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siRNA 靶向沉默PcG蛋白EZH2对人胃癌细胞株 MKN45增殖和侵袭力的影响
PcG蛋白是一组转录抑制因子,其核心成分EZH2在胃癌组织中表达增高,并与胃癌的进展相关.目的:应用RNA干扰(RNAi)技术研究EZH2对人胃癌细胞株MKN45增殖和侵袭力的影响,从细胞水平探讨EZH2参与胃癌发生的机制.方法:使用EZH2小干扰RNA(siRNA)转染MKN45细胞,以实时逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹法检测EZH2 mRNA和蛋白表达,CCK-8(Cell Counting Kit-8)实验检测细胞增殖情况,流式细胞仪分析细胞周期,MatrigelTM侵袭实验检测细胞侵袭力.结果:EZH2 siRNA能有效抑制MKN45细胞的EZH2 mRNA和蛋白表达.与阴性对照siRNA组相比,EZH2 siRNA组MKN45细胞增殖抑制率为14.7%(P<0.05),侵袭能力显著降低[穿过Transwell小室膜细胞数:(38.5±3.4)个/HPF对(92.7±9.7)个/HPF, P<0.05),细胞周期阻滞于G0/G1和G2/M期.结论:EZH2 siRNA可抑制人胃癌细胞的增殖和侵袭力,证实EZH2通过促进细胞增殖和侵袭在胃癌发生中发挥作用.
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PcG蛋白EZH2与消化系肿瘤
PeG蛋白在控制胚胎发育、X染色质失活、基因组印迹、干细胞自我更新以及肿瘤的发生、发展中发挥重要作用.EZH2是PeG蛋白的核心成分,在多种消化系肿瘤中表达增高,并与肿瘤的进展和预后差相关.本文就PcG蛋白的结构、功能以及EZH2在消化系肿瘤中的作用及其机制作一综述.
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MicroRNA 101对乳腺癌细胞运动和迁移能力的影响
目的:探讨microRNA 101 (miR-101)的表达对乳腺癌细胞增殖、运动和迁移能力的影响,并初步分析miR-101影响乳腺癌细胞生物学行为的可能机制.方法:采用实时荧光定量PCR的方法检测miR-101在乳腺癌组织及乳腺癌细胞中的表达情况,再用脂质体介导转染的方法将miR-101模拟物及阴性对照转染人乳腺癌细胞株MDA-MB-231,通过细胞增殖实验(CCK8方法)、划痕实验和Transwell迁移实验检测细胞的增殖、运动、迁移能力.通过Western印迹方法分析miR-101发挥功能的可能机制.结果:与正常乳腺上皮细胞或癌旁组织相比,miR-101在乳腺癌细胞或乳腺癌组织中表达降低.体外增殖实验显示,过表达miR-101对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖无明显影响,但是能显著抑制细胞的运动和迁移能力(P＜0.001).Western印迹实验显示在外源性过表达miR-101模拟物的MDA-MB-231细胞中,EZH2的表达明显下降,而E-钙黏蛋白的表达升高.结论:miR-101的表达在乳腺癌组织和细胞中发生了下调.miR-101抑制乳腺癌细胞运动和迁移能力可能是通过靶向抑制EZH2,间接上调E-钙黏蛋白来实现.
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DZNep在肿瘤治疗中的研究进展
近年来,果蝇zeste基因增强子同源物2(enhancer of zeste homolog 2,EZH2)被认为是一种致癌基因,EZH2抑制剂DZNep(3-deazaneplanocin A)因其通过阻断EZH2途径对肿瘤发挥潜在的抗增殖和促凋亡作用而备受关注.DZNep是一个全新的染色质修饰药物,越来越多的证据表明DZNep参与肿瘤细胞增殖、凋亡、侵袭、转移及新生血管形成等病理生理过程.DZNep可能为肿瘤治疗提供新的途径.本文对近年来DZNep在肿瘤治疗中的研究进展进行综述.
