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DZNep通过下调EZH2蛋白表达抑制人前列腺癌PC3细胞增殖
目的 研究EZH2蛋白抑制剂DZNep对前列腺癌PC3细胞增殖的影响及其用于人前列腺癌治疗的潜在价值.方法 MTT分析DZNep处理、siRNA敲低EZH2和EZH2过表达对PC3细胞增殖的影响,Western blot检测EZH2和Bax/Bcl-2的表达.结果 DZNep抑制PC-3细胞增殖、诱导细胞凋亡,上调Bax基因表达并下调Bcl-2基因表达.敲低EZH2抑制PC3细胞增殖,过表达EZH2则拮抗DZNep对PC3细胞的增殖抑制.结论 DZNep通过下调EZH2表达、诱导细胞凋亡发生从而抑制PC3细胞增殖.DZNep具有抗人前列腺癌治疗的潜在应用前景.
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EZH2在Hcy致泡沫细胞胆固醇聚集中的作用
目的 研究Zeste基因增强子同源物2(EZH2)在同型半胱氨酸(Hcy)致泡沫细胞胆固醇聚集中的作用.方法 将THP-1源性泡沫细胞分为对照组、100μmol/L Hcy组和叶酸组,油红O检测细胞内脂滴聚集;酶法检测细胞内TC和TG含量;Western-blot检测H3K27me3水平;q-PCR和Western-blot检测EZH2表达;分别将EZH2过表达和干扰后检测泡沫细胞H3K27水平及TG和TC含量.结果 Hcy干预后,细胞内TC和TG含量显著增加(P<0.05),H3K27me3水平和EZH2表达也增加(P<0.05);过表达EZH2使H3K27me3水平增加(P<0.05),并使细胞TC和TG含量增多(P<0.05).结论 EZH2通过调控H3K27me3水平可能是Hcy促进泡沫细胞胆固醇聚集的重要机制.
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上调miRNA-101表达对人肝癌HepG2细胞系增殖的影响
目的 通过上调人肝癌HepG2细胞株中miRNA-101表达,探讨miRNA-101抑制靶基因EZH2对肝癌细胞增殖的影响.方法 人工合成miRNA-101模拟体并转染至HepG2肝癌细胞株中,利用MTT法检测细胞增殖抑制、流式细胞仪检测细胞周期、实时荧光定量PCR检测EZH2 mRNA表达.结果 miRNA-101模拟体转染组HepG2细胞增殖活性明显低于阴性对照组及空白对照组(P＜0.05),miRNA-101模拟体组G0/G1期细胞明显增多,为(74.71±4.6)%,S期细胞减少,为(14.57±1.1)%(P均＜0.05);miRNA-101模拟体组EZH2 mRNA较阴性对照组和空白对照组表达下降(P＜0.05).结论 上调miRNA-101可抑制EZH2基因表达,对人肝癌细胞增殖活性具有负调控作用.
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AP-4、EZH2基因表达量与子宫内膜癌病灶中细胞凋亡、上皮间质转化的相关性研究
目的:研究A P-4、EZ H2基因表达量与子宫内膜癌病灶中细胞凋亡、上皮间质转化的相关性.方法:选择在孝感市第一人民医院接受手术切除治疗的子宫内膜癌患者,收集子宫内膜癌病灶及癌旁病灶适量,抽提RNA后测定AP-4、EZH2基因及凋亡基因、上皮间质转化基因的表达量.结果:子宫内膜癌病灶内AP-4、EZH2基因的mRNA表达量显著高于癌旁病灶;子宫内膜癌病灶内SRPX2、RLIP76、ZEB1、SALL4、TET1、RANKL、N-cadherin的mRNA表达量显著高于癌旁病灶,Fat-1、ITLN-1、Caspase-3、α-catenin的mRNA表达量显著低于癌旁病灶;AP-4高表达的子宫内膜癌病灶内SRPX2、RLIP76的mRNA表达量显著高于AP-4低表达的子宫内膜癌病灶,Fat-1、ITLN-1、Caspase-3的mR-NA表达量显著低于AP-4低表达的子宫内膜癌病灶;EZH2高表达的子宫内膜癌病灶内ZEB1、SALL4、TET1、RANKL、N-cadherin的mRNA表达量显著高于EZH2低表达的子宫内膜癌病灶,α-catenin的m RN A表达量显著低于EZ H2低表达的子宫内膜癌病灶.结论:子宫内膜癌病灶内高表达的A P-4、EZ H2基因分别能够抑制癌细胞凋亡、促进癌细胞上皮间质转化.
