、P16INK4a、P53、P21、Rb表达上调,CDK1、CDK2、H3K27me3、E2F1表达下调。结论沉默EZH2的表达能诱导A549/DDP细胞衰老,逆转其对顺铂的耐药性,其机制与调节INK4a/ARF/Rb衰老通路有关。
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多梳基因蛋白EZH2对NK/T淋巴瘤细胞放化疗敏感性的影响
目的 探讨多梳基因蛋白EZH2对鼻腔NK/T淋巴瘤细胞放化疗敏感性的影响.方法 采用MTS实验测定NK/T淋巴瘤细胞株SNK6对吉西他滨的半数抑制浓度(IC50),利用线性二次模型拟合测定干扰EZH2对SNK6细胞的放疗增敏比(SER);通过流式细胞仪Annexin V/PI双染检测细胞凋亡,并用Western blot法检测凋亡蛋白caspase-3和 PARP的断裂带的水平;用免疫荧光检测EZH2干扰后对放射引起的DNA损伤的影响.结果 干扰EZH2降低吉西他滨的IC50约为2.54倍,并提高吉西他滨药物引起的凋亡.沉默EZH2能够提高SNK6细胞的放疗敏感性,SER=5.855;提高射线引起的细胞凋亡,并增加细胞凋亡蛋白断裂带的产生;增加射线诱导的DNA损伤.结论 EZH2可以提高NK/T淋巴瘤细胞的放化疗敏感性.
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miRNA-4465过表达对乳腺癌 MDA-MB-231细胞迁移侵袭的影响及其机制
目的：探讨 miRNA-4465的过表达对乳腺癌 MDA-MB-231细胞迁移侵袭能力的影响及机制。方法将 miR-NA-4465的模拟物（minics）转染入 MDA-MB-231细胞，通过实时定量 PCR 检测 miRNA-4465的表达变化；运用 Transwell实验检测转染后细胞迁移和侵袭能力的改变。采用生物信息学技术预测 miRNA-4465的潜在靶基因，并通过荧光报告载体实验及 Western blot 加以证实。结果与阴性对照组相比，转染 miRNA-4465 minics 组 miRNA-4465表达水平明显升高（P ＝0．001）。Transwell 迁移实验结果显示转染 miR-NA-4465 minics 组细胞迁移能力减弱（P ＝0．001）；Transwell侵袭实验结果显示转染 miRNA-4465 minics 组细胞侵袭能力降低（P ＝0．010）。通过生物信息学技术预测了 EZH2为miRNA-4465的潜在靶基因；荧光报告载体实验结果显示转染 miRNA-4465 minics ＋psiCHECK2-EZH23’UTR（野生型）后荧光素酶活性较转染阴性对照序列（NC）＋psiCHECK2-EZH23’UTR（野生型）降低66％（P ＝0．001）。此外将 miR-NA-4465转染入 MDA-MB-231细胞后 EZH2蛋白表达降低。结论 miRNA-4465能降低 MDA-MB-231细胞的迁移和侵袭能力，这个过程可能是通过调控 EZH2基因的表达实现的。
关键词： miRNA-4465 EZH2 乳腺肿瘤 转移 -
子宫内膜癌基因研究的新进展
子宫内膜癌的发生是一个多种因素相互博弈的过程,而显性癌基因激活和隐性抑癌基因失活又是这些因素重要部分.在分子水平上分析肿瘤的发生已成为研究热点,多基因表达及相关性分析来判断子宫内膜癌恶性程度及临床预后也已得到广泛应用.本文就相关基因KLK4、MDM2、EZH2、RUNX3、CHFR、Maspin在子宫内膜癌表达及其在肿瘤发生发展方面的研究进展作一综述.