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miRNA-32-5p对EZH2基因的靶向调控以及对口腔癌细胞CAL-27增殖的影响
目的:构建miR-32-5p慢病毒载体,研究其对EZH2基因的靶向调控作用以及对CAL-27细胞增殖作用的影响.方法:分别构建pSicoR-miR-32-5p及pMIR-Report-EZH2过表达载体,应用双荧光素酶报告基因系统、Western免疫印迹及实时定量荧光PCR方法验证miR-32-5p与EZH2的靶向调控关系,应用MTT法检测过表达miR-32-5p后对CAL-27细胞的增殖调节作用,采用SPSS20.0软件包对数据进行统计学分析.结果:成功构建了pSicoR-miR-32-5p及pMIR-Report-EZH2重组质粒,并证实miR-32-5p过表达可明显抑制EZH2的蛋白及mRNA的表达水平(P＜0.05);抑制miR-32-5p的表达,则明显上调EZH2的蛋白及mRNA的表达水平(P＜0.05);MTT结果显示,miR-32-5p可显著抑制CAL-27的增殖.结论:miR-32-5p可通过靶向作用于EZH2-3' UTR的特异序列,直接抑制EZH2基因的表达并调控CAL-27细胞的增殖.
关键词： miRNA-32-5p 口腔癌 EZH2 CAL-27 -
HOX转录反义RNA与EZH2分子在肿瘤中的研究进展
长链非编码RNA(long noncoding RNA,lncRNA)通过影响表观遗传修饰在多种肿瘤的发生发展中起到重要作用,HOX转录反义RNA(HOX transcript antisense RNA,HOTAIR)是其中研究较为深入的一种,其在多种肿瘤中的作用已明确.很多lncRNA包括HOTAIR可与多梳蛋白抑制复合物2(polycomb repress complex 2,PRC2)结合,组蛋白-赖氨酸N-甲基转移酶EZH2是PRC2中起催化作用的关键亚基,其介导的组蛋白H3甲基化作用与多种肿瘤的发生发展密切相关,同时HOTAIR与EZH2的相互作用关系已在多种肿瘤中被研究证实.本文对HOTAIR及EZH2在不同肿瘤中的作用及二者的相互关系进行综述,并探索二者在肿瘤中的研究应用前景.
关键词： HOX转录反义RNA EZH2 肿瘤 -
EZH2基因多态性与结直肠癌遗传易感性的关联性研究
目的 探讨EZH2(en-hancer of zeste homolog 2)基因单核苷酸多态性(SNPs)与结直肠癌(CRC)遗传易感性的相关性.方法 用病例-对照方法分析EZH2基因的2个SNPs位点(rs887569与rs1880357)在中南地区汉族人群中的分布.提取96例CRC患者与100例体检健康者的外周血DNA;用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性法(PCR-RFLP)检测EZH2基因型并计算相应等位基因频率;DNA测序验证基因分型结果.结果 CRC组与健康对照组年龄分布(t=0.693,P=0.489)与性别构成(x2=0.403,P=0.526)差异无统计学意义.CRC组与健康对照组EZH2基因rs887569位点与rs1880357位点基因频率分布均符合Hardy-Weinberg平衡(P均＞0.05),证明所观察的样本具有群体代表性.EZH2基因rs887569位点TT、CC和TC基因型(x2=1.531,P=0.465)及rs1880357位点GG、CC和GC基因型(x2=0.670,P=0.413)在CRC患者和健康对照者间分布差异无统计学意义.对等位基因而言,rs887569位点C＞T与rs1880357位点C＞G等位基因分布在CRC患者与健康对照者间差异亦无统计学意义(OR=0.875,95％ CI:0.488～1.566,P=0.667;OR =0.793,95％ CI:0.403～1.563,P=0.503).结论 EZH2基因rs887569与rs1880357 SNPs位点多态性可能与CRC发病风险无关.