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乳腺癌组织中EZH2及p53蛋白表达及其临床意义
目的 研究乳腺癌组织中果蝇zeste基因增强子同源物2(EZH2)及p53蛋白的表达及临床意义.方法 选择从2016年1~10月在青海大学附属医院诊治的乳腺癌患者40例纳入本次研究,将40例患者术区所取的乳腺癌组织记为观察组,另取同期在医院治疗的40例纤维瘤患者的手术切除组织记为对照组,比较乳腺不同组织中EZH2及p53蛋白的表达,分析乳腺癌组织中EZH2及p53蛋白的表达与其病理情况的关系,以及乳腺癌组织中EZH2与p5蛋白表达的相关性.结果 乳腺癌组织中EZH2及p53蛋白的阳性率分别为52.50%、47.50%,均明显高于纤维瘤组织的20.00%和15.00%,差异均有统计学意义(P<0.05).乳腺癌组织中EZH2及p53蛋白的阳性表达与有淋巴结转移及分子亚型为Basal-like型有关,差异均有统计学意义(P<0.05);根据Spearman法对相关性分析后发现,乳腺癌组织中EZH2与p5蛋白的阳性表达之间呈正相关(r=0.66,P<0.05).结论 乳腺癌组织中的EZH2及p53蛋白均存在较强的阳性表达,且两者之间的表达呈正相关.
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EZH2和PTEN蛋白表达与卵巢浆液性囊腺癌的相关性研究
目的 探讨EZH2和PTEN蛋白在卵巢浆液性囊腺癌中的表达和意义.方法 采用免疫组化SABC法对73例卵巢浆液性囊腺癌标本和39例卵巢浆液性囊腺瘤组织标本中EZH2和PTEN蛋白的表达进行检测.结果 EZH2在卵巢浆液性囊腺癌组织中表达阳性率为71.2%,高于卵巢浆液性囊腺瘤组织的阳性率12.8%(P<0.01),且随着病理分级和临床分期的增加而升高(rs分别为 0.246、0.251,P<0.05);PTEN蛋白在卵巢浆液性囊腺癌组织中表达阳性率为45.2%,低于卵巢浆液性囊腺瘤组织的阳性率76.9%(P=0.0013),且随着病理分级和临床分期的增加而降低(rs分别为-0.330、-0.247,P<0.05);两者存在负相关(r=-0.903,P=0.005).结论 EZH2和PTEN蛋白可能参与卵巢浆液性囊腺癌发生、发展过程,有望作为早期诊断和判断预后的指标.
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ZEB1EZH2和PTEN在大肠癌自噬发生中的作用和意义
目的：明确多梳蛋白EZH2是否参与大肠癌自噬及其相关的调节机制。方法使用Western blot及免疫组织化学的方法检测ZEB1、EZH2和PTEN表达水平；实时（real-time）PCR检测ZEB1、EZH2和PTEN的mRNA水平；电镜观察细胞自噬的发生。结果下调EZH2的表达可诱导大肠癌细胞自噬的发生；EZH2通过调节PTEN的表达参与自噬的调控，同时EZH2及PTEN的表达受到ZEB1的调节；大肠癌组织中ZEB1和EZH2的表达明显高于正常肠黏膜组织，而正常肠黏膜组织PTEN的表达水平明显高于大肠癌组织。结论大肠癌中EZH2的下调可以诱导大肠癌自噬的发生。ZEB1正向调控 EZH2的表达，进而影响PT EN参与肿瘤细胞自噬的调节。
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EZH2在原发性肝癌发展中的作用及临床病理意义
目的 探讨EZH2在原发性肝细胞癌(HCC)以及癌旁组织中表达的差异及其临床病理意义.方法 收集2011年6月至2012年6月第四军医大学附属医院HCC患者手术切除标本46例,免疫组化采用链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶连结法(SP法)检测HCC组织及癌旁组织中EZH2蛋白表达情况;分析其与临床病理因素的关系.结果 HCC组织中EZH2蛋白表达水平明显高于相应癌旁组织(P＜0.05),其在HCC中表达率较高[45.7％(21/46)];在癌旁组织中表达率低[4.3％(2/46)].EZH2蛋白表达水平与有无癌栓、肝硬化及肝脂肪变性等临床病理因素无明显相关性.结论 EZH2在HCC中呈高表达,提示EZH2的异常表达与HCC的发生和发展有关.