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EZH2和P57在肾细胞癌中的表达及临床意义
目的 检测肾细胞癌(简称肾癌)组织中EZH2和P57的表达,探讨其与肾癌临床病理特征间的关系.方法 采用免疫组织化学法检测肾癌组织(n=64)和正常肾组织(n=12)中EZH2和P57的表达,分析EZH2和P57表达与肾癌临床病理特征间的关系及其二者表达的相关性.结果 正常肾组织EZH2及P57蛋白的阳性表达率分别为16.67％和75.00％;肾癌组织EZH2和P57的阳性表达率为78.13％和25.56％,肾癌组织EZH2阳性表达率高于正常肾组织,P57阳性表达率低于正常肾组织(均P＜0.01).EZH2阳性表达率随肾癌临床分期和病理分级升高而增加,且淋巴结转移组EZH2阳性表达水平明显高于无淋巴结转移组;P57阳性表达率随肾癌临床分期和病理分级升高而呈下降趋势,且淋巴结转移组P57表达水平低于无淋巴结转移组.二者差异表达与患者的性别及年龄均无关(均P＞0.05).相关性分析显示:P57和EZH2在肾癌组织中的表达呈显著负相关(r=-0.648,P＜0.05).结论 EZH2和P57异常表达与肾癌发生和临床进展关系密切,P57可能是EZH2的下游靶基因,但其靶向抑制的具体机制尚需要深入研究.
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EZH2在宫颈上皮内瘤变（CIN）及宫颈癌组织中的表达及意义
目的：探讨宫颈上皮内瘤变（ CIN）及宫颈癌组织中EZH2的表达及其意义。方法应用免疫组织化学S-P法，检测65例宫颈癌、90例CIN、30例正常宫颈组织中EZH2的表达水平。结果在正常宫颈组织、CIN组织、宫颈癌组织中，EZH2阳性表达率分别为13．3％（4／30）、CINⅠ组30．0％（9／30）、CINⅡ组40．0％（12／30）、CINⅢ组56．7％（17／30）和76．9％（50／65）。 CIN和宫颈癌中EZH2阳性表达率均明显高于正常宫颈组织，差异均具有统计学意义（ P＜0．001）。结论 EZH2参与了宫颈癌的发生、发展，可作为宫颈病变早期诊断的生物学指标，可提高宫颈癌的早期诊断率。
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EZH2与β-catenin在骨肉瘤中的研究进展
果蝇Zeste基因增强子人类同源物2(enhancer of zeste homolog 2,EZH2)是多梳抑制复合物(polycomb repressor complex 2,PRC2)的催化核心蛋白,能够催化组蛋白3的27位赖氨酸的三甲基化(H3 K27 me3),然后沉默与细胞分化、抑制增殖相关基因的表达,导致肿瘤的发生.β-连环蛋白(β-catenin)作为经典Wnt/β-catenin信号通路上关键的效应分子,在细胞的生长及分化中发挥着重要作用,影响着肿瘤的形成.骨肉瘤是青少年常见的原发性恶性骨肿瘤,以往的研究证实EZH2和β-catenin都参与其中,但是二者在它的发生发展中是否存在关联,尚无研究报道.本文就EZH2及β-catenin在骨肉瘤中的研究进展作一综述.