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组织芯片在前列腺癌研究中的可靠性分析
目的 探讨前列腺癌组织芯片结果的可靠性. 方法 收集48例前列腺癌病例,构建成直径2.0mm的组织芯片,进行HE染色并重新评价Gleason得分,同时应用免疫组化、原位杂交技术分别检测EZH2,并对照常规石蜡组织切片结果,进行统计学分析. 结果 前列腺癌组织芯片Gleason评分与常规石蜡切片比较,两者总体符合率为89.58％.前列腺癌组织芯片与常规石蜡切片比较,免疫组化结果一致率为95.65％(Kappa=0.810);原位杂交结果一致率为90.90％(Kappa=0.727). 结论 采用规范的组织芯片制作程序,直径2.0 mm组织芯片上的组织样本可以反映原组织结构的信息,可作为一种可靠的、有代表性的高通量组织分子分析工具用于前列腺癌大样本、回顾性的临床病理学研究.
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混合型抗体EZH2/34βE12/p63在前列腺穿刺标本中的诊断意义
目的 探讨混合型抗体EZH2/34βE12/p63在不同前列腺病变穿刺标本中的表达及其意义. 方法 在一张切片上采用免疫组织化学方法同时检测EZH2、34βE12、p63在前列腺癌(PCa)、良性前列腺增生(BPH)、高度上皮内瘤变(HGPIN)、非典型腺瘤样增生(AAH)中的表达. 结果 52例PCa标本中,EZH2主要表达于前列腺腺上皮细胞核,阳性率为98.1%.60例BPH、10例HGPIN和14例AAH标本中,34βE12主要表达于前列腺基底细胞胞质,在上述病变中的阳性率分别为96.7%、100.0%和85.7%;p63主要表达于前列腺基底细胞胞核,在上述病变中的阳性率分别为98.3%、90.0%和92.9%.EZH2、34βE12和p63在PCa中表达与BPH、HGPIN、AAH中两两比较差异均有统计学意义(P<0.05). 结论 联合检测混合型抗体EZH2/34βE12/p63 3种免疫学指标,在前列腺穿刺标本中对PCa与其他病变的鉴别诊断具有一定参考价值.
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EZH2在前列腺癌中的表达及其与临床病理的关系
目的:探讨EZH2蛋白及其mRNA在前列腺癌中的表达以及两者与临床病理参数间的关系. 方法:通过组织芯片技术,运用免疫组化(EnVision法)和原位杂交方法分别检测48例前列腺癌中EZH2蛋白及其mRNA的表达,同时检测常规石蜡组织中15例良性前列腺增生组织和12例高级别上皮内瘤变组织中的EZH2蛋白及其mRNA的表达作为对照. 结果:EZH2蛋白和mRNA在前列腺癌中的阳性率(87.5%、81.25%)明显高于良性前列腺增生组织(13.33%、6.67%)和高级别上皮内瘤(16.67%、16.67%),差异有统计学意义(P<0.05).免疫组化显示,EZH2蛋白在Gleason≥7分组阳性表达率(96.67%)明显高于Gleason≤6分组(72.22%),差异有统计学意义(P<0.05).EZH2蛋白阳性表达率与TNM分期比较,T3～T4期(100%)明显高于T1～T2期(76.92%),亦有统计学意义(P<0.05),而EZH2蛋白表达与年龄和PSA无关(P>0.05).原位杂交显示,EZH2mRNA的阳性表达率,T3～T4期(100%)高于T1～T2期(85%),与TNM分期显著相关(P<0.05),而与年龄、PSA和Gleason分级无关(P>0.05).分段评价预后估计较好组与预后估计较差组,两组之间EZH2蛋白及其mRNA表达阳性率均有显著性差异(P<0.05). 结论:EZH2蛋白及其mRNA在前列腺癌中高表达,提示其在前列腺癌的发生、发展过程中可能起重要作用,有可能成为判定前列腺癌恶性程度进程和预后的参考指标.
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EZH2在肿瘤发生发展中的作用及其抑制剂的研究进展
Zeste增强子同源物2(EZH2)高表达于多种恶性肿瘤组织,它可以通过对组蛋白3第27位赖氨酸(H3K27)的甲基化实现对相关基因表达的调控,进而沉默抑癌基因.EZH2的功能与肿瘤的起始、化疗耐药、肿瘤细胞的远处转移及肿瘤干细胞的干性维持及分化密切相关,是基于表观遗传治疗肿瘤的一个非常有前景的靶点.本文就EZH2在肿瘤发生发展过程中发挥的功能及EZH2抑制剂的研究现状做一综述.