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RKIP和EZH2在非小细胞肺癌中的表达及意义
目的 探讨非小细胞肺癌(Non-Small Cell Lung Cancer,NSCLC)组织中Raf激酶抑制蛋白(Raf Kinase InhibitorProtein,RKIP)和果蝇Zeste基因增强子人类同源物(Enhancer of Zeste Homolog,EZH2)的表达及其与临床病理特征的关系.方法 应用免疫组织化学方法检测84例肺癌组织及相应的癌旁正常肺组织中RKIP与EZH2蛋白的表达情况,分析两者与肺癌临床病理学参数的关系.结果 肺癌组织中RKIP的阳性表达率为36.90％ (31/84),低于癌旁正常肺组织63.10％ (53/84),差异有统计学意义(x2=11.524,P＜0.05);EZH2的阳性表达率为60.71％ (51/84),高于癌旁正常肺组织39.29％ (33/84),差异有统计学意义(x2=7.714,P＜0.05).其表达水平与肺癌的分化程度、TNM分期、淋巴结转移及术后生存时间有明显关系;RKIP蛋白与EZH2蛋白的表达水平呈负相关(r=-0.446,P＜0.05).结论 RKIP与EZH2在肺癌的发生、发展中起重要作用,RKIP的低表达以及EZH2的过表达,促进了肺癌细胞的侵袭和转移.
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组蛋白甲基化转移酶EZH2在卵巢癌组织中的表达及意义
[目的]探讨组蛋白甲基化转移酶(enhancer of zeste homolog 2,EZH2)在卵巢肿瘤组织中的表达. [方法]应用免疫组织化学方法检测在正常卵巢组织和卵巢良、恶性肿瘤组织中EZH2蛋白表达水平. [结果]EZH2在正常卵巢组织和良性卵巢肿瘤组织、卵巢癌组织中的表达,差异有统计学意义(P＜0.05).在卵巢癌组织中,EZH2的表达在不同手术病理分期间比较,差异有统计学意义(P＜0.05). [结论]EZH2卵巢癌组织中高表达,与手术病理分期有关.
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EZH2基因与恶性肿瘤侵袭和转移关系的研究进展
果蝇Zeste基因增强子人类同源物2(EZH2)是核心蛋白复合体-2(PRC2)的催化亚基,具有组蛋白甲基转移酶活性,它通过对组蛋白H3K27位点赖氨酸进行甲基化修饰发挥沉默靶基因的作用,从而导致肿瘤的发生.研究显示,EZH2在多种恶性肿瘤中表达广泛增高,并通过促进肿瘤细胞的增殖、细胞周期阻滞、细胞迁移和侵袭能力参与肿瘤的发生与演进,而且临床上EZH2异常表达与肿瘤侵袭性及较差预后相关,因此EZH2是肿瘤治疗的潜在靶点.现将主要针对EZH2基因与肿瘤的侵袭与转移研究的进展进行综述.
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PcG蛋白与骨髓增生异常综合征的预后
骨髓增生异常综合征(MDS)是一组起源于造血干细胞(HSC)的恶性异质性疾病,转归变异广泛,急需更为精确的分类与预后评分标准.染色体已经被公认为与预后评分相关,PcG(Polycomb group)蛋白基因家族通过在染色质水平介导基因转录抑制、调控基因表达已经成为近几年研究的热点.本文就PcG家族成员中EZH2、BMI1和ASXL1对MDS预后影响的研究作一综述.
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EZH2及E-Cadherin在SD大鼠子宫内膜异位症中的表达及意义
目的:探讨癌相关蛋白EZH2和钙黏蛋白(E-Cadherin)在子宫内膜异位症大鼠模型异位灶中的表达及意义.方法:根据大鼠自体移植方法构建大鼠子宫内膜异位症模型为实验组(n=15),选取未造模的正常大鼠为对照组(n=10).应用免疫组织化学法(Elivision法)和Western-blot法检测实验组异位灶内及对照组子宫内膜中EZH2和E-Cadherin的表达情况,并分析两者的相关性.结果:免疫组化检测EZH2在实验组异位灶和对照组子宫内膜组织中阳性表达的平均光密度值分别为(43.10-± 1.52)和(32.70±1.64),而E-Cadherin在实验组异位灶和对照组子宫内膜组织中阳性表达的平均光密度值分别为(15.70±1.64)和(23.30±1.64),差异均有统计学意义(P＜0.05).Western-blot法检测实验组异位灶中EZH2表达量(195.26)明显高于对照组(85.74),而E-Cadherin表达量(24.67)明显低于对照组(92.50),差异均有统计学意义(P＜0.05).实验组EZH2与E-Cadherin的表达呈负相关(r=-0.9626,P＜0.05).结论:子宫内膜异位症病灶中EZH2高表达都伴随着E-Cadherin的低表达,且两者呈明显的负相关,EZH2可能通过抑制E-Cadherin的表达促进子宫内膜异位症的发生及发展.