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EZH2抑制剂GSK126对激素性股骨头坏死骨髓间充质干细胞增殖的影响
[目的]研究Zeste基因增强子人类同源2(EZH2)选择性抑制剂GSK126对激素性股骨头坏死患者骨髓间充质干细胞(MSCs)增殖的影响.[方法]选取20例激素性股骨头坏死患者和20例股骨颈骨折患者,无菌条件下抽取患者股骨骨髓,密度梯度离心法体外分离培养MSCs,取第三代细胞实验.实验分为三组:ONFH组为骨坏死患者MSCs,GSK126组为ONFH的MSCs经GSK126干预72h,对照组为股骨颈骨折患者MSCs.MTT检测24、48、72 h三组细胞的增殖能力变化并确定GSK126的适浓度.测定各组细胞内活性氧(ROS)、线粒体膜电位(MMP)的表达水平.实时定量PCR检测PCNA、cyclinD1、cyclinE1表达,Western blot检测H3K27me3的表达.[结果]与对照组相比,ONFH组细胞增殖能力下降、ROS水平增高,MMP下降,差异有统计意义(P＜0.05).10 μmol/LGSK126干预培养72 h后(GSK 126组)能明显促进激素性骨坏死组MSCs增殖,降低ROS水平,提高MMP水平,与ONFH组间的差异有统计学意义(P＜0.05),但仍不及对照组,尽管差异无统计学意义(P＞0.05).实时定量PCR结果显示:ONFH组PCNA、cyclinD1、cyclinE1 mRNA水平明显低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);10 μmol/L GSK126处理后逆转上述mRNA,使其接近对照组水平(P＞0.05).Western blot示ONFH组H3K27me3蛋白水平显著高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05),GSK126处理后蛋白含量明显降低.[结论]H3K27me3修饰异常可能与激素性股骨头坏死的发病相关,10 μmol/L GSK126可逆转其表达,能显著促进MSCs增殖.
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EZH2表达与老年直肠癌患者预后的相关性研究
目的:探讨老年直肠癌(CRC)患者EZH2表达水平及与预后的关系.方法:收集2010年1～6月在本院接受手术治疗的36例老年CRC患者的病例资料.患者年龄65～83岁,平均年龄71.26±9.68岁.检测患者癌组织及癌旁组织中EZH2表达水平,分析癌组织中EZH2阳性表达的相关因素;根据癌组织中EZH2表达水平将患者分为高表达组与低表达组,随访1年评估患者预后,并分析与EZH2表达水平的相关性;随访5年对比两组患者5年无病情进展生存率及总生存率.结果:36例老年CRC患者癌组织中EZH2表达阳性率(69.44％)显著高于癌旁组织(38.89％,P＜0.01).EZH2阳性表达率与CRC患者年龄、病理分型、浸润程度、淋巴转移相关(P＜0.05);Logistic回归分析结果显示EZH2阳性表达是CRC淋巴转移的独立危险因素.随访1年EZH2低表达组QLQ-30生活质量评分显著高于EZH2高表达组(P＜0.01);EZH2表达水平与QLQ-30生活质量评分呈负相关性(r=-0.573,P＜0.01).EZH2低表达组患者5年无病情进展生存率为86.67％,5年总生存率为93.33％;EZH2高表达组患者5年无病情进展生存率为52.38％,5年总生存率为61.90％;EZH2低表达组5年无病情进展生存率及5年总生存率均明显优于EZH2高表达组(P＜0.05).结论:EZH2高表达与直肠癌病情进展密切相关,可作为老年患者预后生存质量、无进展生存时间及总生存时间的一项重要预测指标.
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microRNA let-7e 逆转人卵巢癌细胞顺铂耐药及其作用机制