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EZH-2在子宫内膜癌中的表达及其与肌层浸润的相关性研究
目的：分析果蝇zeste基因增强子同源物2（ EZH2）在子宫内膜癌中的表达，探讨将EZH2作为子宫内膜癌演进的临床监测指标的可行性。方法：应用免疫组化SP法检测正常子宫内膜组织（25例）、子宫内膜不典型增生组织（30例）、子宫内膜癌组织（60例）及相应的癌旁正常组织（56例）中EZH2蛋白的表达，对不同类型的子宫内膜组织中EZH2的表达情况进行比较并分析子宫内膜癌组中EZH2的表达与临床病理特征关系。结果：EZH2阳性表达率子宫内膜不典型增生和子宫内膜癌组织显著高于正常子宫内膜和癌旁正常组织（均P＜0．05），且子宫内膜癌组织显著高于子宫内膜不典型增生组织（ P＜0．05）。 EZH2表达与国际妇产科联盟（FIGO）病理分期、组织学分级及肌层浸润深度有显著关系（P＜0．05）。结论：EZH2能有效反映子宫内膜癌的恶性程度，有利于子宫内膜癌的临床监测和诊疗指导，可作为子宫内膜癌的新检测指标。
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EZH2对人喉鳞状细胞癌HEP-2增殖、迁移和侵袭的影响
目的:探讨Zeste基因增强子同源物2(EZH2)在人喉鳞状细胞癌组织和HEP-2、SCC 10A细胞中的表达及其对人喉鳞状细胞癌细胞HEP-2增殖、迁移和侵袭的影响.方法:收集宣城中心医院30例喉鳞状细胞癌和10例癌旁正常喉黏膜组织标本,qRT-PCR检测喉鳞状细胞癌组织和癌旁组织以及喉鳞状细胞癌细胞HEP-2、SCC10A中EZH2的表达.采用Lipofectamine2000将EZH2shRNA质粒转染至HEP-2细胞中,通过qRT-PCR和Western blot检测EZH2shRNA的转染效率,并通过Western blot检测EZH2下游相关信号分子的表达水平.CCK8实验检测HEP-2细胞的增殖,划痕实验和Transwell侵袭实验检测细胞的迁移、侵袭能力.运用裸鼠体内成瘤实验检测EZH2对HEP-2细胞体内成瘤能力的影响.结果:EZH2在喉鳞状细胞癌组织及细胞中显著高表达(P＜0.01).EZH2shRNA质粒转染后可抑制细胞的增殖能力,细胞的迁移和侵袭也均受到明显抑制.裸鼠体内成瘤实验结果显示,EZH2shRNA组的HEP-2细胞肿瘤形成能力明显减弱.结论:EZH2在喉鳞状细胞癌组织和细胞中高表达;EZH2shRNA能够在体外抑制喉鳞状细胞癌细胞HEP-2的增殖、迁移和侵袭,并抑制RAF1-ERK信号通路的活化;EZH2能够在体内抑制喉鳞状细胞癌细胞HEP-2的成瘤能力.
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DKC1基因对肾癌细胞增殖和迁移能力的影响
目的 探讨小干扰RNA (siRNA)沉默DKC1基因对人肾癌细胞株(ACHN、786 -O)细胞增殖和迁移能力的影响.方法 分别用对照siRNA和DKC1 siRNA瞬时转染人肾癌细胞株ACHN和786 -O细胞;Western blot实验检测DKC1和EZH2蛋白表达量,细胞增殖实验检测DKC1基因对肾癌细胞增殖能力的影响,Transwell细胞迁移实验检测沉默DKC1基因后对ACHN和786-O肾癌细胞迁移能力的影响.结果 转染DKC1 siRNA后肾癌ACHN及786 - O细胞的DKC1表达下调,随着DKC1基因的沉默,EZH2的表达和2种细胞的增殖及迁移能力也下降.结论 沉默DKC1基因后,可以降低EZH2的表达,通过抑制EZH2从而抑制肾癌ACHN细胞及786-O细胞的增殖和迁移能力.