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EZH2在肺癌发生发展中的研究进展
肺癌是常见的恶性肿瘤之一,严重威胁人类生命和健康.筛选合适的靶点是肺癌基因治疗的首要因素.研究EZH2与肺癌发生、发展的分子机制,阐明其信号调控网络,探寻新的治疗靶点和策略,将为筛选临床治疗新靶点提供重要理论支持和实验依据,可以提高肺癌患者生存率、改善生存质量,具有重要的临床应用价值和深远的社会意义.
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利用CRISPR/Cas9慢病毒系统构建肺部EZH2基因敲除小鼠
背景与目的 已有的研究证明CRISPR/Cas9(Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats/CRISPR-associated 9)系统是一种能够在哺乳动物细胞中高效操作的新型基因编辑技术,应用人工设计的向导RNA (single-guide RNA, sgRNA)介导外源表达的Cas9蛋白与靶点DNA特异性结合以实现对基因组DNA的切割,被切割后的基因组DNA通过非同源重组或同源重组的方式进行修复,从而实现基因的敲除、或者外源基因的敲入等目标.本研究的目的是应用CRISPR/Cas9技术构建小鼠肺部EZH2基因敲除的动物模型.方法 针对EZH2基因的编码区,设计两个靶向EZH2基因Exon3和Exon4的sgRNA,通过慢病毒包装、感染细胞、SURVEYOR assay等一系列体外实验,验证所设计的sgRNA的有效性.应用支气管插管的方式把慢病毒灌注到小鼠肺部,利用免疫组化方法和qRT-PCR进行检测.结果 NIH-3T3细胞的体外实验结果验证了实验所设计的sgEZH2能够有效地在体外细胞系中介导Cas9切割靶DNA;小鼠支气管插管实验及肺部组织免疫组化和qRT-PCR方法检测EZH2基因敲除的效率,发现实验组小鼠肺部组织EZH2表达明显降低.结论 本研究成功设计了两条能够敲除EZH2功能的sgRNA,并应用CRISPR/Cas9技术成功建立了肺部EZH2基因敲除的小鼠模型,为研究EZH2的功能和作用机制提供了有效的动物模型.
关键词： CRISPR/Cas9系统 EZH2 sgRNA 基因敲除 -
短发夹核糖核酸沉默EZH2基因对人脑胶质瘤细胞增殖和侵袭的影响
目的 探讨短发夹核糖核酸(shRNA)对高表达EZH2的人胶质瘤细胞株U251增殖和侵袭的影响.方法 构建针对EZH2的shRNA重组质粒,采用电穿孔的方法转染至U251细胞中,分为对照组、control-shRNA-GFP空载体转染组和EZH2-shRNA重组质粒转染组.分别通过逆转录-聚合酶链反应和蛋白质印迹法检测各组细胞EZH2基因和蛋白的表达,以噻唑蓝法测各组细胞的增殖活性,蛋白质印迹法检测各组细胞的EZH2蛋白表达水平;Transwell小室检测细胞侵袭力.结果 对照组、control-shRNA-GFP空载体转染组、EZH2-shRNA重组质粒转染组U251细胞EZH2基因的表达分别为1.13±0.05、1.15±0.05、0.19±0.02,U251细胞EZH2蛋白的表达分别为1.03±0.03、0.97±0.06、0.20±0.02,转染后24 h细胞增殖能力分别为100.00％±9.31％、100.03％±9.35％、60.13％±3.15％,转染后48 h细胞增殖能力分别为100.00％±9.13％、99.58％±9.27％、53.01％±3.14％,重组质粒转染组较另两组均明显下降,差异有统计学意义(P＜ 0.05);重组质粒转染组转染48 h后细胞磷酸化蛋白激酶B和磷酸化叉头框蛋白O1水平降低、细胞周期蛋白D1表达减少、p27蛋白表达增多,差异有统计学意义(P＜0.05).Transwell小室侵袭实验显示侵袭至Transwell小室滤膜下表面的细胞数在EZH2-shRNA重组质粒转染组[(46.00±2.82)个]低于对照组[(60.67±5.71)个]和control-shRNA-GFP空载体转染组[(61.00±2.48)个],差异有统计学意义(P＜0.01).结论 EZH2基因沉默能有效抑制人胶质瘤细胞的增殖和侵袭能力,为深入研究EZH2在胶质瘤中作用提供了研究基础.