目的：研究人类 microRNA let-7e(hsa-let-7e)在人卵巢癌顺铂耐药细胞中的表达及其作用机制。方法：采用实时荧光定量 PCR 法检测 let-7e 在卵巢癌亲本细胞株A2780及耐顺铂卵巢癌细胞 A2780/ CP 中的表达；采用实时荧光定量 PCR 法和 Western blot 法分别检测 A2780细胞和 A2780/ CP 细胞中果蝇 zeste 基因增强子同源物2(EZH2) mRNA 和蛋白的表达。将 let-7e 模拟物(mimics)及阴性对照(negative control,NC)转染A2780/ CP 细胞,采用实时荧光定量 PCR 和 Western blot 法分别检测 EZH2 mRNA 和蛋白的表达,MTT 法检测细胞的半数抑制浓度(IC50),台盼蓝染色实验检测经顺铂作用不同时间后的细胞存活率。结果：与 A2780细胞比较 A2780/ CP 细胞中 let-7e 呈低表达、EZH2 mRNA 和蛋白相对表达水平显著增高,差异均有统计学意义(P<0.05)。 A2780/ CP 细胞转染 let-7e mimics 后,EZH2 mRNA 和蛋白的相对表达水平较阴性对照组明显下降(P<0.05),细胞对顺铂的敏感性显著增强,其半数抑制浓度(IC50值)与阴性对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。顺铂作用于转染 let-7e mimics 的 A2780/ CP 细胞后,细胞的存活率较阴性对照组明显降低(P<0.05)。结论：let-7e 在卵巢癌耐药细胞 A2780/ CP 中异常低表达,上调其表达可部分逆转细胞耐药性。 let-7e 可能通过作用于靶蛋白 EZH2参与卵巢癌细胞顺铂耐药的发生和发展。
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慢病毒介导的EZH2靶向RNA干扰对人卵巢癌SKOV3细胞增殖的影响
目的:通过慢病毒介导的EZH2-shRNA干扰载体,沉默人卵巢癌SKOV3细胞中果蝇zeste基因的人类同源物(EZH2)的表达,探讨靶基因EZH2对卵巢癌细胞增殖的影响.方法:设计含EZH2基因序列的shRNA慢病毒干扰载体,转染人卵巢癌SKOV3细胞株；利用CCK-8比色法检测EZH2基因沉默后对SKOV3细胞增殖的影响；利用RTPCR、Western blot分别检测EZH2、PCNA mRNA及蛋白的表达情况.结果:EZH2-shRNA 载体感染SKOV3细胞后,可显著抑制SKOV3细胞生长(P＜0.05),并下调EZH2、PCNA mRNA和蛋白的表达(P均＜0.05),而在空白对照组和空载体转染组中,无抑制作用.结论:沉默EZH2基因可抑制人卵巢癌SKOV3细胞增殖,可能是一种新的基因治疗方法.
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表观遗传调控因子SNF5和EZH2在肿瘤发生发展中的研究进展
表观遗传调控在基因表达、DNA复制、修复和重组等重要过程中起着关键作用，表观遗传调控异常会引发多种疾病尤其是癌症。SNF5是SWI-SNF染色体重塑复合物的核心成分之一，具有强效抑癌作用。果蝇zeste基因增强子同源物2（EZH2）是目前与肿瘤关联密切且复杂的组蛋白甲基化酶，具有促癌功能。已有研究报道了表观遗传调控因子SNF5和EZH2在不同肿瘤发生发展中的作用及二者之间的相互关系。
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EZH2与肿瘤的关系
果蝇zeste基因增强子同源物2(EZH2)通过催化组蛋白H3第27位赖氨酸三甲基化抑制基因表达.在前列腺癌、乳腺癌、膀胱癌及胃癌等多种肿瘤中都有高表达,与肿瘤的恶性进程、侵袭性、转移能力关系密切.随着对其在肿瘤中分子功能、上下游调控机制和临床病理特点的深入了解,EZH2有望做为靶点,为肿瘤治疗提供新的途径.
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EZH2在子宫内膜癌中的表达
目的 探讨EZH2在子宫内膜癌组织中的表达及其与子宫内膜癌临床病理特征及预后的关系.方法 采用原位杂交及免疫组织化学SP法检测正常子宫内膜组织24例、子宫内膜增生组织26例及子宫内膜癌组织48例(包括局限性子宫内膜癌19例、弥漫性子宫内膜癌29例)中EZH2蛋白及EZH2 mRNA的表达.结果 EZH2蛋白及EZH2 mRNA在子宫内膜癌中的阳性率显著高于正常子宫内膜、子宫内膜增生症(P均＜0.05).子宫内膜癌浸润肌层不同深度、有无淋巴转移、不同临床分期、不同大体类型、不同分化程度之间EZH2蛋白及EZH2 mRNA阳性率均有统计学差异(P均＜0.05).多因素Logistic回归分析结果表明,EZH2表达只与淋巴转移、临床分级及肌层浸润显著相关(P均＜0.05).结论 EZH2基因的表达与子宫内膜癌的转移、临床分期有关.