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EZH2与乳腺癌分子亚型的关系及对临床病理的意义
目的:研究EZH2与乳腺癌分子亚型和临床病理参数的关系,探讨EZH2对评价乳腺癌分子亚型预后的价值.方法:回顾分析80例临床病理资料及术后随访资料均完整的乳腺癌患者,通过免疫组织化学Max Vision快捷法,检测ER、PR、HER-2、CK5/6、CK14、EGFR、EZH2蛋白的表达,分析EZH2阳性表达与乳腺癌分子亚型及临床病理参数的关系,观察EZH2对患者预后的影响.结果:80例乳腺癌病例中,Luminal型49例,HER-2(+)型8例,Basal-like型20例,Normalbreast-like型3例；各分子亚型只与患者绝经与否具有相关性；Luminal型乳腺癌总生存率高,Basal-like型低(P＜0.05).EZH2阳性表达率45.00％,其阳性表达与患者同侧腋窝淋巴结转移与否和肿瘤组织学分级及术后临床分期相关(P＜0.05)；EZH2在Luminal型、HER-2(+)型、Basal-like型乳腺癌阳性表达率分别为34.60％、50.00％和70.00％,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:EZH2阳性表达提示患者预后不良；EZH2有望成为Basal-like型乳腺癌的特异性标记物之一.
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182例前列腺良恶性病变组织中EZH2基因的表达与意义
目的 探讨EZH2基因在前列腺良恶性病变组织中的表达与意义.方法 采用免疫组化EnVision法检测 EZH2在96例前列腺癌(PCa)、45例上皮内瘤变(PIN)及41例前列腺良性增生(BPH)组织中的表达状况.结果 EZH2在PCa、PIN及BPH中的阳性表达率分别为97.92％、57.78％和46.34％,三组间差异有统计学意义(P ＜0.05).EZH2表达的强度与患者的年龄和术前血清前列腺特异抗原(PSA)水平无关(P＞0.05),与临床分期、病理学分级及肿瘤有无转移相关(P＜ 0.05).结论 EZH2在PCa中的异常过表达,对肿瘤的发生和发展起了重要的作用,可作为判断PCa及其预后的标记物.
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乳腺癌组织中SOX4、EZH2的表达及临床意义
目的 观察上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)调控因子SOX4和EZH2在乳腺癌组织中的表达,探讨两者的临床意义.方法 采用免疫组化EnVision两步法检测241例乳腺癌组织及126例癌旁非肿瘤乳腺组织中SOX4、EZH2的表达,分析两者表达的相关性及其与乳腺癌临床病理特征的关系.结果 乳腺癌组织中SOX4的高表达率为82.2％,显著高于癌旁非肿瘤乳腺组织的高表达率(57.1％,P＜0.05);EZH2在乳腺癌组织中的高表达率为80.1％,显著高于癌旁非肿瘤乳腺组织的高表达率(47.6％,P ＜0.05).SOX4高表达与肿瘤淋巴结转移、TNM高分期、HER-2高表达相关(P＜0.05);EZH2高表达与肿瘤组织学高分级、淋巴结转移、ER阴性、EGFR阳性、Ki-67高增殖指数相关(P＜0.05),并与SOX4表达呈显著正相关(rs=0.256,P＜0.001).结论 EMT调控因子SOX4和EZH2在乳腺癌组织中表达上调,两者可能共同参与乳腺癌的转移,有望成为预测乳腺癌转移的潜在生物学标志物.