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人组蛋白H3真核表达载体的构建及功能初步检测
目的 构建带myc标签的人组蛋白H3基因真核表达载体,获得Myc-H3融合表达蛋白,并对其功能进行初步检测.方法 采用PCR技术从乳腺文库中扩增人H3基因编码序列,将其正确插入pXJ-40-myc载体,重组质粒转染人胚肾293T细胞,W3st3rn blot法检测融合蛋白表达,通过免疫共沉淀技术检测融合蛋白与已知结合蛋白组蛋白赖氨酸特异性去甲基化酶(LSD1)和组蛋白甲基转移酶(EZH2)的相互作用.结果 构建得到组蛋白H3基因的真核表达载体,双酶切鉴定得到与预期片段大小相符的外源基因插入片段,经测序与目的序列完全一致；经Western blot法检测,融合蛋白成功表达；免疫共沉淀检测证实Myc-H3融合蛋白可以和已知相互作用蛋白LSD1及EZH2相互作用.结论 成功构建组蛋白H3真核表达载体,该融合蛋白正确表达.
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EZH2和RUNX3在肾细胞癌中的表达及其临床意义
目的 检测EZH2和RUNX3蛋白在肾细胞癌中的表达,探讨它们与肾细胞癌临床病理特征间的关系,并分析它们的表达相关性.方法 利用免疫组织化学法分别检测肾细胞癌标本及对应的癌旁正常肾组织(各56例)中EZH2和RUNX3的表达情况,并利用统计学软件进行统计分析.结果 EZH2和RUNX3蛋白在肾癌组织中的阳性表达率分别为67.9％和37.5％,在癌旁正常肾组织的阳性表达率分别为28.6％和67.3％；EZH2和RUNX3在肾癌组织和癌旁正常组织中的表达差异均有统计学意义(P＜0.05),肾细胞癌中EZH2的高表达和RUNX3的低表达均与临床分期相关(P＜0.05),与病理分化程度、性别、年龄等的关系无统计学差异(P＞0.05).Spearman相关分析显示二者在肾癌中的表达没有明显的负相关关系.结论 EZH2和RUNX3可能共同参与了肾癌的发生发展过程,可成为肾癌的早期诊断及判断预后的指标.
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EZH2在前列腺癌发生发展中作用的研究进展
前列腺癌是男性常见的恶性肿瘤之一,其表现多样,可以无痛或致死.虽然其发病机制目前并不是十分清楚,但表观遗传学与前列腺癌的发生发展密切相关.作为表观遗传学中的一个重要部分,EZH2是PRC2转录抑制复合体的一个特征组分并可以修饰染色质.EZH2基因扩增在早期前列腺癌中比较少见,但较多晚期进展型前列腺癌中存在基因的扩增和高表达,并由此引起肿瘤的进展.EZH2的高表达与包括前列腺癌在内的许多肿瘤的进展和不良预后有关,Kras和雄激素受体信号通路的联合作用以及microRNA的调节失调可以促进EZH2的表达,而雄激素则可以抑制EZH2的表达.EZH2可以通过抑制RKIP、TIMPs、hDAB2IP等机制促进肿瘤细胞的增殖和转移.随着研究的深入,EZH2将会在前列腺癌的诊断、预后和治疗当中发挥重要作用.
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组蛋白甲基转移酶EZH2和MLL2在弥漫大B细胞淋巴瘤中的新研究进展
弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B cell lymphoma,DLBCL)是常见的非霍奇金淋巴瘤(non-hodgkin lymphoma),并且是一组在临床表现、组织形态和预后等多方面具有很大异质性的恶性肿瘤,其发病机制错综复杂.近年来表观遗传学修饰在DLBCL的发生、发展中的重要作用是研究的热点.本文综述了近年来组蛋白甲基转移酶EZH2和MLL2在弥漫大B细胞淋巴瘤中的新研究进展,为从表观遗传学的角度认识和治疗弥漫大B细胞淋巴瘤提供新认识.