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睾丸原发性弥漫大B细胞淋巴瘤中EZH2蛋白的表达及其意义
目的 探讨睾丸原发性弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B cell lymphoma,DLBCL)中EZH2蛋白的表达、临床病理特征及意义.方法 采用免疫组化Ventana Ultra View两步法检测17例睾丸原发性DLBCL中EZH2蛋白的表达,并结合文献分析其病理形态、诊断及鉴别诊断.采用Sanger法检测EZH2 641位点酪氨酸(Y641)突变.结果 11例肿瘤细胞类似中心母细胞,3例肿瘤细胞类似免疫母细胞,3例肿瘤细胞具有间变亚型特点.免疫组化标记显示14例为非生发中心B细胞样(nongerminal centre B cell like,non-GCB)型,3例为生发中心B细胞样(germinal centre B cell like,GCB)型;其中15例肿瘤细胞核强阳性表达EZH2蛋白,2例约70％肿瘤细胞核中等强度表达EZH2蛋白;未检测到EZH2 Y641点突变.随访9例患者,中位生存时间35个月,EZH2蛋白的表达与患者预后无相关性.结论 睾丸原发性DLBCL属于少见的非霍奇金淋巴瘤,具有独特的临床病理学特征,绝大部分为non-GCB型;EZH2蛋白在睾丸原发性DLBCL过表达,其有望成为肿瘤诊断及治疗的新靶点.
关键词： 睾丸原发性弥漫大B细胞淋巴瘤 EZH2 临床病理学特征 免疫表型 预后 -
EZH2在胃癌组织中的表达及对胃癌细胞增殖的影响
目的 探讨EZH2表达与胃癌临床病理特征、预后的关系,及其对胃癌细胞增殖的影响.方法 采用免疫组化SP法检测EZH2在65例胃癌组织及20例正常胃黏膜组织中的表达,分析其表达与胃癌临床病理特征的相关性,应用Kaplan-Meier法及Log-rank检验分析EZH2表达与胃癌患者生存率的关系.采用Western blot法检测胃癌细胞株SGC7901、BGC823中EZH2的表达.EZH2 ShRNA转染胃癌细胞株后,采用MTT法检测细胞的增殖率.结果 胃癌组织中EZH2蛋白阳性率为63.07％,正常胃黏膜组织中EZH2蛋白阳性率为10％;胃癌组织中EZH2蛋白表达明显高于正常胃黏膜组织(P ＜0.000 1).胃癌组织中EZH2蛋白表达与肿瘤直径(P ＜0.000 1)、肿瘤浸润深度(P ＜0.000 1)、淋巴结转移(P=0.001)及分期相关(P=0.001).EZH2阳性者5年总生存率明显低于阴性者(P=0.001).胃癌细胞株SGC7901和BGC823中EZH2蛋白高表达,ShRNA介导的EZH2表达沉默可明显抑制胃癌细胞的增殖.结论 EZH2高表达是胃癌患者预后不良的重要因子,EZH2可明显促进胃癌细胞的增殖.
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乳腺癌中EZH2和p53蛋白表达及其临床意义
目的：探讨乳腺癌组织中EZH2和p53蛋白的表达,分析二者表达与乳腺癌临床病理特征及预后的关系。方法采用免疫组化MaxVision法检测50例乳腺腺病、92例乳腺浸润性小叶癌( invasive lobular carcinoma, ILC)和200例乳腺浸润性导管癌( invasive ductal carcinoma, IDC)组织中EZH2和p53的表达及二者的相关性。结果 EZH2在ILC与IDC中的表达差异无统计学意义(P>0．0167),其在乳腺腺病组织中的表达低于ILC与IDC组织(P<0．0167)。 EZH2表达与患者年龄、绝经状态、组织学类型、pTNM分期等均无关,与肿瘤直径、淋巴结转移、分子亚型、生存状态及p53表达有关( P<0．05)。 p53蛋白在乳腺腺病和ILC组织中的表达差异无统计学意义(P>0．0167),其在IDC组织中的表达高于ILC与乳腺腺病组织(P<0．0167)。 p53表达与患者年龄、绝经状态、肿瘤直径、淋巴结转移等无关,与组织学类型、pTNM分期、分子亚型及生存状态相关( P<0．05)。 Kaplan-Meier生存分析示：EZH2及p53蛋白表达与乳腺癌患者无病生存率及总生存率具有相关性(P<0．05)；COX多因素回归分析显示：EZH2及p53蛋白表达是乳腺癌患者生存的独立影响因素。结论在乳腺腺病、ILC及IDC组织中, EZH2及p53蛋白表达逐渐升高,二者表达呈正相关。 EZH2及p53蛋白表达水平对评价乳腺癌患者预后有重要价值。
